宽体金线蛭与菲牛蛭抗凝血酶活性及抗凝机制比较研究

摘 要 目的：比较宽体金线蛭和菲牛蛭抗凝血酶活性及对凝血途径的影响,为进一步揭示水蛭抗凝作用机制提供参考。方法: 采用凝血酶滴定法、发色底物法 萃取 HPLC联合法测定水蛭对凝血酶的作用;同时采用凝固法测定其活化部分凝血活酶时间（APTT）、凝血酶原时间（PT）和凝血酶时间（TT）,比较宽体金线蛭与菲牛蛭对不同凝血途径的影响。结果: 凝血酶滴定法的结果表明,不同水蛭的抗凝活性顺序依次为：菲牛蛭活体冻干品>菲牛蛭清水吊干品>>宽体金线蛭清水吊干品;发色底物法 萃取 HPLC法测定不同水蛭对凝血酶抑制作用的结果表明：不同水蛭水提取物对凝血酶的作用均表现出低浓度促进,高浓度抑制,且菲牛蛭具有强烈凝血酶抑制活性,而宽体金线蛭在加入更高剂量时才表现出抑制作用,且抑制作用较弱,菲牛蛭的抗凝血酶活性远远高于宽体金线蛭;不同水蛭样品均使APTT、PT、TT延长,但是菲牛蛭活体冻干品主要延长TT,清水吊干品主要延长APTT,而宽体金线蛭使APTT、TT延长更加显著。结论:宽体金线蛭和菲牛蛭对凝血酶及凝血途径的作用很大区别。     

中药水蛭原动物的本草学考证

本文就中药材水蛭的原动物来源分别从原动物、加工炮制及主治功能进行本草学考证。认为药用水蛭的原动物成该为医蛭科日本医蛭Hirudo nipponica Whitman及丽医蛭H.pulchra Song。与中国药典(一九八五年版一部)水蛭项下规定的原动物来源不完全一致;并就目前中药水蛭中最常见的宽体金线蛭Whitmania pigra(Whitman)的正确鉴定作了探讨。     

不同品种水蛭抗凝抗血栓作用的比较

目的:比较研究宽体金线蛭和菲牛蛭的体内外的抗凝、抗血栓作用。方法:采用凝血酶直接滴定法测定不同处理方法的2种水蛭体外抗凝血活性;采用胶原蛋白-肾上腺素诱导小鼠脑血栓,角叉菜胶诱导小鼠尾静脉血栓以及大鼠动-静脉旁路血栓形成的方法,观察不同处理方法的两种水蛭的抗血栓作用。采用毛细管法和剪尾法,观察不同处理方法的两种水蛭的抗凝血作用。结果:菲牛蛭鲜体和干品的体外抗凝活性远优于鲜体及干燥宽体金线蛭;鲜品菲牛蛭、干燥菲牛蛭以及经不同方法处理的宽体金线蛭均具有明显的体内抗凝抗血栓活性,其中以菲牛蛭鲜品的作用最强烈;煎煮后的菲牛蛭几乎无体内外生物活性。结论:菲牛蛭与宽体金线蛭的活性成分有很大区别,且菲牛蛭比目前广泛应用的宽体金线蛭具有更优的药效活性。     

药用水蛭炮制及活性成分研究概况及分析

本文概述了水蛭古今炮制方法、活性成分研究、炮制品前后质量比较等方面的研究报道,结合宽体金线蛭提取物初步抗凝血试验,分析不同品种水蛭的药效物质基础存在较大差别,宽体金线蛭存在热稳定性抗凝血活性成分,水蛭炮制方法应结合临床使用区别对待。     

水蛭冻干粉的急性毒性及对急性血淤证大鼠的治疗作用

目的 评价水蛭冻干粉的急性毒性,比较水蛭冻干粉及水蛭饮片对急性血淤证大鼠的作用.方法 采用最大给药量实验评价水蛭冻干粉的急性毒性;将SD大鼠随机分为空白组、模型组、阿司匹林组(31.25 mg·kg-1)、宽体金线蛭冻干粉和日本医蛭冻干粉高、中、低剂量组(0.3125、0.2083、0.1042 g·kg-1)、宽体金...     

应用聚合酶链式反应技术快速鉴别中药水蛭

目的 建立聚合酶链式反应法(polymerase chain reaction,PCR)对中药水蛭进行快速种间鉴别。方法 根据中国药典项下3种水蛭(宽体金线蛭、日本医蛭及尖细金线蛭)CO1序列的差异设计并合成3对种属特异性引物,对其进行PCR反应条件优化;对不同批次的水蛭进行稳定性试验,并对同批次的水蛭进行灵敏度试验;利用优化的PCR条件对水蛭混合样品进行分析。结果 3对引物分别能在60,61,59℃的退火温度下扩增出1 000~2 000,1 000~2 000,3 000 bp左右的明亮条带,检测限分别为0.1,1,10 ng,并能够准确鉴别以不同比例混合的水蛭样品。结论 所设计的3对引物可以快速鉴别中药水蛭、常见伪品及混掺水蛭,并具有较高的种间特异性及良好的种内稳定性和灵敏度,可作为中药水蛭传统基原鉴别方法的补充,为其质量控制提供更多参考。     

宽体金线蛭提取工艺研究

目的:筛选宽体金线蛭的最佳提取工艺。方法:以水蛭提取液中蛋白质含量及活化部分凝血活酶时间为指标,考察宽体金线蛭在不同溶媒、温度、提取时间、溶媒倍量及提取次数条件下的提取效果。结果:以10倍药材量的4 %NaCl溶液为提取溶媒,在60℃条件下分3次提取药材6h(3h +2h +1h) ,所得结果较为满意。结论:该提取工艺方法简单、科学,有推广应用价值。     

水蛭对血清胆固醇血液粘度及血小板聚集功能的影响

水蛭治疗疾病始载于《神农本草经》,因其具有破血、逐瘀、通经的功能,历来用于闭经、瘢瘕、积聚、跌打损伤。近些年应用于治疗心脑血管病、血栓性静脉炎、高血脂症等疾病,疗效显著。为了提供临床应用参考的理论依据,作者以水蛭对血清胆固醇、血液粘度及血小板聚集功能的影响,进行了一些初步实验研究。l 材料 药物:水蛭(石家庄地区药材公司购入,经鉴定确认为宽体金线蛭(whitIliania pigrawhitman),研为细末。过80目筛,以l％明胶液配制成10％水蛭粉混悬液。安妥明(上海延安制药厂产品,批号810814)以明胶液配制成25mg/ml乳液。脑心舒(上海长城生化制药厂产品.批号820423),也以明胶配成lOmg/ml乳液。     

广西菲牛蛭水蛭素基因cDNA的克隆与序列分析

目的克隆广西菲牛蛭水蛭素基因的cDNA,并对该基因以及氨基酸进行序列分析。方法根据已发表的马尼拉菲牛蛭水蛭素基因cDNA设计一对引物,从广西菲牛蛭的头部提取总RNA后,采用RT-PCR扩增cDNA,将产物克隆至载体PMD-19T,PCR鉴定后进行测序。结果广西菲牛蛭水蛭素基因cDNA序列长度为251 bp,编码框由83个氨基酸组成,其中包括由20个氨基酸的信号肽,以及63个氨基酸组成的成熟肽。广西菲牛蛭水蛭素基因的氨基酸序列和已报道的广东菲牛蛭、马尼拉菲牛蛭水蛭素基因HM1、HM2基因的氨基酸序列相比较,同源性分别为94%,91.8%,84.7%。结论广西菲牛蛭水蛭素基因cDNA序列长度为251 bp,由83个氨基酸组成。     

斜率比法测定水蛭抗凝血活性的方法学验证研究

目的:进行斜率比法测定水蛭抗凝血活性的实验室内方法学验证研究。考察斜率比法测定水蛭抗凝血活性作为质量控制方法的可行性。方法:选用7批蚂蝗和日本医蛭饮片，分别用蚂蝗对照药材和菲牛蛭对照药材，平行制备不同浓度浸提液，测定活化的部分凝血活酶时间(APTT)后用斜率比法测定抗凝血活性。在实验室内进行专属性、线性与范围、精密度、准确度、耐用性等多个方面的系统考察。结果:使用斜率比法测定水蛭抗凝血活性，专属性考察：该条件下土鳖虫不显示其抗凝血活性，水蛭浸提液100℃加热后活性降低，添加低分子肝素后试验不成立，用蚂蝗对照药材做对照测定日本医蛭抗凝血活性则试验不成立，说明本法的专属性和选择性较好。准确度考察：采用蚂蝗对照药材和菲牛蛭对照药材，64%、80%、100%、125%和156%的5个相对水平值测定值的相对偏差均<±20%,效价理论值对数(横坐标)和对应的效价测定值对数(纵坐标)呈现明显的直线关系，相关系数>0.95,斜率在0.95～1.05,说明方法的准确度较好。精密度考察：各相对效价水平的几何变异系数(GCV,%)均<20%;采用多批次的饮片测定RSD均<20%,说明...