还原型谷胱甘肽对大鼠肺缺血-再灌注后黏附分子-1,肿瘤坏死因子α蛋白表达影响

目的 观察还原型谷胱甘肽对大鼠肺缺血再灌注（IR）后细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、肿瘤坏死因子α（TNF—α）蛋白表达的影响。方法 72只雄性清洁级SD大鼠随机分为3组：假手术组（S）、缺血再灌注组（IR）、药物治疗（RG）组。每组分别于夹闭缺血的第45min、缺血再灌注后1、2及4h四个时间点，处死大鼠，取肺组织测定肿瘤坏死因子（TNF—α）、髓过氧化物酶（MPO）含量，免疫组化染色检测肺组织细胞间黏附分子（ICAM-1）蛋白表达。结果 TNF-α、MPO含量在IR组缺血再灌注后含量明显增加，较S、RG组显著增高（P〈0．01）；IR组ICAM-1蛋白表达明显高于S组和RG组。结论 还原型谷胱甘肽能减少肺组织TNF—α、Ⅰ—CAM-1表达，在一定程长上减少肺损伤。     

参附注射液对大鼠肺缺血再灌注损伤时肺细胞凋亡的影响

目的探讨参附注射液对大鼠肺缺血再灌注损伤时肺细胞凋亡及凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达的影响。方法30只雄性SD大鼠随机分为3组，即假手术（Sham，n=10）组、缺血再灌注（IR，n=10）组、参附治疗（SF，n=10）组。制作大鼠单肺原位热缺血再灌注模型，进行肺损伤组织学定量评价指标（IQA）检测；采用末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）法检测肺组织细胞凋亡，并计算凋亡指数（apoptosis index，AI）；免疫组化法检测肺组织细胞Bcl-2、Bax蛋白表达的变化。结果Sham组几乎未见凋亡细胞，IR组、SF组的IQA、AI值均较Sham组明显升高（P〈0．01或P〈0．05）；SF组的IQA、AI值明显低于IR组（P均〈0．01）；与Sham组相比，IR组Bcl-2、Bax蛋白表达明显上调（P均〈0．01），而Bcl-2／13ax比值下降护〈0．01）；与IR组比较，SF组Bax蛋白水平显著下降护〈0．05），而Bcl-2蛋白、Bcl-2／Bax比值显著升高（P〈0．01或P〈0．05）。IQA与AI呈显著正相关（r=0．912，P〈0．01），而AI与Bcl-2／Bax比值呈显著负相关（r=0．847，P〈0．01）。结论参附注射液可能通过抑制Bax的表达、上调Bcl-2的表达，使Bcl-2／Bax比值增加，从而减少细胞凋亡，减轻肺缺血再灌注损伤。     

联合应用前列腺素E1和还原型谷胱甘肽对大鼠啼缺血再灌注损伤的保护作用

目的观察联合应用前列腺素E1和还原型谷胱甘肽对大鼠肺缺血再灌注损伤的保护作用。方法90只雄性清洁级SD大鼠随机分为5组,假手术组（S）,缺血再灌注组（IR）,治疗组1（RG1）,治疗组2（RG2）,治疗组3（RG3）。每组分别于夹闭缺血的第45分钟、缺血再灌注后1h、2h3个时间点处死大鼠,取10％左肺匀浆测定肿瘤坏死因子（TNF—α）、肺组织干／湿重比值（D／W）及在光镜下观察肺组织病理变化。结果（1）TNF—α含量在IR组缺血再灌注后含量明显增加,较S、RG组显著增高（P〈0．05）;（2）IR组肺组织损伤进行性加重,毛细血管充血、肺泡间隔炎性细胞浸润、肺泡腔内炎性细胞及炎性液体渗出显著,RG组肺组织充血水肿及炎性细胞浸润较IR组减轻,RG3组较RG1以及RG2组减轻;（3）IR组和RG各组的肺组织D／W比值呈进行性下降（P〈0．05）。结论联合应用前列腺素E1和GSH对大鼠肺缺血再灌注损伤的保护作用优于单独使用。     

还原型谷胱甘肽在不同潮气量机械通气对大鼠肺细胞凋亡的影响

目的探讨还原型谷胱甘肽对不同潮气量机械通气大鼠肺细胞凋亡的影响。方法将30只健康雄性SD大鼠随机分成对照组（A组,n=6）、正常通气组（B组,n=6）、过度通气组（C组,n=6）、正常通气组＋还原型谷胱甘肽（D组,n=6）及过度通气组＋还原型谷胱甘肽（E组,n=6）五组,D、E组在机械通气前5min阴茎背静脉注射还原型谷胱甘肽,各组大鼠通气时间均为4h。凋亡细胞的检测使用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口标记技术,用免疫组织化学技术检测肺组织核转录因子-κB（NF—KB）的表达。ELISA法检测肺匀浆中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）变化。结果C组肺组织中TNF-α含量与D、E比较明显增加,C组肺组织NF-κB的表达组与D、E组比较明显增加。C组肺组织中细胞凋亡明显高于D、E组。结论还原型谷胱甘肽能减少机械通气损伤中引起的肺组织的细胞凋亡。     

联合应用维拉帕米和还原型谷胱甘肽对兔供肺细胞凋亡的影响

目的：观察联合应用维拉帕米和还原型谷胱甘肽对兔移植肺细胞凋亡的影响.方法：健康日本大耳白兔24对,随机分为4组,每组6对.Ⅰ组用改良型低钾右旋糖酐液（对照组,改良LPD液）行肺灌洗保存,Ⅱ组用改良LPD液＋维拉帕米（2mg/kg）,Ⅲ组用改良LPD液＋还原型谷胱甘肽（3mmol/L）,Ⅳ组用改良LPD液＋维拉帕米（2mg/kg）＋还原型谷胱甘肽（3mmol/L）.供肺在缺血保存4h后移植并再灌注2h.实验结束时取肺组织测定肺组织丙二醛（MDA）含量与超氧化物歧化酶（SOD）活性,细胞内钙离子浓度,并行细胞凋亡及其相关基因Bcl-2,Bax表达蛋白测定.结果：Ⅳ组的肺组织MDA含量、细胞内钙离子浓度、细胞凋亡平均灰度值和阳性单位均低于Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ组,SOD活性、细胞凋亡相关基因Bcl-2平均灰度值和阳性单位IV组明显高于Ⅰ和Ⅱ,Ⅲ组.结论：联合应用维拉帕米和还原型谷胱甘肽对于肺缺血再灌注损伤时细胞凋亡的保护作用优于单独应用.     

ERK1/2在缺血再灌注损伤肺细胞凋亡中的作用及缺血后处理的干预

目的：探究细胞外信号调节激酶1／2（ERK1／2）在缺血／再灌注（IR）损伤肺细胞凋亡中的作用及缺血后处理的干预。方法：雄性sD大鼠,随机分成5组（n=8）,即对照组（C组）、肺缺血／再灌注组（IR组）、肺缺血／再灌注＋缺血后处理组（IPO组）、缺血后处理＋溶剂对照组（D组）、缺血后处理＋U0126组（u组）。分别于再灌注2h留取左肺组织,电镜观察肺组织超微结构改变;原位末端标记（TUNEL）法检测肺细胞凋亡情况并计算凋亡指数（AI）;RT-PCR法、免疫组化法测定肺组织Bax、Bcl-2基因和蛋白的表达。结果：与C组相比,IR组肺组织AI、Bax基因及蛋白表达均显著升高（P〈0．05）,电镜下肺细胞均发生明显损伤;Bcl-2、Bcl-2／Bax基因及蛋白表达显著降低（P〈0．05）;IPO组、D组、U组与IR组相比,肺组织AI、Bax基因及蛋白表达均显著降低（P〈0．05）,电镜下肺细胞损伤情况有所改善;Bcl-2、Bcl-2／Bax显著升高;D组与IPO组比较各项指标差异均无统计学意义（均P〉0．05）,U组与IPO组相比,肺组织AI值显著升高（P〈0．05）,电镜下肺上皮细胞超微结构破坏较严重,胞内细胞器不完整;Bct-2基因及蛋白表达明显降低,Bax基因及蛋白表达明显升高,Bcl-2／Bax显著降低。结论：IR抑制了MAPK家族中的ERK1／2激活,导致大鼠肺组织结构严重破坏,细胞大量凋亡;IPO可以通过激活ERK1／2通路,改善其结构破坏和细胞凋亡。     

Bcl-2过度表达对全脑缺血再灌注后大鼠海马回P53蛋白表达的影响

目的：研究过度表达Bcl-2的大鼠全脑缺血再灌注后P53在海马回的表达,探讨Bcl-2的抗凋亡作用及机制。方法：雄性健康SD大鼠随机分为3组（n=30）。缺血再灌注组（IR组）,采用4-血管法建立全脑缺血再灌注模型,6 min缺血后给予再灌注;假手术组（SO组）,只暴露血管而不夹闭;Bcl-2过度表达组（Bcl-2组）,Bcl-2过度表达大鼠模型造模成功后处理同IR组。所有动物于6、12、24、48、72及96 h行4%多聚甲醛灌注处理,将脑组织切片行免疫组化染色、原位末端标记法和HE染色,光镜下观察P53在海马回CA1和CA3区的表达、神经元形态及结构的变化以及凋亡神经细胞数,结果行统计学分析。结果：① 全脑缺血再灌注后24 h,IR组CA1区P53蛋白开始表达,程度较弱,随后逐渐增加,于72 h达高峰后下降,主要位于胞核;CA3区于再灌注后48 h才出现P53蛋白的表达,72 h达高峰,但表达强度较CA1区弱（P<0.05）。Bcl-2组CA1和CA3区P53蛋白表达强度均弱于IR组（P<0.05）,主要位于胞浆。② HE染色：全脑缺血再灌注后72 h,IR组CA1区有明显组织水肿,神经元数目降低,排列紊乱,核膜不清晰,未见核仁;CA3区神经元损伤程度较CA1区轻（P<0.05）;Bcl-2组神经元损伤较IR组轻（P<0.05）。③原位末端标记法染色：与SO组比较,IR组海马CA1区全脑缺血再灌注后24～48 h凋亡细胞数最多（P<0.01）,再灌注后72 h海马CA1区凋亡细胞数开始减少;与IR组比较,Bcl-2组凋亡细胞均较少（P< 0.05）。结论：Bcl-2过度表达可抑制大鼠全脑缺血再灌注后P53在海马回的表达。     

缺血预处理影响兔肝缺血再灌注时细胞凋亡及调控基因Bcl-2／Bax表达的研究

摘要目的：探讨缺血预处理对肝脏细胞凋亡的影响以及与调控基因Bcl-2／Bax蛋白表达的关系。方法：90只新西兰兔被随机分为4组：假手术（SO）组、缺血再灌注（IR）组,缺血预处理（IP）组。IR和IP组进行60min的全肝缺血后恢复灌注。而IP组在缺血前采用5min缺血及5min再灌注的方法进行缺血预处理。两组又根据再灌注后处死动物,标本采集时间点分为4个亚组（IR3h,IR12h,IR24h,IR48h和IP3h,IR12h,IR24h,IR48h）,SO组于手术后24h采取肝标本。所有标本进行HE染色后光镜镜检,TUNEL法检测细胞凋亡及免疫组化检测Bcl-2／Bax基因表达水平。结果：HE染色证实,经预处理后肝脏组织损伤明显较IR组减轻。IR组和IP组与SO组比较,细胞凋亡指数（AI）差异有显著统计学意义（P〈0．01）;IP组中IP3h,IR12h,IR24h较同时间段IR组细胞凋亡指数差异有显著性降低（P〈0．05）;IP48h与IR48h相比,凋亡指数无统计学意义（P〉0．05）。Bcl-2蛋白表达：IP组与IR组及SO组比较,差异有显著统计学意R（P〈0．05）;IR组与SO组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。Bax蛋白表达：IR组和Ip组与SO组比较,差异有显著性增高（P〈0．05）;IP组与IR组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：缺血预处理可能通过激活Bcl-2蛋白的表达,改变Bcl-2／Bax表达比例从而抑制肝细胞凋亡。     

姜黄素对缺血再灌注大鼠肺组织坏死性凋亡的影响

目的研究姜黄素对缺血再灌注大鼠肺组织坏死性凋亡的影响。方法将18只SD大鼠随机分为假手术组（SM组）、肺缺血再灌注组（IR组）和姜黄素预处理组（CU组）,每组6只。IR组于左肺门夹闭缺血1h（建模）后再灌注,CU组在建模前2h腹腔注射姜黄素200mg/kg,SM组仅暴露左肺门而不予缺血。再灌注3h时,观察3组大鼠左肺组织显微和超微结构改变,计算湿干重比,流式细胞仪测定肺组织单细胞悬液细胞死亡方式,检测肺组织受体相互作用蛋白（RIP）1和RIP3蛋白表达,并测定支气管肺泡灌洗液（BALF）中高迁移率族蛋白1（HMGB1）、IL-1β和TNF-α浓度。结果与SM组比较,IR组肺组织显微结构破坏,呈现坏死样超微结构改变,肺水含量增加,肺组织单细胞悬液凋亡和坏死细胞比例增加,肺组织RIP1和RIP3蛋白表达上调,BALF中HMGB1、IL-1β和TNF-α浓度升高（均P＜0.05）;与IR组比较,CU组肺组织含水量降低,单细胞悬液凋亡和坏死细胞比例降低,RIP1和RIP3蛋白表达降低,BALF中HMGB1、IL-1β和TNF-α浓度降低（P＜0.05）,肺组织显微和超微结构改善。结论姜黄素能抑制坏死性凋亡,减轻肺缺血再灌注损伤。     

福辛普利对心肌缺血再灌注损伤心肌细胞的作用和对Bcl-2、Bax表达的影响

目的探讨福辛普利对大鼠心肌缺血再灌注模型心肌细胞凋亡及相关调控基因Bcl-2、Bax表达的影响及相关机制。方法24只动物随机分成假手术组（n=8），缺血再灌注损伤组（n=8）和福辛普利预处理组（n=8），再灌注24h后处死动物。用透射电镜观察大鼠心肌超微结构的变化，TUNEL法检测心肌细胞凋亡，RT-PCR检测Bcl-2及Bax基因表达。结果电镜结果显示福辛普利的应用促使缺血再灌注大鼠心肌组织肌原纤维排列趋于恢复正常、线粒体肿大好转、细胞核和核仁显示良好，无细胞核变形，无胞核空洞样变及核固缩等现象。TUNEL显示福辛普利组细胞凋亡明显减少。缺血再灌注损伤24h后心肌组织Bcl-2基因表达较假手术组显著降低，而Bax基因表达则显著增高，福辛普利则可以逆转这种趋势。结论应用福辛普利能抑制心肌缺血再灌注损伤导致的心肌细胞凋亡，发挥心肌保护作用，从而缓解缺血再灌注损伤的发生发展。