大鼠液压脑损伤后皮层微血管改变与脑水肿的关系

目的探讨大鼠液压脑损伤后皮层微血管损伤情况及其与伤后脑水肿的关系。方法成年SD大鼠30只,随机分为正常组（n=6）、假手术组（n：6）、损伤组（n=18）,其中损伤组分为伤后6h、24h、72h三亚组,每亚组6只。利用液压冲击法建立大鼠颅脑损伤模型,显微镜下观察直接损伤侧和非直接损伤侧皮层微血管损伤隋况,CD34标记血管内皮细胞评价血管密度改变,干湿重法检测脑组织含水量的变化。结果大鼠皮层微血管损伤后6h可见血管支行迂曲、扩张、充血,伤后24h可见少量血栓形成,损伤后72h可见有较多血栓形成。损伤组CD34阳性细胞数明显低于假手术组和对照组（P〈0．05）,而脑组织含水量明显高于假手术组和对照组（P〈0．05）,而后两组无统计学差异（P〉O．05）。损伤组直接损伤侧皮层微血管损伤较非直接损伤组严重,而且伤后24h较伤后6、72h严重。结论颅脑损伤后脑微血管损伤为全脑性血管损伤,这可能是伤后脑水肿形成的机制之一。     

SD大鼠重型创伤性颅脑损伤后皮质Shankla蛋白的改变及意义

目的探讨Sprague—Dawley（SD）大鼠重型颅脑损伤后皮质组织中Shankla蛋白的表达改变及其意义。方法48只成年雄性SD大鼠,按随机数字表法,分为正常对照组、颅脑损伤后1h、6h、24h、48h及72h共6组,每组8只。采用免疫组化染色法和Western blot法行蛋白测定,RT—PCR法行mRNA测定。观察各颅脑损伤组及对照组大鼠Shankla蛋白及mRNA梯度灰度值,并进行免疫组化评分。结果与对照组比较,严重颅脑损伤后,Shankla蛋白和mRNA的表达量增加,从伤后1h持续到伤后72h（P〈0．05）,伤后24h表达量最高（P〈0.01）。结论在严重颅脑损伤后,Shankla出现1个表达高峰,在不同机制的影响下可能对脑损伤发生、发展起重要作用。     

人脑外伤后皮层基质金属蛋白酶9的表达:定量、定位和时相

目的探讨基质金属蛋白酶9（matrix metalloproteinases-9,MMP-9）在人创伤性脑损伤（traumatic brain injury,TBI）后挫伤皮层中的表达情况,包括表达位置、表达强度和表达时相。方法挫伤区皮层的标本来自于24位TBI患者,取样时间从伤后5h到5d,利用免疫组化技术测定MMP-9的表达强度。结果在人TBI后的挫伤区皮层中,MMP-9表达明显上调,表达高峰为伤后24-48h,MMP-9主要在神经元细胞中表达,神经胶质细胞中也有少量表达。结论MMP-9在人TBI后的挫伤区皮层中表达上调,提示其可能在TBI后的病理生理过程中起着重要作用。     

缺氧预处理对颅脑损伤大鼠脑组织HIF-1α及其HO-1表达的影响

目的探讨缺氧预处理对颅脑损伤大鼠脑组织缺氧诱导因子（HIF-1α）及血红素氧合酶-1（HO-1）表达的影响。方法 Sprague-Dawley大鼠102只,随机分为对照组（n=6）、创伤组（n=48）和预处理组（n=48）。创伤组按照改进的Feeney自由落体撞击法建立大鼠颅脑损伤模型,预处理组给予缺氧预处理后,同法造模。采用RT-PCR和Western blotting观察伤后1 h、4 h、8 h、12 h和1 d、3 d、7 d、14 d挫伤周围脑组织HIF-1α、HO-1表达变化。结果创伤组与对照组比较,HIF-1α和HO-1在伤后4 h、8 h、12 h和1、3 d表达上调（P〈0.05）。预处理组与创伤组比较,HIF-1α和HO-1在伤后1 h逐渐上调,伤后4 h、8 h、12 h和1、3 d表达显著上调,直至伤后7 d（P〈0.05）。结论缺氧预处理可增加颅脑损伤后挫伤区周围脑组织HIF-1α的表达,进而促进HO-1 m RNA及蛋白表达。其机制可能是缺氧预处理提高颅脑损伤对缺氧的适应性,减轻挫伤周围脑组织氧自由基对神经细胞伤害。     

大鼠二次脑损伤后脑内c-fos基因表达和血浆β-内啡肽的变化及意义

目的 探讨脑内c-fos基因表达及血浆β-内啡肽的变化在二次脑损伤（SBI）中的作用。方法 125只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、脑缺血组、颅脑损伤组和SBI组。分别采用免疫组化及放免分析测定大鼠脑内c-fos蛋白与血浆β-EP的含量，并对脑组织进行病理学观察。结果 SBI组c-fos基因表达分别于伤后3h、24h出现两个高峰．伤后3～48hc-fos基因表达均明显高于颅脑损伤组及脑缺血组（P〈0．05）。SBI组大鼠血浆β-EP水平在伤后1h达高峰，至伤后48h仍未恢复正常（P〈0．05），伤后各时间点均明显高于颅脑损伤组和脑缺血组（P〈0．05）。在伤后12hSBI组脑含水量达高峰；伤后3～48h明显高于颅脑损伤组及脑缺血组（P〈0．05）。伤后648hSBI组神经元损伤数目明显高于颅脑损伤组及脑缺血组（P〈0．05）。结论 伤后大鼠脑内c-fos基因表达增加、血浆β-EP水平明显升高参与了SBI后病理生理过程，提示两者同SBI发展密切相关。     

颅脑损伤后血清可溶性E-选择素水平变化及其意义

目的 研究颅脑损伤后血清可溶性E-选择素水平变化及其意义。方法 采用酶联免疫吸附法（ELISA）对30例重型颅脑损伤（GCS 3-8分）患者和25例轻-中型颅脑损伤（GCS 9-15分）患者伤后12、24、48、72和96h的血清可溶性E-选择素水平进行测定，伤后3个月按GOS评分评估预后，分析血清可溶性E-选择素水平变化与预后的关系。同时测定20例健康人血清可溶性E-选择素水平作为对照。结果 重型颅脑损伤组血清可溶性E-选择素水平明显高于正常对照组（P〈0．05），在伤后12和24h也明显高于轻-中型颅脑损伤组（P〈0．05）。伤后12h血清可溶性E-选择素水平〉60μg/L的病人预后明显不良（P〈0．05）。结论 血清可溶性E-选择素水平在颅脑损伤后明显升高．而且与预后相关。     

大鼠颅脑损伤后亚低温治疗对Calpain及作用底物MAP-2表达的影响

目的探讨亚低温治疗对颅脑损伤后Calpain、MAP-2基因和蛋白表达的影响。方法将54只SD大鼠随机分为假手术组（n=6）、常温脑损伤组（n=24）和亚低温脑损伤组（n=24）。亚低温脑损伤组在液压打击伤后即接受持续4h的亚低温治疗。伤后6h、12h、24h和72h4个时间点分别处死3只常温脑损伤组和亚低温脑损伤组大鼠。荧光PCR、Western blot半定量检测皮质Calpain及MAP-2基因转录和蛋白的表达。结果颅脑损伤后12h及24h亚低温使Calpain mRNA表达增加（P〈0．05）,伤后6h、12h、24h和72h亚低温均可减少Calpain蛋白的升高,伤后12h及72h尤其显著（P〈0．05）。与假手术组比较,常温脑损伤组和亚低温脑损伤组MAP-2基因转录均减少（P〈0．05）;与常温脑损伤组比较,伤后6h、12h和24h亚低温可抑制MAP-2基因转录的下调,但亚低温脑损伤组MAP-2蛋白的表达均比同时间点常温组低（P〈0.05）。结论颅脑损伤后亚低温治疗的脑保护机制可能与调节Calpain蛋白的表达有关,而亚低温与MAP-2的关系还有待进一步研究。     

rhEPO对大鼠颅脑损伤后的损伤脑组织NF-κB表达和血清TNF-α水平的影响

目的探讨重组人促红细胞生成素（rhEPO）对大鼠颅脑损伤后损伤脑组织核因子-κB（NF-κB）表达和血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平的影响。方法将90只雄性成年Wistar大鼠分为假损伤组、颅脑损伤组及rhEPO组。采用改进Feeney法制作大鼠颅脑损伤模型,rhEPO组伤后即刻腹腔注射rhEPO（3000IU／kg）;伤后3h、12h、24h、48h、72h、5d和7d免疫组织化学染色法检测NF-κB的表达、双抗体夹心酶联免疫吸附法检测血清TNF-α水平。结果伤后3h,损伤脑组织NF-κB表达明显升高,伤后24h达最高峰,随后其表达水平逐渐下降,至伤后7d仍明显升高（P〈0．05）;rhEPO治疗后,每个时间点损伤脑组织NF-κB表达水平均明显降低（P〈0.05）。伤后3h,血清TNF-α水平也明显升高,伤后12h迅速达到最高峰,随后其水平逐渐下降;伤后3d,其水平又再次升高,随后又逐渐下降,至伤后7d仍明显升高（P〈0．05）。rhEPO治疗后,每个时间点血清TNF-α水平均明显降低（P〈0．05）。结论NF-κB和TNF-α可能在颅脑损伤后的炎症反应中发挥重要作用,而rhEPO可能通过抑制NF-κB和TNF-α的表达而减少损伤脑组织的炎症反应,发挥脑保护作用。     

尼莫同对颅脑损伤后AQP4表达和血脑屏障通透性的影响

目的尼莫同对研究颅脑损伤后AQP4表达和血脑屏障（BBB）通透性的影响。方法健康成年Wistar大鼠50只，随机分成尼莫同组和生理盐水对照组。自由落体硬膜外撞击方法致重度脑创伤模型。在伤后6h、12h、24h、48h和72h每组各处死5只动物。取大鼠受损脑组织用于以下实验：①HE染色进行形态学观察；②免疫组化检测AQP4的表达变化；③测伤区脑组织中伊文氏蓝（EB）外渗的量，以反映伤侧BBB通透性的变化。结果颅脑损伤后，在尼莫同组和对照组损伤的脑组织均出现脑损伤的病理改变、AQP4表达上调、BBB通透性增加等改变，其变化趋势一致。颅脑损伤后6h、12h、24h、48h和72h，尼莫同组损伤脑组织EB外渗量明显多于对照组（P〈0．05）。结论尼莫同可以增加颅脑损伤后BBB通透性，加重脑损伤，但不影响受损脑组织AQP4的表达。     

犬颅脑枪弹伤后脑组织中脑源性神经生长因子和快反应蛋白c-myc的表达

目的研究犬颅脑枪弹伤后脑组织中脑源性神经生长因子（BDNF）和快反应蛋白C-myc的变化规律。方法24只杂种犬随机分为对照组（n=41，枪弹伤组（n=20）。采用德国小口径步枪子弹致犬颅脑额叶切线伤。用免疫组织化学方法检测伤后0．5、2、6、12和24h各不同时期弹道挫伤区、震荡区、海马及脑干神经元中BDNF和C-myc蛋白的表达。结果对照组脑神经元中BDNF和c-myc蛋白表达弱。枪弹伤组挫伤区、震荡区、海马及脑干神经元中BDNF和c-myc蛋白表达0．5h开始增加（P〈0．05），2h达高峰（P〈0．01）．6h开始下降，c-myc表达在24h同对照组，但BDNF表达在24h仍高于对照组。两者在不同区域、不同时间之间的表达不完全一致。结论BDNF和c-myc在弹道挫伤区、震荡区、海马及脑干神经元均有表达，两者在脑组织中表达的时空变化规律基本一致，可能共同参与细胞抗凋亡过程，相互间也可能存在着一定的调控作用。     

AQP4在高血压脑出血周围水肿组织中表达的临床研究

目的研究水通道蛋白-4（AQP4）与高血压脑出血（HICH）患者血肿周围组织水肿的相关性，并观察其在脑水肿形成过程中表达变化的规律。方法对32例HICH患者行开颅血肿清除术，对术中所取得的血肿周围水肿脑组织标本（实验组）分别应用免疫组化方法测定AQP4的表达，并与对照组（为手术人路中皮层造瘘所获取的皮层标本）进行对比分析。结果实验组各时间段血肿周围水肿脑组织AQP4的表达均明显高于对照组（P〈0．01）；脑出血后24h周围水肿脑组织中的AQP4含量显著升高，直到72h仍在较高水平。结论HICH血肿周围脑水肿的形成和发展与AQP4的异常表达密切相关。     

甘露醇与尼莫地平联合应用对大鼠创伤性脑水肿以及水通道蛋白-4表达的影响

目的观察甘露醇与尼莫地平联合应用对大鼠挫裂伤脑组织水通道蛋白-4（AQP-4）表达的影响。方法成年Wistar大鼠54只,随机分为挫裂伤组、甘露醇治疗组、甘露醇与尼莫地平联合治疗组。采用文献报告的方法制作大鼠左顶叶皮层局限性脑挫裂伤模型。各组分别于脑挫裂伤后24、48、72h取挫伤区脑组织,检测其含水量以及AQP-4的表达。结果随着伤后时间的增加;各组脑组织含水量增加,AQP-4mRNA和AQP-4蛋白的表达均逐渐增高（P〈0．0．5）;与挫裂伤组相比较,甘露醇治疗组伤后各时间点脑组织含水量、AQP-4mRNA和AQP-4蛋白的表达均明显增加（P〈0．05）;甘露醇与尼莫地平联合治疗组伤后各时间点与前两组相比,脑组织含水量及AQP-4mRNA和AQP-4蛋白的表达均明显降低（P〈0．05）。结论脑挫裂伤后,AQP-4mRNA和AQP-4蛋白的表达增加;脯组织含水增加,甘露醇联合应用尼莫地平后,能够下调AQP-4mRNA和AQP-4蛋白的表达,有效缓解创伤性脑水肿。     

促红细胞生成素对颅脑损伤后大鼠脑组织中XIAP和Smae／DIABLO表达的影响

目的观察重组人促红细胞生成素（r—HuEPO）对颅脑损伤后大鼠脑组织中抗凋亡因子X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）和促凋亡因子第二个线粒体衍生的半胱氨酸蛋白酶激活剂（Smac／DIABLO）表达的影响,并探讨二者在r-HuEPO抗凋亡中的作用。方法采用自由落体法建立大鼠颅脑损伤模型,在伤后不同时间点用末端标记原位细胞凋亡检测法（TUNEL法）检测细胞凋亡,用免疫组织化学法检测XIAP和Smac／DIABLO表达的变化。结果与假手术组相比,颅脑损伤后打击周边区的细胞凋亡数显著增加沪〈0．01）,XIAP和Smac／DIABLO表达水平明显升高（P〈0．05）;与对照组相比,r—HuEPO治疗组XIAP的表达在2—72h时间点明显升高（P〈0．05）,Smac／DIABLO的表达和细胞凋亡数在6h至7d时间点显著下降（尸〈0．05）。结论r—HuEPO可能通过促进XIAP的表达和抑制Smac／DIABLO的表达减少颅脑损伤后的细胞凋亡,发挥脑保护作用。     

利用miRNA芯片筛选大鼠颅脑创伤后皮层差异表达的miRNA

目的 筛选大鼠颅脑创伤后皮层差异表达的miRNA,为颅脑创伤治疗中的miRNA干预策略提供可供选择的目标miRNA.方法 利用miRNA芯片检测伤后6 h、24 h、48 h、72 h组各2例创伤大脑皮层组织与2例正常对照的差异表达基因.并随机挑选差异表达基因做PCR验证.结果 创伤后6 h组共有136个miRNA表达,其中2倍以上差异表达上调的13个,2倍以上差异表达下调的14个;24 h组共有118个miRNA表达,其中2倍以上差异表达上调的4个,2倍以上差异表达下调的23个;48 h组共有149个miRNA表达,其中2倍以上差异表达上调的16个,2倍以上差异表达下调的11个;72 h组共有203个miRNA表达,其中2倍以上差异表达上调的19个,2倍以上差异表达下调的5个.其中只有miR-21在4个伤后时间点上均高表达,分别为2.0215、2.0401、2.0702、2.7910.定量PCR验证结果提示芯片结果可信.结论 创伤大脑皮层的差异表达miRNA在以往文献中鲜见报道,对其干预有望成为颅脑创伤基因治疗的新靶向.     

p38MAPK在体外培养星形胶质细胞缺氧/复氧损伤中的表达

目的 建立SD大鼠星形胶质细胞缺氧复氧损伤模型,探讨p38MAPK活性变化与星形胶质细胞损伤的关系.方法 体外培养新生SD大鼠星形胶质细胞,实验设正常对照组（N）、SB203580组（SB组,10 μmol/L）、缺氧/复氧组（H/R组）和缺氧/复氧组＋SB203580阻断p38MAPK组（H/R＋SB组）.应用MTT法、WB法、ELISA法检测缺氧4 h、8 h、复氧6 h、12 h、24 h、48 h时细胞存活率,p38MAPK、p-p38（磷酸化p38MAPK）及TNF-α的变化.结果 培养星形胶质细胞GFAP阳性表达率大于97%.缺氧/复氧使星形胶质细胞活力降低,SB203580阻断p38MAPK细胞活力高于H/R组,各组星形胶质细胞总p38MAPK水平无显著变化,缺氧复氧干预后p-p38表达上调,TNF-α水平显著增高.用SB203580阻断p38MAPK通路后,SB＋H/R组较H/R组p-p38、TNF-α水平降低.SB组总p38MAPK、p-p38、TNF-α水平与N组比较无显著变化.结论 p38MAPK信号通路参与了星形胶质细胞缺氧复氧损伤过程.     

大鼠弥漫性脑损伤后脑组织中MMP-9的表达与神经元损伤

目的探讨大鼠弥漫性脑损伤后基质金属蛋白酶-9（MMP-9）在脑组织中的表达与神经元损伤的关系。方法荧光实时定量RT—PCR和免疫组化分别测定大鼠弥漫性脑损伤后MMP-9 mRN和MMP-9在脑组织中的表达。光镜和电镜观察神经元的变化。结果外伤后3h大鼠脑组织中MMP-9的阳性表达率开始升高，72h达高峰（50．35％±7．27％），伤后6h～7d各组均明显高于假手术对照组（P〈0．05）；随后开始下降，14d降至对照组水平。MMP-9 mRNA于伤后1h表达水平开始升高，72h达最高（20．56±1．29），伤后12h～7d时明显高于假手术对照组（P〈0．01）；随后开始下降，14d降至对照组水平。光镜及电镜下均可见弥漫性神经元变性和坏死，伤后72h损伤表现最为严重。结论本研究提示大鼠弥漫性脑损伤后MMP-9表达升高并可能参与了外伤后炎症反应和神经元损伤的病理过程。     

MAPK信号通路在创伤性脑损伤中的作用

目的通过建立小鼠创伤性脑损伤(TBI)模型,研究丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)通路中的细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)通路、JNK通路和p38通路的激活及在TBI中的作用及机制。方法建立小鼠TBI模型,通过Western blot检测ERK1/2、JNK和p38的相对磷酸化水平,确定TBI后MAPK通路的激活情况;分别加入ERK1/2通路抑制剂(PD98059,500μmol/L)、JNK通路抑制剂(SP600125,500μmol/L)和p38通路抑制剂(SB203580,500μmol/L),通过脑干湿重检测、神经功能学评分和TUNEL染色评估不同抑制剂对TBI的作用,并通过Western blot检测ERK1/2、JNK和p38的相对磷酸化水平,明确ERK1/2通路、JNK通路和p38通路之间的相互调节作用。结果 TBI可分别引起ERK1/2通路、JNK通路和p38通路的激活;抑制ERK通路和JNK通路可减轻TBI引起的脑水肿、神经功能损伤和细胞凋亡,而抑制p38通路则加重TBI引起的脑水肿、神经功能损伤和细胞凋亡;抑制JNK通路可减少ERK1/2的相对磷酸化水平,而抑制p38通路可增加ERK1/2的相对磷酸化水平。结论 TBI后,ERK1/2通路和JNK通路的激活发挥促进损伤形成的作用,而p38通路的激活则起到神经保护的作用;ERK1/2通路的激活受到JNK通路的促进和p38通路的抑制,表明MAPK通路之间存在相互调节。