紫杉醇对人肝癌细胞SMMC-7721黏附及侵袭转移潜能的影响

目的探讨紫杉醇对人肝癌细胞株SMMC-7721的黏附及侵袭转移潜能的影响及机制。方法应用体外细胞．基质黏附实验检测不同浓度紫杉醇对SMMC-7721与Matrigel胶（人工基底膜胶）黏附性的影响：Transwell小室模型测定紫杉醇对细胞侵袭和迁移能力的影响;蛋白免疫印迹检测紫杉醇对细胞内黏着斑激酶（FAK）蛋白表达量的影响。结果不同浓度紫衫醇（10、20、40nmol／L）作用SMMC-7721细胞60min后,细胞与Matrigel胶黏附性下降;紫杉醇干预24h后,细胞的侵袭能力及迁移能力随紫杉醇浓度提高而明显减弱;细胞内FAK蛋白的表达量也随紫杉醇浓度增高而明显下降。结论紫杉醇能抑制肝癌细胞SMMC-7721的黏附及侵袭转移,其机制可能与其抑制肝癌细胞内FAK的表达相关。     

Effect of reversing low-level histone acetylation with VPA on metastasis of hepatocellular carcinoma in vitro

目的 探讨丙戊酸钠(VPA) 逆转组蛋白低乙酰化水平对体外培养的人肝癌细胞系SMMC-7721细胞体外侵袭、转移能力的影响及其可能的作用机制.方法 流式细胞仪(FCM)分析不同浓度VPA对SMMC-7721细胞凋亡及细胞周期的影响;分别采用划痕试验,Transwell侵袭小室和细胞-基质黏附试验测定细胞体外迁移、侵袭和黏附能力;Western blot观察不同浓度VPA处理后HPA和PCNA蛋白的表达变化.结果 VPA诱导SMMC-7721细胞凋亡,阻滞细胞于G2/M期,抑制细胞增殖.VPA试验组细胞的侵袭、迁移能力以及黏附能力均显著低于对照组(P<0.05).随浓度和时间增加,VPA能明显降低HPA和PCNA蛋白表达.结论 VPA可通过逆转染色体组蛋白低乙酰化水平,显著抑制肝癌细胞增殖,降低肝癌细胞侵袭、迁移和黏附能力.下调HPA和PCNA表达可能是其发挥作用的主要机制之一.     

小檗胺对肝癌SMMC-7721细胞侵袭转移的影响

目的 研究小檗胺对人肝癌SMMC-7721细胞侵袭转移作用的影响及其可能的机制。方法 在体外用不同浓度小檗胺处理肝癌SMMC-7721细胞,采用MTT法检测细胞活力的变化;采用细胞划痕试验、Transwell迁移和侵袭试验检测肿瘤细胞侵袭转移能力;采用Western blot法检测细胞上皮间质转化相关蛋白E-cadherin和Vimentin的表达。结果 MTT结果显示浓度<20 μmol·L^-1的小檗胺对SMMC-7721细胞存活率无显著影响。划痕试验和Transwell结果显示,小檗胺呈浓度依赖性抑制肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭过程。Western blot结果表明,小檗胺显著增强SMMC-7721细胞中E-cadherin表达,而减弱Vimentin表达。结论 人肝癌SMMC-7721细胞侵袭转移能力可被小檗胺抑制,其机制可能与其调控上皮间质转化相关蛋白的表达有关。     

丙戊酸钠逆转组蛋白低乙酰化水平对肝癌细胞侵袭转移的体外实验研究

目的探讨丙戊酸钠(VPA)逆转组蛋白低乙酰化水平对体外培养的人肝癌细胞系SMMC-7721细胞体外侵袭、转移能力的影响及其可能的作用机制。方法流式细胞仪(FCM)分析不同浓度VPA对SMMC-7721细胞凋亡及细胞周期的影响;分别采用划痕试验,Transwell侵袭小室和细胞-基质黏附试验测定细胞体外迁移、侵袭和黏附能力;Western blot观察不同浓度VPA处理后HPA和PCNA蛋白的表达变化。结果 VPA诱导SMMC-7721细胞凋亡,阻滞细胞于G2/M期,抑制细胞增殖。VPA试验组细胞的侵袭、迁移能力以及黏附能力均显著低于对照组(P<0.05)。随浓度和时间增加,VPA能明显降低HPA和PCNA蛋白表达。结论 VPA可通过逆转染色体组蛋白低乙酰化水平,显著抑制肝癌细胞增殖,降低肝癌细胞侵袭、迁移和黏附能力。下调HPA和PCNA表达可能是其发挥作用的主要机制之一。     

杨梅素对肝癌SMMC-7721细胞迁移及侵袭影响的研究

目的探讨杨梅素对肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭的影响。方法以不同浓度杨梅素处理的肝癌SMMC-7721细胞为研究对象,分别采用Wound healing实验、Transwell细胞迁移和侵袭实验检测细胞的迁移和侵袭过程,用RT-q PCR和Western blot检测E-cadherin和N-cadherin的表达。结果杨梅素呈浓度依赖性(10~40μ mol · L~(-1))抑制肝癌SMMC-7721细胞活力;杨梅素还可以抑制SMMC-7721细胞迁移和侵袭过程,并且随着杨梅素浓度的增加,细胞中丝状、片状伪足逐渐减少,细胞排列越来越紧密;RT-qPCR和Western blot结果均显示,杨梅素可以上调SMMC-7721细胞的E-cadherin表达,下调N-cadherin表达。结论杨梅素能抑制肝癌SMMC-7721细胞的迁移和侵袭过程,此作用的发生可能是通过上调E-cadherin、下调N-cadherin等EMT相关的信号通路以及肌动蛋白细胞骨架的重排实现的。     

蜂毒肽对人肝癌细胞SMMC-7721迁移与侵袭的影响

目的探讨蜂毒肽对人肝癌细胞SMMC-7721迁移与侵袭的影响,并初步研究其作用机制。方法浓度为2、4、8、12和16μg/ml的蜂毒肽作用SMMC-7721细胞24 h,采用倒置显微镜观察细胞形态变化,MTT法检测蜂毒肽对SMMC-7721细胞增殖活性的影响,细胞划痕实验观察对细胞迁移能力的影响,Transwell小室法检测细胞侵袭能力。Western blot法检测细胞内MMP-9和NF-κB p65蛋白表达变化。结果与对照组相比,2～16μg/ml的蜂毒肽作用SMMC-7721细胞后,细胞逐渐圆缩,崩解或死亡细胞增多,细胞存活率下降,差异有统计学意义(P0.05)。划痕实验结果显示,蜂毒肽作用后细胞迁移能力明显下降。Transwell小室结果显示,蜂毒肽对SMMC-7721细胞侵袭能力具有显著抑制作用,差异有统计学意义(P0.05)。Western blot结果显示,蜂毒肽处理组细胞MMP-9和NF-κB p65蛋白表达呈现下降趋势,差异有统计学意义(P0.05)。结论蜂毒肽对SMMC-7721细胞迁移与侵袭具有抑制作用,其机制可能通过抑制NF-κB通路调控MMP-9的表达。     

姜黄素对人肝癌细胞SMMC7721侵袭转移的影响

目的 研究姜黄素在体外对人肝癌细胞株SMMC7721细胞黏附、迁移及侵袭的抑制作用.方法 分别以不同浓度姜黄素在体外处理SMMC7721细胞48 h,通过细胞黏附、迁移和侵袭实验观察姜黄素对SMMC7721细胞黏附力、运动力和侵袭力的影响.结果 姜黄素20.0、40.0、60.0μmol/L处理SMMC7721细胞48 h,对细胞侵袭能力的抑制率分别为(17.31±1.78)%、(60.30±4.54)%、(100.00±0.00)%(P<0.01).SMMC7721细胞迁移能力抑制率分别为(15.70±1.33)%、(41.90±3.34)%、(100.00±0.00)%(P<0.01).姜黄素20.0、40.0、60.0μmol/L均能有效抑制SMMC7721细胞与Matrigel胶的黏附力.结论 姜黄素具有抑制人肝癌细胞体外侵袭和转移的作用.     

复方苦参注射液对人肝癌SMMC-7221细胞体外增殖、转移和侵袭的抑制作用及其机制

目的探讨复方苦参注射液(CKI)对体外培养的人肝癌SMMC-7221细胞增殖、转移和侵袭的抑制作用及机制。方法用不同稀释百分比〔0.0%(细胞对照组),2.5%,5.0%和10.0%〕的CKI与SMMC-7221细胞共孵育24 h,分别采用MTT法检测细胞存活,采用划痕修复实验和Transwell实验观察细胞迁移和侵袭能力。用5.0%和10.0%的CKI处理SMMC-7221细胞12或24 h后,RT-PCR及Western印迹法分别检测细胞NF-κB mRNA和蛋白的表达水平。结果经2.5%,5.0%和10.0%CKI处理24 h后,SMMC-7221细胞存活率分别为细胞对照组的(92±8)%,(77±5)%(P<0.01)和(56±7)%(P<0.01);细胞迁移率分别为(90±7)%,(50±10)%(P<0.01)和(25±5)%(P<0.01);体外细胞侵袭率分别为(98±7)%,(51±10)%(P<0.01)和(20±5)%(P<0.01)。另外,5.0%和10.0%CKI处理细胞12 h后,NF-κB mRNA水平分别降低至细胞对照组的(42±9)%和(46±10)%(P<0.01),而5.0%和10.0%CKI处理24 h后,NF-κB蛋白表达水平分别降低至(67±16)%和(27±11)%(P<0.01)。结论 CKI具有抑制SMMC-7221细胞增殖、体外转移和侵袭的能力,其机制可能与抑制NF-κB信号通路有关。     

siRNA-DAD1联合人参皂苷Rh 2对肝癌SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响

目的　探讨基因沉默DAD1 联合人参皂苷Rh2 对肝癌细胞增殖和凋亡的作用机制。方法　化学合成siRNADAD1,然后转染肝癌SMMC-7721 细胞,分别采用Q-PCR 和Western blot 检测DAD1 的mRNA 及蛋白表达水平变化,CCK-8 法检测肝癌SMMC-7721 细胞增殖能力的改变,DNA Ladder 法和流式细胞术检测肝癌SMMC-7721 细胞凋亡的变化。结果　siRNA-DAD1 可下调肝癌SMMC-7721 细胞中DAD1 的mRNA 及蛋白表达水平;siRNA-DAD1 与人参皂苷Rh2 均具有抑制SMMC-7721 细胞增殖的能力,并促使其发生凋亡,二者联合作用效果更好（P<0.05）。结论　siRNADAD1可下调肝癌SMMC-7721 细胞中DAD1 的mRNA 和蛋白表达水平,与人参皂苷Rh2 协同抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖并促进其凋亡。     

裂果薯皂苷单体Ⅰ通过TGF-β1调控上皮间质转化对人肝癌细胞SMMC-7721侵袭和转移的影响

目的探究裂果薯皂苷单体Ⅰ通过转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)对人肝癌细胞SMMC-7721侵袭和转移的影响。方法MTT法检测SMMC-7721细胞的增殖活性;用TGF-β1刺激细胞24 h,以TGF-β1/Smad信号通路抑制剂SIS3作阴性对照。细胞划痕实验和Tran-swell小室侵袭实验分别检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot检测Smad7、Smad2/3、p-Smad2/3、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白表达。结果SSPHⅠ能抑制SMMC-7721细胞的增殖,其24 h的IC50为1.72μmol·L^-1;与TGF-β1组相比,TGF-β1+SSPHⅠ组细胞迁移率和侵袭细胞数显著降低;Western blot实验结果显示,TGF-β1+SSPHⅠ组的Smad2/3,p-Smad2/3,N-cadherin和Vimentin蛋白的表达降低,Smad7和E-cadherin表达升高,结果与TGF-β1+SIS3组相同(P均<0.05)。结论SSPHⅠ能抑制SMMC-7721细胞侵袭和转移,其机制可能与抑制TGF-β1/Smad信号通路,阻断EMT发生有关。     

三氧化二砷对肝癌细胞内活性氧水平的影响

目的探讨三氧化二砷（As2O3）对肝癌细胞增殖及细胞内活性氧（ROS）水平的影响。方法用As2O3作用于体外培养的人肝癌SMMC-7721细胞株，分别用MTT法和流式细胞仪观察SMMC-7721细胞增殖情况并检测ROS。结果MTT结果显示As2O3能明显抑制SMMC-7721细胞的增殖．并呈时间和浓度依赖性。流式细胞仪分析显示As2O3作用后的人肝癌SMMC-7721细胞内ROS水平明显增高（P〈0．01）．并也呈时间和浓度依赖性。结论As2O3可通过抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖和提高细胞内ROS水平诱导细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用，这可能也是As2O3抗肝癌的主要途径之一。     

裂解型腺病毒Ad-E1A的构建以及体外对肝癌细胞的作用

目的 构建Ad-E1A裂解型腺病毒载体,研究其对肝癌细胞的裂解作用.方法 以QBI-293A细胞基因组DNA为模板,用特异性引物PCR法扩增E1A基因,酶切后连接到pAdTrack-CMV转移质粒上,用PmeI酶对pAdTrack-CMy-E1A线性化后,与pAdEasy-1共转化在BJ5183大肠杆菌中进行同源重组,筛选重组腺病毒质粒pAdEasy-1-pAdTrack-CMV-E1A;再用PacI酶切对重组腺病毒质粒线性化,脂质体转染QBI-293A细胞,收获Ad-E1A腺病毒子.在QBI-293A细胞中多轮感染后获得高效价的病毒.将Ad-EIA腺病毒感染SMMC-7721,并用MTT和流式细胞仪检测Ad-E1A对人肝癌细胞生长和细胞周期的影响.结果 获得高滴度的重组裂解型腺病毒Ad-E1A.Ad-E1A感染SMMC-7721后,出现明显的细胞病变.Ad-E1A对人肝癌细胞SMMC-7721的生长有明显抑制,48 h后效果明显.Ad-E1A可直接诱导SMMC-7721细胞的凋亡.结论 裂解型腺病毒Ad-E1A构建成功并可以显著抑制人肝癌细胞SMMC-7721的生长,并在肝癌细胞中复制造成细胞裂解,诱导肝癌细胞的凋亡.     

Induction of differentiation in human hepatocarcinoma cells by isoverbascoside

Isoverbascoside, a phenylethanoid glycoside, was isolated from Chinese folk medicine herb Pedicularis striata Pall. Here we report that isoverbascoside is capable of inducing differentiation in human hepatocellular carcinoma (HCC) cell line SMMC-7721. When treated with isoverbascoside, the proliferation of SMMC-7721 cells was markedly inhibited in a dose- and time-dependent manner, and the average cell population doubling time was delayed. Exposure of cells to 20 micromol/l isoverbascoside led to the decline of colony formation efficiency on soft agar, induced G0/G1 arresting, and resulted in the decrease of gamma-glutamyltransferase (gamma-GT) activity and the increase of tyrosine aminotransferase (TAT) activity, two marker enzymes, respectively, representing HCC malignance and differentiation stage. These results suggest that isoverbascoside possess the activity of inducing differentiation in SMMC-7721 cells.     

三氧化二砷联合奥曲肽协同抗肝癌作用的实验研究

目的:研究三氧化二砷(As2O3)联合奥曲肽在体外对人肝癌细胞株SMMC -7721增殖的作用,观察两药合用的效果。方法:采用MTT法测定药物的体外杀伤作用;用流式细胞术检测细胞周期变化;运用中效原理进行联合用药分析。结果:两药合用后在体外能显著抑制SMMC -7721生长;合用后的中效浓度分别为2 022、8 088μmol/L ,低于分别单用时的中效浓度;合用后可将肝癌细胞阻滞于S期;两药合用在抑制率>0 3时合用指数(CI)<1。结论:As2O3 联合奥曲肽在体外能显著增加两药单用时对人肝癌细胞株SMMC -7721的抑制作用,两药联合应用在抑制率>0 3时具有较好的抗肝癌协同作用。     

三磷酸腺苷对国人食管癌Eca-109和肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响

目的研究三磷酸腺苷(ATP)对人食管癌细胞株Eca-109和人肝癌细胞株SMMC-7721细胞增殖的影响。方法采用MTT法测定ATP、腺苷(ADO)和三磷酸尿苷(UTP)抑制肿瘤细胞增殖的作用,W rights-G iem sa染色观察细胞形态学的改变。结果ATP(0.03~0.3 mmol.L-1)和ADO(0.1~0.3 mmol.L-1)可不同程度地抑制Eca-109和SMMC-7721的增殖,ATP对两株肿瘤细胞增殖的抑制作用均强于ADO。ATP和ADO对Eca-109细胞的最大抑制率分别为86.36%和29.88%,IC50分别为0.056和0.823 mmol.L-1;对SMMC-7721细胞的最大抑制率分别为82.06%和52.84%,IC50分别为0.218和0.517 mmol.L-1。UTP对Eca-109细胞有很弱的抑制增殖作用,最大抑制率仅为18.27%;对SMMC-7721无抗增殖作用。两株细胞经高浓度(0.3 mmol.L-1)ATP处理后,部分SMMC-7721细胞形态出现了明显的凋亡特征,而Eca-109细胞凋亡特征不明显。结论ATP具有较强的抗Eca-109细胞增殖作用,其抗增殖作用主要由ATP自身所致,代谢产物ADO也具有一定的作用;而对于SMMC-7721细胞,ATP可能较大程度地通过降解为ADO而发挥抗增殖作用。     

蜗牛多糖对人肝癌细胞SMMC-7721的抑制作用

目的 探讨蜗牛多糖对人肝癌细胞株SMMC-7721的抑制作用. 方法将不同浓度的蜗牛多糖分别与人肝癌细胞SMMC-7721共同培养24,48,72 h后,采用噻唑蓝法测定吸光度值(A),评定蜗牛多糖对肝癌细胞株的增殖抑制作用;流式细胞术测定其对肝癌细胞周期的影响. 结果 不同浓度的蜗牛多糖作用SMMC-7721细胞24,48和72 h后,各组与细胞对照组比较,A值差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),并显示出对时间和剂量的依赖性,蜗牛多糖对SMMC-7721细胞的半数抑制浓度分别为0.293,0.032和0.011 mg.mL^-1. 流式细胞术结果 表明,蜗牛多糖能将肝癌细胞株SMMC-7721阻滞在细胞的G2/M期. 结论 蜗牛多糖对肝癌细胞株SMMC-7721的增殖有一定的抑制作用.     

蛇莓中齐墩果酸对肝癌细胞SMMC-7721的抑制作用

目的:探讨蛇莓中齐墩果酸(OA)对人肝癌SMMC-7721细胞增值的抑制作用.方法:建立人肝癌SMMC-7721细胞体外培养模型.MTT法检测不同浓度OA对人肝癌SMMC-7721细胞的影响.结果:与对照组比较,药物组在24h对肝癌细胞具有明显的抑制作用(P<0.05),并在48h内随着浓度的增加,抑制率增加.结论:O...     

守宫硫酸多糖对肝癌SMMC-7721细胞分化和增殖的影响

目的:研究守宫硫酸多糖(Gepsin)对肝癌SMMC-7721细胞分化和增殖的影响,并进一步探讨其可能的机制。方法:将不同浓度的Gepsin加入对数生长的SMMC-7721细胞进行培养,在不同的时间利用台盼兰染色观察细胞的增殖情况。同时,收集细胞培养上清液,利用联合放免法,以溴钾酚绿法分别观察Gepsin对甲胎蛋白(AFP)、白蛋白(ALB)分泌的影响;利用酶联免疫吸附试验法观察Gepsin对转化生长因子(TGF)-β1、血管内皮生长因子(VEGF)分泌的影响;利用光镜观察Gepsin对SMMC-7721细胞形态的影响。结果:随着处理组Gepsin的浓度升高,SMMC-7721细胞的增殖明显受到抑制;而对细胞活率无明显影响。Gepsin可增加培养上清中的ALB分泌量,降低AFP分泌量。光学显微镜下可见加入Gepsin后细胞的形态由圆形变为纺锤形。Gepsin对培养上清分泌的VEGF无影响,但可使TGF-β1增加。结论:Gepsin可明显抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖,诱导SMMC-7721细胞分化。其机制可能是通过上调TGF-β1来诱导肝癌细胞分化实现的。