小鼠胚胎AGM区Flk-1~+细胞的造血特性

本研究旨在考察Flk-1分子在胚胎期10.5 d(E10.5)的主动脉-性腺-中肾区(AGM区)不同类型造血前体细胞的表达情况。通过流式细胞术分析发现低于10%的Flk-1+细胞与CD41、CD45/Ter119有共表达,继而分选出CD31+CD45-Ter119-Flk-1+CD41+(R1,代表不成熟的造血前体细胞)和CD31+CD45-Ter119-Flk-1+CD41-(R2,代表内皮细胞)两群细胞,利用造血集落培养和OP9共培养体系分别考察其体外的髓系与淋系潜能。结果表明:仅R1组细胞能在造血集落培养体系中形成典型的造血集落,但与OP9共培养7-9 d后,两组细胞均能产生丰富的造血前体细胞(CD45+c-Kit+)、髓系细胞(Gr-1+/Mac-1+)、红细胞(Ter119+)和B淋巴细胞(CD19+)。结论:E10.5的小鼠胚胎AGM区Flk-1仍然在幼稚的造血前体细胞以及更早期的生血内皮细胞表达,但是此时的造血干细胞前体和造血干细胞是否表达Flk-1仍需通过体内功能实验明确。     

两种人胚胎干细胞体外诱导CD34＋造血前体细胞方法的比较

目的对比小鼠骨髓基质细胞系OP9共培养和二维单层诱导方法体外诱导人胚胎干细胞（hESCs）产生CD34＋造血前体细胞的效率,为后续研究提供参考。方法采用hESCs与OP9共培养方法或用二维单层诱导方法诱导hESCs产生CD34＋造血前体细胞,通过流式细胞仪检测分化效率,比较两种方法的效果。结果通过hESCs／OP9共培养方法,hESCs在分化第9日出现CD34＋细胞,比例达（19．7±7．9）％;通过二维单层诱导方法,hESCs在分化第6日即出现CD34＋细胞,比例仅为（5．8±1．8）％,两种方法分化效率比较差异具统计学意义（P〈0．05）。结论hESCs／OP9共培养方法和二维单层诱导方法均可将hESCs诱导为造血前体细胞,相对于二维单层诱导方法,hESCs／OP9共培养方法尽管需要更长的时间,但其分化效率更高,更有利于后续研究。     

体外诱导人类诱导性多能干细胞分化为造血干 / 祖细胞的研究简

本研究探讨体外诱导人诱导性多能干细胞（induced pluripotent stem cell,iPSC）分化为造血干/祖细胞的能力.在体外用小鼠骨髓基质细胞OP9与人类iPSC共培养的方法,将iPSC诱导分化为造血干/祖细胞;用流式细胞术检测造血干/祖细胞表面标志物的表达水平;用实时定量PCR检测分化过程中iPSC及造血干/祖细胞的相关基因mRNA表达水平的变化;用免疫磁珠法分离CD34＋造血干/祖细胞并进行半固体集落形成实验检测细胞的集落形成能力.结果表明,iPSC与OP9细胞共培养诱导造血分化的第4天即可观察到iPSC形态变化;流式细胞术检测显示,分化得到的细胞表达已知的造血干/祖细胞相关表面标志物CD34和CD43分子.在体外分化过程中多能性的标志基因Oct4的表达逐渐下降,造血相关转录因子Gata-2的表达逐渐升高,而Runx-1的表达量则呈波浪式变化,CD34表达量逐渐升高.集落培养14 d能够得到红系集落（CFU-E）,粒系集落（CFU-G）,巨核系集落（CFU-M）,粒-巨核系集落（CFU-GM）和混合系集落（CFU-GEMM）.结论：iPSC细胞能够在体外通过与OP9细胞共培养分化为造血干/祖细胞.     

动员外周血造血干细胞移植物中同时高效去除T／B细胞的体外研究

单倍体相合造血干细胞移植时，去除移植物中的T细胞和B细胞可减少移植物抗宿主病和EBV相关的淋巴细胞增殖性疾病的发生。本研究在国内首次应用CliniMACS系统，通过CD3／CD19磁珠抗体同时有效地去除动员外周血造血干细胞中的T细胞和B细胞。用流式细胞术检测移植物中T细胞和B细胞的去除效率，以集落形成实验评价去除后的干细胞功能。结果表明：T细胞和B细胞去除之前单个核细胞总数为4．88×10^10，去除之后移植物中T细胞比例为0．02％，去除4．4Log；B细胞比例不到0．01％，至少去除3．3Log。移植物中除CD34^＋细胞外。还包括NK细胞，单核细胞和粒细胞。CD34^＋细胞纯度为0．98％，计数1．84×10^8，回收率为69．7％；NK细胞计数2．54×10^9，回收率为71．7％。集落形成实验显示CD3／CD19去除对造血干细胞功能无影响。结论：应用CliniMACS系统可有效地同时去除动员外周血干细胞中的T细胞和B细胞，且不影响造血干细胞的生物学功能，此项研究为去除T／B细胞的单倍体相合造血干细胞移植提供了技术平台。     

人胎盘组织来源造血干/祖细胞及其特性

背景:近年来的研究表明,除已知的人骨髓、外周血和脐带血中存在造血干/祖细胞外,人胎盘组织中也有造血干/祖细胞存在.目前为止,还缺乏对人胎盘组织造血干/祖细胞的增殖分化特性及人胎盘组织淋巴细胞亚群组成和免疫原性等的深入研究.目的:探究人胎盘组织是否含有比脐带血更丰富的造血干/祖细胞,并对其造血祖细胞系增殖分化能力进行检测,同时对人胎盘组织淋巴细胞亚群组成及表型特征进行分析.设计、时间及地点:开放性实验,于2004-01/2006-12在贵州省细胞工程重点实验室完成.材料:经产妇知情同意,无菌采集遵义医学院附属医院产科健康足月分娩新生儿胎盘和脐带血共12份.淋巴细胞亚群检测试剂盒,CD34绝对计数试剂盒(Becton Dickinson公司):CD34磁珠分选试剂盒,FITC标记的CD38单克隆抗体,抗FITC磁珠和MS/LS免疫磁式细胞分选柱(Miltenyi Biotec).方法:脐带血与RPMI-1640培养基(含体积分数为0.1的胎牛血清)按1:1的比例混合,采用Ficoll-Histopaque分离液离心30min,吸取界面层细胞,PBS洗涤一次,获得脐带血单个核细胞.采用机械法加0.25g/L胶原酶消化制备胎盘组织单个细胞悬液,之后同脐带血单个核细胞分离步骤分离胎盘单个核细胞.流式细胞仪检测胎盘单个核细胞中CD34 CD38-, CD34 CD38 造血干/祖细胞(HSPCs)和淋巴细胞亚群的组成比例.免疫磁珠分选法分选人胎盘CD34 CD38-,CD34 D38 造血干/祖细胞,并分别进行粒细胞-单核细胞集落生成单位、红细胞爆裂型集落生成单位、混合集落生成单位系集落形成培养,以评价其造血祖细胞系增殖分化能力.实验全程用脐带血作平行比较分析.主要观察指标:胎盘和脐带血CD34 造血干/祖细胞组成百分率、祖细胞系集落形成能力、淋巴细胞亚群表型及组成特点.结果:[1]胎盘CD34 造血干/祖细胞百分率是脐带血的8.8倍,差异有显著性意义(P<0.01).[2]胎盘中的淋巴细胞总数、T细胞(CD3 CD2 )、B细胞(CD19 )、Th(CD3 CD4 )细胞及Th/Ts比值均明显低于脐带血,而CD8 CD28-T抑制细胞则明显高于脐带血,差异有显著性意义(P<0.01).[3]胎盘CD34 CD38 造血干/祖细胞亚群培养形成的粒细胞-单核细胞集落生成单位、红细胞爆裂型集落生成单位、混合集落生成单位集落数明显高于CD34 CD38-造血干/祖细胞亚群(P<0.01);胎盘与脐带血造血干/祖细胞中相同表型细胞亚群形成的各系集落数比较,差异无显著性意义(P0.05).结论:人胎盘组织富含CD34 造血干/祖细胞,其CD34 CD38 、CD34 CD38-两个造血干/祖细胞亚群均具有增殖分化为粒细胞-单核细胞集落生成单位、红细胞爆裂型集落生成单位、混合集落生成单位的能力,并且人胎盘组织具有淋巴细胞亚群低比例和抑制性T细胞高比例的特点,使其有望成为造血干/祖细胞移植的新来源.     

趋化因子—基质细胞源性因子-1与造血

基质细胞源性因子-1是一种由骨髓基质细胞分泌的与骨髓造血功能密切相关的趋化因子。该因子在体外可刺激B细胞增殖,在体内与淋系和髓系造血也有密切联系。同时它还是至今被发现的第一种可趋化淋巴细胞、单核细胞和CD34~+造血祖细胞的高效趋化因子。其受体在HIV感染T细胞过程中也起着重要的协同作用。本文即对此因子的结构和功能作一简要概述,并着重介绍其在造血生理方面的进展。     

小鼠骨髓间充质干细胞对胚胎干细胞造血分化的影响

骨髓间充质干细胞作为骨髓基质细胞的前体细胞 ,在体外具有一定的造血支持作用 ,与造血干细胞共移植可促进其植入。本研究旨在初步探讨应用小鼠骨髓间充质干细胞与胚胎干细胞共培养作为一种新的分化体系的可行性。首先分离、培养并鉴定小鼠骨髓间充质干细胞 ,然后利用扩增培养的骨髓间充质干细胞与胚胎干细胞共培养 ,通过造血集落培养和RT PCR观察造血分化的特点。结果表明 ,分离、扩增培养至第四代之后的骨髓间充质干细胞形态均一 ,高表达Sca 1,CD2 9,CD4 4和CD10 5 ,而CD34和CD4 5等造血与内皮细胞特异性表面标志呈阴性 ;特异性诱导体系内传代后 (>4代 )的骨髓间充质干细胞可向脂肪细胞和成骨细胞分化。与悬浮分化体系相比 ,骨髓间充质干细胞共培养体系中初始分化的胚胎干细胞含有显著增加的拟胚体形成细胞而没有造血集落形成细胞。此外 ,RT PCR检测发现 :共培养细胞表达胚胎干细胞特异性转录因子Oct 4 ,而造血标记Flk 1,GATA 1和 β H1为阴性。结论 :间充质干细胞在一定程度上抑制了胚胎干细胞的初始分化 ,但是共培养体系来源的拟胚体产生造血集落的能力显著高于悬浮体系     

B淋巴细胞淋巴瘤的基因改变和相关发病机制

<正>现有的造血理论认为,与髓系一样,淋系来源于淋巴干细胞,但是淋系的发育过程比髓系复杂,已知的淋系肿瘤也更多。WHO 2016分类包括的淋系肿瘤超过50种,B淋巴细胞(下文均简称为B细胞)和T淋巴细胞肿瘤的发病占了90%以上,在分类、临床特征和病理机制上T淋巴细胞肿瘤比B细胞肿瘤复杂,发病率相对较低,本文将重点阐述常见的慢性B淋巴细胞淋巴瘤的来源、基因改变和相关发病机制~([1])。1 B细胞的发育B细胞的发育经历一个从骨髓到外周血和淋巴组织的循     

胚胎干细胞来源的BL-CFC可产生高增殖潜能造血祖细胞

小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cell，ES cell)体外分化2，5—3．5天形成的拟胚体(embryoid body，EB)中可产生原始细胞集落形成细胞(blast dtony—forming cell，BL—CFC)，后具有造血和内皮细胞双向分化潜能，是目前体外实验可检测到的最早期的定向造血分化的细胞。本研究建立BL—CFC培养体系，并通过造血祖细胞集落培养、免疫荧光标记以及巢式RT—PCR鉴定单个原始细胞集落来源的贴壁细胞和非贴壁细胞的分化特点。结果表明：部分贴壁细胞吞噬DiI—Ac—LDL。并表达CD31，UEA—I，VF—cadtherin等内皮细胞特异性的表面分子；非贴壁细胞具有原始造血(primitive hematopoiesis)和(或)永久造血(definitive hematopoiesis)活性，其中20％的原始细胞集落含有高增殖潜能集落形成细胞(high proliferative potential colony—forming cell，HPP—CFC)，后能形成次级造血集落。结论：胚胎干细胞来源的BL-CFC可产生高增殖潜能造血祖细胞，但原始细胞集落来源的HPP—CFC是否具有体内造血活性有待进一步的研究证实。     

碱性成纤维细胞生长因子在胚胎卵黄囊造血过程中的表达

目的 探讨人胚胎发育过程中碱性成纤维细胞生长因子1(FGF1)对造血细胞形成的影响,研究FGF1、血管内皮生长因子受体(KDR)、CD133、CD34和转录凶子Ihh、SCL、GATA-1、GATA-2和PU.1在卵黄囊中的表达,了解FGF1、造血细胞和转录因子在胚胎造血过程中的作用和关系.方法 采用药物流产孕3～12周人胚胎,冰冻切片,免疫组织化学SP染色,并应用分析软件进行分析,同时进行造血相关转录因子RT-PCR扩增分析.结果 孕3～12周人胚卵黄囊血岛均由外周的血管内皮细胞和中心的造血细胞组成.在16 d的卵黄囊中脏壁中胚层嗣血岛周边表达FGF1阳性产物,而血岛内少有FGF1表达,低表达KDR,不表达CD34、CD133;21 d上述抗体均有表达,灰度值减少,染色增强;30d时在血岛和中胚层发现强染色CD34+、CD133+和KDR+细胞,灰度值分别由156±16、173±18和160±14降低为53±7、52±6和69±8;FGF1呈强阳性表达,灰度值由161±13急降至40±5,达到最低值.有些阳性细胞沿血岛边缘形成血管样结构.45 d时中等程度表达CD34、CD133、KDR细胞数量增多,细胞聚集成团分布于血岛中;FGF1阳性细胞也多聚集分布在血岛中,中胚层少有分布,灰度值增加.7周后CD133+、KDR+、CD34+细胞明显减少,灰度值增加,染色变浅,卵黄囊弱表达FGF1,灰度值增加为179±22.RT-PCR结果显示,不同时间的卵黄囊均表达Ihh、SCL、GATA-1和GATA-2,PU.1在16 d不表达,此后表达.结论 卵黄囊造血细胞的发育受FGF1和转录因子的诱导和调节,提示FGF1介导的信号通路对造血中胚层模式的形成、成血管血液干细胞的扩增以及造血十细胞的动态平衡具有重要意义.FGF通路可能通过调节GATA1等转录因子表达水平和活性来调控卵黄囊造血.     

乙型肝炎病毒相关慢加急性肝衰竭患者外周血T淋巴细胞比例的特征及其意义

目的探讨乙型肝炎病毒相关慢加急性肝衰竭患者外周血T淋巴细胞的变化及意义。方法乙型肝炎病毒相关慢加急性肝衰竭患者（肝衰竭组）与慢性乙型肝炎患者（慢乙肝组）各50例,以门诊同期健康体检者（健康对照组）20名为对照,应用流式细胞仪测定外周血CD3’T淋巴细胞所占比例、CD4＋和CD8＋T淋巴细胞所占比例及比直、CD4＋CD25＋调节l生T淋巴细胞所占比例。结果肝衰竭组外周血CD31淋巴细胞[（35．48±23．44）％]、CD8＋T淋巴细胞[（37．66±13．28）%]、CD4＋CD25＋调节陡T淋巴细胞[（0．72±1．07）％]所占比例与健康对照组[分别为（50．31±12．09）％、（42．05±9．26）％、（2．93±1．31）％]和慢乙肝组[分别为（49．72±20．11）％、（41．95±8．63）％、（3．47±2．29）％1比较均下降,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论乙型肝炎病毒相关慢加急性肝衰竭一旦形成,有别于慢性乙型肝炎时期,外周血总T淋巴细胞、CD8＋T淋巴细胞以及CD4＋CD25＋调节性T淋巴细胞等效应T淋巴细胞便处于耗损状态。     

Notch配体Delta-1ike1对小鼠骨髓细胞来源的树突状细胞分化和抗原呈递功能的影响

本研究探讨Notch配体Delta—likel（Dil1）对小鼠骨髓细胞来源的树突状细胞（dendriticcell,DC）分化及其抗原呈递功能的影响。在GM—CSF和IL4存在条件下,用OP9-Dil1和OPt）．GFP细胞分别与小鼠骨髓细胞共培养8天,经肿瘤抗原刺激成熟。用流式细胞仪检测DC表面MHCII、CD80和CD86的表达情况,ELISA法检测肿瘤抗原刺激后DC培养上清细胞因子IL-12和IL110的水平,通过混合T淋巴细胞反应观察DC对T细胞的促增殖能力。结果表明：与GFP组相比,Dll1组的小鼠骨髓来源的树突状细胞明显增多（P〈0．05）。肿瘤抗原刺激后,Dll1组DC表面MHCII、CD80和CD86表达量更高。DC分泌的IL-12水平显著高于对照组（P〈0．05）,而IL-10的水平显著低于对照组（P〈0．01）。Dll1组DC具有更强的促T细胞增殖活性。结论：OP9-Dll1促进小鼠骨髓细胞向DC分化并增强其抗原呈递功能。     

川崎病外周血中CD4＋CD25＋调节性T细胞与其他免疫细胞的关系研究

目的 探讨CD4＋CD25＋调节性T细胞在川崎病发病机制中作用.方法 以2006年12月～2008年2月入院的32例KD患儿为研究对象,以年龄匹配的30例儿童作为对照组（其中15例急性呼吸道感染的发热患儿为非KD发热组,15例健康体检患儿为健康组）,KD患儿分别于静脉注射丙种球蛋白（IVIG）治疗前和IVIG治疗后热退2～3天取外周血,用流式细胞仪测定外周血单个核细胞CD4＋CD25＋调节性T细胞及其他免疫细胞比例,并分析其关系.结果 急性期KD患儿外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞比例与非KD发热患儿和健康对照组相比均明显降低（P〈0.01）.而IVIG治疗后热退2～3天,CD4＋CD25＋调节性T细胞比例明显升高,接近于正常水平.同时,急性期KD患儿外周血中,CD3＋CD4＋、CD19＋CD23＋细胞业群比例明显增高,而CD3＋CD8＋、CD16＋CD56＋细胞亚群比例明显下降.在IVIG治疗后热退2～3天,CD3＋CD4＋,CD19＋CD23＋细胞亚群比例均有明显的下降,CD3＋CD8＋细胞比例升高,但未见CD16＋CD56＋细胞比例的升高.且在KD急性期,CD3＋CD4＋、CD19＋CD23＋细胞亚群比例与CD4＋CD25＋调节性T细胞比例成负相关性（P〈0.01）,而CD3＋CD8＋、CD16＋CD56＋细胞亚群比例则与其没有明显的相关性（P〉0.05）.在IVIG治疗后热退2～3天,CD3＋CD4＋、CD19＋CD23＋细胞亚群比例仍与CD4＋CD25＋凋节性T细胞比例呈负相关（P〈0.01）.结论 CD4＋CD25＋调节性T细胞可能通过对体内免疫细胞的调控参与了KD的发病机制.     

人胎血T淋巴细胞和NK细胞的免疫学表达特性

目的探讨人胎儿血T淋巴细胞和NK细胞的免疫学表达特性及其意义。方法用流式细胞仪检测20例胎儿血T淋巴细胞以及NK细胞免疫学标志,包括CD3＋、CIM＋CD28＋、CD4＋CD25＋、CIM5RO＋、CD45RA＋、CD4-CD8-、CD4＋CD8＋、CD4＋或CD8＋细胞的比例以及CD3-CD16＋CD56＋细胞的比例。结果20例胎血中CD3＋细胞百分率平均为（45．43±20．20）％,显著低于文献报道的脐血及正常外周血CD3＋细胞百分率。CD45RO＋细胞百分率为（2．47±2．62）％,显著低于CIM5RA＋细胞的百分率（39．41±19．37）％。胎血CD4＋CD25＋细胞的百分率为（0．764±0．73）％。20例胎血NK细胞标记CD3-CD16＋CD56＋表达为（15．69±9．92）％。胎血NK细胞比例与胎血的孕周龄之间存在负相关（r=-0．446,P=0．049）。结论人胎儿血的T淋巴细胞分化不成熟,较多的保持在初始阶段,且胎血CD4＋CD25＋调节性T细胞的百分率较低,有可能对减少移植后移植物抗宿主病（GVHD）的发生有益。随孕龄的增长人胎血NK细胞比例有下降趋势。     

1型糖尿病小鼠同基因骨髓移植治疗后的免疫变化

摘要本研究旨在观察同基因骨髓移植（syn—BMT）治疗1型糖尿病（T1D）4、鼠前后外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞比例的变化。探讨其在小鼠T1D的发生及同基因骨髓移植在诱导T1D小鼠恢复免疫耐受中的作用。选取C57BL／6J小鼠以链脲佐菌素腹腔注射建立T1D模型,并将成模小鼠分为病鼠移植组及病鼠对照组;另取正常C57BL／6J小鼠6只作为正常对照组。病鼠移植组小鼠于成模后第10天行同基因骨髓移植治疗;正常对照组和病鼠对照组不作处理。每10天监测1次正常对照组、病鼠对照组、病鼠移植组空腹血糖;每3天监测1次病鼠移植组小鼠移植后血象。小鼠成模后第10天即移植治疗当天及移植后30天分别取正常对照组、病鼠对照组及病鼠移植组小鼠外周血标本,用流式细胞术测定外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞比例。结果显示,syn—BMT后,小鼠空腹血糖逐渐下降,至移植后25天,与正常对照鼠相比无差异,显著低于对照病鼠;移植后小鼠外周血白细胞和血小板计数分别在接受预处理及骨髓移植后3天和6天达最低值,此后逐渐上升,至移植后27天基本恢复正常。糖尿病小鼠外周血CD4^＋T淋巴细胞比例、CD4^＋／CD8^＋T淋巴细胞比值和NK细胞比例均较正常对照鼠明显升高（P〈0．01）,CD8^＋T淋巴细胞比例较正常对照鼠显著下降（P〈0．01）。syn．BMT后CD4^＋T淋巴细胞比例、CD4^＋／CD8^＋T淋巴细胞比值和NK细胞比例较对照病鼠不同程度的降低,CD8^＋T淋巴细胞比例较对照病鼠及正常对照鼠明显升高（P〈0．01）。结论：同基因骨髓移植可以逆转糖尿病小鼠的高血糖状态。糖尿病小鼠发病初期,外周血CD4^＋T淋巴细胞比例、CD4^＋／CD8^＋T淋巴细胞比值和NK细胞比例增高及CD8^＋T淋巴细胞比例降低,这些变化可能与糖尿病的发生有关。同基因骨髓移植可以不同程度的逆转糖尿病小鼠的免疫紊乱。     

延缓吸收性肺炎免疫功能的变化及与血清铁蛋白的关系

目的：探讨延缓吸收性细菌性肺炎患者免疫功能及血清铁蛋白（SF）的关系。方法30例延缓吸收性细菌性肺炎患者为A组,30例常规吸收的社区获得性肺炎患者为B组及30例正常体检者为C组,分析3组研究对象的CD3^＋T细胞、CD4^＋T细胞、CD8^＋T细胞、NK细胞、B细胞的细胞比例、CD4^＋/CD8^＋T细胞比值和SF水平的变化。结果入院次日,A、B组患者CD3^＋T细胞、CD4^＋T细胞、NK细胞、B细胞比例均明显低于C组（P＜0.01）;A、B组CD8^＋T细胞的细胞比例、SF水平均比C组明显升高（P＜0.01）。入院第14日A组患者CD3^＋T细胞、CD4^＋T细胞、NK细胞、B细胞的细胞比例均比B、C组明显下降（P＜0.01）;CD8^＋T细胞比例及SF水平比B、C组明显升高（P＜0.01）。入院第28日3组受检者各指标比较差异均无统计学意义（P均＞0.05）。A组患者SF水平与CD3^＋T细胞、CD4^＋T细胞、NK细胞、B细胞的细胞比例呈负相关（r分别为-0.472、-0.578、-0.602、-0.565、-0.587,P均＜0.05）,与CD8^＋T细胞水平呈正相关（r＝0.542,P＜0.05）。结论延缓吸收性肺炎患者存在不同程度的免疫功能紊乱,且与SF变化密切相关。     

供体凋亡淋巴细胞预输注对猪肝移植受体CD4^＋T、CD8^＋T、CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的影响

背景：凋亡细胞能够主动调节机体的免疫功能,并能通过调节机体细胞免疫和体液免疫的途径诱导免疫耐受,但这些结果只在大鼠肝脏移植模型中证实。目的：探讨通过60Coγ射线体外处理后的供体淋巴细胞预输注诱导猪肝移植特异性免疫耐受的作用中,对淋巴细胞亚群的影响。方法：建立非转流小型猪原位肝移植模型。将受体猪随机摸球法均分为2组：空白对照组,受体猪无特殊处理,行肝移植;淋巴细胞组：受体猪在肝移植前7d经耳静脉注射60Coγ射线处理过的5×108个供体淋巴细胞。观察两组受体猪移植后的存活时间,移植后T淋巴细胞亚型CD4＋T、CD8＋T、CD4＋CD25＋Tr变化及病理。结果与结论：移植后3d,两组病理活检均呈急性中、重度排斥反应;移植后6d,两组均呈急性重度排斥反应。移植后1,3,6dCD4＋T、CD8＋T、CD4＋CD25＋Tr升降趋势,两组间差异无显著意义（P〉0.05）。提示,60Coγ射线体外处理过的淋巴细胞预输注未能够诱导猪同种异体肝移植特异性免疫耐受,未能引起T淋巴细胞亚群变化有关。     

镁对健康人外周血CD4~＋T细胞凋亡和自噬的影响

背景：研究表明镁参与了机体免疫系统的调节,包括细胞增殖、凋亡等过程。目前国内外尚未见报道镁浓度对健康人外周血CD4＋T淋巴细胞的凋亡和自噬有何影响。目的：拟观察镁离子浓度对体外培养的健康人外周血CD4＋T淋巴细胞凋亡和自噬的影响。方法：分离20名健康人外周血CD4＋T淋巴细胞,与不同浓度的镁共培养24-72h,分别为低浓度镁（0.2和0.4mmol/L）、生理浓度镁（0.8mmol/L）和高浓度镁（5和10mmol/L）,然后以流式细胞术检测细胞的凋亡和自噬水平。结果与结论：①CD4＋T细胞与低浓度镁共培养后,细胞的凋亡和自噬水平均显著增加（P〈0.05）。②高浓度镁则显著下调CD4＋T细胞的凋亡和自噬水平（P〈0.05）。③非生理浓度的镁对CD4＋T细胞凋亡和自噬的影响呈浓度依赖性和时间依赖性,但是生理浓度镁（0.8mmol/L）对健康人外周血CD4＋T细胞的凋亡和自噬无影响（P〉0.05）。结果提示细胞外镁缺乏可以诱导健康人外周血CD4＋T细胞的凋亡和自噬,而补充镁可以下调其凋亡和自噬水平,生理浓度的镁不影响其凋亡和自噬水平。     

多发性硬化抗原特异性CD4~+CD25~+调节性T细胞的体外扩增及其功能效应

目的针对多发性硬化(MS)患者CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)的免疫功能缺陷,尝试利用体外培养法获取功能正常的Treg。方法密度梯度离心法获得MS患者(n=5)和健康对照者(n=5)外周血单个核细胞(PBMC),免疫磁珠法分选B细胞和CD4+CD25-初始T细胞,前者进一步经可溶性CD40配体(sCD40L)刺激活化后作为抗原提呈细胞(APC),与后者混合体外共培养,并以髓鞘碱性蛋白(MBP)85-99等刺激后收获细胞;经流式细胞仪分选获得CD4+CD25highCD127low Treg。通过增殖分析鉴定所获Treg的免疫抑制功能。结果磁珠法分选B细胞、初始T细胞的纯化率分别达到90%和80.62%。体外诱导扩增所获的MBP反应性Treg比例为3.5%⁶%,MS组与健康对照组Treg比较抑制功能活性无明显差异。结论经此方法可扩增获得免疫功能正常的Treg细胞,进而为今后开展MS的特异性免疫调节治疗提供客观的依据。