单耐利福平结核分枝杆菌耐药分子机制研究

目的 探讨单耐利福平结核分枝杆菌中耐药相关基因突变以及药物外排泵两种不同耐药机制的功能。 方法 从国家结核病参比实验室2007-2008年全国耐药基线调查菌株库中挑选单耐利福平的菌株23株。采用直接测序法检测利福平耐药相关基因rpoB突变情况。提取rpoB无突变菌株的RNA后反转录并采用real-time PCR方法检测20个药物外排泵基因的表达量,对比菌株最低抑菌浓度（minimum inhibitory concentration,MIC）实验结果,筛选可能与利福平药物外排相关的基因,并选用大肠埃希菌为模式生物,构建表达载体,检测过表达目的外排泵的大肠埃希菌对利福平的耐药程度以验证。结果 在23株单耐利福平的菌株中,有16株（69.6%）检测到rpoB突变,其中包括531位点突变9株,526位点突变6株及533位点突变1株。Ser531Leu、His526Asp表现为高浓度耐药,其MIC分别为192 μg/ml和256 μg/ml;而突变类型His526Gly、His526Leu、His526Arg和Leu533Pro表现为低浓度耐药,其MIC分别为0.75 μg/ml、4 μg/ml、2 μg/ml和0.5 μg/ml。在rpoB未突变菌株中,通过real-time PCR发现Rv2936、Rv0783和Rv0933的转录水平与MIC呈正相关。在对照组和转入pEASY-E1-Rv0933的大肠埃希菌中MIC均为 8 μg/ml,而转入pEASY-E1-Rv2936和 pEASY-E1-Rv0783的大肠埃希菌的MIC均有不同程度的提高,分别为32 μg/ml和16 μg/ml。结论 不同耐药突变类型导致的耐药程度不同,Rv2936和Rv0783可能是与利福平耐药相关的的药物外排泵基因。     

耐氧氟沙星结核分枝杆菌对五种氟喹诺酮类药物交叉耐药的研究

目的 研究耐氧氟沙星结核分枝杆菌对5种不同氟喹诺酮类药物之间的交叉耐药性.方法 本研究选取来自于2007年全国结核病耐药性基线调查的130株对氧氟沙星耐药的结核分枝杆菌菌株,用微孔板稀释法检测这些菌株对5种氟喹诺酮类药物（氧氟沙星、左氧氟沙星、莫西沙星、加替沙星以及司帕沙星）的最低抑菌浓度,统计耐药率的差别并分析对某种氟喹诺酮类药物耐药的菌株中对其他4种药物的耐药率的差别,组间差异的比较采用卡方检验,以P＜0.05为差异有统计学意义.结果 130株对氧氟沙星耐药的菌株中,分别有110株（84.6％,110/130）、108株（83.1％,108/130）、46株（35.4％,46/130）及66株（50.8％,66/130）对左氧氟沙星、莫西沙星、加替沙星及司帕沙星耐药.加替沙星耐药率显著低于左氧氟沙星（x2=65.641,P＜0.01）、莫西沙星（x2=61.225,P＜0.01）和司帕沙星（x2=6.274,P=0.02）的耐药率.左氧氟沙星耐药菌株中分别有90.9％（100/110）、41.8％（46/110）和59.1％（65/110）的菌株对莫西沙星、加替沙星和司帕沙星耐药;在加替沙星和司帕沙星耐药菌株中,有97.8％（45/46）和97.0％（64/66）对莫西沙星耐药.莫西沙星耐药株中分别有41.7％（45/108）和59.3％（64/108）对加替沙星和司帕沙星耐药.结论 上述5种氟喹诺酮类药物之间呈现出不同的交叉耐药性,其中左氧氟沙星和莫西沙星交叉耐药,加替沙星和司帕沙星与莫西沙星之间表现为部分单向交叉耐药.     

结核分枝杆菌DNA促旋酶基因突变与耐氟喹诺酮类药物的相关性研究

目的 分析MDR TB结核分枝杆菌临床分离株的DNA促旋酶（gyr）基因突变特点,初步探究MDR-TB对氟喹诺酮类药物耐药与gyr基因突变的相关性.方法 采用最低抑菌浓度（MIC）法筛选MDR-TB,对17株临床MDRTB菌株应用DNA直接测序法检测gyr基因的突变情况,分析细菌基因突变与耐药产生的相关性.结果 Mtb 1株标准菌株（H37Rv）未见gyr A亚单位基因（gyrA）和gyr B亚单位基因（gyrB）基因突变,所有17株临床菌株gyrA均存在95位AGC→ACC.12株耐环丙沙星和左氧氟沙星菌株中,10株gyrA产生了错义突变,突变率为83.3％;突变位点位于89位、90位、91位和94位;1株发生了gyrB突变,突变位点位于500位.耐莫西沙星的9株耐药株中,8株gyrA发生突变,占88.9％.结论 gyrA基因突变是Mtb对氟喹诺酮类药物产生耐药的机制之一;gyrA的错义突变主要发生在第89位、90位、91位、94位密码子上.     

984株结核分枝杆菌耐药情况分析

目的了解浙江省当前结核病对一线抗结核药物的耐药水平及耐多药情况，为今后结核病防治工作提供参考依据。方法采用WHO推荐的药敏比例法对984株临床分离结核分枝杆菌进行药物敏感性试验。结果总耐药率为30．6％，初始耐药率为26．6％，获得性耐药率为52．3％，耐多药（MDR）率为7．6％。结论浙江省耐药水平有上升趋势，应引起相关卫生部门的关注。     

984株结核分枝杆菌耐药情况分析

目的了解浙江省当前结核病对一线抗结核药物的耐药水平及耐多药情况,为今后结核病防治工作提供参考依据。方法采用WHO推荐的药敏比例法对984株临床分离结核分枝杆菌进行药物敏感性试验。结果总耐药率为30.6%,初始耐药率为26.6%,获得性耐药率为52.3%,耐多药(MDR)率为7.6%。结论浙江省耐药水平有上升趋势,应引起相关卫生部门的关注。     

广东省地区结核分枝杆菌寡核苷酸基因分型及耐药相关性

目的 研究结核分枝杆菌(MTB)不同基因型在广东省各地区的流行情况及其耐药相关性。方法 随机数字法抽取广州市胸科医院2014-2015年临床分离的来自于广东省不同地区的504株结核分枝杆菌菌株,采用比例法进行药物敏感性实验,选用间隔区寡核苷酸分型方法(Spoligotyping)对结核分枝杆菌进行基因分型。基因型耐药率差异比较采用χ²检验。结果 (1)在504株结核分枝杆菌临床分离株中北京家族和非北京家族分别是386株和118株。非北京家族中,T家族高达48株;其余是H3家族、EAI家族、MANU家族、AMBIGO家族、LAM家族以及新发基因型。北京家族构成比在性别、年龄上无统计学差异(P>0.05),但在汕头、汕尾、揭阳、东莞四个地级市的构成比低于广州市,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)504株结核分枝杆菌中,453株在SPOIDB 4.0数据库中分为49种寡核苷酸类型归类于30个簇,其主要流行簇依次为:SIT1、SIT53、SIT52、SIT19、SIT523。SIT1基因型的异烟肼(INH)、利福平(RFP)、链霉素(SM)、乙胺丁醇(EMB)、 吡嗪酰胺(PZA)、 阿米卡星(AMK)、左氧氟沙星(LVFX)、耐多药(MDR)、泛耐药(XDR) 的耐药率均高于SIT53、 SIT52、SIT19,而SIT523在 RFP、SM、EMB、MDR的耐药率方面高于SIT1 (3)主要流行基因型北京家族的INH、PZA、AMK的耐药率高于非北京家族,差异有统计学意义(P<0.05),其余药物的耐药性无显著性差异(P>0.05)。结论 广东省结核分枝杆菌呈基因多态性,北京基因型菌株为本省结核分枝杆菌主要流行株,而且与异烟肼、吡嗪酰胺、阿米卡星耐药相关。非北京基因型在潮汕和东莞等华侨之乡比例有所增加。     

华东地区耐药结核分枝杆菌katG基因的变异

目的了解我国华东地区结核分枝杆菌中与异烟肼耐药相关的katG基因的变异情况，提供我国异烟肼耐药相关的基因谱。方法对429株结核杆菌行核酸抽提后先以限制性酶切片段多态性方法检测有无最常见的耐药相关S315T突变，对未发现S315T突变的异烟肼耐药株取部分行katG全基因测序以了解其他位点的变异情况。结果耐药结核分枝杆菌中76．9％（166／216）存在katG基因$315T突变。发现有2株异烟肼高度耐药株中存在katG基因片段的缺失。48株异烟肼耐药株测序结果发现katG基因突变特点如下：突变率较高的有315、463、234位点，其余突变位点较多而分散。315位密码子的突变中除S315T外，S315N突变形式也较常见，占8．7％。结论结核分枝杆菌耐药机制复杂，了解耐药相关基因的变异情况是建立可靠的耐药性分子检测方法的基础。     

结核分枝杆菌thyA基因突变与对氨基水杨酸钠耐药关系的研究

目的 了解Mtb临床分离菌株中对于对氨基水杨酸钠（PAS）的耐药率及PAS耐药性与thyA基因突变的关系。 方法 从肺结核患者的痰标本中分离并鉴定Mtb 96株,采用比例法、全基因测序的方法检测上述Mtb临床菌株对PAS的耐药性情况及其thyA基因突变情况。结果 96株Mtb中,65株为PAS敏感菌株和31株为PAS耐药菌株。以Mtb标准菌株H37Rv为对照,筛选敏感和耐药菌株中的thyA基因突变率分别是46.15%（30/65）、70.97%（22/31）,突变多为单个碱基的缺失和插入突变,其中又以第19位密码子缺失C、第168位密码子缺失C为主,在耐药中所占比率分别是54.84%（17/31）、25.81%（8/31）,其在敏感菌株中的比率也分别是35.38%（23/65）、12.31%（8/65）。结论 耐药菌株中thyA基因的突变频率明显高于敏感菌株,thyA基因可能是PAS耐药潜在靶点,但未发现其特异性突变位点。     

结核分枝杆菌耐乙胺丁醇分子机制的研究进展

结核病是严重危害人类生命健康的历史最悠久的疾病之一,近年来耐药结核病呈上升趋势.乙胺丁醇是治疗结核病,尤其是耐多药结核病的重要药物,但是随着该药的长时间使用,其耐药情况逐步出现,目前已有大量报道.为此笔者综述了乙胺丁醇分子耐药机制的研究进展.     

河南省濮阳市1119株结核分枝杆菌耐药情况分析

目的了解河南省濮阳市涂阳肺结核耐药结核病的流行现状和特点,为今后结核病防治工作提供参考依据。方法收集2010年3月1日至2013年2月28日全市结核病防治机构发现的1291例涂阳肺结核患者的痰标本,进行分枝杆菌培养,用比例法进行6种抗结核药物（H、R、E、S、Ofx、Kin）敏感性试验。经培养阳性、菌型鉴定为结核分枝杆菌且药敏试验成功的1119例为研究对象,其中,初治患者1017例,复治患者102例,并对1119株结核分枝杆菌的药敏试验结果进行分析。计数资料组间比较采用X2检验,P〈0．05为差异有统计学意义。结果1119株结核分枝杆菌对6种抗结核药物的总耐药率、单耐药率、多耐药率、耐多药率分别为37．2％（416／1119）、24．3％（272／1119）、8．2％（92／1119）、4．5％（50／1119）。在总耐药方面,其中初治患者耐药率35．1％（357／1017）,复治患者耐药率57．8％（59／102）;复治患者耐药率明显高于初治患者,两者间差异有统计学意义（X2=20．525,P〈0．05）。对6种抗结核药物的耐药率由高到低的顺序是：H（19．9％,223／1119）、S（19．5％,218／1119）、R（10．8％,121／1119）、Ofx（3．7％,14／1119）、E（3．6％,40／1119）、Km（1．4％,16／1119）。初治患者单耐药率为24．3％（247／1017）,复治患者单耐药率为24．5％（25／102）,两者之间差异无统计学意义（X2=0．002,P〉0．05）。初治患者多耐药率为7．9％（80／1017）,复治患者多耐药率为11．8％（12／102）,两者间差异无统计学意义（X2=1．867,P〉0．05）。初治患者耐多药率为2．9％（30／1017）;复治患者耐多药率为19．6％（20／102）;两者间差异具有统计学意义（X2=56．423,P=0．000）。结论濮阳市1119例涂阳肺结核患者的耐药结果,反映了本地区耐药结核病的实际水平,为今后结核病防治、特别是耐药结核病防治,及时采取干预措施、更有效地控制疫情奠定了基础。     

宁夏回族自治区结核分枝杆菌基因分型及与耐药性关系的研究

目的 利用间隔区寡核苷酸分型(Spoligotyping)方法对宁夏回族自治区（简称“宁夏”）结核分枝杆菌流行株进行分型研究,并分析北京基因型与耐药性的相互关系。 方法 搜集宁夏结核分枝杆菌临床分离株115株,应用Spoligotyping方法进行基因分型研究,采用BioNumerics软件将分型结果进行基因聚类分析。应用比例法药物敏感性试验对115株结核分枝杆菌进行检测,最后将药敏结果结合基因型及流行病学资料进行分析。采用卡方检验比较不同组间结果的差异。 结果 在分离培养的115株菌株中,具有特异Spoligotyping指纹图谱的北京基因型菌株90株,占78.3%（90/115）,25株为非北京基因型,占21.7%（25/115）。 90株北京基因型菌株中,41株为古代基因型（45.6%,41/90）,任意耐药株为16株（17.8%,16/90）;49株为现代基因型（54.4%,49/90）,任意耐药株为33株（36.7%,33/90）,两者间差异无统计学意义（χ²=1.27,P>0.05）。 结论 宁夏结核分枝杆菌以北京基因型流行为主,结核分枝杆菌北京基因型与耐药性之间无明显相关性。     

不同年龄组结核分支杆菌耐药性的研究

目的 了解近阶段不同年龄组结核分支杆菌耐药情况,探讨当前耐药发展趋势。方法 根据年龄将1948例肺结核患者分为青年组（18－39岁）,中年组（40－59岁）和老年组（≥60岁）;采用绝对浓度法进行抗结核药物耐药性测定。结果 青年组、中年组、老年组原发耐药率分别为36．1％、46．8％和40．2％,各组间差异无显著性（P＞0．05）。青年组、中年组、老年组获得性而药率分另为81．3％、70．1％和62．1％,青年组和老年组差异有显著性（P＝0．0916）。原发耐药频度各年龄组从高到低均依次为H、E、S、P,中年组耐R最高达10．6％。获得性耐药顺序青、中年组为H、R、S、E,老年组为H、S、R、E,其中青年组耐R率最高达63．3％。原发耐多药率以中年组最高为5．3％,显著高于青年组（P＝0．0112）和老年组（P＝0．0085）。获得性耐多药率青年组最高达55．2％,显著高于中年组（P＝0．0319）和老年组（P＜0．001）。既往用1－3个月者耐药58．7％,显著高于未用药者（P＜0．001）和用药＜1月者（P＝0．0472）,而未用药和有药＜1月者耐药率差异无显著性（P＝0．02929）。此外,在各年龄组中青年组发生耐药的速度最快。结论 不同年龄组无论原发耐药还是获得性耐药均有所不同,建议应重视不同年龄组耐药率的监测,为修订国家结核病规划提供依据。     

结核分枝杆菌耐药机制的研究进展

在人类的传染病中,结核病死亡率最高,每年约有200万人死于结核病;而且估计每年有920万的新发病例,更为严重的是全世界1/3的人口都感染过结核分枝杆菌.据WHO统计,目前全世界耐多药结核患者已占20%,而且这个数字在逐年递增.因此,明确结核分枝杆菌耐药机制不仅能够建立快速、灵敏、准确的检测方法,更重要的是能找到抗结核药物靶点,开发新的抗结核药物,控制结核病疫情,减轻患者的负担与痛苦.     

部分抗结核分枝杆菌药物的耐药机理研究进展

结核病是危害严重的重大传染病之一,抗结核药物的应用在治疗结核病的过程中具有重要意义。然而抗结核药物治疗不当会引起耐多药和广泛耐药结核分枝杆菌的出现,导致结核病抬头。结核的耐药多与耐药基因突变有关,笔者总结了常见抗结核药物的耐药分子机制的研究进展,为耐药结核的诊断和治疗提供分子依据。     

莫西沙星与左氧氟沙星对结核分枝杆菌的交叉耐药性研究

目的探讨莫西沙星（MXF）与左氧氟沙星(LVF)对结核分枝杆菌的交叉耐药性及耐药基因突变位点,为临床用药提供理论依据。方法选取结核分枝杆菌标准株H₃₇Rv和73株左氧氟沙星耐药的耐多药结核分枝杆菌（MDR-TB）临床分离株以及5株对左氟沙星敏感的MDR-TB临床分离株,以试管二倍稀释法采用7H9培养基,测定以上菌株对MXF和LVF的MIC;通过直接测序法测定gyrA基因喹诺酮类药物耐药决定区（QRDR）320bp的基因突变位点。结果MXF的MIC比LVF低4～8倍;H₃₇Rv未发生gyrA基因突变;78株MDR-TB临床分离株均有Ser95Thr突变;73株LVF耐药的MDR-TB菌株中,35株（47.94%）对LVF低耐药（MIC为1～8μg/ml）的菌株和31株（42.46％）对LVF高耐药株中,除4株只有Ser95Thr突变外,其他菌株同时有Ala90Val、Asp94His、Asp94Asn、Asp94Gly、Asp94Ala、Asp94Tyr突变。结论莫西沙星较左氧氟沙星的抗结核活性强4～8倍,为不完全交叉耐药;gyrA基因90位和94位突变与MDR-TB菌株对LVF、MXF耐药有关,低耐药与高耐药的突变氨基酸种类有差别,有望将测序作为临床左氟沙星分子药敏试验方法。     

结核分枝杆菌的耐药机制研究进展

结核病是由结核分枝杆菌引起的一种人兽共患慢性传染病,随着结核分枝杆菌自身演变和抗结核病药物的使用,导致结核分枝杆菌产生耐药性。目前根据结核病患者是否接受过抗结核病药物的治疗,将结核分枝杆菌的耐药性分为两种,一种是原发性耐药,另一种是获得性耐药。为了探索结核分枝杆菌的耐药机制,本文对原发性与获得性耐药机制进行阐述,为后续新型抗结核病药物的研发奠定理论基础。     

结核分枝杆菌耐药性检测方法的研究进展

结核分枝杆菌耐药基因的检测是结核病诊断和治疗中的难题之一,近年来已有多种方法用来检测耐药基因,笔者从在我国获得注册证书的试剂盒,在国际上获得注册证书尚未进入我国的试剂盒和临床前研究的新方法3个方面概述了结核分枝杆菌耐药性检测方法的研究进展。