牛乳中抗幽门螺杆菌特异性抗体的间接ELISA法的建立

目的 建立抗幽门螺杆菌(Hp)特异性抗体的ELISA检测方法,用于牛乳中抗Hp特异性抗体的检测.方法 超声Hp全菌抗原接种奶牛,按多克隆抗体制备技术制备牛抗Hp抗血清.用纯化牛IgG免疫家兔.制备兔抗牛IgG多克隆抗体.硫酸铵盐析,DEAE-32柱层析分别纯化牛与兔IgG.兔抗牛IgG以辣根过氧化物酶标记.用Hp全菌抗原包被反应板,建立间接ELISA法用于牛乳抗Hp抗体的检测.结果 建立的抗Hp间接ELISA法的最佳包被抗原量为1.47μg/孔,HRP-兔抗牛IgG 1∶600稀释,标准曲线方程为A=0.0124 0.3988 lnC,相关系数r=0.999 8,线性范围为1.8～145μg/ml,回收宰在86.4%～92.8%,变异系数为9.4%～12.3%.结论 初步建立牛乳中抗Hp抗体的间接ELISA测定法,可用于Hp免疫牛乳中抗Hp特异性IgG的检测.     

检测尿液中抗HIV抗体的精确方法

由于收集血样来检测抗HIV抗体不方便,本文报道了两种能精确检测未处理过的尿液中抗HIV的方法。一种是抗体捕获颗粒吸附法(GACPAT),另一种是抗体捕获酶联免疫吸附法(GACELISA)。GACPAT的操作方法是:在包被了免抗人IgG抗体的反应板中加入一定量的尿液样品和对照液,反应一定时间后,加入HIV包被的明胶颗粒,放置过夜。若样品中有抗HIV抗体存在,则明胶颗粒就粘附于反应板     

间接ELISA测定血清中RI含量方法的建立

目的：建立检测血清中核糖核酸酶抑制因子（Ribonuclease Inhibitor，RI）含量的问：陵酶联免疫吸附法（EUSA），并分析该方法的特异性和敏感性。方法：用血清样品包被酶标板，兔抗人RI抗体为一抗，辣根过氧化物酶标记的羊抗兔抗体为二抗，建立血清RI定量检测的间接EUSA法。结果：所建立的用于血清中RI含量检测的间接ELISA方法特异性好．灵敏度高。结论：间接ELISA法可以用于测定血清中的RI抗原含量，具有良好的灵敏度和稳定性，能够有效的反映出人血清中的RI表达情况。     

利用酵母重组抗原U1RNP-70K建立间接ELISA法检测抗U1RNP-70K抗体

目的利用纯化的酵母重组U1RNP-70K抗原建立间接ELISA法,用于检测抗U1RNP-70K抗体。方法将巴斯德毕赤酵母菌重组表达的U1RNP-70K抗原包被于聚苯乙烯微量反应板,与待检血清中抗U1RNP-70K抗体反应后,经洗涤,再加入辣根过氧化物酶标记羊抗人IgG与之结合,然后用四甲基联苯胺（TMB）作用显色。结果间接ELISA法与欧蒙斑点酶免疫法的阳性符合率为94.74%（54/57）,阴性符合率为98.00%（49/50）,总符合率为96.26%（103/107）;两者差异无统计学意义（P=0.617,P〉0.01）。结论本研究利用酵母重组U1RNP-70K抗原成功建立了用于检测抗U1RNP-70K抗体的间接ELISA法,具有良好的临床诊断应用前景。     

心肌肌钙蛋白Ⅰ自身抗体间接酶联免疫吸附分析法的建立

目的建立以重组心肌肌钙蛋白I-C(cTnI-C)融合蛋白为包被抗原的间接酶联免疫吸附分析法(ELISA),检测人血循环中的抗cTnI自身抗体,为判断心肌损伤的预后提供依据。方法采用自行构建表达的cTnI-C融合蛋白作为包被抗原,以棋盘法优化实验条件,建立检测人血清cTnI自身抗体的间接ELISA方法。采用建立的间接ELISA法在121例急性心肌梗死(AMI)中筛查抗cTnI自身抗体,并用蛋白印迹法(WB)进行确证。结果 121例AMI血清抗cTnI抗体的阳性率为10.74%,ELISA试验的灵敏度100%,特异性95.37%,Kappa值为0.815。结论以cTnI-C融合蛋白作为包被蛋白建立的间接ELISA法具有良好的敏感度、特异性,可用于人血清抗cTnI自身抗体的筛查。     

一种新的检测双链DNA抗体的ELISA法

在诊断和处理系统性红斑狼疮(SLE)时能否准确检测双链DNA抗体是很重要的。作者建立了一种新的ELISA方法,即将质粒双链DNA生物素标记化,然后再和包被板底的链霉抗生物素蛋白连接。这种生     

ELISA法检测人血丙种球蛋白制剂抗-HCV含量——稀释液的选择

<正> ELISA法是用HCV特异性抗原包被酶联板,待检样品中的抗—HCV抗体与包被抗原反应后,再与酶标抗体结合形成抗原—抗体—酶标抗体复合物,加入TMB显色后读取OD值以判定制品中抗—HCV含量。     

ELISA法定量测定食蟹猴血清中的抗CTLA-4单克隆抗体

目的:建立酶联免疫吸附法(ELISA法)用于测定食蟹猴血清中的抗CTLA-4单克隆抗体(伊匹单抗,YERVOY?)的浓度.方法:建立间接ELISA方法对待测抗体药进行浓度测定,将Human CTLA-4蛋白包被于酶标板中,封闭后加入稀释后样品,采用HRP标记的羊抗人IgG作为酶标抗体,用TMB底物进行显色并用2 mol...     

子宫内膜异位症患者血清抗转铁蛋白抗体的表达及意义

目的建立一种ELISA方法 ,检测患者血清中抗转铁蛋白抗体 ,评价其对子宫内膜异位症诊断的价值。方法用转铁蛋白抗原包被 ,间接ELISA方法检测患者血清中抗转铁蛋白抗体。采集患者血清 ,分 3组 :盆腔内异症组 38例 ,Ⅰ、Ⅱ期 2 0例 ,Ⅲ期 9例 ,Ⅳ期 9例 ;妇科良性疾病对照组 30例 ;正常对照组 4 0例。结果内异症患者血清中抗转铁蛋白抗体阳性率高达 94 .7% ,正常对照组阳性率为 2 .5 % ,良性疾病对照组阳性率为 0 % ,内异症组与两对照组比较差异有显著意义 (P均 <0 .0 1 )。间接ELISA法诊断内异症临床敏感性为 94 .7% ,特异性为 98.6 % ,诊断符合率为 96 .5 %。内异症各组阳性率比较差异无显著意义 (P >0 .0 5 )。结论用转铁蛋白抗原包被的间接ELISA法检测血清中抗转铁蛋白抗体诊断内异症敏感性、特异性强 ,诊断符合率高 ,可试作为内异症辅助诊断及疗效检测的一种非创伤性的指标     

小鼠血清乙型肝炎病毒前S1抗体间接ELISA检测方法的建立和验证

目的  建立小鼠血清乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）前S1抗体的间接ELISA检测方法。方法  以合成的HBV前S1（21-47位氨基酸）多肽包被酶标板,利用方阵滴定法确定间接ELISA方法的最适工作条件,对该法的精密度、特异性和灵敏度进行验证,并与商品化试剂盒进行比较。结果  确定最佳抗原包被浓度为1.0 mg/L,血清稀释度为1︰10。该方法的特异性、灵敏度和精密度均符合检测要求。本法与商品化前S1抗体检测试剂盒测定结果的符合率为98.0%。结论  成功建立了HBV前S1抗体间接ELISA方法,可用于小鼠血清中前S1抗体的检测。     

ELISA测定抗百日咳毒素免疫球蛋白

本文介绍了先用胎球蛋白包被微量滴定板的酶联免疫吸附法(ELISA),检测百日咳毒素抗体的方法,以提高ELISA技术检测百日咳毒素抗体的敏感度。作者选用不同浓度的胎球蛋白(15～100μg/ml)和不同浓度(0.5～8.0μg/ml)的纯化百日咳毒素(PT),用加胎球蛋白和不加胎球蛋白包被的微量滴定板ELISA系统,对人双份血清     

梅毒检测的方法及评价

梅毒检查已成为临床上检测的一个重要指标,现已在各医院普及。为使各医院的检验工作者能对各种检测方法的结果进行正确评估,本文阐述以下几种检测方法的操作注意事项及方法学评价。1双抗原夹心酶联免疫法(ELISA法)采用双抗原夹心ELISA法将高纯度梅毒特异抗原包被于微孔反应板,待测血清中如存在抗梅毒抗体,即可与     

抗紫杉醇单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立

目的:制备抗紫杉醇单克隆抗体并建立间接ELISA检测方法。方法:用琥珀酸酐法将紫杉醇(taxol)与牛血清白蛋白(BSA)偶联制成全抗原taxol-BSA,采用紫外波长扫描法和薄层层析检测法对合成抗原进行鉴定;以taxol-BSA免疫Blab/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0进行融合,经间接ELISA法筛选、融合细胞有限稀释法克隆、克隆化杂交瘤细胞株的亚类鉴定等筛选出单克隆抗体杂交瘤细胞株,并对单克隆抗体的特异性进行鉴定;用杂交瘤细胞株诱生小鼠腹水,应用辛酸-饱和硫酸铵沉淀法纯化腹水。同时,对间接ELISA法反应条件进行了优化。结果:获得了3株能稳定分泌抗紫杉醇单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为taxol-A1,taxol-A2和taxol-A3;taxol-A3株腹水效价为1∶128 000,属于IgG2b亚型;建立的间接ELISA法检测条件为15μg.mL-1抗原、4℃包被过夜、1%BSA封闭1 h,PBS做抗体稀释液,单抗反应时间为30 min,酶标二抗作用时间1 h,10%浓硫酸终止反应。结论:获得了特异性的抗紫杉醇单克隆抗体并建立了间接ELISA检测方法。本研究制备的抗紫杉醇单克隆抗体及建立的间接ELISA检测方法,为从内生真菌生物合成紫杉醇发酵液中迅速、高效地分离纯化和检测紫杉醇奠定了基础。     

蟹类食物过敏症的ELISA检测试剂的研究

目的研制蟹类食物过敏症的ELISA检测试剂。方法以纯化的中华绒螯蟹主要过敏原蛋白为抗原包被酶标反应板,对包被浓度和包被时间、封闭液的种类与封闭时间、酶标二抗稀释度等ELISA条件进行优化。结果中华绒螯蟹过敏原蛋白的最适包被浓度为100ng/孔,最适包被条件为37℃孵育3h、4℃过夜;酶标反应板的封闭以20g·L-1脱脂奶粉、37℃孵育3h、4℃封闭过夜为最适条件;HRP标记羊抗人IgE抗体以1∶2 500为最适稀释度。结论以中华绒螯蟹的主要过敏原蛋白为诊断抗原制备ELISA检测试剂,适用于临床蟹类食物过敏症的实验诊断。     

间接抗体夹心酶联免疫吸附法测定人红细胞生成素(EPO)体外活性

目的　介绍一种经济、实用的红细胞生成素(EPO)体外活性检测方法—间接抗体夹心酶联免疫吸附法。方法　采用捕捉抗体(单克隆抗体:鼠抗EPO)包被酶标板,然后用封闭液封闭酶标板,加入稀释成合适浓度的EPO样品进行温育,再加入EPO第二抗体(多克隆抗体:兔抗EPO)温育,然后加入酶连抗体(HRP -羊抗兔)温育,最后加入底物缓冲液显色,用酶标仪读数,计算出EPO体外效价。结果　该方法重复性好(CV <5 %),与ELISA试剂盒比较,两法测定的结果相符( P >0 . 5 )。结论　该方法是一种经济、实用、准确、可靠的红细胞生成素(EPO)体外活性检测方法,与EPOELISA试剂盒比较,大大降低了实验费用     

妊娠妇女血清柯萨奇B组病毒抗体测定

本文利用检测抗体的方法，对在本院体检的一组孕妇柯萨奇B组病毒（CVB）感染情况进行了调查，并对妊娠结果进行随访，发现某些异常妊娠可能与该组病毒感染有关。材料与方法一、检测对象本院门诊产前体检孕妇130人，受检时孕期平均26十周。同期体检非孕妇女100人。两组均取血清进行病毒抗体测定。二、试剂与方法用间接ELISA法测定CVBI～6型IgG、IgM多价抗体。所用病毒抗原，酶标抗人IgG、酶标抗人lgM均由本室自制，病毒抗原用Hela细胞制备。1．IgG抗体测定CVBI～6型病毒抗原按比例混合，经适当稀释包被微孔板，同样包被未感染细胞…     

ELISA法幽门螺旋菌抗体检测的临床应用

近年来我院应用间接ELISA 法检测胃肠疾病患者血清中抗幽门螺旋菌(简称HP)抗体ImG 并与胃粘膜涂片找HP 作了比较,兹报道如下。材料与方法100例胃肠疾病患者做胃镜时钳取胃粘膜组织,直接涂片革兰氏染色,油镜下寻找HP。同时抽取静脉血1毫升,用间接ELISA 法测抗HP 抗体IgG。两组作对照观察。抗HP 抗体IgG 检测:用间接ELISA 法,以数株HP 的超声粉碎物作为抗体(由上海消化疾病研究所提供),待测病例血清为一抗,酶标羊抗人IgG 为二抗。ELISA 中的各反应物浓度用棋盘滴定法测定。用20ug/毫升的抗原包     

虾过敏症特异性IgE的ELISA检测方法的研究

目的研制虾过敏症特异性IgE的ELISA检测试剂。方法以纯化的刀额新对虾的2种主要变应原30 kD和33 kD蛋白为抗原分别包被酶标反应板,对抗原的包被浓度和时间、封闭液的选择与封闭时间、酶标二抗稀释度等ELISA条件进行优化。结果 30 kD和33 kD变应原的最适包被浓度分别为200 ng/孔和12.5ng/孔,最适包被条件为37℃孵育3 h,4℃过夜;酶标反应板的封闭以1.0%BSA、4℃封闭过夜为最适条件;HRP标记的羊抗人IgE抗体以1∶1 500为最适稀释度。结论以刀额新对虾的33 kD主要变应原为诊断抗原研制特异性IgE的ELISA检测试剂,适用于临床虾过敏症的实验诊断。     

重复给予恒河猴rhKGF后其免疫原性及抗体中和性质的检测

目的测定恒河猴经静脉重复给予重组人角质细胞生长因子(rhKGF)后血清中特异性抗体的水平及抗体中和性质。方法采用间接ELISA法检测猴血清中的抗体水平,同时采用32D-KGFR细胞检测抗体的中和活性。结果确定了抗原包被浓度为10μg·mL-1,抗体从1.6×103开始稀释,二抗稀释倍数为1∶5×103的间接ELISA法实验体系;14～56 d均可检测到抗体的存在;生物学活性测定的结果显示其为非中和性抗体。结论重复给予恒河猴rhKGF的毒性试验中,部分猴的血清中检测到抗体,但不是中和抗体。     

酶联免疫吸附法定量测定人血清狂犬病抗体

酶联免疫吸附法(ELISA)由于具有高度敏感性、特异性和可重复性,在病毒性疾病诊断中得到广泛应用。本文系用双抗体(ELISA)定量测定人经“Fermi”狂犬病疫苗免疫后的狂犬病抗体。作者用100μl经适当稀释的兔抗狂犬病血清包被聚氯乙烯微孔滴定板,在37℃培育2小时,并置4℃过夜。然后,用含0.05%吐温20的磷酸盐缓冲盐水(PBS-T)