Notch 3沉默对人急性T淋巴细胞白血病细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨Notch 3受体特异性沉默对急性T淋巴细胞白血病的影响。方法:运用survivin启动子介导的RNA干涉方法特异性地封闭急性T淋巴细胞白血病细胞SupT1中Notch 3基因的表达。结果:survivin启动子介导的RNA干涉系统能特异而高效封闭肿瘤细胞内源Notch 3基因的表达,Notch 3基因表达的下调能够使肿瘤细胞的增殖活性降低,凋亡明显增加。结论:Notch 3基因沉默可有效抑制白血病细胞的增殖,并促进其凋亡,为急性T淋巴细胞白血病相关基因功能研究及靶向性治疗探索了一种新策略。     

Notch 3沉默对人急性T淋巴细胞白血病细胞增殖与凋亡的影响

目的：探讨Notch 3受体特异性沉默对急性T淋巴细胞白血病的影响。方法：运用survivin启动子介导的RNA干涉方法特异性地封闭急性T淋巴细胞白血病细胞SupT1中Notch 3基因的表达。结果：survivin启动子介导的RNA干涉系统能特异而高效封闭肿瘤细胞内源Notch 3基因的表达,Notch 3基因表达的下调能够使肿瘤细胞的增殖活性降低,凋亡明显增加。结论：Notch 3基因沉默可有效抑制白血病细胞的增殖,并促进其凋亡,为急性T淋巴细胞白血病相关基因功能研究及靶向性治疗探索了一种新策略。     

PD-1 在急性T淋巴细胞白血病细胞中的表达及其临床意义

[摘要] 目的：探讨PD-1 分子在急性T淋巴细胞白血病（T-ALL）患者来源的肿瘤细胞（T-ALL细胞）中的表达及其临床意义。方法：选用2015 年12 月江苏省中医院血液科提供的1 例T-ALL细胞、4 例健康志愿者提供的PBMC和博生吉医药科技（苏州）有限公司提供的人293T/PD-1 细胞,将T-ALL细胞经尾静脉注射到B-NDG小鼠构建T-ALL细胞异种移植瘤模型,用流式细胞术检测移植瘤小鼠脾中获得的细胞是否主要是由T-ALL细胞组成。用流式细胞术检测T-ALL细胞中PD-1 蛋白的表达,用RT-PCR进一步验证T-ALL细胞中PD-1 mRNA表达水平。对T-ALL细胞中PD-1 基因进行SNP测序,以检测PD-1 基因DNA序列是否发生改变。在体外使用PD-1 抑制剂研究其对T-ALL细胞增殖、凋亡以及相关因子mRNA表达水平的影响。结果：成功构建小鼠TALL细胞异种移植瘤模型,用流式细胞术确认了该例疾病是T-ALL。T-ALL 细胞中PD-1 mRNA和蛋白均高表达（均P<0.01）。PD-1 基因的第5 个外显子的一个碱基由胞嘧啶突变成胸腺嘧啶。在体外PD-1 抑制剂对T-ALL细胞的增殖和凋亡均无明显影响;PD-1 抑制剂上调抑癌蛋白IGFBP3 mRNA表达,降低促癌蛋白SULT1A3 mRNA表达（均P<0.01）。结论：PD-1 在T-ALL细胞中高表达,PD-1可作为临床上T-ALL诊断及治疗的靶点。     

Notch 信号通路相关基因的mRNA在急性B淋巴细胞白血病中的表达

 目的：检测Notch信号通路相关基因的mRNA在B-ALL（急性B淋巴细胞白血病）中的表达水平,并探讨其在B-ALL中的作用。方法：建立实时定量RT-PCR方法,采用ABI PRISM 7700 PCR仪检测了16例初诊B-ALL患者骨髓（原始＋幼稚淋巴细胞≥80％）和11例正常供者骨髓中Notch1、Notch2、Jagged1、Delta1和Hes1及内参GAPDH的表达水平,以检测基因=（检测基因拷贝数/GAPDH拷贝数）×106 计算检测基因的表达水平。结果：B-ALL组骨髓中 Jagged1基因的mRNA表达水平明显低于对照组,分别为(76.7±23.8)和(2 192.3±971.6)（P=0.000）, Delat1基因mRNA表达水平B-ALL组明显高于对照组,分别为(60 316.6±8 713.5)和(2 189.8±802.3)（P=0.002）, 差异有统计学意义。Notch1、Notch2和Hes1基因的mRNA表达水平B-ALL组分别为(6 167.6±1661.3)、(95 318.6±9 437.5)和(258.2±96.2),对照组分别为(1 735.5±936.6)、(52 078.2±8 746.3)和(1 006.2±806.0)(P值分别为0.089、0.815和0.786),此三个基因在B-ALL组与对照组之间表达差异没有统计学意义。结论：Jagged1在B-ALL中低表达,Delta1在B-ALL中高表达,提示B-ALL发病与Notch信号途径中配基的异常表达有关。     

Notch信号与急性T细胞淋巴瘤白血病关系的研究进展

 Notch信号不仅能调节T细胞分化、发育,参与T细胞淋巴瘤/白血病（Acute T lymphocty lymphoma/leukemia, T-ALL）的发生、发展,还影响造血干、祖细胞生长、分化和自我更新。最常见的Notch1突变为HD区域和PEST区域的突变,活化突变的Notch信号通过PI3K/Akt信号通路、mTOR、NF-κB信号通路等诱导T-ALL的发病与发展。多项研究表明Notch受体不仅能调节T细胞发育,还参与急性髓系白血病（acute myeloid leukemia, AML）和异基因造血干细胞移植（allogeneic hematopoietic stem cell transplantation, allo-HSCT）后移植物抗宿主病（Graft-versus-host Disease, GVHD）的发生,调节造血干、祖细胞生长、分化和自我更新,对造血干细胞移植后造血重建以及造血微环境的动态平衡均发挥重要作用。本文对Notch信号通路与造血系统疾病的关系及其治疗进展作一综述。     

Notch1基因在食管鳞癌细胞株EC9706中的表达及其对细胞凋亡的影响

背景与目的:早期的研究显示,Notch1信号途径与肿瘤的发生密切相关,在细胞的生长、增殖、分化和凋亡中起着十分重要的作用.本研究旨在研究Notch1基因在食管鳞癌EC9706细胞中的表达及其对EC9706细胞凋亡的影响.方法:通过免疫细胞化学方法检测Notch1基因在EC9706细胞中的表达.采用RT-PCR技术扩增Notch1基因,构建真核表达载体pcDNA3.1-Notch1(命名为pcNICD),转染EC9706细胞,利用RT-PCR及Western blot检测稳定转染pcNICD 载体、转染pcDNA3.1空载体及未处理的EC9706细胞中Notch1的表达,另通过流式细胞仪检测未处理、转染pcDNA3.1和转染pcNICD的EC9706细胞的凋亡.结果:EC9706细胞中发现Notch1基因的表达.与未处理的和转染pcDNA3.1的EC9706细胞相比,转染pcNICD的EC9706细胞中Notch1基因的mRNA和蛋白表达水平均明显增加,大约增加3倍(P＜0.05);但未处理的和转染pcDNA3.1的EC9706细胞中Notch1的表达差异无统计学意义(P＞0.05).流式细胞检测结果显示,在未处理的和转染pcDNA3.1的EC9706细胞中,细胞凋亡率差异无统计学意义(P＞0.05);但与与未处理的和转染pcDNA3.1的EC9706细胞相比.转染pcNICD的EC9706细胞转染后24 h、48 h和72 h时细胞凋亡率明显增加(P＜0.01).结论:Notch信号途径的激活引起食管鳞癌EC9706 细胞的凋亡.提示Notch1基因有可能成为治疗食管鳞癌的新靶点.     

慢病毒介导的 HO-1基因沉默对人白血病K562细胞增殖与凋亡的影响

目的:研究沉默血红素加氧酶1(heme oxygenase-1,HO-1)基因对人慢性粒细胞性白血病(chronic myelogenous leu-kemia,CML)K562细胞增殖与凋亡的影响。方法:构建靶向HO-1基因的重组慢病毒Lv-siRNA-HO-1,将其感染K562细胞,荧光显微镜检测其最适感染复数(multipliciy of infection,MOI)。Western blotting检测Lv-siRNA-HO-1感染组、空载体Lv-Ctrl感染组及未感染组K562细胞中HO-1蛋白的表达,CCK-8法、流式细胞术分别检测各感染组K562细胞的增殖与凋亡。结果:成功构建靶向HO-1基因的干扰表达载体PSIH1-HO-1-siRNA,包装后形成重组慢病毒Lv-siRNA-HO-1,其有效感染K562细胞MOI值为6。与未感染组相比,Lv-siRNA-HO-1感染组K562细胞中HO-1蛋白的表达显著降低[(0.16±0.02)vs(0.70±0.02),P<0.01],K562细胞增殖活性也明显下降[(1.36±0.12)vs(2.02±0.17),P<0.01)],而K562细胞凋亡率则显著增加[(62.77±4.39)%vs(14.19±1.6)%,P<0.01]。结论:慢病毒介导的HO-1基因沉默能抑制人白血病K562细胞增殖和诱导其凋亡。     

实时荧光定量-PCR检测Notch信号通路相关分子在急性T淋巴细胞白血病中的表达

目的:检测Notch信号通路相关分子在急性T淋巴细胞白血病(T cell acute lymphoblastic leukemia, T-ALL)中的表达,并探讨其在T-ALL中的致病机制.方法:采用实时荧光定量-PCR(real-time fluorogentic quantitative PCR,RFQ-PCR)法检测了15例初诊的T-ALL患者的骨髓和11例正常骨髓移植供者细胞中Notch1、Notch2,Notch信号配体分子Jagged1、Delta1,Notch信号途径效应分子Hes1及内参GAPDH的表达水平.结果:T-ALL组患者的骨髓中Notch1的均数表达水平明显高于健康供体组,分别为15 105.3±5 961.3和1 735.5±936.6(P=0.002);Jagged1的表达水平在T-ALL组明显低于健康供体组,分别为231.6±78.4和2 192.3±971.6, 差异有统计学意义(P=0.000).Notch2、Delta1和Hes1的表达水平在T-ALL组分别为63 067.8±9 437.5、368.2±142.5和252.7±94.2,健康供体组为52 078.2±8 476.3、2 189.8±802.3和1 006.2±806.0(P值分别为0.452、0.752和0.561), 差异无统计学意义;T-ALL组、健康供体组中Notch1和Notch2的表达差异均无统计学意义.结论:Notch1在T-ALL中高表达,而Jagged1在T-ALL则为中低表达,提示T-ALL发病与异常与Notch1信号通路有关;而Notch 2与Notch 1的表达并不平行.     

lncRNA XIST通过miR-375-Notch1轴调控急性T淋巴细胞白血病细胞增殖、侵袭的实验研究

目的 探讨lncRNA XIST通过miR-375-Notch1轴调控急性淋巴细胞白血病(T-acute lymphocytic leukemia,T-ALL)细胞增殖和侵袭的影响。方法 以2018年6月—2021年3月收治的57例T-ALL患者为观察对象(T-ALL组),另选55例同期健康体检者为对照组。qRT-PCR检测T-ALL组和对照组及T-ALL T淋巴细胞CCRF-CEM细胞株中lncRNA XIST水平;对CCRF-CEM细胞转染si-lncRNA XIST以沉默lncRNA XIST、转染miR-375模拟物以过表达miR-375;采用CCK-8法、Transwell侵袭实验法及流式细胞术检测CCRF-CEM细胞的增殖、侵袭及凋亡情况;荧光素酶报告基因方法检测lncRNA XIST靶基因;Western blot检测Notch1、ADAM-17、Hes1蛋白表达。结果 与对照组比较,T-ALL组的lncRNA XIST、Notch1 mRNA表达明显增加(P＜0.05),而miR-375水平明显下降(P＜0.05),且T-ALL组患者Notch1蛋白水平明显高于对照组(P＜0.001)。转染si-lncRNA XIST沉默lncRNA XIST后,CCRF-CEM细胞增殖数量、侵袭能力明显下降(P＜0.05),细胞凋亡明显增加(P＜0.05)。荧光素酶报告基因显示miR-375是lncRNA XIST的靶点。CCRF-CEM细胞转染miR-375后,细胞增殖数量、侵袭能力明显下降(P＜0.05),细胞凋亡明显增加(P＜0.05)。转染si-lncRNA XIST可以明显上调miR-375水平、下调Notch1 mRNA水平,同时下调Notch1、ADAM-17、Hes1蛋白表达。结论 lncRNA XIST在T-ALL患者中呈高表达,可能通过miR-375-Notch1轴影响白血病细胞生物学功能。     

miRNA-618对急性单核细胞白血病THP-1细胞增殖和凋亡调控的研究

目的探讨miRNA-618(miR-618)对急性单核细胞白血病THP-1细胞增殖和凋亡的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测miR-618在THP-1细胞和健康人外周血分离的单核细胞中的相对表达量。构建过表达miR-618质粒载体,以空载体作为阴性对照,将二者分别转染THP-1细胞,设定为miR-618过表达组和阴性对照组。采用CCK-8法和流式细胞术分别检测各组THP-1细胞增殖和凋亡情况。采用TargetScan软件预测miR-618靶基因,通过荧光素酶报告基因实验对其进行验证。采用蛋白质印迹法检测miR-618过表达组或阴性对照组的THP-1细胞和健康人外周血单核细胞中预测的miR-618靶基因蛋白表达的水平。结果PCR结果显示,与健康人外周血分离的单核细胞相比,THP-1细胞中miR-618表达量低(P<0.05)。CCK-8法检测结果显示,与阴性对照组比较,miR-618过表达组THP-1细胞增殖能力降低(转染0、24、48、72 h细胞吸光度值:0.20±0.03比0.20±0.03、0.28±0.02比0.35±0.03、0.34±0.03比0.43±0.04、0.39±0.02比0.53±0.05,均P<0.05),细胞晚期凋亡率升高[(27.1±0.1)%比(14.9±0.1)%,t=2.13,P=0.03]。TargetScan软件预测miR-618靶基因为ARPP19。荧光素酶报告基因实验结果显示,转染野生型ARPP19基因质粒+miR-618基因质粒组的THP-1细胞相对荧光素酶活性均高于空白对照组和转染野生型ARPP19基因质粒+miR-618空载质粒组(0.170±0.003比0.100±0.004、0.100±0.001,均P<0.05)。蛋白质印迹法检测结果显示,miR-618过表达组THP-1细胞ARPP19蛋白表达水平低于阴性对照组,而两组健康人外周血单核细胞中ARPP19蛋白表达水平相近。结论miR-618可能通过抑制急性单核细胞白血病THP-1细胞ARPP19的表达而抑制细胞增殖、促进细胞凋亡。     

雷帕霉素对去甲氧柔红霉素诱导急性髓系白血病THP-1细胞凋亡的影响

目的:探讨雷帕霉素（Rapa）对去甲氧柔红霉素（IDA）诱导急性髓系白血病THP-1细胞凋亡的影响及其分子机制。方法:分别用10、20、40、80 nmol/L Rapa处理THP-1细胞1 h,另设未经Rapa处理的细胞。采用蛋白质印迹法检测THP-1细胞自噬标志物LC3蛋白的转换情况（LC3Ⅱ/LC3Ⅰ）,采用流式细胞术检测细胞凋亡,确定Rapa处理浓度。用不同浓度IDA作用THP-1细胞24 h,采用CCK-8法检测IDA对THP-1细胞的增殖抑制率,计算半数抑制浓度（ IC50）。以低于 IC50的IDA作用Rapa处理或未处理的THP-1细胞24 h,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡情况,实时荧光定量聚合酶链反应检测自噬相关基因Beclin-1、LC3和p62的表达变化,蛋白质印迹法检测自噬标志物LC3蛋白的转换情况。 结果:20 nmol/L Rapa处理的THP-1细胞LC3Ⅱ/LC3Ⅰ高于未处理的细胞（ P=0.002 4）;80 nmol/L Rapa处理的细胞凋亡率高于未处理的细胞（ P=0.007 3）。根据蛋白质印迹法和流式细胞术检测结果,选取20 nmol/L Rapa作为预处理浓度。IDA对THP-1细胞作用24 h的 IC50为59.874 nmol/L。50 nmol/L IDA作用24 h后,Rapa预处理的THP-1细胞增殖抑制率[（69.67±5.03）%比（41.67±3.51）%]和细胞凋亡率[（74.35±4.83）%比（41.25±5.24）%]均高于未预处理的细胞（均 P<0.05）;Rapa预处理的THP-1细胞Beclin-1、LC3 mRNA表达水平及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ均高于未预处理的细胞,p62 mRNA表达水平低于未预处理的细胞（均 P<0.05）。 结论:Rapa能增强较低剂量IDA诱导的THP-1细胞凋亡,此效应可能是通过其引起THP-1细胞过度自噬实现的。     

儿童急性淋巴细胞白血病染色体及融合基因表达的临床研究

目的 研究儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞遗传学改变和预后的关系.方法 采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测103例儿童ALL患者常见的融合基因、染色体数和结构,分析染色体和融合基因的变化对治疗反应及生存时间的影响.结果 103例患儿中,52例染色体数正常,未检出融合基因.51例检出融合基因,其中TEL-AML1阳性22例,bcr-abl阳性10例,E2A-PBX1阳性11例,MLL-AF4阳性2例,HOX11阳性3例,SIL-TAL1 1例,dupMLL 1例,TLS-ERG 1例.bcr-abl组平均生存时间短于未检出异常基因组、TEL-AML1组、E2A-PBX1组,差异均有统计学意义[(16.5±3.8)个月比(34.6±1.7)个月、(31.6±1.4)个月、(34.5±3.3)个月,均P＜0.05],与其他异常基因组[(12.8±1.5)个月]差异无统计学意义(P＞0.05).未检出异常基因组平均生存时间与TEL-AML1组及E2A-PBX1组比较,差异均无统计学意义(均P＞ 0.05),与其他异常基因组间差异有统计学意义(P＜0.05).染色体数异常18例,其中亚二倍体4例,超二倍体14例.亚二倍体患儿平均生存时间短于超二倍体患儿[(19.8±4.8)个月比(37.5±2.2)个月,x 2=7.375,P=0.007],易复发.初诊时不同白细胞计数和乳酸脱氢酶水平的患儿平均生存时间差异有统计学意义(均P＜ 0.05).结论 融合基因及染色体数等细胞遗传学指标的检测可用于判断儿童ALL的预后和转归,对实现个体化治疗有重要指导意义.     

成年人急性淋巴细胞白血病方案优化与分层治疗

 儿童急性淋巴细胞白血病（AML）疗效在不断改善,而成年人ALL疗效一直没有大的改观。临床上很多危险因素影响其预后,其中最重要的是早期对治疗的反应。儿童ALL的方案与成年人方案相比采用了更大剂量的左旋门冬酰胺酶、激素和长春碱,采用儿童方案可以改善成年人ALL的预后。对于Ph+ ALL、CD+20 ALL联合靶向治疗有助于提高患者长期生存。异基因造血干细胞移植仅适用于高危、复发难治性ALL。     

第54届美国血液学会年会急性淋巴细胞白血病研究领域的主要进展报道

 急性淋巴细胞白血病（ALL）是一组异质性疾病,其预后与患者年龄、免疫亚型、基因和分子生物学特征密切相关。第54届美国血液学会（ASH）年会大量报道了有关ALL发病机制、预后及治疗等领域的最新进展。对ALL的基因表达谱、靶向治疗及造血干细胞移植等方面的亮点进行介绍。     

Arsenic trioxide induces apoptosis of glucocorticoid-resistant acute lymphoblastic leukemia CEM-C1 cells

Objective  To explore the effects of arsenic trioxide (ATO) on the apoptosis of glucocorticoid (GC)-resistant T-acute lymphoblastic leukemia (ALL) CEM-C1 cells and its possible mechanisms. Methods  Different concentrations of ATO (0.25 μmol/L-5 μmol/L) were used to induce the apoptosis of CEM-C1 cells. The inhibition rate of cell proliferation and apoptosis were detected by MTT test, Annexin V-FITC/PI flow cytometry and optical microscopy, respectively. RT-PCR was applied to semi-quantitatively analyze the mRNA expression of pro-apoptotic proteins (Bad and PDCD4) and anti-apoptotic proteins (XIAP and MCL-1) induced by different concentrations of ATO at different time points. Results  ATO could inhibit proliferation and induce apoptosis of CEM-C1 cells at a concentration and time dependent manner. Low-dose ATO mildly inhibited the proliferation of CEM-C1 cells while higher concentrations (1 μmol/L and 5 μmol/L) had strong anti-tumor effect with the inhibiting rates of 40.07±7.98% and 88.67±2.88%, respectively. Annexin V-FITC/PI flow cytometry showed that the apoptotic rates of CEM-C1 cells were significantly increased after 48 hours treatment of different concentrations of ATO. RT-PCR demonstrated up-regulated mRNA expression of pro-apoptotic protein Bad and PDCD4 but down-regulated mRNA expression of anti-apoptotic protein XIAP when CEM-C1 cells were treated with different concentrations of ATO at different time points. The MCL-1 mRNA expression was down-regulated only after the treatment of 5 μmol/L ATO. Conclusion  ATO can inhibit cell proliferation and induce cell apoptosis in GC-resistant CEM-C1 cells. The molecular mechanisms might involve the increased mRNA expression of pro-apoptotic protein Bad and PDCD-4, and rapid down-regulation of XIAP mRNA expression. This work was supported by a grant from the Science and Technology Committee of Sichuan Province (No. 2008JY0029-1).