急性病毒性脑炎患儿血小板α颗粒膜蛋白、血浆血管性假血友病因子水平变化及意义

血小板α颗粒膜蛋白(CD62P)为目前最具特异性的血小板活化的分子标志物,血管性假血友病因子(VWF)则为血管内皮细胞损伤的特异性标志物,两者参与了多种疾病的病理过程.本课题旨在探讨急性病毒性脑炎患儿体内血小板活化及血管内皮细胞损伤程度,研究其在急性病毒性脑炎中的意义和作用,为急性病毒性脑炎的诊治提供理论依据.     

血小板膜糖蛋白Ⅰbα表达水平与急性脑梗死相关性研究

目的探讨血小板膜糖蛋白Ⅰbα(GPⅠbα)表达水平与急性脑梗死(ACI)的相关性。方法采用流式细胞术(FCM)分别检测119例ACI患者与117例健康对照者GPⅠbα的表达水平并进行比较分析。结果 ACI组的GPⅠbα表达水平低于对照组,其差异有统计学意义(P<0.05)。非条件Logistic回归分析显示GPⅠbα表达降低是ACI发生的独立危险因素。结论 GPⅠbα的表达水平与ACI的发生有关。     

血小板膜糖蛋白Ⅰbα、血管性血友病因子表达水平与深静脉血栓进展的相关性

目的观察血液血小板膜糖蛋白Ⅰbα(GPⅠbα)、血管性血友病因子(vWF)表达水平与静脉血栓性疾病(VTE)进展的相关性。方法 SD大鼠下腔静脉(IVC)血栓造模,检测造模后2、8、24、72 h各组大鼠血液中GPⅠbα、vWF的变化情况;收集30例DVT患者、30例实验对照患者、30例健康对照者血样,ELISA法检测GPⅠbα、vWF的表达水平并进行比较分析。结果大鼠造模后,假手术组与模型组血GPⅠbα、vWF水平均呈增高趋势。在下腔静脉受损、血栓形成的起始阶段(2 h),GPⅠbα、vWF水平未明显增高;而在2~24 h血栓形成高峰阶段,假手术组与模型组GPⅠbα、vWF水平升高,模型组GPⅠbα、vWF升高更显著;24~72 h稳定血栓形成,GPⅠbα水平降低,模型组和假手术组vWF水平仍表现高于2 h和对照组。DVT患者组GPⅠbα、vWF表达水平高于无DVT患者组及健康人对照组(P0.05)。结论血GPⅠbα、vWF表达水平随DVT发生而升高,与VTE的进展相关。     

血小板糖蛋白Ⅰbα因子突变（A156V）导致其与血管性血友病因子 …

目的：研究在流休切应力作用下表达突变的细胞与固着的血管性血友病因子（ｖＷＦ）相互作用中ＧＰⅠｂα突变（Ａ１５６Ｖ）的意义。方法在ＧＰⅠｂαｃＤＮＡ中直接诱发的突变克隆到哺乳类表达载体ｐＤＸ的ＥｃｏＲⅠ位点,随后将突变的ｃＤＮＡ转染在ＣＨＯβⅨ细胞。人的ｖＷＦ通过甘氨酸和氯化钠沉淀及在Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ柱分离的方法从血液冷沉淀制剂中纯化。纯化的ｖＷＦ固着在盖玻片上,在平行板液流室中进行细胞滚动研     

月经过多患者血浆血管性血友病因子水平分析

目的观察不明原因月经过多(HMB)患者血浆血管性血友病因子(vWF)的水平。方法选择不明原因HMB患者126例及健康女性73例,比较血浆凝血酶原时间(PT)、国际标准化比值(INR)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、FⅧ凝血活性(FⅧ:C)、血管性血友病因子抗原(vWF:Ag)及瑞斯托霉素辅因子活性(vWF:RCo)及vWF:RCo/vWF:Ag比值的差异;按HMB类型分成周期规则HMB组、周期不规则HMB组、青春期HMB组,按Hb值分成轻度贫血组、中重度贫血组,分别比较各组间vWF水平的差异。结果 HMB组、不同类型HMB组血浆PT、INR、APTT、FⅧ:C、vWF:Ag、vWF:RCo及vWF:RCo/vWF:Ag水平与对照组比较,差异均无统计学意义(P均0.05)。Hb正常组、轻度贫血组、中重度贫血组与对照组血浆vWF:Ag、vWF:RCo及vWF:RCo/vWF:Ag水平差异均有统计学意义(P均0.05);中重度贫血组血浆vWF:Ag、vWF:Rco水平及vWF:RCo/vWF:Ag比值与对照组比较差异均有统计学意义(P均0.01)。结论不明原因HMB伴中重度贫血女性人群血浆vWF水平与健康人差异明显,针对该人群血浆vWF的检测有助于检出血管性血友病(vWD)。     

血小板糖蛋白Ⅰbα因子突变(A156V)导致其与血管性血友病因子相互作用缺陷

目的　研究在流体切应力作用下表达突变的细胞与固着的血管性血友病因子 (vWF)相互作用中GPⅠbα突变 (A15 6V)的意义。方法　在GPⅠbαcDNA中直接诱发的突变克隆到哺乳类表达载体pDX的EcoRⅠ位点 ,随后将突变的cDNA转染在CHOβⅨ细胞。人的vWF通过甘氨酸和氯化钠沉淀及在Sepharose 4B柱分离的方法从血液冷沉淀制剂中纯化。纯化的vWF固着在盖玻片上 ,在平行板液流室中进行细胞滚动研究 ,用相差电视显微镜观察。结果　表达GPⅠb Ⅸ Ⅴ复合物的CHO细胞能粘附于并滚动在固着的vWF表面 ,当用表达A15 6V突变的细胞进行试验时 ,这些细胞虽然能粘附于并滚动在固着的vWF表面 ,但是它们滚动的速度明显快于其野生型 ,这表明突变的GPⅠbα与vWF之间的受体配体键的解离速度受损 ,单克隆抗体AN5 1与突变的GPⅠbα结合明显减少 ,表明A15 6V突变产生了GPⅠbα氨基端配体结合区的构象改变。结论　突变致使A15 6V突变细胞与固着的vWF产生较快的解离速度。突变的多肽在GPⅠbα氨基端配体结合区发生构象改变。平行板液流室在评价GPⅠbα与vWF之间相互作用中是一种有用的工具     

脑梗死患者血浆纤维蛋白原及其血管性假性血友病因子含量与血小板聚集功能的检测及临床意义

目的 通过对脑梗死患者血浆纤维蛋白原(Fib)、血管性假性血友病因子(vWF)及血小板聚集功能的检测,探讨其相互关系及在脑梗死发病中的意义.方法 对62例急性脑梗死患者和50名健康对照者血浆Fib、vWF及血小板聚集功能进行检测,同时对脑梗死患者临床神经功能缺损和梗死面积进行分析比较.结果 脑梗死急性期患者血浆Fib、vWF水平及血小板聚集率分别为(4.29±0.60)g/L、(244.56±62.45)%、(71.22±5.60)%,明显高于对照组[(2.35±0.45)g/L、(98.32±20.14)%、(58.19±7.31)%,t值分别为4.123、3.584、4.725,P均＜0.01],并与患者临床神经功能评分和梗死面积相关(r=0.538、r=0.349,P均＜0.05).结论 脑梗死患者急性期血浆Fib、vWF水平升高,血小板聚集功能增强,是脑梗死发病的重要机制.     

急性脑梗死患者血小板CD62p和CD63的变化及临床意义

脑梗死是由于脑的血液供应障碍,致脑组织缺血、缺氧而引起的脑软化。其中包括脑血栓形成和脑栓塞。病因是栓子阻塞了脑血管使脑组织缺血坏死,丧失正常的神经功能。脑梗死的病理基础是血栓形成,血小板的活化、黏附和聚集在病理的血栓形成过程中起着重要作用。为了解急性脑梗死患者血小板膜糖蛋白的变化,我们分析研究51例急性脑梗死住院患者的CD62p和CD63,并探讨其临床意义。     

老年人脑梗死与胆红素和血管性血友病因子的相关性

目的　探讨老年人脑梗死与血清胆红素和血管性血友病因子 (vWF)的关系。方法　选择老年人脑梗死组 (4 2例 )和对照组 (19例 ) ,测定血清总胆红素 (TBIL)、直接胆红素 (DBIL)、间接胆红素 (IBIL)、低密度脂蛋白胆固醇 (LDL)和血浆vWF的浓度 ,分析其与老年人脑梗死之间的关系。结果　老年人脑梗死TBIL、DBIL、IBIL明显降低 ,LDL、vWF显著升高 ,与对照组比较差异有显著意义。结论　胆红素和血管性血友病因子的异常变化与老年人脑梗死的发生、发展密切相关。     

不同栓塞面积肺血栓栓塞症患者血管性假血友病因子及α颗粒膜蛋白-140的变化

目的研究血管性假血友病因子(vWF)和α颗粒膜蛋白-140(GMP-140)在不同栓塞面积急性肺血栓栓塞症(PTE)患者中的变化情况,探讨vWF和GMP-140与PTE形成的关系。方法检测48例PTE患者[PTE组,其中急性大面积PTE15例(大面积PTE组),次大面积PTE21例(次大面积PTE组),非大面积PTE12例(非大面积PTE组)]和20例正常人(对照组)的血小板膜GMP-140和血浆vWF、D-二聚体变化。结果大面积PTE组、次大面积和非大面积PTE组血小板表面GMP-140、血浆vWF、D-二聚体表达均明显高于正常对照组(P均<0.01),其中大面积PTE组又明显高于次大面积组和非大面积组(P<0.01),次大面积亦高于非大面积组(P<0.01)。结论GMP-140和vWF与PTE的发生、发展关系密切。     

仪器计数血小板方法学进展

准确计数血小板在血液学分析中是极为重要的,然而仪器法计数血小板总是存在许多不足之处,如大血小板、红细胞碎片以及小红细胞等问题严重影响着血小板计数的准确性,该文结合现代电子技术在血小板计数方面的应用,对其方法学的进展作简要综述,期望对关注这一领域和从事血细胞分析工作的同事有所帮助。     

血栓性血小板减少性紫癜患者血管性血友病因子前肽水平的研究

目的探讨血栓性血小板减少性紫癜（thrombotic thrombocytopenic purpura,TTP）患者血管内皮损伤程度,以及不同类型TTP之间血管内皮损伤差异性。方法纳入2005年4月2010年12月特发性TTP患者17例（A组）,继发性TTP患者15例（B组）,骨髓移植相关TTP患者2例（C组）,疑似TTP患者11例（D组）,共45例;另选取健康体检志愿者为对照组10例（E组）。采用双夹心酶联免疫吸附试验测定血管性血友病因子前肽（vonWillebrand factor propeptide,vWFpp）水平。结果 vWFpp水平为其与正常混合血浆的比值,A组为2.2,B组为2.34,C组为2.795,D组为1.72,E组为1.08。A、B、C、D组患者vWFpp水平与E组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）,A、B、C、D组间比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 TTP患者vWFpp水平明显增高,提示血管内皮损伤明显,但vWFpp水平不能用于鉴别TTP类型。     

某地区急性缺血性脑梗死患者GPⅠbα基因VNTR多态性研究

目的探讨GPⅠbαVNTR基因多态性与脑梗死的相关性。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析、DNA测序分析技术,对119例急性缺血性脑梗死患者和117例健康对照者进行血小板膜糖蛋白(GP)Ⅰbα基因可变数目串联重复序列(VNTR)分析。结果该地区汉族人群中不仅存在B、C、D等位基因和CC、DD、CD、BC、BD基因型,而且还发现了A等位基因和AC基因型;其中以C、D等位基因和CC、CD基因型为主;急性缺血性脑梗死病例组血小板膜GPⅠbαVNTR CC基因型和CD基因型与健康对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论该地区汉族人血小板膜GPⅠbαVNTR CC基因型和CD基因型与缺血性脑梗死显著相关。     

血小板膜糖蛋白Ⅰbα基因可变数目串联重复序列多态性分布及其与脑梗死的关系

目的 研究血小板GPⅠbα基因可变数目串联重复序列（VNTR）多态性在哈尔滨地区汉族人群中的分布状况及其与脑梗死的相关性。方法 采用PCR技术对正常对照组200名和脑梗死患者组200例进行检测，所得结果进行统计学处理。将脑梗死组进一步分为腔隙性脑梗死组（77例）和动脉粥样硬化血栓性脑梗死组（123例），分析GPⅠbα基因VNTR多态性与脑梗死的相关性。结果 血小板GPⅠbα基因VNTR多态性存在3种等位基因B、C、D，未见A等位基因。发现5种基因型BC、BD、CC、CD、DD，未见BB纯合子。脑梗死组及脑梗死各分组与正常对照组间GPⅠbα基因VNTR多态性基因型分布频率差异无统计学意义（P值分别为0．412和0．572）。结论 哈尔滨地区汉族人群血小板GPⅠbα基因VNTR多态性等位基因以C、D为主，基因型CC、CD、DD多见。GPⅠbα基因VNTR多态性与脑梗死可能无相关性。     

血小板内血管性血友病因子裂解酶表达的鉴定

目的　血管性血友病因子裂解酶(vWF cp)是一种新发现的血浆金属蛋白酶,他在人外周血细胞中的 表达尚待确定。本研究确定了该酶在血小板中的表达。方法　应用逆转录 聚合酶链反应(RT PCR)、流式细胞 术(FCM)和免疫共沉淀鉴定了血小板内vWF cpmRNA和蛋白的表达情况。同时应用FCM检测了白细胞、红细 胞内vWF cp蛋白的表达。结果　RT PCR显示,血小板中存在该蛋白酶mRNA的表达。同时,免疫沉淀及蛋白 印迹结果表明,血小板内存在相对分子质量约200000的vWF cp蛋白。FCM结果显示,经穿膜处理的血小板可 检测到vWF cp蛋白的明显表达,而不经穿膜处理以及经过穿膜处理的白细胞和红细胞中不存在该酶的表达。 结论　本研究不仅证实了外周血血小板中存在vWF cp,由于血小板亦为血管性血友病因子的一个主要合成/贮 存场所,这将有助于深入阐明血小板在血栓形成与止血中的作用。     

血小板内血管性血友病因子裂解酶表达的鉴定

目的血管性血友病因子裂解酶(vWF—cp)是一种新发现的血浆金属蛋白酶,他在人外周血细胞中的表达尚待确定。本研究确定了该酶在血小板中的表达。方法应用逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)、流式细胞术(FCM)和免疫共沉淀鉴定了血小板内vWF-cpmRNA和蛋白的表达情况。同时应用FCM检测了白细胞、红细胞内vWF—cp蛋白的表达。结果RT-PCR显示,血小板中存在该蛋白酶mRNA的表达。同时,免疫沉淀及蛋白印迹结果表明,血小板内存在相对分子质量约200000的vWF—cp蛋白。FCM结果显示,经穿膜处理的血小板可检测到vWF—cp蛋白的明显表达,而不经穿膜处理以及经过穿膜处理的白细胞和红细胞中不存在该酶的表达。结论本研究不仅证实了外周血血小板中存在vWF—cp,由于血小板亦为血管性血友病因子的一个主要合成／贮存场所,这将有助于深入阐明血小板在血栓形成与止血中的作用。     

血管性血友病因子和血小板表面受体突变的数据库构建及数据分析

背景：血管性血友病因子和血小板表面受体之间的相互作用在血小板黏附、传播、聚集等血栓形成过程中起到关键作用。目前关于血管性血友病因子突变信息的数据库并不完善且血小板表面受体相关的数据库仍未构建。目的：致力于构建血管性血友病因子及血小板糖蛋白Ibα相关突变的数据库,以利于相关领域的研究人员快速查找到该分子对的重要突变信息。方法：以数据库Uniprot、VWFdb及文献报道的突变信息为数据源,采用MySQL和Apache为后台数据库和服务器,运用PHP语言开发血管性血友病因子及血小板糖蛋白Ibα突变数据库。结果与结论：收集了341条血管性血友病因子,13条血小板糖蛋白Ibα的野生或者突变序列数据,并人工构建A1结构域的虚拟突变3 920条,建立了包括背景介绍、相关病理图册和资料下载等登录页面,初步实现了数据检索、突变位点分析以及虚拟突变位点信息等相关功能。该数据库较全面搜集及分析血管性血友病因子及血小板糖蛋白Ibα的数据信息,有利于研究人员对血管性血友病因子和血小板糖蛋白Ibα相关信息的查询,有助于新型抗血栓药物的研发,进一步提高临床诊断和治疗水平。     

血小板膜糖蛋白(GP)Ⅰbα胞内区551到565氨基酸序列对GPⅠbα结合VWF功能的调控作用

目的 探讨血小板膜糖蛋白(GP)Ⅰ bα胞内区551到565氨基酸序列对GPⅠ bα结合血管性血友病因子(VWF)功能的调控作用。方法 以同时表达野生型GPⅠ bα、GP Ⅰ bβ和GPⅨ三种蛋白的中国仓鼠卵巢细胞株(1b9)、同时表达野生型GP Ⅰ bβ、GPⅨ和在565或551以后氨基酸序列缺失的GPⅠ bα的中国仓鼠卵巢细胞株(△565或△551)为模型,采用流式细胞术检测细胞株的GP Ⅰbα在瑞斯托霉素诱导下结合VWF的能力,流动腔技术检测细胞株在流体剪切力条件下(200 s-1)在VWF表面的黏附状况,激光共聚焦技术检测细胞株在botrocetin诱导下在VWF表面的铺展状况。结果 与对照1b9和△551相比,△565细胞株在ristocetin诱导下其GPⅠ bα结合VWF的能力最强(P＜0.01),在VWF表面黏附的△565细胞数量最多(P＜0.05),在botrocetin诱导下△565细胞株在VWF表面的铺展面积最大(P＜0.05)。结论 GP Ⅰ bα胞内区551到565氨基酸序列对GP Ⅰ bα结合VWF的功能具有重要调控作用。     

慢性肾功能衰竭患者血小板膜糖蛋白Ⅰb/Ⅸ/Ⅴ复合物表达的研究

目的:观察慢性肾功能衰竭(CRF)患者血小板膜糖蛋白(GP)Ⅰb/Ⅸ/Ⅴ复合物及其组分GPⅠbα的表达与正常人之间的差异。方法:采用流式细胞术检测CRF患者血小板GPⅠb/Ⅸ/Ⅴ复合物和GPⅠbα的表达,采用比浊法检测其血小板最大聚集率(MA)。结果:CRF患者GPⅠb/Ⅸ/Ⅴ复合物、GPⅠbα表达和MA明显低于正常对照组(P=0.013,P=0.001,P=0.006);相关性分析显示GPⅠb/Ⅸ/Ⅴ复合物和GPⅠbα的表达与血肌酐呈明显负相关(P=0.041,P=0.026)。结论:血小板GPⅠb/Ⅸ/Ⅴ复合物作为凝血酶和血管性血友病因子的受体,在CRF患者体内的表达下降,导致血小板聚集功能障碍,可能是CRF出血倾向的重要原因之一。