少突胶质前体细胞移植治疗对大鼠脊髓损伤轴突髓鞘化的影响

目的 探讨少突胶质前体细胞(oligodendrocyte precursor cells,OPCs)移植治疗对大鼠脊髓损伤轴突髓鞘化的影响.方法 采用Allen法制作大鼠T10脊髓损伤模型,亚急性期OPCs移植治疗.通过HE染色、免疫组化染色、髓鞘染色及透射电镜观察等方法,研究OPCs移植治疗对大鼠脊髓损伤轴突髓鞘化的影响.结果 移植术后8周时大鼠损伤脊髓内检测到移植细胞分布,HE染色显示OPCs移植组大鼠脊髓组织结构较对照组改善,勒克司坚牢蓝(LFB)髓鞘染色表明OPCs移植组大鼠脊髓内髓鞘含量(7 802.42±1 085.58)明显高于对照组(5 055.98±916.74)(P＜0.01),OPCs移植组大鼠脊髓组织内髓鞘碱性蛋白(MBP)表达水平(8 544.44±812.78)较对照组(5 243.83±808.27)显著增高(P＜0.01),透射电镜示OPCs移植组大鼠脊髓组织髓鞘化超微结构改善也较对照组明显.结论 OPCs移植治疗有助于改善大鼠脊髓损伤轴突髓鞘化情况.     

少突胶质前体细胞移植治疗对大鼠脊髓损伤轴突髓鞘化的影响

Objective To investigate the effects of transplantation of oligodendrocyte precursor cells (OPCs) on axonal myelination after spinal cord injury in a rat model. Methods A rat model of spinal cord injury at the tenth thoracic vertebral level (T10) was produced by Allen weight-drop impact method. OPCs implantation was performed at the subacute stage of spinal cord injury. Effects of OPCs transplantation on axonal myelination after spinal cord injury were evaluated by HE staining, immunohistochemistry, myelin staining and transmission electron microscopy. Results The implanted cells were still observed in lesioned segments of spinal cord eight weeks after transplantation. The results of HE staining clearly showed better structure of spinal cord in OPCs-transplanted group than that of control group.Myelin staining also demonstrated that the amount of myelin in white matter of lesioned cord in the OPCs-transplanted group (7 802.42 ± 1085.58) was higher than that of the control group (5 055.98 ± 916.74)(P ＜0.01 ). Expression of myelin basic protein (MBP) was significantly increased in the OPCs-trans-planted group (8 544.44 ±812.78) as compared with that of the control group (5 243.83 ±808.27)(P＜0.01). Moreover, transmission electron microscopy further confirmed the improvement of micro-structure of myelination in OPCs-treated rats. Conclusion OPCs transplantation can improve axonal myelination in rat with spinal cord injury.     

冷藏保存时间对人少突胶质前体细胞的影响

目的 评价冷藏保存时间对人少突胶质前体细胞生物学特性的影响。方法 取生长状态良好的第3代人少突胶质前体细胞,按照4×107 mL-1细胞浓度重悬于含有10 g/L 人血清白蛋白的50 g/L葡萄糖保存介质中,置于2～8 ℃冷链运输箱中保存24 h、48 h、72 h,与新鲜制备的少突胶质前体细胞（即冷藏保存0 h细胞）比较,评价冷藏保存时间对细胞活率、增殖能力、迁移能力、免疫表型及分化能力的影响。将冷藏保存24 h的少突胶质前体细胞移植到脑白质损伤大鼠侧脑室内,观察移植细胞在体内成髓鞘情况。结果 与冷藏保存0 h细胞比较,冷藏保存24 h、48 h细胞活率没有显著差异,冷藏保存72 h细胞活率明显下降（P<0.05）;通过CCK8法检测各组细胞增殖能力,结果显示冷藏保存24 h和48 h细胞增殖能力与冷藏保存0 h的细胞比较无显著差异,冷藏保存72 h细胞增殖能力显著下降（P<0.05）;细胞体外迁移和分化结果显示,与冷藏保存0 h细胞比较,冷藏保存24 h的细胞迁移和分化能力无显著差异,冷藏保存48 h和72 h,细胞迁移和分化能力显著下降。体内实验证实,冷藏保存24 h的少突胶质前体细胞在体内可以分化为产髓鞘碱性蛋白的少突胶质细胞。结论 人少突胶质前体细胞在含有10 g/L人血白蛋白的50 g/L葡萄糖保存介质中冷藏保存24 h,细胞活率、迁移和分化能力较好,因此,建议少突胶质前体细胞制剂冷藏保存24 h内移植,以确保最佳治疗效果。     

急性一氧化碳中毒对大鼠大脑少突胶质细胞前体细胞分化功能的影响CSCD

目的 探讨急性一氧化碳中毒（acute carbon monoxide poisoning,ACOP）对大鼠大脑少突胶质前体细胞（oligodendrocyte precursor cells,OPCs）分化功能的影响.方法 利用分次腹腔注射制作ACOP大鼠模型,60只SD大鼠按随机数字表法选取45只进行染毒,造模结束后从存活大鼠中随机选取15只作为ACOP组,对照组15只大鼠按同样方案注射空气.分别在造模成功后1、3、7、14 d和30 d时取大鼠脑组织,采用免疫荧光组织化学法分别检测大脑皮质和海马NG2和CC1阳性细胞数目.结果 （1）与对照组相比,ACOP组大鼠脑内NG2阳性细胞胞体形态不规则、皱缩,且突起数量明显减少;（2）与对照组相比,处理后1d和3d时ACOP组大鼠大脑皮层内NG2阳性细胞数目明显较多（P＜0.05）;7d时ACOP组NG2阳性细胞数目开始减少（P＜0.05）,14 d和30 d时减少更加明显（P＜0.01）.CC1阳性细胞数目处理后第3天开始减少（P＜0.05）,7d时最明显（P＜0.01）,14 d和30 d时CC1阳性细胞数目亦较对照组少（P＜0.05）.但与14 d相比,30 d时ACOP组大鼠脑内皮层CC1阳性细胞数目增加约50％.（3）与对照组相比,处理后1d时ACOP组大鼠大脑海马内NG2阳性细胞数目明显较多（P＜0.01）;3d时NG2阳性细胞数目稍减少（P＞0.05）,7、14 d和30 d时明显减少（P＜0.01）.ACOP组大鼠大脑海马内CC1阳性细胞数目处理后1、3、7、14 d和30 d时均较对照组减少（P＜0.05）.结论 大鼠ACOP后OPCs和少突胶质细胞（oligodendrocytes,OLs）均会受到不同程度的损伤,同时可能会调动机体自我修复能力,诱导OPCs增殖、分化成为成熟的OLs,从而实现髓鞘损伤修复.     

胚胎脊髓移植对大鼠损伤脊髓胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的 研究大鼠脊髓损伤后胚胎脊髓（ＦＳＣ）移植是否能够影响胶质纤维酸性蛋白（ＧＦＡＰ）的表达和伤后大鼠后肢功能的恢复情况。方法 将６０只大鼠分为脊髓半脊髓半切洞损伤＿胚胎脊髓移植组（Ａ组）和单纯脊髓半切洞损伤组（Ｂ组）。伤后１,３,,７,１４,２８天,应用行为学和电生理检查观察大鼠功能恢复情况,应用原位杂我和免疫细胞化学方法观察ＧＦＡＰ的表达,并采用计算机图像分析技术,进行定量分析。结果 大鼠脊髓     

少突胶质细胞与视神经再生

近年来的研究表明，中枢神经系统损伤后再生失败与少突胶质细胞有关，少突胶质细胞产生的蛋白NI－35／250对中枢神经再生具有强烈的抑制作用，其单克隆抗体IN－1可使这种抑制作用消失。2000年编码这种抑制性蛋白的基因-Nogo被发现，这为我们研究视神经损伤修复带来了新的希望，本文就这一方面的研究成果作一综述。     

大鼠视神经少突胶质细胞培养方法的改良

目的改良既往新生大鼠视神经组织块培养法体外培养少突胶质细胞。方法新生2 d SD大鼠,无菌条件下取双侧视神经,置于预先涂有多聚赖胺酸的培养皿中（直径35 cm）,加入基础培养液约400 μL;培养第4天时,更换为含05%胎牛血清化学限定培养液约400 μL;约第10天时,更换为无胎牛血清化学限定培养液约600 μL;第11天行髓鞘碱性蛋白（myelin basic protein,MBP）细胞免疫化学鉴定,计算阳性细胞百分率。重复培养3次,方差分析方法的稳定性。结果视神经培养至第11天,每皿细胞数可达(6~8)×105个,90％以上为MBP阳性细胞;3次培养细胞的MBP免疫细胞化学染色阳性细胞百分率差异无统计学意义（P＞005）。结论本实验方法所得成熟少突胶质细胞纯度高,数量足够一般细胞生物学实验使用,且方法简便、稳定。     

活化小胶质细胞移植治疗大鼠脊髓损伤的疗效初探

目的 研究活性小胶质细胞移植对脊髓损伤后大鼠运动功能恢复的作用.方法 选用成年雌性Wistar大鼠40只,随机分为4组,前两组为运动功能观察组,采用自制改良Allen脊髓打击装置打击脊髓,建立中度脊髓损伤的动物模型,分成移植组和对照组,每组10只.后两组为组织学观察组,用相同方法制作动物模型,也分为移植组与对照组,每组10只.在动物模型制作早期进行新生大鼠小胶质细胞的培养、分离以及纯化,并对小胶质细胞进行鉴定和细胞纯度的测定.移植组术后7 d再次暴露损伤部位,微量注射器以损伤部位为中心注射移植活化小胶质细胞悬液.而对照组不移植.运动功能观察组分别在移植后第1天、第1,2,3,4周对大鼠进行运动功能评分;组织学观察组在相同时相点进行Naoumenko及Feigin小胶质细胞石蜡切片染色,每个时间点移植组和对照组每组随机抽取两只大鼠取材切片,镜下观察并计数小胶质细胞.对所得数据进行统计学分析.结果 术后1,2,3,4周,对照组与移植组随时间延长BBB评分均逐渐升高,移植组术后2,3,4周后肢运动功能评分较对照组明显升高(P＜0.05);Naoumenko-Feigin染色计数,移植组比同期对照组阳性细胞数显著增多(P＜0.05).结论 小胶质细胞移植可促进脊髓损伤大鼠后肢运动功能的恢复.     

用MR扩散张量成像评价犬急性脊髓损伤后神经前体细胞移植的作用

目的用MR扩散张量成像(diffusiontensorimaging,DTI)观察神经前体细胞移植对犬急性脊髓损伤的影响。方法经端粒酶转染人胚胎脑室下区(subventricularzone,SVZ)细胞建立永生化的神经前体细胞系,并转基因表达绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein,GFP)用于标记和示踪。制作犬T13脊髓左半横断损伤模型。8只犬于损伤后1周行细胞移植,移植点取脊髓半切损伤头侧和尾侧邻近区域的灰白质交界处,不用免疫抑制剂。分别于损伤前、损伤后1周、移植后1周(即损伤后2周)、移植后4周用DTI测量损伤侧和未损伤侧的表观扩散系数(apparentdiffusioncoefficient,ADC)值及部分各向异性(fractionalanisotropy,FA)值,并对结果进行统计学分析。结果损伤前、损伤后1周、移植后1周、移植后4周损伤侧的ADC值分别为(1.00±0.15)、(1.65±0.45)、(1.44±0.48)、(1.43±0.26)×10-3mm2/s,不同时间的差异有统计学意义(F=6.038,P=0.005);损伤侧的FA值分别为0.59±0.11、0.30±0.17、0.36±0.25、0.34±0.11,不同时间的差异有统计学意义(F=5.221,P=0.009)。未损伤侧的ADC值分别为(1.01±0.17)、(1.32±0.06)、(1.10±0.24)、(1.14±0.22)×10-3mm2/s,不同时间的差异无统计学意义(F=1.303,P=0.306);未损伤侧的FA值分别为0.60±0.09、0.38±0.25、0.46±0.15、0.50±0.21,不同时间的差异无统计学意义(F=2.797,P=0.072)。结论DTI对实验性脊髓损伤后脊髓损伤和修复过程的观察能提供有价值的信息。     

大鼠星形胶质细胞和少突胶质细胞的纯化培养与鉴定

目的 纯化培养并鉴定大鼠脑组织星形胶质细胞和少突胶质细胞。方法 根据星形胶质细胞和少突胶质细胞的生长时间差异、细胞生长方式及细胞对培养层粘附等特性的不同,改进ＭｃＣａｒｔｈｙ方法纯化培养星形胶质细胞和少突胶质细胞,用免疫组化法对其鉴定。结果 （１）混合培养的星形胶质细胞和少突胶质细胞生长分化状况均优于纯化后的生长,以少突胶质细胞表现更为明显;（２）星形胶质细胞呈向心性生长,细胞相邻的接触面有较多的     

慢性压迫性脊髓损伤后神经前体细胞的增殖情况

目的　通过分析成年大鼠慢性压迫性脊髓损伤后及减压后巢蛋白表达的变化 ,探讨神经前体细胞的增殖。　方法　选用健康Wistar大鼠 5 0只 ,体重 2 80～ 32 0g。制备慢性压迫性脊髓中度、重度损伤及重度压迫损伤减压后 3,10d模型 ,自距压迫边缘至 5mm段脊髓组织切片。正常成年健康大鼠作为正常对照组。巢蛋白、胶质纤维酸性蛋白采用免疫组织化学染色 ,计算机图像分析仪定量分析 ,观察神经前体细胞的增殖情况。　结果　成年大鼠慢性压迫性脊髓中、重度损伤及重度压迫损伤减压后 3d ,巢蛋白在白质、灰质及脊髓中央管的室管膜细胞和减压后 10d组白质中均有明显表达 (P <0 .0 5 ) ,以重度压迫组最为显著 (P <0 .0 1)。减压后 10d组灰质与正常对照组比较 ,差异无显著性意义 (P >0 .0 5 )。与正常对照组相比 ,各损伤组脊髓内胶质纤维酸性蛋白表达增强 ;胶质纤维酸性蛋白阳性细胞数目增多 ,胞体肥大 ,突起增粗、增长。　结论　成年大鼠慢性压迫性脊髓损伤及减压后早期存在神经前体细胞增殖。星形胶质细胞参与神经前体细胞的增殖与迁移 ,对脊髓具有重要的营养修复作用。     

转TrkC基因神经干细胞移植对脊髓损伤的治疗作用

目的 研究转酪氨酸激酶C（tyrosine kinase C，TrkC）基因神经干细胞（neural stem cells，NSCs）移植治疗脊髓损伤的作用。方法 60只SD大鼠随机分成正常对照组（A组）、脊髓半切组（B组）、NSCs移植组（C组）、NSCs移植＋神经营养素（NT）-3局部使用（D）组、转TrkC基WNSCs移植组（E组）和转TrkC基因NSCs移植＋NT-3局部使用组（F组），每组10只。脊髓损伤后第9天进行细胞移植。各组大鼠在细胞移植后2个月，行体感诱发电位（SEP）和运动诱发电位（MEP）检查以及脊髓运动功能（BBB）评分。结果 细胞移植后2个月SEP和MEP发生潜伏期和峰峰波幅以及右后肢BBB评分的恢复均以下组最佳，与其他各组比较，差异有统计学意义（P＜ 0．05，0．01）。结论在局部给予的NT-3作用下，转TrkC基因NSCs能较好地促进损伤脊髓功能的恢复。     

神经细胞移植对帕金森病大鼠模型的治疗作用观察

目的 比较胚胎多巴胺神经元、未经诱导和诱导的中脑来源的神经干细胞移植治疗帕金森病(PD)的疗效.方法 将40只SD PD大鼠随机均分为4组,每组10只,分别在纹状体内植入未经诱导的中脑来源的神经干细胞(B组)、胚胎多巴胺神经元(C组)和经诱导的中脑来源的神经干细胞(D组),对照组(A组)仅在纹状体内注入生理盐水,观察移植后2、4、8周各组大鼠旋转行为改善情况,并采用酪氨酸羟化酶(TH)免疫组化染色比较各组大鼠脑内存活TH阳性神经元的数量.结果 A组移植前后各时间点旋转次数无明显差异(F=0.294,P=0.830).B组移植后旋转次数有所减少,但差异无统计学意义(F=0.335,P=0.800).C组和D组移植后4～8周时旋转次数均明显减少(分别为F=26.838,P=0.000;F=14.571.P=0.000),但两组之间比较无明显差异(P=0.764).TH免疫组化染色显示,A组未见TH阳性细胞,B组可见少量TH阳性细胞(共80±36个),C组移植后存活的TH阳性细胞数共679±286个,而D组共665±264个,后两组之间比较无明显差异(P=0.548).结论 胚胎多巴胺神经元和经诱导的中脑来源的神经于细胞移植可有效的改善PD大鼠的旋转行为.     

hBDNF基因修饰骨髓间充质干细胞移植对大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响

目的 探讨人脑源性神经营养因子(humar brain- derived neurotrophic factor,hBDNF)基因修饰骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)移植入大鼠体内后在脊髓损伤区的存活情况、hBDNF蛋白的表达情况及其对大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响. 方法 240只成年雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、损伤组、hBDNF-大鼠MSCs (rMSCs)组和空载体- rMSCs组,每组60只.用Mlen法建立大鼠脊髓损伤模型.造模后7d,于L4～5间隙蛛网膜下腔向hBDNF -rMSCs组、空载体- rMSCs组和损伤组分别注射等体积的hBDNF基因修饰rMSCs悬液、空载体基因修饰rMSCs悬液和PBS.移植后1,2,3,7和14 d分别取损伤脊髓组织,用荧光显微镜观察带有增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因的rMSCs在体内的存活分布情况,用Western blot法检测hBDNF蛋白的表达水平,以原位末端标记法(TUNEL)检测神经细胞的凋亡情况.结果 hBDNF - rMSCs组和空载体- rMSCs组均检测到EGFP基因表达的绿色荧光信号;hBDNF-rMSCs组表达hBDNF蛋白,其表达水平随时间而变化,移植后2d即可检测到hBDNF蛋白表达,移植后7 d hBDNF表达量最高,此后逐渐下降;移植后2,3,7和14 d,hBDNF - rMSC组TUNEL阳性细胞数量最少,空载体- rMSCs组次之,损伤组相对较多,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 脊髓损伤后hBDNF基因修饰rMSCs经蛛网膜下腔移植能聚集生长在脊髓损伤区域,并表达hBDNF蛋白;hBDNF基因修饰rMSCs能够抑制神经细胞的凋亡.     

心理因素对脊髓损伤患者神经干细胞移植疗效的影响

 目的 探讨脊髓损伤患者心理因素对神经干细胞(neural stem cells, NSCs)移植疗效的影响.方法 随机选择60例脊髓损伤患者,根据自评焦虑量表(SAS)评分系统分为高评分组和低评分组,采用相同的NSCs移植方案,术后给予相同的治疗及护理措施,术后3个月评价患者各方面改善情况,并比较两组之间的差别.结果 SAS低评分组改善情况明显好于高评分组,两者间差异具有统计学意义.结论 心理因素对脊髓损伤患者NSCs移植疗效有一定影响.     

大鼠脊髓急性损伤后神经细胞的凋亡

目的 研究脊髓急性损伤后神经细胞的凋亡及其分布特点。方法 44只大鼠分为对照组（4只）和损伤组（40只）。损伤组脊髓（T8．9）经中度压迫致伤后,分别在伤后30min、2,4,8,24,48,72h和7,14,21d处死取材（每时相点鼠数＝4只）。应用HE、尼氏染色及凋亡细胞原位末端标记法对脊髓组织进行细胞检测。结果 伤后4h,损伤段及邻近段可见末端标记阳性神经细胞;伤后8h,损伤段灰质中阳性细胞数达高峰;伤后24h,白质中阳性胶质细胞数达高峰;伤后72h,相邻节段阳性细胞数达高峰。阳性细胞以白质中胶质细胞为主,主要分布于相邻手段。结论 脊髓损伤后神经细胞凋亡是继发损伤期的重要病理变化。     

神经干细胞移植与脊髓损伤修复

众所周知，脊髓损伤(spinal cord injury，SCI)是临床治疗的世界性难题。以往，许多学者曾尝试周围神经移植、胚胎脊髓移植、雪旺细胞移植、大网膜移植及应用神经营养因子治疗脊髓损伤。这些研究虽有很大进展，但都未达到目的。近年，国内外把研究焦点集中到了具有自我复制能力和多向分化潜能的神经干细胞(neural stem cells，NSCs)上，已取得了一些突破。笔者就脊髓损伤修复和NSCs移植及应用前景作一简介。     

Quantitative MRI of spinal cord injury in a rat model

Sequential in vivo MRI studies of experimental spinal cord injuries (SCI) were performed using a three-dimensional implementation of the FATE (Fast low-Angle spin echo sequence with short TE) sequence. MRI-observed pathology was quantified using a multispectral segmentation algorithm. Neurological analysis was performed on the same animals concurrently, in addition to end-point histology, for comparison with quantitative MRI results. These studies suggest that it is possible to use MRI to detect the onset of secondary injury in the spinal cord. The data also indicate that early detection of MRI-visible pathology may provide the necessary markers for predicting the long-term level of neurologic deficit.