不同剂量结核病DNA疫苗的电转染免疫原性研究

目的 研究不同剂量结核病DNA疫苗电转染后的免疫原性.方法 40只BALB/c小鼠通过随机数字表法分为8组,每组5只.其中4组分别用100 μl生理盐水和10 μg、50 μg、100 μg结核分枝杆菌Ag85A DNA肌内注射免疫小鼠;另4组用100 μl生理盐水和10 μg、50 μg、100 μgAg85ADNA肌内注射加电转染免疫小鼠.每2周免疫1次,共3次.最后1次免疫后2周杀死小鼠.用ELISA方法检测小鼠脾细胞培养上清液中γ干扰素（IFN-γ）和白细胞介素4（interleukin 4,IL-4）水平;用流式细胞术检测小鼠外周血单个核细胞（PBMC）分泌IFN-γ的辅助性T细胞（helper T cell,Th）1细胞百分比、分泌IL-4的Th2细胞百分比,以及Th1与Th2的细胞比值.用SAS 9.2软件处理数据,实验数据以“-x±s”表示,对有关数据进行两因素析因设计的方差分析,两两比较采用t检验,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 免疫结束后2周,小鼠脾淋巴细胞分泌IFN-γ水平,50 μg[（646.05±342.53） pg/ml]和100 μgAg85ADNA肌内注射组[（738.61±372.68） pg/ml]显著高于生理盐水组[（1.73±3.88）pg/ml]（f值分别为4.065、4.647,P值均＜0.05）和10 μg Ag85A DNA组[（87.83±120.82）pg/ml]（t值分别为3.513、4.094,P值均＜0.05）;10 μg Ag85A DNA电转染组[（357.06±105.18） pg/ml]显著高于生理盐水组（t=2.247,P＜0.05）,高于100 μg Ag85ADNA电转染组[（86.08±135.73） pg/ml],但差异无统计学意义（t=1.706,P＞0.05）;50 μg Ag85ADNA电转染组[（648.60±439.41）pg/ml]显著高于生理盐水组（t=4.081,P＜0.05）和100 μg Ag85A DNA电转染组（t=3.539,P＜0.05）.与直接肌内注射组IFN-γ水平[（87.83±120.82） pg/ml]比较,10 μg Ag85A DNA电转染组增高3倍[（357.06 pg/ml）/（87.83 pg/ml）]; 50 μg Ag85A DNA肌内注射组[（646.05±342.53） pg/ml]与电转染组[（648.60±439.41）pg/ml]比较,差异无统计学意义（t=-0.016,P＞0.05）;100 μg Ag85A DNA电转染组[（86.08±135.73）pg/ml]较肌内注射组[（738.61±372.68） pg/ml]降低88.35％（t=4.105,P＜0.05）.小鼠PBMC分泌IFN-γ的Th1细胞百分比,不同剂量Ag85A DNA肌内注射组[10 μg Ag85A DNA：（1.39±0.84）％;50 μg Ag85A DNA：（1.55±0.33）％;100 μg Ag85A DNA：（2.13±0.47）％]和DNA电转染组[10 μg Ag85A DNA：（1.42±0.47）％; 50 μg Ag85A DNA：（1.88±0.51）％; 100 μg Ag85ADNA：（1.43±0.68）％]均高于生理盐水组[（0.65±0.31）％]（t值分别为2.002、2.431、4.015、2.084、3.332和2.105,P值均＜0.05）,但不同剂量Ag85A DNA电转染组与肌内注射组之间差异均无统计学意义（t值分别为0.081、0.901和-1.91,P值均＞0.05）.小鼠PBMC分泌IL-4的Th2细胞百分比,不同剂量Ag85A DNA肌内注射组[10 μg Ag85A DNA：（1.42±1.18）％; 50 μg Ag85A DNA：（1.14±0.78）％; 100 μg Ag85A DNA：（1.24±0.76）％]和DNA电转染组[10 μg Ag85A DNA：（1.19±1.09）％; 50 μg Ag85A DNA：（2.06±0.96）％;100 μgAg85A DNA：（1.47±0.65）％]均显著低于生理盐水电转染组[（4.14±2.55）％]（t值分别为-3.392、-3.738、-3.616、-3.676、-2.599和-3.325,P值均＜0.05）,但不同剂量DNA肌内注射组与DNA电转染组之间差异无统计学意义（t值分别为0.284、-1.139和-0.292,P值均＞0.05）.结论 DNA电转染免疫可以增强低剂量DNA疫苗的免疫应答,使用少量的DNA疫苗就可以产生较好的免疫效果.     

HLA-DRB1＊15及相应位点下Th1／Th2细胞相关因子对乙肝疫苗免疫效果的影响

目的探讨广西人群HLA—DRB1＊15基因及相应位点下Th1／Th2细胞相关因子IFN-γIL-4对乙肝疫苗免疫应答水平的影响。方法选取完成重组乙型肝炎疫苗标准全程接种的广西籍汉族健康大学生中抗-HBsS／N值〈10mIU／ml的无、弱应答者80名（A组）作为研究对象,随机选取抗-HBsS／N值〉10mIU／ml的中、强应答者62名（B组）作为对照。应用PCR—SSP进行HLA-DRB1＊15等位基因的检测,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清中Th1／Th2细胞相关因子干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素-4（IL-4）。结果①A组HLA—DRB1＊15基因表达频率为11．25％,显著低于B组的36．67％（P=0．001）;②A组中IFN-γ的平均表达水平为（6．28±6．84）pg／ml,显著低于B组（16．28±10．05）pg/ml（P=0．000）;③A组的IL-4平均表达水平为（2．36±1．91）pg／ml。显著低于B组（8．50±6．68）pg／ml（P=0．000）;④HLA—DRB1＊15阳性组IFN-γ平均表达水平为（13．82±9．89）pg／ml,显著高于HLA—DRB1＊15阴性组（9．76±9．54）pg／ml（P=0．029）;⑤HLA-DRB1＊15阳性组IL-4平均表达水平为（5．81±4．27）pg／ml,阴性组IL-4平均表达水平为（4．82±5．84）pg／ml,两组间差异无统计学意义（P=0．207）。结论①HLA—DRB1＊15基因可能是促进广西人群乙肝疫苗免疫应答的相关基因;②Th1／Th2细胞相关因子IFN-1、IL-4的表达水平可能影响机体乙肝疫苗的免疫效果;③HLA—DRBB1＊15基因可能是通过影响Th1细胞相关因子IFN-γ的表达水平,而不是通过影响Th2细胞相关因子IL-4的表达水平来影响乙肝疫苗的免疫应答。     

新诊断2型糖尿病与柯萨奇病毒、巨细胞病毒感染及白介素-18、干扰素-γ、干扰素-γ诱导蛋白-10的相关性

目的 探讨新诊断T2DM与柯萨奇病毒（COX）、巨细胞病毒（CMV）、单纯疱疹病毒（HSV）及EB病毒（EBV）感染的关系,分析T2DM病毒感染患者血清IL-18、干扰素-γ（IFN-γ）及IFN-γ诱导蛋白-10（IP-10）的水平及意义. 方法 选取新诊断T2DM患者（T2DM组）208例和健康对照（NC组）者240名,检测血清COX、CMV、HSV、EBV IgG抗体阳性率和炎症因子IL-18、IFN-γ及IP-10水平,比较两组病毒抗体阳性率与炎症因子水平的差异,分析T2DM病毒感染与炎症因子的关系. 结果 T2DM组COX、CMV抗体阳性率高于NC组（19.23％vs0.83％,94.71％vs83.33％,P＜0.01）,两组HSV和EBV抗体均为阴性.T2DM组IL-18、IFN-γ及IP-10水平均高于NC组[IL-18：（130.30±118.44） vs（41.69±40.39） pg/ml; IFN-γ：（103.93±110.10）vs（34.50±24.89） pg/ml;IP-10：（2215.50±3395.47）vs （234.55±64.40） pg/ml,P＜0.05或P＜0.01].T2DM COX感染者IL-18高于无COX感染者[（142.84±150.63）vs（122.04±92.59） pg/ml,P＜0.05]. 结论 COX感染与新诊断T2DM的发生发展存在一定的相关性,可能与IL-18等的作用有关.     

细粒棘球绦虫重组BCG-Eg95疫苗诱导小鼠脾细胞淋巴因子变化的研究

目的 探讨细粒棘球绦虫（Eg）重组BCG-Eg95疫苗免疫后对受攻击小鼠的包囊减重率及脾细胞淋巴因子的影响。方法 细粒棘球绦虫重组BCG-Eg95疫苗分别采用皮下注射、鼻腔内接种、口服灌胃和肌肉注射4种途径免疫BALB/C小鼠，免疫后8周用Eg原头节攻击感染，50个Eg原头节/每只小鼠，感染后18周剖杀小鼠，分离并称重细粒棘球蚴，计算包囊减重率；取脾，分离脾细胞，用Eg粗抗原（EgAg）或伴刀豆球蛋白A（ConA）刺激培养，收集脾细胞培养上清液，检测脾细胞培养上清液的白介素-2（IL-2）、γ干扰素（IFN-γ）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白介素-4（IL-4）水平。同时设卡介苗（BCG）和磷酸盐缓冲液（PBS）对照。 结果 以上4种疫苗接种组的包囊减重率分别为45.77%、18.20%、88.05%和92.46%；疫苗肌肉接种组的IL-2、IFN-γ和TNF-α均较PBS对照为高，分别为（30.0±0）pg/ml、（65.0±0）pg/ml和（425.0±10.7） pg/ml， IL-4低于PBS对照组， 为（10.0±0） pg/ml。 结论 细粒棘球绦虫重组BCG-Eg95疫苗诱导小鼠产生辅助性T细胞1型（Th1）反应，从而对抗Eg原头节攻击感染。     

白细胞介素-17A在原发性干燥综合征发病中的作用探讨

目的探讨IL-17A对pSS患者炎性因子和PBMCs自噬基因的调控作用。方法选择符合pSS诊断的患者30例, 抽取20 ml外周血, 分离PBMCs, 分为PBMCs组、IL-17A刺激剂组和IL-17A抑制剂组, 温育48 h后, 应用免疫荧光检测微管相关蛋白l轻链3(LC3)自噬小体, ELISA法检测炎性因子IL-4、IFN-γ、IL-13的表达, 实时荧光聚合酶链反应(qRT-PCR)检测自噬诱导基因Ambra-1、Bif-1和凋亡基因Bcl-2、Bcl-XL mRNA的表达, 免疫蛋白印迹法检测苄氯素1(Beclin1)和LC3蛋白表达。采用方差分析比较组间差异, 两两比较采用t检验。结果免疫荧光结果显示, 与IL-17A刺激剂组比较, IL-17A抑制组LC3自噬小体明显增多。ELISA结果显示, 与PBMCs组[IL-4分泌量(13.39±0.32)pg/ml, IFN-γ分泌量(14.4±0.4)pg/ml, IL-13分泌量(854±36)pg/ml]比较, IL-17A刺激组IL-4分泌量(11.54±0.30)下降(t=12.83, P=0.024), IFN-γ...     

日本血吸虫感染对过敏性哮喘影响的实验研究

目的 建立日本血吸虫感染并发过敏性哮喘实验动物模型及探讨日本血吸虫感染对过敏性哮喘的作用. 方法 取25只BALB/c小鼠,随机分为3组,A组为日本血吸虫感染并发过敏性哮喘组,B组为单纯过敏性哮喘组,C组为健康对照组.A组小鼠经腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴(23±3)条.8周后,以卵白蛋白(OVA)分别对A组、B组小鼠进行致敏激发,建立过敏性哮喘模型.12周后,取小鼠脾脏制成单细胞悬液并培养72 h,收集脾细胞上清液,检测细胞因子IL-4和IFN-γ水平;收集支气管肺泡灌洗液(BALF),观察嗜酸性粒细胞(EOS)所占的百分比;取小鼠肺组织作病理切片,观察小鼠肺组织的炎症变化. 结果 与B组比较,A组小鼠BALF涂片中EOS数减少(P＜0.05),A、B两组EOS百分比分别为(7.30±5.01)%和(43.60±2.53)%,而C组小鼠BALF中仅见少数气管上皮细胞,无炎细胞;ELISA法检测A、B、C组小鼠脾细胞培养上清IL-4水平分别为(96.02±38.54) pg/ml、(414.86±175.12) pg/ml和(13.55±1.66) pg/ml,IFN-γ水平分别为(11.60±4.18) pg/ml、(7.43±3.60)pg/ml和(7.55±1.57) pg/ml.与B组比较,A组小鼠IL-4水平降低(P＜0.05),IFN-γ水平无显著性变化(P＞0.05),IL-4/IFN-γ比值降低(P＜0.05).肺部病理改变A组小鼠较轻,B组较重,C组无炎症反应. 结论 日本血吸虫感染对过敏性哮喘的发生有抑制作用.     

结核分枝杆菌RD区基因Rv1988的构建、表达及免疫学功能研究

目的构建结核分枝杆菌(Mtb)Rv1988基因原核表达载体pET30b-Rv1988,诱导目的蛋白的表达并进行纯化,通过体外试验和动物试验观察rRv1988诱导人淋巴细胞及小鼠的免疫应答类型及水平。方法设计目的基因Rv1988特异性引物,PCR扩增Rv1988基因,将克隆片段与质粒pET30b进行连接,构建重组质粒pET30b-Rv1988,以基因工程技术表达并纯化目的蛋白rRv1988。从山西省长治医学院和平医院感染科募集26例符合要求的受试者,采用全血IFN-γ分析试验(WBIA)检测Rv1988抗原诱导Mtb感染者和健康对照者外周血淋巴细胞产生的IFN-γ水平及其差异。其中动物试验设5个组(PBS组、BCG组、DMT组、rRv1988/DMT组及BCG+rRv1988/DMT组),皮下免疫C57BL/6小鼠,9周后处死并检测特异性抗体滴度,脾淋巴细胞培养上清中Th1型细胞因子IFN-γ、TNF-α和IL-2的水平,并进行数据分析。结果成功构建了Rv1988基因重组载体,表达并纯化了重组蛋白rRv1988。rRv1988蛋白刺激Mtb感染者淋巴细胞产生的IFN-γ浓度显著高于健康对照者[如rRv1988刺激值为(1 118±70.53) pg/ml和(207.1±31.58) pg/ml,t=10.21,P0.01]。经BCG初免后以rRv1988蛋白联合佐剂DMT免疫C57BL/6小鼠,诱导产生高水平的特异性IgG抗体及其亚类(F=755.1、326.5和193.1,均P0.01),IgG2a/IgG1趋向Th1型应答;同时诱导小鼠脾淋巴细胞产生高水平的IFN-γ和TNF-α(F=58.71和131.2,均P0.05),而IL-2在BCG+rRv1988/DMT组、rRv1988/DMT组和BCG组之间差异无统计学意义(P0.05)。结论原核表达了rRv1988蛋白,该蛋白能被Mtb感染者的T细胞所识别,并可引发机体产生特异性Th1型细胞免疫应答,表明rRv1988蛋白具有免疫原性,为结核病疫苗的研制奠定了基础。     

支气管哮喘患者CC16与气道炎症及Th1/Th2细胞因子的关系

目的探讨支气管哮喘（哮喘）患者CC16与气道炎症及Th1/Th2细胞因子的关系。方法采取病例对照研究,收集25例哮喘急性发作期患者和33例健康对照组。采外周静脉血分离血浆,提取外周血单个核细胞（PBMC）,用ELISA测定血浆中CC16、干扰素-γ（IFN-γ）、白介素-4（IL-4）的水平;用RT-PCR法检测PBMC转录因子T-bet和Gata-3mRNA表达水平。结果 1.哮喘组CC16及IFN-γ分别为（21.96±7.31）ng/ml,（118.73±22.59）pg/ml,明显低于对照组[分别为（64.88±25.27）ng/ml和（145.53±29.50）pg/ml,（均P〈0.01）],哮喘组IL-4（425.22±4.37）pg/ml高于对照组（69.72±10.15）pg/ml,（P〈0.01）。2.哮喘组T-betmRNA、T-bet/GATA-3表达水平（0.12±0.01,0.25±0.04）显著低于对照组（0.48±0.12,1.894±0.65）（均P〈0.01）,GATA-3mRNA表达（0.45±0.05）较对照组明显升高（0.30±0.08）（P〈0.01）。3.CC16与T-betmRNA表达水平、T-bet/GATA-3呈正相关（r分别为0.792,0.761,均P〈0.01）;与GATA-3mRNA无明显相关性（r=-0.146,P=0.551）。结论 CC16参与哮喘气道炎症反应,并以Th1/Th2细胞因子失衡为特点。     

曼氏裂头蚴感染小鼠外周血T淋巴细胞亚群及IL-4、IL-10、IFN-γ、TNF-α的动态变化

目的观察小鼠感染裂头蚴后外周血T淋巴细胞亚群及细胞因子含量的动态变化,了解小鼠感染后的细胞免疫特点。方法从黑斑蛙体内检获裂头蚴,口服法感染昆明小鼠,5条/只。感染后第2～10周分批处死小鼠,用流式细胞仪检测外周血T淋巴细胞亚群（CD4^＋T、CD8^＋T）,用双抗夹心ELISA法检测血清IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-10的含量变化。结果实验鼠CD4^＋T细胞百分比在感染后第2～5周呈上升趋势,之后逐渐下降,第9周降至（31.61±5.33）%,第10周又回升到第8周水平;CD8^＋T细胞百分比升高,第4周达高峰,为（41.69±15.84）%。IFN-γ在感染后第3周为（13.36±2.58）pg/ml,第4周为（13.96±4.53）pg/ml,第5周为（13.33±2.32）pg/ml,与对照组相比差异有统计学意义（P〈0.05）;TNF-α第4周达（22.99±4.52）pg/ml,之后呈下降趋势,第10周降至（10.99±1.14）pg/ml;IL-4第4周开始上升,第7周达（18.31±7.70）pg/ml,第8周后逐渐下降;IL-10从第5周起逐渐上升,至第8周达到（15.89±4.64）pg/ml,之后呈下降趋势。结论小鼠感染裂头蚴早期,发生Th1免疫应答;随着感染的进程,免疫应答向Th2偏移。Th1／Th2型免疫应答发生的时相和效应强度可能影响裂头蚴感染的最终结局。     

白细胞介素-33在过敏性哮喘小鼠体内的变化及作用

目的探讨白细胞介素-33(IL-33)在粉尘螨1类变应原(Der f 1)诱导的过敏性哮喘小鼠中的变化及作用。方法将40只雌性BALB/c小鼠用随机数字表法分为哮喘组、免疫治疗组、抑制剂组和阴性对照组(PBS组),每组10只。哮喘组、免疫治疗组和抑制剂组分别在第0、7和14天腹腔注射100μl粉尘螨变应原提取液(含100μg/ml Der f 1),抑制剂组小鼠同时注射抑制剂(可溶性ST2 100μl,用于抑制IL-33),PBS组注射等量PBS。第21天起,各组小鼠雾化吸入粉尘螨变应原提取液(0.5μg/ml),30 min/次,1次/d,连续7 d。免疫治疗组小鼠第25天起于雾化前0.5 h,分别用200μl的Der f 1蛋白溶液(100μg/ml)腹腔注射进行免疫治疗,PBS组用PBS代替粉尘螨变应原。第27天雾化吸入后24 h处死小鼠,收集小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)和眼球血,并对BALF中嗜酸粒细胞进行计数,制作肺组织病理切片。ELISA法检测BALF中IL-5、IL-13和γ干扰素(IFN-γ)的含量及血清中特异性Ig E和Ig G2a水平。结果除PBS组小鼠外,其他组小鼠自第21天开始出现不同程度的哮喘症状。自第25天开始,免疫治疗组小鼠的哮喘症状开始缓解。哮喘组和PBS组小鼠BALF中嗜酸粒细胞总数分别为(4.41±0.36)×10~5/ml和(0.37±0.08)×10~5/ml,两组差异有统计学意义(t=24.50,P0.01);免疫治疗组和抑制剂组小鼠的嗜酸粒细胞总数分别为(1.43±0.14)×10~5/ml和(2.73±0.33)×10~5/ml,均明显低于哮喘组(F=129.72,P0.01)。ELISA检测结果显示,哮喘组、免疫治疗组、抑制剂组和PBS组BALF中IFN-γ的水平分别为(83.06±11.38)、(277.97±22.46)、(175.13±13.41)和(224.77±19.97)pg/ml,免疫治疗组和抑制剂组均明显高于哮喘组(t=17.31,t=11.71,P0.01)。哮喘组、免疫治疗组、抑制剂组和PBS组小鼠BALF中IL-5水平分别为(208.64±11.55)、(106.87±11.39)、(140.71±14.58)和(90.15±9.49)pg/ml,哮喘组的水平明显高于其他各组(F=97.19,P0.01)。哮喘组和免疫治疗组BALF中IL-13水平分别为(308.37±13.67)pg/ml和(175.66±11.79)pg/ml,两者差异有统计学意义(P0.01);抑制剂组小鼠的为(221.12±21.08)pg/ml,明显低于哮喘组(t=16.44,P0.01);PBS组为(97.57±18.38)pg/ml。免疫治疗组与哮喘组相比,小鼠肺部炎性症状均减轻,几乎无炎症细胞。抑制剂组小鼠的支气管周围也有嗜酸粒细胞增多症、上皮细胞脱落和支气管上皮细胞肥大,但较哮喘组要减轻许多。血清Ig E抗体水平的检测结果显示,哮喘组、免疫治疗组、抑制剂组和PBS组分别为(31.97±3.48)、(12.86±2.22)、(18.43±2.30)和(9.68±1.27)IU/ml,免疫治疗组和抑制剂组均低于哮喘组(t=-7.77,P0.01)。Ig G2a抗体水平的变化和Ig E相反,哮喘组、免疫治疗组和PBS组分别为(26.94±2.96)、(35.06±2.57)和(10.31±1.48)μg/ml,免疫治疗组高于哮喘组(t=6.55,P0.01)。结论 ELISA检测结果表明IL-33/ST2信号通路在小鼠过敏性哮喘中发挥着重要的作用。     

复苏促生长因子结构域及其突变体重组蛋白诱导小鼠免疫应答的研究

目的 评价复苏促生长因子结构域蛋白（Rpfd）及其突变体蛋白（Rpfd1、Rpfd2）等3种重组蛋白的免疫效能。 方法 2011年11月至2012年2月间,分别以本实验前期制备的重组蛋白Rpfd（A组）、Rpfd1（A1组）、Rpfd2（A2组）分别于0、2、4周免疫无特定病原体（SPF）级BALB/c小鼠,每组14只,并分别以BCG（B组）和生理盐水（C组）同期免疫同种小鼠各14只作为对照。第5周,每组取7只小鼠摘眼球取血,ELISA法检测血清特异性抗体、血清IFN-γ和IL-2表达水平;第8周,每组剩余7只小鼠用1×10⁵ CFU结核分枝杆菌标准株H37Rv感染小鼠,第9周检测感染后小鼠血清细胞因子IFN-γ和IL-2水平。 结果 （1）抗体水平：①Rpfd抗原包被。A1组刺激小鼠产生抗体A₄₅₀的检测值（0.990±0.272）高于B组（0.631±0.180）（t=4.635,P<0.05）;A2组（1.470±0.455）高于B组（t=6.634,P<0.05）。②Rpfd1抗原包被。A组刺激小鼠产生抗体A₄₅₀的检测值（1.030±0.304）高于B组（0.573±0.004）（t=5.276,P<0.05）;A1组（1.368±0.171）高于B组（t=17.20,P<0.05）;A2组（2.766±0.245）高于B组（t=31.643,P<0.05）;③Rpfd2抗原包被。A1组刺激小鼠产生抗体A₄₅₀的检测值（1.055±0.202）高于B组（0.538±0.100）（t=8.009,P<0.05）;A2组（1.605±0.544）高于B组（t=8.192,P<0.05）。（2） IFN-γ水平：①感染前。A组刺激小鼠产生IFN-γ水平［（553.47±132.00）pg/ml］高于B组［（385.28±129.07）pg/ml］（t=3.150,P<0.05）;②感染后。A1蛋白组刺激小鼠产生IFN-γ水平［（492.41±211.74）pg/ml］高于B组［（335.36±207.72）pg/ml］（t=2.874,P<0.05）;A2组［（543.09±223.07）pg/ml］高于B组（t=3.15,P<0.05）。（3）IL-2水平：①感染前。A组刺激小鼠产生IL-2水平［（1490.05±215.35）pg/ml］高于B组［（718.70±269.29）pg/ml］（t=7.763,P<0.05）;A1组［（1738.91±358.40）pg/ml］高于B组（t=7.903,P<0.05）;A2组［（2270.74±193.40）pg/ml］高于B组（t=16.308,P<0.05）;②感染后。A组刺激小鼠产生IL-2水平［（806.81±306.39）pg/ml］高于B组［（335.26±176.81）pg/ml］（t=4.627,P<0.05）;A1组［（1373.22±143.75）pg/ml］高于B组（t=15.90,P<0.05）。 结论 Rpfd、Rpfd1、Rpfd2蛋白具有启动宿主体液免疫功能及增强宿主细胞免疫功能的双重作用,可能成为预防及治疗Mtb感染的免疫新策略。     

男性急性冠脉综合征患者血清睾酮与炎性因子改变的相关性

目的：测定不同类型冠心病（CHD）患者血清睾酮、血浆白介素-18（IL-18）、IL-10的水平,探讨睾酮与IL-18、IL-10的相关性,及在CHD发生发展中的可能作用。方法：96例男性CHD患者被分为急性心梗（AMI）组（35例）、不稳定型心绞痛（UAP）组（32例）和稳定型心绞痛（SAP）组（29例）,另选择30例经冠脉造影排除冠心病的患者为非冠心病对照组,采用酶联免疫吸附法测定各组血清睾酮,血浆IL-18、IL-10水平。结果：血清睾酮水平在UAP组、AMI组均显著低于非冠心病对照组[（6．89±1．35）mmol／L比（5．02±1．87）mmol／L比（13．46±1．99）mmol／L,t=1．917～2．365,P均〈0．05],且AMI组显著低于UAP组（t=1．034,P〈0．05）;IL-18水平在SAP组、UAP组和AMI组均显著高于非冠心病对照组[（209．32±80．49）pg／ml比（316．78±75．63）pg／ml比（457．78±83．21）pg／ml比（146．72±79．36）pg／ml,t=2．016～3．167,P均〈0．05],且UAP、AMI组显著高于SAP组（t=2．173,2．596,P〈0．05）;IL-10水平在SAP组、UAP组和AMI组显著高于非冠心病对照组[（116．45±42．76）pg／ml比（85．64±27．33）pg／ml比（70．26±18．55）pg／ml比（48．46±18．27）pg／ml,t=2．9972．018,P均d0．053,而AMI组、UAP组显著低于SAP组（t-2．034,2．291,P〈0．05）。Pearson直线回归分析显示,CHD组的血清睾酮水平与IL．10（r=-0．678,P〈0．01）,IL-18（r=-0．579,P〈O．01）水平呈显著负相关。结论：冠心病血清睾酮及IL-18,IL-10水平有显著改变,且血清睾酮与IL-18,IL-10呈显著负相关,可作为评价冠状动脉粥样硬化病变的新指标。     

白细胞介素1β和干扰素γ对小鼠胰岛素瘤βTC-6细胞胰岛素分泌功能的影响

目的探讨炎性细胞因子白细胞介素1β（IL-1β）、干扰素γ（IFN-γ）对小鼠胰岛β细胞株βTC-6胰岛素分泌功能的影响。方法将βTC-6细胞培养于高糖DMEM培养基,48h后换用无糖KRBH缓冲液培养30min,分别于含0、1．38、5．50和11．10mmol／L葡萄糖的KRBH缓冲液中孵育60min,放射免疫法检测细胞上清液中胰岛素水平（GSIS）。在BTC-6细胞中分别加入不同浓度的IL-1β（0．15、1．50μg／L）和（或）IFN-γ（10、100U／m1）,24h后换用无糖KRBH缓冲液培养30min,在含1．38mmol／L葡萄糖的KRBH缓冲液中孵育60min,放射免疫法检测细胞上清液中胰岛素水平。多组间数据比较采用单因素方差分析,两组间数据比较采用t检验。结果βTC-6细胞在1．38mmol／L葡萄糖刺激时胰岛素分泌达高峰,与无葡萄糖刺激时相比差异有统计学意义[（151±14）对（120±4）mU／L,t=-4．215,P=0．006];5．50、11．10mmol／L葡萄糖刺激时胰岛素分泌较1．38mmol／L葡萄糖刺激时明显下降（均P〈0．05）。与单纯1．38mmol／L葡萄糖刺激组相比,IL-1β（0．15μg／L）组[（85．53±5．06）mU／L对（103．11±0．27）mU／L,t=4．897,P=0．039]、IL-1β（1．50μg／L）组[（62．62±0．64）mU／L对（103．11±0．27）mU／L,t=212．66,P〈0．001]葡萄糖刺激下胰岛素分泌水平显著下降,下降程度与IL-1β的剂量呈正相关;与单纯葡萄糖刺激组相比,IFN-γ（100U／m1）组葡萄糖刺激下胰岛素分泌显著下降[（73．2±1．6）对（105．2±1．8）mU／L,t=19．52,P：0．003];与IL-1β（0．15μg／L）组及IFN-γ（100U／m1）组相比,IL-1β联合IFN-γ组葡萄糖刺激下胰岛素分泌显著下降（F=77．38,P〈0．001）。结论IL-1β和IFN-γ对13TC-6细胞的胰岛素分泌功能有抑制作用,且两者间具有协同效应。     

细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31疫苗诱导小鼠脾细胞因子变化的研究

目的探讨细粒棘球绦虫(Eg)重组双歧杆菌(Bb)-Eg95-EgA31疫苗免疫和Eg原头节攻击后小鼠脾细胞因子的变化。方法 56只雌性BALB/c小鼠随机均分7组,A组和B组分别皮下和肌肉注射5×106蛋白克隆形成单位(CFU)疫苗悬浮于100μl双歧杆菌液体培养基(MRS)、C组鼻腔内接种5×105CFU+10μlMRS、D组经口灌胃5×108CFU+100μlMRS、E组(空载体对照组)5×106CFUBb(pGEX-1λT)+100μlMRS、F组为双歧杆菌(Bb)对照组和G组为双歧杆菌液体培养基(MRS)对照组。免疫后8周各组鼠攻击感染50个Eg原头节,感染后25周剖杀小鼠,取脾,分离脾细胞,用Eg粗抗原(EgAg)刺激培养,同时设伴刀豆球蛋白A(ConA)或脂多糖(LPS)刺激对照和非刺激组。收集脾细胞培养上清液,ELISA法检测脾细胞培养上清液中γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-12(IL-12)、α肿瘤坏死因子(TNF-α)和IL-10水平。结果 A、B、C和D组小鼠脾细胞培养上清液中,IFN-γ水平分别为(137.5±23.2)、(162.5±23.2)、(250.0±53.5)和(215.0±37.4)pg/ml,均高于MRS对照组(50.0±10.7)pg/ml(P0.01);IL-12水平分别为(27.5±4.6)、(32.5±4.6)、(45.0±5.4和(35.0±5.4)pg/ml,均高于MRS对照组(15.0±5.4)pg/ml(P0.01);TNF-α水平分别为(275.0±46.3)、(325.0±46.3)、(450.0±53.5)和(350.0±53.5)pg/ml,均高于MRS对照组(150.0±53.5)pg/ml(P0.01);IL-10水平分别为(37.5±4.6)、(35.0±5.4)、(25.0±5.4)和(32.5±4.6)pg/ml,均低于MRS对照组(45.0±5.4)pg/ml(P0.05或P0.01)。结论细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31疫苗可诱导小鼠产生Th1型保护性免疫应答。     

冠心病患者介入治疗后白介素-8和C反应蛋白水平变化的意义

目的：探讨冠心病患者介入治疗后白介素（IL）-8和C反应蛋白（CRP）水平变化。方法：入选2010年3月-2012年12月在本院住院治疗的冠心病患者共90例,根据治疗方法分为 PCI组（70例）,保守治疗组（20例）,另选择20例健康人群作为健康对照组。比较治疗前,治疗后20d内IL-8和CRP含量的变化。结果：与治疗前比较,治疗后1d PCI组IL-8[（63.22±13.10） pg/ml比（31.58±9.10） pg/ml]、CRP [（14.59±6.13） mg/L比（9.61±2.35） mg/L]水平显著下降,且IL-8明显低于保守治疗组[（50.18±19.31） pg/ml], P＜0.01;20d后,PCI组IL-8[（15.13±5.22） pg/ml]、CRP [（3.01±0.76） mg/L]水平下降更加显著（P＜0.05-＜0.01）,且显著低于保守治疗组[（27.22±14.69） pg/ml ,（5.46±2.77） mg/L], P均＜0.01,甚至PCI组的IL-8水平与健康对照组[（15.58±4.10） pg/ml]无明显差异（P＞0.05）。结论：PCI术后白介素-8和C反应蛋白水平明显下降,可作为评估冠心病合并动脉粥样硬化患者PCI术后预后的指标。     

维生素D抗炎机制对糖尿病大鼠骨代谢的影响

目的 探讨活性维生素D3对糖尿病大鼠炎症因子及骨代谢指标的影响.方法 6～8周龄雄性SD大鼠30只,链脲佐菌素诱导建立糖尿病大鼠模型.将糖尿病大鼠分为2组：糖尿病组、维生素D组.选取健康同龄大鼠10只作为正常对照组.维生素D组给予1,25（OH）2D3（0.1μg·kg＾-1·d＾-1）溶于0.05 ml花生油灌胃,正常对照组及糖尿病组给予花生油0.05 ml/d灌胃.12周后处死各组大鼠,测定血清白介素17（IL-17）、钙、磷、骨钙素、24 h尿钙、24 h尿白蛋白（UAlb）水平;免疫组化法检测肾皮质内IL-17的表达;荧光定量RT-PCR检测骨组织骨钙素mRNA表达水平.结果 （1）糖尿病组24 h尿钙、24 hUAlb显著高于正常对照组[分别为（0.31±0.18）比（0.01±0.01） mmol/24 h、（1.15±0.13）比（0.43±0.09） mg/24 h,t值分别为5.125、13.948,均P＜0.05];维生素D组24 hUAlb显著低于糖尿病组[（0.82±0.13）比（1.15±0.13） mg/24 h,t=-5.798,P＜0.05].（2）与正常对照组、维生素D组相比,糖尿病组血清IL-17、肾皮质IL-17表达显著升高[分别为（494±28）比（137±18）、（250±20）pg/ml,（165.0±7.0）比（81.9±5.6）、（119.1±6.6）,t值分别为34.229、-23.263、29.238、-15.475,均P＜0.05].（3）与正常对照组、维生素D组相比,糖尿病组血清骨钙素、骨组织骨钙素mRNA表达显著降低[分别为（485±123）比（752±239）、（621±161）pg/ml,（19.8±2.9）比（24.1±2.9）、（22.9±3.1）,t值分别为-3.147、2.158、-3.220、2.265,均P＜0.05].（4）血清IL-17与血清骨钙素呈负相关（r=-0.544,P＜0.05）.结论 维生素D可抑制糖尿病大鼠IL-17等炎症因子的表达,改善骨代谢.