原发性肝细胞癌p53基因突变检测

为了解在黄曲霉毒素Ｂ１低含量区以ＨＢＶ为主要危险因素的ＨＣＣｐ５３基因突变情况，并分析它与ＨＢＶ及其它因素的关系，作者筛检了成都地区３２例原发性肝癌，分别应用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ Ｓｏｕｔｈｅｒｎ吸印杂交及免疫组化染色法检测了３２例ＨＣＣ及２７份癌旁肝组织中ｐ５３基因突变、ＨＢＶ ＤＮＡ整合及ＨＢｓＡｇ表达，结果：所有ＨＣＣ病例均感染过ＨＢＶ，肝癌细胞中ＨＢＶ ＤＮＡ整合率７１．９％，癌旁组织均有肝硬     

原发性肝癌中 HBV X、S、Pre-S、C 基因片段整合与 ras、myc 癌基因表达的关系

用地高辛标记的ＨＢＶ基因组探针检测了６６例肝细胞性肝癌（ＨＣＣ）中ＨＢＶ的存在状态，从中筛选出３２例仅有ＨＢＶＤＮＡ整合的ＨＣＣ作为研究对象，进一步检测了ＨＢＶＸ基因、Ｓ基因、Ｐｒｅ－Ｓ、Ｃ基因ＤＮＡ片段的整合情况，并探讨了ＨＢＶ４种基因亚片段整合与ｒａｓ、ｍｙｃ癌基因表达的关系。结果显示，ＨＢＶＸ、Ｓ、Ｐｒｅ－Ｓ和Ｃ基因片段的整合率分别为８７．５％（２８／３２）、６２．５％（２０／３２）、６２．５％（２０／３２）和２５．０％（８／３２）。ｐ２１ｒａｓ、ｐ６２ｍｙｃ在ＨＣＣ中的表达率分别为５０．０％（２０／４０）、８１．２％（２６／３２）。通过对ＨＣＣ中４种ＨＢＶ基因片段整合与ｐ２１ｒａｓ、ｐ６２ｍｙｃ表达之间关系的研究，显示ｐ６２ｍｙｃ的表达与ＨＢＶＸ、Ｐｒｅ－Ｓ基因整合关系密切，ｐ２１ｒａｓ的表达则主要与ＨＢＶＸ基因整合有关（Ｐ＜０．０５）。提示ＨＢＶＸ、Ｐｒｅ－ＳＤＮＡ片段在宿主细胞染色体上的整合可能直接或通过其蛋白启动ｍｙｃ和（或）ｒａｓ癌基因的表达。     

肝癌的病毒病因学研究

为了探讨了乙型肝炎病毒（ＨＢＶ），丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染与肝细胞肝癌（ＨＣＣ）发生的关系及原癌基因ｒａｓ和肿瘤抑制基因ｐ５３在肝癌中的变化，我们利用免疫组人技术检测了福尔马林固定，石蜡包埋理肝癌组织内乙型肝炎病毒表面抗原（ＨＢｓＡｇ），核心抗原（ＨＢｓＡｇ）的表达以及ｒａｓＰ２１，ｐ５３蛋白的过量表达，利用聚合物聚链式反应（ＰＣＲ）检测了肝癌及癌旁组织的ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ。在２５例外检     

HCV对HBV干扰作用的研究

应用ＰＣＲ及ＥＬＩＳＡ技术，分析ＨＣＶ ＲＮＡ阳性及阴性标本的ＨＢＶ ＤＮＡ及ＨＢｓＡｇ的感染状况，以探讨ＨＣＶ对ＨＢＶ的干扰作用。结果发现当ＨＢｓＡｇ阳性时，无论ＨＣＶ ＲＮＡ是否阳性，ＨＢＶ ＤＮＡ的阳性率分别为５３．８５％和５９．０９％无明显差异，（Ｐ〉０．０５）；当ＨＢＶ ＤＮＡ阳性时，两驵ＨＢｓＡｇ的转阴率分别为３３．３３％和２３．５３％，无明显差异，（Ｐ〉０．０５）。实验表明ＨＣＶＣＦ     

肝癌细胞中 HBV-DNA 片段整合及 N-ras、p~(53) 表达的研究

肝细胞性肝癌（ＨＣＣ）与ＨＢＶ整合密切相关，为研究ＨＢＶ－ＤＮＡ各片段在ＨＣＣ发生中的作用，用ＨＢＶ全长基因探针通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎ转膜杂交分析了１７例ＨＣＣ标本中ＨＢＶ－ＤＮＡ的存在状态，并用ＨＢＶ片段基因探针和Ｎ－ｒａｓ、ｐ５３探针检测了其相应ｍＲＮＡ的转录情况。结果发现，５２．９％ＨＣＣ标本为纯整合型，４７．１％的标本为混合型。１７例ＨＣＣ中，Ｐｒｅｓ、ＨＢｓ、ＨＢｘ、ＨＢｃ转录率分别为４７．１％、５８．８％、７０．５％和４１．２％。９例纯整合型ＨＣＣ中，上述基因转录率分别为１１．１％、４４．４％、５５．６％和１１．１％，其中ＨＢｘ较ＨＢｃ、Ｐｒｅｓ差异有显著性（Ｐ＜０．０５），ＨＣＣ标本Ｎ－ｒａｓ、ｐ５３总转录率分别为８２．３％、６４．７％。提示ＨＢＶ－ＤＮＡ在ＨＣＣ细胞内主要以整合于染色体上的方式存在，而且整合片段可作为转录的模板，其蛋白产物可能通过影响Ｎ－ｒａｓ、ｐ５３在细胞调控中的功能促进肿瘤的形成。     

人原发性肝细胞癌地高辛素标记HBV DNA探针的原位杂交与C－myc和P_（53）癌基因表达相互关系的研究

取自肝癌高发区的４０例人原发性肝细胞癌（ＰＨＣ）标本，应用地高辛素（Ｄｉｇ）标记ＨＢＶＤＮＡ探针作原位杂交，检测ＰＨＣ和癌周肝组织内ＨＢＶＤＮＡ的表达，并用光敏生物素Ｃ－ｍｙｃ癌基因探针原位杂交和用免疫组化检测ＨＢｓＡｇ，ＨＢｃＡｇ及Ｐ５３癌基因在ＰＨＣ和癌周肝组织内的表达。Ｄｉｇ－ＨＢＶＤＮＡ探针肝内总阳性率为８０％，在ＰＨＣ内为６５％，而癌周肝组织中为７３％。ＨＢＶ－ＤＮＡ定位于肝细胞或癌细胞的胞浆和胞核内，而ＨＢＶＤＮＡ阳性颗粒在胞浆内比胞核内多。ＨＢＶＤＮＡ阳性细胞癌周比癌内更多。结果表明，ＰＨＣ病例与ＨＢＶ存在关系密切；癌内ＨＢＶＤＮＡ大都属整合型，而癌周属游离型。研讨ＰＨＣ内ＨＢＶＤＮＡ的表达与ＨＢｓＡｇ，ＨＢｃＡｇ，和Ｐ５３及Ｃ－ｍｙｃ癌基因的表达相互关系及致癌作用。     

聚合酶链反应检测HBV—DNA及临床意义的再认识

采用聚合酶链反应检测１１４例肝病患者血清ＨＢＶ－ＤＮＡ。结果：１１４例患者血清ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率３５．９６％，其中ＡＨ、ＣＰＨ、ＣＡＨ、ＬＣ组ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率分别为４１．６７％、２１．４３％、５３．６６％和２６．３１％；ＨＢｅＡｇ（＋）组３９．０２％，抗ＨＢｃ（＋）组２２．７３％，ＨＢｓＡｇ（＋）、抗ＨＢｃ（＋）组４３．３７％，抗ＨＢｓ（＋）组４１．１８％；ＨＢＶＭ（－）组１１．１１％。结果     

聚合酶链反应检测HBV─DNA及临床意义的再认识

采用聚合酶链反应检测１１４例肝病患者血清ＨＢＶ－ＤＮＡ。结果：１１４例患者血清ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率３５．９６％，其中ＡＨ、ＣＰＨ、ＣＡＮ、ＬＣ组ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率分别为４１．６７％、２１．４３％、５３．６６％和２６．３１％；ＨＢｅＡｇ（＋）组３９．０２％，抗ＨＢｃ（＋）组２２．７３％，ＨＢｓＡｇ（＋）、抗ＨＢｃ（＋）组４３．３７％，抗ＨＢｓ（＋）组４１．１８％；ＨＢＶＭ（－）组１１．１１％。结果提示：①ＣＡＨ组阳性率较高（５３．６６％）；②抗ＨＢｅ（＋）患者血清中有高滴度ＨＢＶ－ＤＮＡ，提示仍有传染性；③抗ＨＢｅ（＋）、抗ＨＢｓ（＋）、ＨＢＶＭ（－）的患者ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性可能为ＨＢＶ的变异株感染。     

人肝癌组织中黄曲霉毒素和肝炎病毒基因检测分析

以肝细胞场（ＨＣＣ）患者手术切除标本为研究材料，采用高效液相色谱荧光法检测组织中的黄曲霉毒素Ｂ１（ＡＦＢ１），嵌套式多聚酶链反应技术检测组织中的ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ。在６９．２％（１８／２６例）的ＨＣＣ患者中检出了３．６５－８９．０６ｎｇ不等的ＡＦＢ１／ｇ肝组织；ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ检出率分别为９０．５％（５７／６３例）和１２．７％（８／６３例）。其中，ＡＦＢ１和ＨＢＶＤＮＡ重叠检出率为６１．５％（１６／２６例），ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ重叠检出率为７．９％（５／６３例），４例ＨＣＣ患者重叠检出了ＡＦＢ１、ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ；同步检测对照组５例，无１例出现这种情况。结果表明，上述３种因素均与人类肝癌密切相关，并且可能存在协同致癌效应。     

α1b—干扰素治疗慢性乙型肝炎与慢性丙型肝炎疗效比较

目的研究国产干扰素（α１ｂ－ＩＦＮ）对慢性乙型肝炎（ＣＢＨ）与慢性丙型肝炎（ＣＨＣ）疗效差异方法对４６例ＣＢＨ与３９例ＣＨＣ患者分别采取用α１ｂ－ＩＦＮ３００万Ｕ隔日一次，疗程３ｍｏ，同时设立对照组ＣＢＨ５７例，ＣＨＣ３３例，于治疗前、治疗后８ｗｋ、治疗结束及治疗后０．５ａ采血清测ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇＨＢＶ、ＤＮＡ、ＨＣＶ、ＲＮＡ并动态观察丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）变化结果对ＣＢＨ及ＣＨＣ的ＡＬＴ复常效果皆优于对照组，并且ＩＦＮ对ＣＨＣ疗效优于ＣＢＨ（Ｐ＜０．０５），ＩＦＮ对ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ阴转疗效皆不明显（Ｐ＜０．０５），但对ＨＢＶ．ＤＮＡ阴转疗效明显（Ｐ＜０．０５），对ＨＣＶ．ＲＮＡ阴转有明显疗效（Ｐ＜０．０１），并且ＩＦＮ对ＨＣＶ．ＲＮＡ阴转疗效明显优于ＨＢＶ．ＤＮＡ（Ｐ＜０．０５）结论提示ＩＦＮ对ＣＨＣ疗效优于ＣＢＨ。     

原发性肝细胞癌癌组织中p33ING1b与p53基因的表达

目的研究p33ING1b与p53蛋白在原发性肝细胞癌中表达的相关性及ING1b基因在原发性肝细胞癌中的突变率.方法应用免疫组织化学SP方法检测了57例原发性肝细胞癌癌组织、51例癌旁肝组织及12例正常肝组织中p33ING1b和p53蛋白的表达,并分析了原发性肝细胞癌癌组织中乙肝病毒(HBV)的感染率;应用聚合酶链式反应(PCR)联合单链构象多态性(SSCP)方法检测了28例配对癌及癌旁肝组织中ING1b基因两个外显子的突变情况,对有异常泳动条带的DNA片段分别克隆测序.结果在57例原发性肝细胞癌癌组织中,p33ING1b、p53蛋白的阳性率分别为42.1%和57.9%,p33ING1b、p53表达均呈阳性者有19例(33.3%),且两者在癌组织中阳性分布区域相同;p33ING1b蛋白表达与p53蛋白表达在癌组织中呈显著正相关(r=0.783, P<0.01);配对癌旁肝组织及正常肝组织中p53蛋白表达均为阴性,p33ING1b蛋白在13例癌旁肝组织及2例正常肝组织中呈弱阳性表达;在57例原发性肝癌组织中有35例(61.4%)HBV X蛋白呈阳性,其病理类型均为肝细胞肝癌,在51例癌旁肝组织中检出HBV X蛋白阳性者39例(76.47%),癌组织中HBV感染与p33ING1b、p53蛋白表达均有关(P<0.01);PCR-SSCP结果表明,ING1b基因在原发性肝细胞癌中突变率较低为7.1%(2/28).结论 p33ING1b、p53蛋白在原发性肝细胞癌中的表达呈显著正相关,p33ING1b的存在可能还有其他不依赖p53蛋白的途径;HBV感染与p33ING1b、p53蛋白表达均有关;基因突变不是p33ING1b丧失抑癌功能的主要因素.     

血浆循环核酸p53突变诊断原发性肝癌的价值

目的　研究肝脏良恶性疾病患者血浆循环核酸 p5 3基因突变 ,探讨其突变检测诊断肝癌的可行性和价值 .方法　肝脏疾病患者 6 1例 ,其中原发性肝癌 36例 ,良性组为肝血管瘤、肝囊肿和乙型肝炎肝硬化患者共 2 5例 ,提取血浆DNA,采用 PCR扩增 p5 3基因外显子 5 & 6 ,7和 8(E5 & 6 ,E7和 E8) ,用变性高效液相色谱法 (DHPL C)对产物进行突变筛选 .结果　肝恶性肿瘤患者 36例血浆提取的 DNA扩增出E5 & 6 ,E7和 E8例数分别为 10 ,36和 35 ,良性组对应为 0 ,6和 4例 . DHPL C检测到 4 / 36例 E5 & 6突变 ,12 / 36例 E7突变 ,未检测到 E8突变 ,良性组检测到 2 / 2 5例 E7突变 .结论　良恶性组间扩增阳性率有明显差异 (P<0 .0 5 ) ,p5 3基因突变与乙型肝炎感染有关 ,HBs Ag+肝癌患者 p5 3基因突变率明显高于 HBs Ag- 肝癌患者 (P<0 .0 5 ) ,循环核酸 p5 3突变检测有望成为肝癌高危人群特别是乙型肝炎感染和携带者预警或早期诊断的参考指标     

肝细胞癌肿瘤抑制基因P53改变及其与乙型肝炎病毒关系的研究

肝细胞癌肿瘤抑制基因Ｐ５３的改变有着显著的地理差异。应用地高辛标记探针原位杂杂，ＰＣＲ、ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分别检测重庆地区高感染、黄曲霉素中等含量３８例ＨＣＣ中ＨＢＶ ＤＮＡ及Ｐ５３的基因突变，并应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交对其中的１２例进行限制性片段多态性分析。     

三种肝炎病毒在肝细胞癌组织及慢性肝炎肝组织中的表达

目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)及庚型肝炎病毒(HGV)在肝细胞癌(HCC)及慢性肝炎肝组织中的存在状态。方法:分别采用抗HBVS,抗-HBVC,抗HCVNS5及抗-HGVNS5单克隆抗体,以免疫组织化学SPAB法检测27例HCC及37例慢性肝病患者石蜡包埋的肝组织中HBVS抗原(HBsAg)、HBVC抗原(HBcAg)、HCVNS5抗原(HCAg)和HGVNS5抗原(HGAg)。结果:HCC中检出HBsAg18例(66.7%),HCAg13例(48.2%)及HGAg9例(33.3%)。其中HBV/HCV/HGV重叠感染7例,HBV/HCV重叠感染4例,HBV单独感染7例,HCV单独感染2例,HGV单独感染2例;在慢性肝炎中检出HBsAg26例(70.3%),HCAg19例(51.4%)及HGAg12例(32.4%)。其中HBV/HCV/HGV重叠感染10例,HBV/HCV重叠感染5例,HBV单独感染11例,HCV单独感染5例,HGV单独感染2例。HBsAg、HCAg、HGAg均表达于肝细胞或肝癌细胞浆内,呈细颗粒状分布。HBcAg表达于肝细胞或肝癌细胞胞核或胞浆内。结论:慢性肝炎及HCC患者有较高的HBV、HCV及HGV感染率,HBV感染在HCC的发生过程中起重要作用,HCV和HGV的感染可能是HCC发生的相关因素。     

乙型肝炎病毒相关性肝癌与p53基因变化的关系

目的：探讨与ＨＢＶ感染相关的肝癌其ｐ５３基因变化及意义，方法：收集１６例西安地区的肝癌及其旁肝组织，应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交检测了组织中ＨＢＶＤＮＡ的状态，免疫组化确定ＨＢＶ的ＨＢｓＡｇ，ＨＢｘＡｇ和肿瘤抑制基因Ｐ５３蛋白的分布，采用ＰＣＲ扩增后直接ＤＮＡ序列分析，检测了ｐ５３基因第５～８外显子的基因序列。结果：１６例中１３例ＨＢＶＤＮＡＳｏｕｔｈｅｒｎ杂交阳性，１０例癌组织和１３例癌旁组织ＨＢｘ     

The relationship of cancer suppressor gene p53 with HBV in hepatocellular carcinoma

Ｔｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｏｆｃａｎｃｅｒｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒｇｅｎｅｐ５３ｗｉｔｈＨＢＶｉｎｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａＷａｎｇＤｏｎｇ（王东），ＺｈａｎｇＸｉｎｌｉ（张新立），ＳｈｉＪｉｎｇｈｑｕａｎ（史景泉）（Ｄｅｐａｒｔ...     

肝硬化和肝癌组织中乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒及p53蛋白的检测

目的 检测肝硬化和肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）组织中乙型肝炎（hepatitis B virus,HBV）表面抗原（HBsAg）、丙型肝炎（hepatitis C vims．HCV）核心抗原（HCVAg）和p53赁白的表达。方法 应用免疫组织化学法检测20例肝硬化，78例HCC及癌旁肝组织HBsAg、HCVAg和p53蛋白的表达。结果肝硬化，HCC及癌旁肝组织中HBsAg、HCVAg、HBsAg并HCVAg和p53蛋白表达率分别为75．0％、40．0％、25．0％、20．0％；9．07％、6．4％、2．6％、87．2％；80．8％、44．9％、29．5％、21．8％，3组间有显著性差异（P〈0．01）。HCC与癌旁肝组织之间HBsAg、HCVAg、HBsAg并HCVAg和p53蛋白阳性表达率甜显著性差异（P〈0．01）。在肝硬化和HCC无肝艇化组，p53蛋白表达与HBsAg阳性率显著相关（P〈0．01）。HCC合并肝硬化组p53蛋白表达与HBsAg、HCVAg、HBsAg并HCVAg阳性率显著相关（P〈0．01）。结论HCC的发生与HBV和HCV的感染密切相关，肝细胞癌变是一个长期的、多因索作用的结果．在这个过程中p53基因的突变起到了重要的作用。     

原发型肝癌的HBV感染及肝内的HBVDNA

应用~(32)P标记的3.2kb克隆HBVDNA探针对36例原发型肝癌患者的血清和肝组织作HBVDNA斑点杂交,结果:血清、肝癌组织、癌近邻肝组织和癌远邻肝组织的阳性率分别为56％、91％88％和80％,皆高于国内外一些同类研究,说明其HBV感染率比一般认为的还要常见,尽管肝内良恶组织的HBV DNA阳性率未见显著差别。此外,尚对HBV6项血清标记作了检测,结果HBsAg和PHSA·Re的阳性率均较高,分别为83％和75％,说明多数病例的HBV感染仍然处于病毒活动复制阶段。由于血清HBsAb阳性者,肝内HBV DNA全阳性,提示HCC阶段的“保护性抗体”并不能清除病毒感染。     

广西肝癌组织中P^53蛋白和乙肝病毒免疫学标志物的检测

用免疫组化法测定广西２９例人肝癌及其癌旁组织中的Ｐ＾５３蛋白、ＨＢａＡｓ和ＨＢｘＡｇ。４４．８％肝癌病例为Ｐ＾５３蛋白阳性，其癌内及癌Ｐ＾５３蛋白的检出率分别为２７．６％和２８．６％。２１％的肝癌及及８５．７％的癌旁肝组织中可见到ＨＢｓＡｇ。