酶联免疫吸附试验的再认识

将待测抗原或抗体先包被于固相载体表面,再用标记有酶的抗原或抗体与固相载体的相应抗体或抗原发生特异性反应,加入酶底物及色原后显色,,显色程度与待测抗原或抗体量呈相关性［1］,这就是酶联免疫吸附试验（ELISA）的基本原理。该试验虽然操作简便,特异性、敏感性也较好,广泛应用于实验室常规检测中,但由于很多因素都会影响试验结果。故有必要对ELISA 进行再认识。     

关于标本因素对ELISA检测结果影响的分析

ELISA(enzymelinkedimmunosorbentassay)即酶联免疫吸附试验 ,是一种常用的固相酶免疫测定方法。ELISA的基本原理是 :①使抗原 (或抗体 )结合到某种固相载体表面 ,并保持其免疫活性 ;②使抗原 (或抗体 )与某种酶联结成酶标抗原 (或抗体 ) ,而且此酶标抗原 (或抗体 )既保留其免疫活性 ,又保留其酶活性 ;③测定时将待测标本 (抗体或抗原 )和酶标抗原(或抗体 )按不同步骤与固相载体表面的抗原或抗体进行反应 ,再用洗涤方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开 ,最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检的抗体或抗原量成一定比…     

ELISA试验操作过程中应注意的两个问题

在传染病防治工作中，应用最多的实验室诊断方法是血清学试验。血清学试验是基于抗原抗体结合的高度特异性原理，用已知抗体检测抗原，或用已知抗原检测抗体的方法。目前，血清学试验的最常用方法是酶联免疫吸附试验（ELISA法），用ELISA法进行血清学试验，操作过程中有一些易被人们忽视但对试验结果会产生直接影响的问题，应引起检验人员注意。[第一段]     

溶血对ELISA法测定HIV抗体假阳性的观察

EUSA试验是一种敏感性高,特异性强,重复性好的实验诊断方法 [1].将抗原、抗体免疫反应的特异性和酶的高效催化作用原理有机地结合起来,可敏感地检测体液中微量的特异性抗体或抗原.在日常ELISA测定HIV抗体试验试验中经常会遇到溶血标本,标本溶血后会释放出血红蛋白,血红蛋白中的亚铁血红素具有过氧化物酶样作用,可能造成试验的假阳性,影响HIV抗体检测的结果 ,本研究探讨溶血对ELISA法检测HIV抗体的影响,现报告如下.     

临床ELISA检测的常见问题与对策

酶联免疫吸附实验（ELISA）是检验科免疫室日常工作中的一项最基本的实验技术,广泛用来检测生物分子抗原和抗体。目前临床免疫室开展的甲肝抗体、乙肝抗原抗体系统、丙肝抗体、戊肝抗体、艾滋病抗体等日常检测工作中,最为常用的检测方法为ELISA。笔者结合多年临床ELISA检验工作实践,现将临床ELISA检测的常见问题与对策总结综述如下。     

ELISA试剂预温控制与常规操作实验结果的比较

温育是ELISA试验中必需的步骤,也是影响ELISA检测结果最为关键的一个因素。ELISA作为一种固相免疫测定,抗原-抗体结合反应在固相载体上进行,必须在一定的温度条件下反应一定的时间才能使液相中的抗原或抗体与固相中的特异性抗体或抗原充分结合。ELISA试验中抗原-抗体结合的合适温度为37℃,但在常规实验中,从室温操作完毕再将微孔板放入37℃恒温箱中时,孔内的温度从室温升至反应平台的37℃需要一定的时间,这样会使抗原-抗体在37℃条件下反应的时间相对缩短,有可能直接影响检测结果。     

酶联免疫吸附试验检测HBsAg的应用体会

目的总结酶联免疫吸附试验(ELISA)测定HBsAg的经验,提高乙肝检测水平。方法利用酶标记物作为指示物,以抗原-抗体的特异性结合反应为基础,在酶标记物同抗原-抗体结合后,由于酶的催化放大作用,使得ELISA既保持抗原抗体反应的特异性又体现酶催化放大的敏感性。针对检测过程,总结应用体会。结果仪器设备、试剂、标本、操作过程、环境、质量控制等方面都会影响检测结果,操作时一定要严格控制。结论控制影响检测结果的因素,可为临床提供准确可靠的检测结果。     

胶体金免疫层析试条法检测血清HBsAg应用评价

免疫层析分析是将特异性抗体或抗原固定于固相载体的某一区域,通过毛细作用使样品溶液在层析条上泳动,待测物中抗原或抗体与层析材料上相应抗体或抗原发生特异性免疫反应,通过胶体金或酶反应与免疫复合物结合显色,从而实现快速的特异性诊断.为了检测免疫层析法的敏感性和特异性,对1500病人用免疫层析和ELISA法作比较,其中100例又与微粒酶免疫发光分析法(MEIA)进行了比较. 1 材料与方法 1．1 试剂与仪器：胶体金免疫层析试条：郑州博赛生物技术研究所;ELISA酶标试剂：珠海亚利生物工程有限公司;MEIA试剂及Axsym免疫发光仪：美国AB…     

影响酶联免疫吸附试验结果的操作因素

酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)是利用酶标记物作为指示物,以抗原-抗体的特异性结合反应为基础,在酶标记物同抗原-抗体结合后,由于酶的催化放大作用,使得ELISA既保持抗原-抗体反应的特异性,又体现酶催化放大的敏感性.整个反应过程的完成是在非均相反应体系中,即固相免疫吸附.为此反应的每一步都经过洗涤程序,不仅除去未反应物质,还除去某些非特异的干扰物质,从而进一步提高了检测的特异性[1].     

斑点金免疫渗滤试验检测不育者血清抗精子抗体

目的研究一种快速鉴定抗精子抗体的新方法的临床意义。方法用化学试剂提纯精子抗原,将其结合于硝酸纤维素膜上;以胶体金颗粒结合的羊抗人lgG作为标记抗体,以斑点金免疫渗滤试验(Dot-immunogoldfiltrationassay,DIGFA)检测人血清抗精子抗体。结果抗原抗体通过渗滤在膜上进行反应,10min内即可用肉眼观察结果,在289例临床血清标本的检测中,阳性率为21%,与酶联免疫吸附试验(ELISA)的结果基本相符。结论斑点金免疫渗滤试验可快速测定抗精子抗体,具有推广使用的价值。     

双抗原夹心ELISA检测抗HCV总抗体

目的建立检测抗HCV抗体的双抗原夹心ELISA法,评价其可行性。方法将与His或GST融合表达的HCV基因工程抗原,分别用作ELISA的包被和酶标记抗原,建立用于抗HCV总抗体检测的双抗原夹心ELISA。用此方法检测1 968份临床血清标本,并以间接ELISA(北京万泰试剂)与之对照;此外,用套式RT-PCR检测部分血清的HCV RNA。结果有1 761份血清2种ELISA检测均为阴性,有190份血清均为阳性,两种方法符合率为99.1%;有17份血清的检测结果不相符,间接法阳性而本法阴性的14份,其中HCV RT-PCR阳性1份;本法阳性而间接ELISA阴性的3份,其中RT-PCR阳性2份。双抗原夹心ELISA与间接ELISA的敏感性分别为99.48%、98.96%,特异性分别为99.94%、99.27%。结论新研制的检测抗HCV总抗体的双抗原夹心ELISA具有较高的敏感性和特异性,值得作进一步的深入研究。     

伤寒检测方法探讨及结果分析

目的 建立适当的实验室检测方法 体系,提高伤寒早期诊断率,为临床提供合理的分析治疗方案.方法 对50例临床上疑似伤寒的患者分别用肥达试验、酶联免疫吸附试验(ELISA)检测伤寒抗原抗体、血培养等3种方法 进行敏感度、特异性、诊断效率、阴性预测值、阳性预测值、治愈率的检测.结果 3种方法 的阳性率:肥达试验44%,ELISA检测伤寒抗原抗体69.6%,血培养45.2%.结论 ELISA检测伤寒抗原抗体阳性率高,特异性和敏感性好,操作简便快速,适合早期诊断,同时结合血培养和药敏试验以便临床合理选用抗生素治疗.以多种方法 联合应用检测可提高结果 的准确性,从而提高检测率.     

胶体金免疫结合试验在检验医学中的应用

胶体金免疫结合试验是在酶免疫结合试验的基础上发展起来的一种固相标记免疫测定新技术。其特点是单份测定、简单、快速、除商品试剂外不需任何仪器设备 ,几分钟即可用肉眼观察结果。目前已在临床检测中获得广泛应用。现就其检测原理、试剂制作及应用现状和展望作一介绍。一、胶体金免疫结合试验的检测原理胶体金免疫结合试验的检测原理是以微孔滤膜为载体 ,包被已知抗原或抗体 ,加入待检标本后 ,经滤膜的毛细管作用使标本中的抗体或抗原与膜上包被的抗原或抗体结合 ,再通过胶体金结合物达到检测目的。根据检测装置的不同可分为金免疫渗滤试…     

双抗体夹心ELISA检测肺炎支原体抗原方法的建立

目的建立检测肺炎支原体(MP)抗原的双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA),并探讨其临床应用的可行性。方法采用不同株MP单抗,用双抗体夹心ELISA检测MP抗原,优化该方法检测MP抗原的最佳实验条件。对MP标准株及147份临床标本进行测定,观察双抗体夹心ELISA的敏感性和特异性及该方法与聚合酶链反应(PCR)检测的符合率。结果包被单抗量为20μg／ml,酶标记单抗1：200稀释时,阳性对照与阴性对照吸光度之比(P／N值)最大,检测MP抗原敏感度达2μg／ml,和其他支原体没有交叉反应;147份临床标本PCR检测阳性率13．6％(20／147),双抗体夹心ELISA检测阳性率12．2％(18／147),两者符合率达95．9％。结论建立的双抗体夹心ELISA检测MP抗原具有快速、简便、灵敏度高、特异性强等优点。     

双抗体夹心ELISA检测肺炎支原体抗原方法的建立

目的　建立检测肺炎支原体(MP)抗原的双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA),并探讨其临床应用的可行性。方法　采用不同株MP单抗,用双抗体夹心ELISA检测MP抗原,优化该方法检测MP抗原的最佳实验条件。对MP标准株及147份临床标本进行测定,观察双抗体夹心ELISA的敏感性和特异性及该方法与聚合酶链反应(PCR)检测的符合率。结果　包被单抗量为20μg/ml,酶标记单抗1∶200稀释时,阳性对照与阴性对照吸光度之比(P/N值)最大,检测MP抗原敏感度达2μg/ml,和其他支原体没有交叉反应; 147份临床标本PCR检测阳性率13. 6% (20 /147),双抗体夹心ELISA检测阳性率12. 2% ( 18 /147 ),两者符合率达95. 9%。结论　建立的双抗体夹心ELISA检测MP抗原具有快速、简便、灵敏度高、特异性强等优点。     

斑点金免疫渗滤试验检测不育者血清抗精子抗体

目的：研究一种快速鉴定抗精子抗体的新方法的临床意义。方法：用化学试剂提纯精子抗原,将其结合于硝酸纤维素膜上;以胶体金颗粒结合的羊抗人lgG作为标记抗体,以斑点金免疫汉滤试验（Dot-immunogold filtration assay,DIGFA)检测人血清抗精子抗体。结果：抗原抗体通过渗滤在膜上进行反应,10min内即可用肉眼观察结果,在289例临床血清标本的检测中,阳性率为21％,与酶联免疫吸附试验（ELISA）的结果基本相符。结论：斑点金免疫渗滤试验可快速测定抗精子抗体,具有推广使用的价值。     

双抗原夹心酶联免疫吸附试验对丙型肝炎病毒抗体检测灵敏度及特异性的影响

目的:探究双抗原夹心酶联免疫吸附试验对丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)检测灵敏度及特异性的影响。方法:选取2016年5月~2017年4月我院进行手术和血液透析前抗-HCV检测的患者270例,经血液筛查(荧光定量PCR法)抗-HCV阳性12例,抗-HCV阴性258例,采用双抗原夹心酶联免疫吸附法(ELISA)和间接ELISA分别对270例患者血清进行抗-HCV检测,比较两种检测方法的特异性、灵敏度。结果:双抗原夹心ELISA法灵敏度、特异性均高于间接ELISA法(P<0.05)。结论:双抗原夹心酶联免疫吸附试验可提高丙型肝炎病毒抗体检测灵敏度及特异性,可作为临床血液标本筛查首选方法。     

数种检测抗核抗体、抗盐水可提取核抗原抗体方法的对比分析

目的评价检测抗核抗体和抗盐水可提取核抗原(ENA)抗体的酶联免疫吸附试验(ELISA)的性能.方法将相关纯化抗原包被的ELISA试剂和间接免疫荧光抗核抗体(IFANA)试验、免疫印迹法(IBT)和对流免疫电泳法(CIE)等用于20份系统性红斑狼疮(SLE)、10份干燥综合征(SS)患者以及30份健康对照血清中自身抗体的检测.结果 ELISA和IFANA抗核抗体筛选试验对结缔组织病诊断的敏感性和特异性差异无显著性(P>0.05),但5例IFANA阴性而ELISA阳性的患者血清经鉴定为抗SS-A和/或dsDNA抗体阳性;1例ELISA阳性而IFANA阴性的正常人血清经证实为ELISA试验假阳性.ELISA、CIE、IBT 3种方法检测抗Sm抗体对诊断SLE的特异性均达到100%,敏感性差异无显著性(P值均>0.05).ELISA与IBT相比,在抗SS-A抗体检测上更为敏感(P<0.01),ELISA与CIE法相比对抗SS-B抗体的检测也更敏感(P<0.05).结论本研究中所用的ELISA抗核抗体检测试剂敏感性、特异性较好.     

以合成肽为抗原检测人巨细胞病毒抗体的酶联免疫吸附试验的建立及评价

目的以合成多肽为抗原建立用于人巨细胞病毒(HCMV)抗体检测的间接酶联免疫吸附试验(ELISA)。方法以固相多肽合成技术合成了HCMV 7个抗原性肽段,并对其抗原性进行了初步评价,选择高抗体反应的肽段为抗原,建立检测HCMV特异性抗体的间接ELISA。结果7个肽段中,抗体反应性较高肽段有4个;以合成多肽为抗原的间接ELISA对HCMV IgG抗体检测的敏感性和特异性分别为90.9%和100.0%,对于IgM抗体检测的敏感性和特异性分为90.0%和100.0%;与国外试剂盒测定结果有良好的符合性;该方法的精密度及稳定性良好。结论合成的HCMV多肽片段可作为抗原用于HCMV的检测,以此多肽为抗原建立的间接ELISA可用于临床HCMV特异性抗体的检测。     

献血者血液抗-HIV初筛与确证试验结果对比

正酶联免疫吸附试验(ELISA)由于操作简单,灵敏度高,是目前输血领域中血液筛查普遍使用的检测技术。抗-HIV筛查ELISA试剂是将多种HIV抗原包被到反应板上,只要检测到1种与包被抗原结合的抗体就判为阳性,其灵敏度高,有假阳性的可能,因此必须应用特异性强的确证试验进一步