新生大鼠缺氧缺血性脑损伤5NOSmRNA表达变化

目的 研究新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)时诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA的表达变化。方法 制备新生大鼠左脑HIBD的模型。用反转录聚合酶链反应(RT—PCR)检测HIBD后6h、24h、48h、5d不同时点脑皮层iNoS mRNA的表达情况。经凝胶成像及分析系统扫描RT—PCR产物，用内参半定量分析iNOS mRNA的动态变化。同时观察光镜下神经元坏死变化。结果 7日龄wistar大鼠对照组没有iNOS mRNA表达，HIBD 6h开始表达，HIBD24～48h为表达高峰(与HIBD 6h相比有显著性差异，P＜0.01)，此后逐渐下降，HIBD 5d仍可检测出(与HIBD 6h相比有显著性差异，P＜0．01)。观察光镜下神经元坏死在HIBD后24～48h员显著。结论 新生大鼠HIBD可诱导iNOS基因表达，其可能参与HIBD后的神经毒性损伤。     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤Caspase-1mRNA的表达变化

目的　研究新生大鼠缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)后Caspase 1mRNA的表达变化。方法　制备新生大鼠左脑HIBD模型 ,用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)测定HIBD 12、2 4、72 ,96h不同时点脑皮质Caspase 1mRNA的表达 ,同时观察光镜下神经元坏死情况。结果　假手术对照组有少量Caspase 1mRNA表达 ,HIBD 12hCaspase 1mRNA的表达仍较少 ,与对照组相比无显著性差异 (P >0 0 5 ) ,HIBD 2 4～ 96hCaspase 1mRNA的表达逐渐增多 ,达高峰 ,同其他各组相比均有显著性差异 (P <0 0 5 )。光镜下HIBD 2 4～ 96h神经元坏死明显加重。结论　新生大鼠HIBD可诱导Caspase 1mRNA的表达 ,可能参与了新生儿HIBD的形成。     

缺氧缺血后新生鼠脑组织caspase-3mRNA表达变化及其意义

目的　观察新生大鼠缺氧缺血后脑组织caspase 3mRNA表达动态变化 ,进一步探讨缺氧缺血诱导新生鼠神经元凋亡的机制及意义。方法　制备新生鼠HIBD模型 ,随机分为假手术对照组、HIBD 6h、2 4h、3d、5d组 ,每组 5只动物。应用RT PCR方法测定了大鼠脑组织caspase 3mRNA的表达。结果　 7日龄Wistar大鼠假手术对照组即有一定水平caspase 3mRNA表达 ,HIBD 6h组表达增加(与对照组比较有显著性差异 ,P <0 0 5 ) ,HIBD 2 4h其表达呈高峰 ,此后逐渐下降 ,HIBD 5d仍维持较高水平 (与HIBD 6h相比有显著性差异 ,P <0 0 1)。结论　缺氧缺血可诱导新生鼠脑组织caspase 3mRNA表达 ,其过度表达在HIBD后神经元凋亡的调控中起一定作用 ,针对caspase 3的治疗对策为围生期缺氧缺血脑损伤打开了新视窗     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤COX-2mRNA表达变化

研究新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)时环氧合酶-2(COX-2)mRNA的表达变化,应用、制备新生大鼠左脑HIBD的模型。用逆转录多聚酶链反应(RT-PRC)检测HIBD后6 h、24h、48h、5d不同时点脑皮层COX-2 mRNA的表达情况。经凝胶成像及分析系统扫描RT-PCR产物,用内参半定量分析COX-2 mRNA的动态变化。结果显示:七日龄Wistar大鼠对照组即有COX-2 mRNA的低表达,HIBD 6h表达开始升高,HIBD 24～48h为表达高峰(与对照组相比有显著性差异,P<0.01),HIBD 5d表达下降。结论:新生大鼠HIBD可诱导COX-2基因表达,其可能参与HIBD后的神经毒性损伤。     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤COX-2 mRNA表达变化

研究新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)时环氧合酶-2(COX-2)mRNA的表达变化,应用、制备新生大鼠左脑HIBD的模型.用逆转录多聚酶链反应(RT-PRC)检测HIBD后6 h、24h、48 h、5 d不同时点脑皮层COX-2 mRNA的表达情况.经凝胶成像及分析系统扫描RT-PCR产物,用内参半定量分析COX-2 mRNA的动态变化.结果显示七日龄Wistar大鼠对照组即有COX-2 mRNA的低表达,HIBD 6 h表达开始升高,HIBD 24～48 h为表达高峰(与对照组相比有显著性差异,P＜0.01),HIBD 5 d表达下降.结论新生大鼠HIBD可诱导COX-2基因表达,其可能参与HIBD后的神经毒性损伤.     

缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑组织MMP-9和TIMP-1表达的动态变化研究

目的 探讨新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的发生机制.方法 建立新生大鼠HIBD模型,随机分为假手术组及HIBD 6 h、12 h、24 h、48 h、72 h组,每组6只.观察脑组织大体病理学改变.采用Real-time Q-PCR方法测定大鼠脑组织MMP-9 mRNA和TIMP-1 mRNA表达.结果 (1)新生大鼠HIBD后12～48 h脑水肿明显,可见点状软化坏死灶.(2)假手术组大鼠MMP-9 mRNA表达水平极低,HIBD组大鼠在缺氧缺血6 h表达开始增高,24 h达高峰,此后渐渐下降,但72 h仍维持较高的水平,与假手术组相比差异有非常显著性(P＜0.01).(3)假手术组大鼠TIMP-1 mRNA表达水平极低,HIBD组大鼠在经历缺氧缺血6、12、24h,TIMP-1 mRNA表达水平有微弱升高,与假手术组相比差异有显著性(P＜0.05),但48 h后TIMP-1 mRNA表达下降到假手术组水平(P＞0.05).(4)MMP-9 mRNA/TIMP-1 mRNA比值在假手术组接近1:1,HIBD组缺氧缺血12 h后比值升高,在48 h达到高峰,72 h有所下降,但仍高于假手术组(P＜0.01).结论 新生大鼠HIBD后可诱导MMP-9 mRNA表达,而MMP-9 mRNA和TIMP-1 mRNA表达的失衡可能参与了HIBD的发病过程.     

环氧化酶-2在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的表达

目的探讨环氧化酶-2(COX-2)在新生儿缺氧缺血性脑损伤(HIBD)中的作用。方法新生7日龄大鼠制成HIBD模型,缺氧时间为2h,RT-PCR半定量分析COX-2mRNA,免疫组化方法测定COX-2蛋白表达,光镜下观察神经元坏死情况。结果HIBD后6、24、48h,5dCOX-2mRNA表达出现不同程度的表达增强,分别为(0·461±0·052),(0·887±0·0816),(0·660±0·119),(0·474±0·104),与对照组(0·321±0·175)比较,差异有统计学意义(P<0·01),其中HIBD24hCOX-2mRNA表达为最高峰,同其余各组相比,差异均有统计学意义(P<0·01),免疫组化结果与之一致。结论COX-2在新生儿HIBD形成中发挥一定的作用。     

缺氧缺血性脑损伤新生鼠肾上腺髓质素及其受体mRNA表达的变化

目的探讨新生鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后早期不同时间点肾上腺髓质素(ADM)及其受体基因表达的改变。方法取80只新生7dWistar大鼠,随机分为10组:对照组,HIBD0、2、4、6、8、10、12、24、48h组,每组8只,对照组不结扎也不缺氧。应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定各组脑皮质ADMmRNA的表达。结果HIBD后2～4hADMmRNA有明显上升,HIBD8～10h后表达达最高峰,与对照组相比均有显著性差异(P<0.05),其后下降,于HIBD48h显著下降,但仍高于对照组。结论新生大鼠发生HIBD后ADM系统可能参与新生儿HIBD后的病理生理过程,且能早期判断HIBD。     

环氧化酶-2在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的表达

目的 探讨环氧化酶-2(COX-2)在新生儿缺氧缺血性脑损伤(HIBD)中的作用.方法 新生7日龄大鼠制成HIBD模型,缺氧时间为2h,RT-PCR半定量分析COX-2mRNA,免疫组化方法测定COX-2蛋白表达,光镜下观察神经元坏死情况.结果 HIBD后6、24、48h,5d COX-2mRNA表达出现不同程度的表达增强,分别为(0.461±0.052),(0.887±0.0816),(0.660±0.119),(0.474±0.104),与对照组(0.321±0.175)比较,差异有统计学意义(P＜0.01),其中HIBD 24 hCOX-2mRNA表达为最高峰,同其余各组相比,差异均有统计学意义(P＜0.01),免疫组化结果与之一致.结论 COX-2在新生儿HIBD形成中发挥一定的作用.     

Bid基因在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤中的动态变化

目的　探讨Bid基因在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)中的动态变化。方法　通过建立新生大鼠HIBD动物模型 ,采用RT PCR技术检测缺氧缺血后不同时间点缺血侧脑组织中Bid基因表达的变化。结果　正常组中无Bid基因表达 ,缺氧缺血组Bid基因表达明显上调 ,且随着缺氧缺血后时间的延长 ,Bid基因表达呈动态变化缺氧缺血后 6h其表达开始增加 ,2 4h达高峰 ,48～ 72h有所回落。结论　脑缺氧缺血引起的神经细胞凋亡可能与Bid基因表达上调有关。     

Nitric oxide synthase gene polymorphisms in children with minimal change nephrotic syndrome

Aims:  Nitric oxide (NO) attenuates many functions within the kidney, and all NO synthase (NOS) isoforms are constitutively expressed in the kidney. But the exact role of NO in renal diseases is still debatable. The aim of the present study was to investigate endothelial ( eNOS ), and neuronal ( nNOS ) NOS gene polymorphisms in children with minimal change nephrotic syndrome (MCNS).
Materials and methods:  Eighty-six Turkish children with clinical MCNS, ranging in age from 2 to 10 years, were compared with 114 healthy age- and sex-matched controls. The glu 298 Asp (G/T) polymorphism of the eNOS, and C276T (C/T) polymorphism of nNOS genes were genotyped using polymerase chain reaction.
Results:  The distribution of GG, TG, and TT genotypes for eNOS was 52%, 33% and 15% in MCNS compared with 61%, 26% and 13% in the controls ( P  > 0.05). The distribution of CC, TC, and TT genotypes for nNOS was 16%, 66% and 18% in MCNS compared with 10%, 43% and 47% in the controls. TT genotype distribution of nNOS was found to be lower in patients ( P  = 0.003). The eNOS and nNOS gene polymorphisms were not associated with gender, positive family history, frequency of relapses, or response to steroid.
Conclusions:  The present study is the first to investigate eNOS and nNOS gene polymorphisms in children with MCNS. The nNOS gene polymorphism may be associated with MCNS in children, but further studies in a larger population with different glomerular diseases are needed to confirm the results.     

先天性膈疝动物模型制作及其肺部一氧化氮的改变

用Nitrofen致畸孕鼠，获取先天性膈疝鼠仔模型。共获得28只先天性膈疝（CDH）鼠仔，经Nitrofen处理未患CDH鼠仔34只，正常对照组鼠仔25只，对3组进行肺重/体重指数，肺蛋白定量、肺中一氧化氮合成酶（NOS）和一氧化氮（NO）研究。结果发现用Nitrofen致畸孕鼠，在鼠仔中能产生CDH；病侧肺组织中NO含量下降，NOS酶活性下降。由于NO能舒张血管平滑肌细胞。因此病侧肺组织中NO含量明显下降。和CDH肺高压病理生理有关。NO制剂量治疗CDH肺高压一种有希望的新途径。     

持续高氧对新生鼠肺组织一氧化氮、一氧化氮合酶及病理学的动态影响

目的探讨持续吸入高氧后新生大鼠肺组织一氧化氮(NO)含量、一氧化氮合酶(NOS)活力的动态变化及病理学改变。方法足月新生鼠生后12h内分别持续吸入90%±5%的高氧和空气,于1、3、7、14、21d,分别检测肺组织NO含量、NOS活性以及动态观察病理改变。结果(1)NO含量:在7、14和21d,高氧组水平高于空气组,数值分别为(99.38±7.80)vs(88.78±8.00),P<0.05;(128.18±33.78)vs(93.30±16.73),P<0.05;(170.66±34.00)vs(106.37±25.11),P<0.01。(2)NOS活力:在高氧暴露3d时高于空气组,(20.56±2.56)vs(18.25±0.71),P<0.05;并持续至21d,数值分别为(24.09±2.48)vs(21.10±2.38),P<0.05;(25.07±2.06)vs(20.27±4.15),P<0.05;(27.06±4.79)vs(20.45±2.53),P<0.01。(3)病理学:吸高氧3d时炎症反应为主,7d时炎症反应更明显,开始出现肺间隔增宽,肺泡发育受阻,14d和21d间质增生、肺泡化降低越来越明显。结论持续吸入高氧可致新生鼠发生与人类BPD有类似的病理改变;肺组织病理损伤逐渐加重时,肺组织NO含量和NOS活性增加,提示NO可能在BPD中有重要作用。     

小儿急性阑尾炎细菌移位及相关性的研究

目的 探讨小儿急性阑尾炎细菌移位的发生与阑尾组织一氧化氮合成酶(NOS)、血清一氧化氮(NO)的关系.方法 应用聚合酶链反应(PCR)定性检测全血细菌DNA(所有细菌共有的16SrRNA、大肠杆菌BG);腹腔液体及肠系膜淋巴结细菌培养;免疫组织化学方法定量检测阑尾组织NOS的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)定量检测不同时间血清中NO的变化.结果 对照组及单纯性阑尾炎组均未检出细菌DNA,化脓性阑尾炎组16SrRNA阳性率为70%,BG阳性率为60%,肠系膜淋巴结细菌培养阳性率(大肠杆菌)为50%,腹腔液体为40%.阑尾炎组NOS平均灰度值与对照组之间有明显差异(P<0.01).阑尾炎组术前NO浓度与术后组、对照组间均有差异(P<0.05).NOS平均灰度值与NO浓度呈相关性,二者与细菌移位的表达密切相关.结论 小儿急性阑尾炎发生细菌移位,而细菌移位可能与NOS、NO相关,及时检测血清细菌DNA和NO对小儿急性阑尾炎细菌移位的诊治有一定的临床价值.     

内源性一氧化氮合酶/一氧化氮体系对反复高热惊厥脑损伤的影响

目的 研究神经元型一氧化氮合酶(nNOS)在反复高热惊厥(FS)中的变化规律，探讨NOS／一氧化氮(NO)体系对反复FS脑损伤的影响．方法 采用热水浴诱导大鼠FS。实验分两步进行。时第1批大鼠，采用定量RT-PCR方法检测海马nNOS cDNA含量，Western blot检测nNOS蛋白表达；对第2批大鼠，记录惊厥强度。潜伏期、持续时间及惊厥时肛温，HE染色观察海马神经元形态学改变。结果 反复FS后海马nNOS cDNA含量明显高于正常对照组和高热对照组，同时nNOS蛋白表达也出现一致性增高；随惊厥次数的增加。FS组大鼠惊厥潜伏期呈波动状，惊厥持续时间呈延长趋势，NOS抑制剂的干预使惊厥潜伏期呈延长趋势，惊厥持续时间的延长趋势较FS组降低。惊厥强度和惊厥时肛温在两组间无统计学意义；反复FS后，光镜下可观察到海马神经元出现组织学改变，抑制剂减轻了神经元损伤。结论 反复FS诱导nNOS的基因表达，NOS／NO体系的上调可能参与反复FS脑损伤发展。     

NOS1 polymorphism is associated with atopy but not exhaled nitric oxide levels in healthy children

Exhaled nitric oxide (FE_NO) is raised in atopy. The mechanism for this is unclear. The aim of this study was to investigate whether the number of AAT repeats in intron 20 of the NOS1 gene, recently associated with variations in FE_NO in adults with asthma and cystic fibrosis, was associated with the raised FE_NO in healthy atopic children. Eighty-seven healthy children (44 girls, 42 atopic, age range 6–18 years) underwent measurements of FE_NO, spirometry, airway responsiveness and skin prick testing. Genotyping was carried out to determine the number of AAT repeats. There was no association between the number of AAT repeats and FE_NO in either the whole sample of healthy children (n = 87) or in the subsample of healthy atopics (n = 42). However, a greater number of atopic children had two high repeat alleles compared with non-atopic children (33.3% vs. 13.6%, respectively, p = 0.03). This suggests that variations in the NOS1 gene may contribute to atopy without this relationship being reflected by FE_NO.     

窒息对新生大鼠肾组织一氧化氮和一氧化氮合酶含量的影响

目的探讨一氧化氮合酶(NOS)和一氧化氮(NO)在窒息后肾损伤中的作用。方法Wistar新生大鼠48只,随机分为对照组、窒息后复氧2h组、24h组和48h组,制备常压窒息模型。窒息30min后在上述时间点处死动物,测定肾脏NOS和NO含量,并在光镜下对肾小管损伤程度进行评分。结果窒息复氧2h肾脏NOS和NO即显著升高,持续时间达24h,肾小管评分在窒息后24h和48h明显增高。结论NOS和NO在新生大鼠窒息后的肾损伤中起重要作用。     

诱导型一氧化氮合酶和缺氧缺血脑损伤

缺氧缺血可导致严重的神经系统疾病,如脑卒中、新生儿缺氧缺血性脑病。诱导型一氧化氮合酶在缺氧、缺血过程中被诱导表达,产生过量一氧化氮,导致神经系统的炎症反应及神经元死亡,加重神经损伤。抑制诱导型一氧化氮合酶表达在体内体外实验及临床应用中显示了一定的神经保护作用。该文综述了诱导型一氧化氮合酶在中枢神经系统中的表达及与缺氧缺血脑损伤的相关性,展望了诱导型一氧化氮合酶抑制剂作为缺氧缺血脑损伤治疗策略的前景。     

Exhaled and nasal nitric oxide in mechanically ventilated preterm and term newborns

AIM: Nitric oxide (NO) is an important mediator required for neonatal pulmonary circulatory adaptation and for pulmonary defence. Both deficient and excessive NO production have been proposed to play a role in neonatal lung disease. This study aimed to establish a method that allows direct measurement of exhaled and nasal NO concentrations in newborn infants who require intubation and ventilation. METHODS: A rapid-response chemiluminescence NO analyser was used. Gas was sampled from the endotracheal intubation tube, and tidal volumes and flow rates were measured. The nasal NO was sampled from the non-intubated nostril. The accuracy of the method was validated using a lung model. NO levels from six preterm and six term/near-term newborns were studied. Measurements were performed on a daily basis during the first week. RESULTS: An expiration >0.2 s in duration with a flow rate >1.7 ml s(-1) could be accurately analysed for the presence of >1 parts per billion of NO. The very preterm infants with neonatal lung disease had a different postnatal NO output pattern from the lower and upper airways compared with the ventilated term/near-term infants. CONCLUSION: A novel method for measurement of exhaled NO of an intubated newborn is presented. The possible association of exhaled NO concentration with the development of chronic lung disease remains to be studied.