C型凝集素受体和Toll样受体在原因不明复发性流产患者蜕膜中的表达

目的:研究原因不明复发性流产(URSA)患者蜕膜中树突细胞(DC)特异性细胞间黏附分子-3结合非整合素因子(DC-SIGN)和甘露糖受体(MR)及Toll样受体2(TLR-2)和TLR-4的表达情况。方法:采集URSA患者及正常妊娠人工流产妇女(对照组)的新鲜蜕膜。采用免疫组化和Western blot法检测蜕膜中DC-SIGN、MR、TLR-2和TLR-4蛋白表达,RT-PCR检测蜕膜中DC-SIGN、MR、TLR-2和TLR-4 mRNA表达;流式细胞检测蜕膜中DC表面表达DC-SIGN、MR、TLR-2和TLR-4的水平。结果:与对照组比较,URSA组蜕膜中及DC表面的TLR-2和TLR-4表达水平明显升高(P0.05,P0.01),DCSIGN表达水平明显降低(P0.01)。两组的MR表达水平比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论:相对于正常妊娠妇女,URSA患者蜕膜中及树突细胞表面的C型凝集素受体(CLRs)弱势表达,而TLRs优势表达。CLRs与TLRs之间的免疫平衡失调可能是URSA发病机制中的重要因素之一。     

原因不明复发性流产患者蜕膜Foxp3 mRNA及蛋白质的表达

目的:探讨原因不明复发性流产(URSA)患者蜕膜Foxp3 mRNA及蛋白的表达。方法:分别采用免疫组化S-P法、半定量和实时定量PCR法和W estern B lot法检测25例URSA患者蜕膜组织Foxp3 mRNA及蛋白的表达与分布,并以32例正常早孕妇女为对照。结果:(1)免疫组化S-P法显示Foxp3表达于胞浆,妊娠后的蜕膜组织有Foxp3的表达;URSA患者蜕膜Foxp3的表达显著低于正常妊娠妇女(P<0.01);(2)半定量和实时定量RT-PCR法分析均显示,URSA患者蜕膜组织Foxp3 mRNA的表达显著低于正常早孕妇女(P<0.05);(3)W estern B lot法分析显示,URSA患者蜕膜组织Foxp3蛋白的表达显著低于正常早孕妇女(P<0.05)。结论:Foxp3可能在维持早期妊娠中起重要作用,其表达水平降低可能与URSA的发病有关。     

原因不明复发性流产患者蜕膜组织中转录因子GATA-3及T-bet mRNA表达的研究

目的 探讨转录因子GATA-3、T-bet在原因不明复发性流产发病中的作用.方法 采用原位杂交方法,检测20例原因不明复发性流产患者(流产组)和20例正常妊娠妇女(正常妊娠组)蜕膜组织中1型辅助性T细胞(Th1)特异性转录因子T-bet和2型辅助性T细胞(Th2)特异性转录因子GATA-3的mRNA表达水平.结果 (1)GATA-3:蜕膜组织中每高倍视野平均GATA-3阳性细胞数流产组为(25±16)个,正常妊娠组为(38±16)个,两组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).(2)T-bet:蜕膜组织中每高倍视野平均T-bet阳性细胞数流产组为(59±17)个,正常妊娠组为(46±18)个,两组比较,差异也有统计学意义(P＜0.05).(3)两组妇女蜕膜组织中GATA-3 mRNA与T-betmRNA的表达水平呈负相关关系(r=-0.55,P＜0.01).结论 原因不明复发性流产患者蜕膜组织中T-bet表达占优势,GATA-3的表达受抑制,可能诱导了母胎界面Th1/Th2平衡向Th1偏移,从而使胚胎遭受免疫攻击而发生流产.     

Ang-1、Ang-2和AS在稽留流产患者血清和蜕膜组织中的表达及意义

目的:检测血管生成素1(Ang-1)、血管生成素2(Ang-2)及血管抑素(AS)在稽留流产(MA)患者血清和蜕膜组织中的表达,对血管生成的影响,探讨其与稽留流产的关系。方法:选取稽留流产患者62例和同期自愿要求终止妊娠的正常孕妇60例。酶联免疫吸附法检测患者血清中Ang-1、Ang-2和AS水平免疫组化法检测蜕膜组织中Ang-1、Ang-2、AS及CD31表达,计数两组微血管密度(MVD)。结果:稽留流产患者血清中Ang-1、Ang-2表达水平低于对照组,AS表达水平高于对照组,但差异无统计学意义。稽留流产患者蜕膜组织中Ang-1、Ang-2、CD31表达水平明显低于对照组(P<0.01或P<0.05),AS表达水平明显高于对照组(P<0.01)。对照组患者蜕膜组织中Ang-1、Ang-2表达水平与CD31呈正相关(r=0.535,r=0.466,P<0.01),Ang-1、Ang-2、CD31表达水平与AS呈负相关(r=-0.395,r=-0.506,r=-0.460,P<0.01或P<0.05);稽留流产患者蜕膜组织中Ang-1、Ang-2表达水平与CD31呈正相关(r=0.678,r=0.473,P<0.01),Ang-1、Ang-2、CD31表达水平与AS呈负相关(r=-0.610,r=-0.402,r=-0.491,P<0.01或P<0.05)。结论:蜕膜组织中Ang-1、Ang-2、AS表达与血管生成密切相关,Ang-1、Ang-2的低表达及AS的高表达参与稽留流产胚胎血管生成障碍。     

复发性流产患者绒毛和蜕膜中NLRP3炎症小体的差异性表达研究

目的:研究NLRP3炎症小体与复发性流产(RSA)发生之间的相关性。方法:收集RSA患者和正常人工流产妇女的绒毛和蜕膜组织,实时荧光定量PCR、Western blot和免疫组化法检测各组织中蛋白表达。结果:绒毛及蜕膜组织中均可见NLRP3和IL-1β表达,绒毛组织中两者表达较为丰富且分布集中,主要分布于滋养细胞胞浆内;而蜕膜组织中两者表达较绒毛少且分布广泛,无明显特征性。与正常组相比,RSA组各组织中NLRP3和IL-1β基因及蛋白表达量显著升高,差异均有统计学意义(P0.05);与蜕膜组织相比,RSA组绒毛组织中NLRP3和IL-1β表达更显著,差异有统计学意义(P0.05)。结论:RSA患者绒毛组织中NLRP3炎症小体表达明显增加,绒毛滋养细胞可能通过NLRP3炎症小体参与RSA的发生与发展。     

不明原因复发性流产患者蜕膜组织中MMPs/TIMPs表达及启动区甲基化水平分析

目的分析不明原因复发性流产(unexplained recurrent spontaneous abortion, URSA)患者蜕膜组织中基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases, MMPs)和基质金属蛋白酶组织抑制物(tissue inhibitor of metalloproteinases, TIMPs)的表达及其启动区甲基化水平。方法选取2017年1月至2017年12月在我院妇产科行清宫术的URSA患者31例(URSA组)及同期正常早孕放弃妊娠行人工流产女性30例(NC组)的蜕膜组织,应用实时定量PCR技术分别检测MMP1、MMP2、MMP3、MMP7、MMP9、TIMP1、TIMP2、TIMP3以及TIMP4的表达情况。焦磷酸测序技术检测上述差异表达基因启动区的甲基化水平。结果两组患者在年龄、停经天数等无统计学差异(P0.05)。URSA组蜕膜中MMP2水平(1.08±0.68 vs 2.15±0.97)、MMP9水平(0.83±0.79 vs 2.01±1.42)的表达水平较NC组下调。URSA组较NC组TIMP1 (3.45±1.33 vs 2.16±1.57)和TIMP2(2.95±1.14 vs1.72±1.29)TIMP3(2.8±1.1 vs1.62±1.16)的表达水平上调,差异均具有统计学意义(P0.05)。MMP1、MMP3、MMP7和TIMP4在两组间表达差异无统计学意义(P0.05)。对转录水平存在差异的MMP2、MMP9、TIMP1、TIMP2、TIMP3启动区甲基化水平进行焦磷酸测序,结果显示,URSA组MMP2启动区甲基化水平(0.26±0.11)高于NC组(0.18±0.07),TIMP3启动区甲基化水平(0.46±0.10)低于NC组(0.63±0.11),差异均有统计学意义(P 0.05)。结论 URSA妇女的蜕膜组织中MMP2、MMP9的表达水平下调,TIMP1、TIMP2、TIMP3的表达水平上调,出现MMPs/TIMPs失衡,考虑细胞外基质水解不足导致了绒毛组织的的侵袭力下降为URSA可能的发病机制,而其中MMP2、TIMP3的基因表达与其启动区甲基化水平的改变有关。     

Foxp3在子宫内膜、正常早孕和原因不明复发性流产患者蜕膜上的表达

目的:探讨Foxp3在增生期、分泌期内膜和正常早孕、原因不明复发性流产(URSA)患者蜕膜的表达。方法:用免疫组化法观察15例增生期子宫内膜, 12例分泌期子宫内膜, 32例正常早孕和25例URSA患者蜕膜组织Foxp3的表达与分布。结果:增生期子宫内膜无Foxp3表达,分泌期内膜和蜕膜组织均有表达;分泌期内膜Foxp3的表达显著低于正常早孕组(P<0 .01)和URSA组(P<0. 05);URSA患者蜕膜Foxp3的表达显著低于正常早孕组(P<0 .01);Foxp3表达于胞浆,正常早孕组和分泌期内膜主要表达在腺上皮细胞,URSA患者主要表达在间质细胞。结论:Foxp3在分泌期子宫内膜和蜕膜组织的表达可能在胚泡植入和早期妊娠的维持中起重要作用,其表达水平降低可能与URSA的发生有关。     

复发性流产患者子宫蜕膜血管的免疫病理观察

目的：探讨子宫局部免疫反应在复发性流产发病机理中的作用。方法：采用免疫组织化学ＡＢＣ法，对２６例复发性流产患者（流产组）和１０例正常孕妇（对照组）的子宫蜕膜血管进行免疫病理观察，并测定血清免疫球蛋白和补体水平。结果：流产组蜕膜血管壁有免疫球蛋白ＩｇＧ和补体Ｃ３沉着，分别为１７例（６５．４％）和２１例（８０．８％），而对照组为阴性，两组比较，差异有显著性（Ｐ〈０．００１）；血管壁ＩｇＧ的沉着流产组为     

肿瘤坏死因子受体1在原因不明早期自然流产孕妇蜕膜组织及血清中的表达

近年来的研究发现 ,肿瘤坏死因子 α(TNF α)与原因不明自然流产 (不明流产 )的关系密切[1,2 ] 。TNF α主要通过TNF α受体 1(TNFR1)的信号传导产生生物学效应。本研究检测了早期不明流产孕妇蜕膜组织 ,及血清中TNF α膜受体 1(mTNFR1)及其可溶性受体 (sTNFR1)的表达 ,探讨早期不明流产与蜕膜及母体血清TNFR1表达水平的关系 ,为其病因的深入研究以及临床防治 ,提供新的理论依据。一、资料与方法1 研究对象 :选择 2 0 0 0年 3月至 2 0 0 1年 1月 ,在西安交通大学第一医院妇产科门诊的妊娠 6～ 10周 ,以出现原因不明阴道流血和下…     

细胞因子信号抑制因子3(SOCS3)在先兆流产绒毛和蜕膜组织中的表达

目的:初步探讨早孕母胎界面细胞因子信号抑制因子3(SOCS3)的作用。方法:26例妊娠35-49d先兆流产患者,采用RT-PCR法及Western blotting法、免疫组化法检测绒毛、蜕膜组织SOCS3的表达,并以30例正常早孕者作对照。结果:①绒毛、蜕膜组织均表达SOCS3,但先兆流产组SOCS3表达明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。②绒毛中的SOCS3表达于滋养细胞和绒毛间质,蜕膜中的SOCS3主要位于蜕膜腺体及间质细胞,二组SOCS3表达定位一致。结论:母胎界面SOCS3可能在早期妊娠的维持中起重要作用,其表达水平降低可能与先兆流产的发生、发展有关。     

反复早期自然流产血浆溶血磷脂酸及其受体3在绒毛、蜕膜组织中的表达

目的 探讨反复早期自然流产患者血浆溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid,LPA)水平及溶血磷脂酸受体3(lysophosphatidic acid receptor3,LPA3)在绒毛、蜕膜组织中的表达.方法 2007年1-6月在石家庄市妇幼保健院选取反复早期自然流产患者30例以及同孕龄正常早孕妇女30例和30例正常非孕期妇女采用薄层比色法测定外周血血浆溶血磷脂酸水平;并采用免疫组化方法检测上述反复早期自然流产惠者及正常早孕妇女人工流产的绒毛、蜕膜组织中溶血磷脂酸受体3的表达情况.结果 反复早期自然流产患者血浆溶血磷脂酸水平(3.72±2.39)μmol/L高于正常早孕妇女(1.99±O.94)μmol/L及正常非孕期妇女(1.70±O.67)μmol/L,差异有统计学意义(P<0.01);后两者相比差异无统计学意义(P>0.05).反复早期自然流产患者绒毛、蜕膜组织中溶血磷脂酸受体3的表达[(2.667±1.093)μmol/L,(2.60±1.192)μmol/L]低于正常早孕相应孕龄妇女[(5.867±2.161)μmoL/L,(5.333±1.807)μmol/L],两者比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 血浆溶血磷脂酸水平升高及绒毛、蜕膜组织中溶血磷脂酸受体3的低表达可能导致反复早期自然流产的发生率增高.     

Low plasma levels of decoy receptor 3 (DcR3) in the third trimester of pregnancy with preeclampsia

ObjectiveThe pathophysiology of preeclampsia, a major threat during pregnancy characterized by excessive inflammatory status, remains unclear. Decoy receptor 3 (DcR3), a soluble member of the tumor necrosis factor receptor (TNFR) superfamily, is capable of inducing anti-apoptosis via binding with TL1A and anti-inflammation by driving Th2 immune reactions. DcR3 may, therefore, play a role in immune modulation during pregnancy. The purpose of this study is to explore the role of DcR3 in normal and preeclamptic pregnancies.Materials and methodsPlasma samples from 104 normal pregnant women (26, 42, and 36 in the first, second, and third trimester, respectively) and 10 patients with preeclampsia in the third trimester were collected. Plasma DcR3 levels were determined by using commercial ELISA kits. ANOVA and linear regression analysis were performed to analyze the relationship between gestational age and DcR3 levels. After adjusting for gestational days, the levels of plasma DcR3 in preeclamptic and non-preeclamptic women in the third trimester were compared.ResultsThe plasma levels of DcR3 gradually decreased as the gestational days increased during pregnancy (p < 0.05). In the third trimester, pregnant women with preeclampsia had significantly lower plasma DcR3 levels compared to non-preeclamptic women (p < 0.05).ConclusionsWe found that plasma DcR3 levels gradually decreased as gestation progressed. The levels of plasma DcR3 in preeclamptic women were significantly lower than those of normal pregnant women, suggesting that a potential involvement of DcR3 in normal pregnancy and decreased levels of DcR3 may be related to preeclampsia.     

复发性流产患者蜕膜组织中间充质干细胞的鉴定及其对血管生成的影响

目的:鉴定复发性流产(RSA)患者蜕膜组织中间充质干细胞(MSC),并检测其对血管生成的影响。方法:随机抽取24例RSA患者作为观察组,选取同期在门诊行人工流产术的25例正常早孕患者作为对照组。收集两组患者行人工流产术后的蜕膜,免疫组化及Western blot法检测患者蜕膜组织中MSC标记物(CD29,CD90,CD105,CD73)及血管标记物(CD31)的表达。酶消化法提取蜕膜组织中MSC,倒置相差显微镜下观察蜕膜MSC的形态差异,流式细胞术检测蜕膜MSC上表面标记物的表达,并对蜕膜MSC的分化能力进行检测。同时将蜕膜MSC与内皮细胞进行共培养,检测蜕膜MSC对内皮细胞增殖、迁移及小管形成的影响。结果:RSA组蜕膜组织中MSC标记物(CD29,CD90,CD105,CD73)及血管标记物(CD31)的表达均明显低于正常早孕组。两组蜕膜MSC都表现为贴壁生长的类纤维样结构,表面都高表达HLA-ABC、CD44、CD90、CD105和CD73,都具有向成脂及成软骨分化的能力。RSA组蜕膜MSC促内皮细胞增殖、迁移及小管形成能力明显低于正常早孕组。结论:较正常早孕患者,RSA患者蜕膜组织中MSC数量减少,血管密度下降,且其蜕膜MSC促血管生成能力降低,提示RSA患者蜕膜血管密度下降可能与其蜕膜MSC数量减少及其促血管生成能力下降有关。     

组蛋白去乙酰化酶1蛋白在早期自然流产绒毛和蜕膜组织中的表达

目的:探讨组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)蛋白在早期自然流产发生中的病理生理作用及临床意义。方法:应用免疫组织化学和Western blot法检测早期自然流产和早期正常妊娠者绒毛及蜕膜组织中HDAC1蛋白的表达。结果:免疫组化示:HDAC1主要定位于绒毛细胞滋养细胞、合体滋养细胞和子宫蜕膜细胞、腺上皮细胞的胞核;早期自然流产绒毛组织中HDAC1的表达强度低于早期正常妊娠组,而蜕膜组织中,早期自然流产组织HDAC1的表达强度高于正常妊娠组,差异均有统计学意义(P均<0.05)。Westernblot示:早期自然流产绒毛组织中HDAC1蛋白的相对表达量为1.38±0.63,明显低于正常妊娠组(1.92±0.82),差异有统计学意义(P<0.05);而早期自然流产蜕膜组织中HDAC1蛋白的相对表达量为1.02±0.53,明显高于正常妊娠组(0.71±0.36),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:HDAC1在早期自然流产绒毛和蜕膜组织中的异常表达可能在早期自然流产的发生、发展中起重要作用。     

IL-1 receptor antagonist gene polymorphism in recurrent spontaneous abortion

Genetic factors may contribute to the development of an aberrant pro-inflammatory immune response during pregnancy, thereby increasing the risk of some pregnancy-related pathologies such as recurrent spontaneous abortion (RSA). Interleukin 1 receptor antagonist is an important anti-inflammatory molecule encoded by the IL1RN gene, in which an intronic polymorphism has been described. Even though the molecular genetic mechanisms are not understood, this non-coding polymorphism, and especially IL1RN*2, has been associated with several chronic inflammatory and autoimmune diseases. IL1RN*2 is also associated with increased activity of IL-1beta, which is an important pro-inflammatory cytokine. We investigated the genetic variants of IL1RN in 37 Finnish women with RSA and 800 randomly selected Finnish blood donors. The women with RSA showed a significantly increased frequency of genotypes bearing the rare allele IL1RN*3 compared to the blood donors (10.8 vs 2.1%, odds ratio 5.6, 95% CI: 1.5-19.0, P=0.006). Our results suggest that IL1RN polymorphisms may predispose to RSA in a small subgroup of patients.     

Ascites from epithelial ovarian cancer contain high levels of functional decoy receptor 3 (DcR3) and is associated with platinum resistance

ObjectiveDecoy receptor 3 (DcR3), a soluble tumor necrosis factor receptor is a known binding partner of multiple apoptotic ligands inhibiting apoptosis. The expression of DcR3 by cancers has been reported in gastrointestinal cancers yet it has not been described in ovarian cancer. Abnormalities in apoptosis pathways are seen in ovarian cancer and we theorized that the presence of DcR3 is a component of the dysregulation.MethodsAscites samples from 44 women with advanced ovarian cancer were tested for DcR3 by ELISA. The ability of ascites to inhibit Fas-ligand mediated apoptosis was determined by chromium release assays using cell surface or soluble Fas-ligand. Clinical parameters including, response to platinum and progression free and overall survival were compared between patients with high or low levels of DcR3.ResultsDcR3 was found in all 44 cases by ELISA. Ascites fluid significantly inhibited Fas-ligand mediate apoptosis using both surface Fas-ligand (KFL-9 cells) and soluble Fas-ligand. Blocking DcR3 with antibodies restores the cytolytic effects in both assays. HIGH DcR3 level was associated with stage IV disease and more than double the incidence of platinum resistant disease. In this modest sample size Low DcR3 cases had longer PFI and overall survival however neither difference was statistically significant.ConclusionsDcR3 is expressed by epithelial ovarian cancers, concentrated in ascites and inhibits Fas-ligand mediated apoptosis. Together with a trend toward poor patient outcome these results indicate that expression of DcR3 by ovarian cancers is worthy of further investigation in a larger population to allow multivariate analysis.