MAPK/ERK信号转导通路在白藜芦醇抑制A431细胞株裸鼠移植瘤生长中的作用机制研究

目的 探讨白藜芦醇对人皮肤鳞状细胞癌（简称鳞癌）A431细胞株裸鼠移植瘤生长的影响。 方法　取对数生长期A431细胞株接种于Balb/c （nu/nu）裸鼠左腋下造模,7 ～ 8 d后将A431裸鼠移植瘤模型按随机数字表法分为空白组、阴性对照组（生理氯化钠溶液组）、环磷酰胺（CTX）阳性对照组、白藜芦醇高、中、低剂量组,每组10只。通过终末瘤质量计算白藜芦醇的抑瘤率,观察各组移植瘤组织病理形态学变化,原位末端标记技术检测细胞凋亡,Western印迹检测各组移植瘤组织中P-ERK、p53、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（caspase3）的表达。SPSS13.0统计软件对结果进行方差分析及Pearson相关分析。 结果　CTX组、白藜芦醇高、中、低剂量组、阴性对照组、空白组裸鼠移植瘤体积分别为（1153.56 ± 255.41）、（1001.69 ± 115.08）、（1206.80 ± 175.88）、（1342.28 ± 211.12）、（1642.34 ± 225.85）、（1564.32 ± 156.49） mm3,各组差异有统计学意义（F = 16.00,P < 0.05）;各组瘤质量差异亦有统计学意义（F = 19.15,P < 0.05）,白藜芦醇高、中、低剂量组抑瘤率分别为45.57%、37.97%、15.51%。CTX组、白藜芦醇高、中、低剂量组、阴性对照组、空白组肿瘤组织的凋亡指数分别为36.79 ± 8.86、33.15 ± 6.00、18.09 ± 3.92、10.53 ± 4.20、3.87 ± 1.63、2.73 ± 1.61,白藜芦醇各组均高于阴性对照组及空白组（F = 93.26,P < 0.05）。各组肿瘤组织中P-ERK/β肌动蛋白、p53/β肌动蛋白caspase3/β肌动蛋白比值经方差分析,F值分别为6.65、6.78、11.56,均P < 0.05,白藜芦醇各组P-ERK、p53、caspase3蛋白的表达均高于阴性对照组及空白组。经Pearson相关分析,裸鼠移植瘤P-ERK 与p53、p53与caspase3表达具有显著相关性（r分别0.68和0.56,均P < 0.05）。 结论　白藜芦醇对A431荷瘤裸鼠移植瘤的生长具有抑制作用,其机制之一可能与活化肿瘤组织中MAPK/ERK信号传导通路,进而活化p53,诱导肿瘤细胞凋亡有关。 【关键词】 癌,鳞状细胞; 丝裂原激活蛋白激酶激酶类; 肿瘤抑制蛋白质p53; 细胞系,肿瘤; 白藜芦醇     

重楼皂苷Ⅶ对人皮肤鳞状细胞癌裸鼠移植瘤生长的影响及作用机制

目的 探讨重楼皂苷Ⅶ(PPⅦ)对人皮肤鳞状细胞癌(cSCC)裸鼠移植瘤生长的影响及作用机制.方法 将cSCC A431细胞注射于裸鼠皮下构建cSCC移植瘤模型,随机分为对照组、PPⅦ0.5、1、2 mg/kg组、氟尿嘧啶(5-FU)10 mg/kg组,每组5只.观察移植瘤生长情况,采用原位末端标记技术(TUNEL)检测...     

白藜芦醇对人皮肤鳞状细胞癌A431裸鼠移植瘤生长的影响

目的：评价白藜芦醇（Resveratrol,Res）对皮肤鳞状细胞癌（简称鳞癌）移植瘤生长的影响。方法：建立人皮肤鳞癌（A431）裸鼠移植瘤模型,分别予以药物干预后处死荷瘤鼠,称取瘤质量;HE染色观察各组移植瘤组织细胞病理形态学变化;应用原位末端标记（TUNEL）技术检测细胞凋亡;采用sP免疫组化法检测Res对各组裸鼠移植瘤组织中凋亡调控基因Bcl-2及Bax的蛋白表达的影响。结果：Res实验组移植瘤体积、瘤质量低于阴性对照组,肿瘤组织的凋亡指数高于阴性对照组,瘤组织中Bcl-2蛋白表达低于阴性对照组,Bax蛋白表达高于阴性对照组（均P〈0．05）。结论：白藜芦醇可通过下调Bcl-2和上调Bax蛋白的表达诱导皮肤鳞癌细胞凋亡,从而抑制移植瘤的生长。     

乙酰肝素酶反义寡核苷酸对人恶性黑素瘤裸鼠皮下移植瘤抑制作用的研究

目的探讨乙酰肝素酶反义寡核苷酸(ASODN)对人恶性黑素瘤裸鼠皮下移植瘤的抑制作用。方法分空白组、无关序列(N-ODN)组、10μmol/LASODN组、20μmol/LASODN组和30μmol/LASODN组5组,以脂质体包埋分别转染人恶性黑素瘤细胞株A375,后接种于裸鼠皮下,观察裸鼠移植瘤体积变化,并采用原位杂交、免疫组化法检测移植瘤中乙酰肝素酶mRNA及其蛋白表达的变化。结果接种6周后,各ASODN组的裸鼠移植瘤体积均显著小于N-ODN组和对照组(P均<0.05);各ASODN组裸鼠移植瘤中乙酰肝素酶mRNA和蛋白水平均较对照组、N-ODN组显著下调(P均=0.000)。结论乙酰肝素酶ASODN对人恶性黑素瘤裸鼠皮下移植瘤具有抑制作用。     

人瘢痕疙瘩成纤维细胞裸鼠荷瘤模型的建立

目的 建立一种简单、成功率高的人瘢痕疙瘩裸鼠荷瘤模型。 方法 27只雌性BALB/c裸鼠随机分为5组,A、B、C组每组5只,在每只裸鼠腋窝下接种人瘢痕疙瘩成纤维细胞和Matrigel胶混悬液0.1 ml,细胞浓度分别为1.0 × 104个/μl Matrigel胶（A组）、3.0 × 104个/μl Matrigel胶（B组）、5.0 × 104个/μl Matrigel胶（C组）。取C组成形瘤块修剪成若干个5 mm × 5 mm × 5 mm大小的组织块移植于D组裸鼠（8只）的腋窝皮下;E组裸鼠（4只）皮下注射100 μl Matrigel胶作为对照组。A、B、C组出瘤后30 d、D组瘤块移植后30 d肉眼观察瘤体的形成过程及变化,并在第31天处死裸鼠进行组织病理学检查,分析其移植后成形的瘤体组织学变化及裸鼠的心、肝、脾、肺、肾组织的变化。 结果 A、B、C组裸鼠成瘤率为100%,出瘤时间分别为（90.20 ± 3.96） d、（61.00 ± 2.92） d、（39.60 ± 3.20） d。出瘤30 d时3组瘤体体积分别为（288.34 ± 25.29） mm3、（1 370.63 ± 105.24） mm3、（1 940.98 ± 184.37） mm3,3组差异有统计学意义（F = 138.74,P < 0.05）。D组裸鼠成形瘤块移植后瘤块体积先略增大后逐渐减小,移植第14天始持续增大,8只中7只成瘤。E组裸鼠未见瘤体形成。组织病理学检查,各组瘤体的组织形态在镜下一致,与人瘢痕疙瘩组织相似,未见其他脏器组织学改变及转移瘤灶。结论 裸鼠皮下接种人瘢痕疙瘩成纤维细胞可建立瘢痕疙瘩裸鼠荷瘤模型,而且已成瘤组织修剪成一定体积再次移植于裸鼠皮下也可以建立瘢痕疙瘩裸鼠荷瘤模型。     

基质金属蛋白酶7在恶性黑素瘤中的表达

目的 探讨基质金属蛋白酶7（MMP7）的表达与恶性黑素瘤浸润、转移的关系。方法 采用免疫组化SP法研究MMP7在恶性黑素瘤（30例）、交界痣（30例）、正常人皮肤（15例）组织中的表达，并观察其在恶性黑素瘤A375细胞株和不同浓度乙酰肝素酶反义寡核苷酸转染的裸鼠体内恶性黑素瘤移植瘤中的表达情况。结果 MMP7在恶性黑素瘤组、交界痣组及正常人皮肤组中的阳性表达率分别为83.33%（25/30）、6.67%（2/30）和0，恶性黑素瘤组与交界痣组MMP7的阳性表达率比较，χ2 = 35.62，P < 0.01；交界痣组与正常人皮肤组比较，差异无统计学意义。10、20、30 μmol/L乙酰肝素酶反义寡核苷酸对裸鼠体内恶性黑素瘤移植瘤MMP7表达表现出不同程度的抑制作用，30 μmol/L组的抑制作用最强，与其他2个组相比，差异均有统计学意义（P < 0.05）。MMP7在A375细胞株中呈强阳性表达。结论 MMP7在恶性黑素瘤中的表达明显高于其在交界痣和正常人皮肤；乙酰肝素酶反义寡核苷酸对裸鼠体内恶性黑素瘤移植瘤中MMP7的表达有显著抑制效应；MMP7在A375细胞株中呈强阳性表达。     

携带IL-18基因的溶瘤腺病毒对裸鼠恶性黑素瘤移植瘤的抗肿瘤作用

目的 探讨携带IL-18基因的溶瘤腺病毒（ZD55-IL-18）对裸鼠恶性黑素瘤移植瘤的抗肿瘤效果。方法 取A375细胞2 × 106个接种于BALB/c裸鼠腋下组织内,建立裸鼠黑素瘤模型,当移植瘤体积达100 ~ 150 mm3时将其随机分为3组,每组8只,分别于瘤体内注射ZD55-IL-18、Ad-IL-18和磷酸盐缓冲液（PBS）。通过定期测量肿瘤体积观察肿瘤生长抑制情况,并切取肿瘤进行HE染色,观察肿瘤细胞生长形态;激光共聚焦显微镜下观察移植瘤组织IL-18表达水平、E1A蛋白的表达情况。免疫组化检测荷瘤裸鼠肿瘤组织CD34染色标记测定的肿瘤组织微血管密度;TUNEL法检测移植瘤组织细胞凋亡情况。结果 肿瘤生长曲线表明,ZD55-IL-18处理组肿瘤生长速度较PBS组明显减慢,接种44 d后ZD55-IL-18组肿瘤平均体积为（1039.378 ± 29.67） mm3,Ad-IL-18组为（2900.46 ± 62.65） mm3,PBS组为（3980.24 ± 63.78） mm3,各组间差异有统计学意义（P < 0.01）。HE染色发现,ZD55-IL-18处理组细胞核深染,很少见核仁,显示肿瘤组织生长抑制。激光共聚焦结果表明,ZD55-IL-18处理组IL-18的表达阳性率比Ad-IL-18处理组明显增强（P < 0.01）,并可以在肿瘤组织中表达E1A蛋白;免疫组化检测显示,ZD55-IL-18治疗组肿瘤微血管密度明显低于PBS组（P < 0.05）。不同处理组移植瘤细胞凋亡阳性率ZD55-IL-18处理组（86.28% ± 3.25%） ＞ Ad-IL-18处理组（43.67% ± 3.46%） ＞ PBS处理组（10.73% ± 2.48%）,各组之间差异有统计学意义（P ＜ 0.05）。结论 携带IL-18基因的溶瘤腺病毒ZD55-IL-18对裸鼠恶性黑素瘤移植瘤的生长及转移有抑制作用,并探讨了其可能的作用环节。     

Hpa-ASODN转染裸鼠黑素瘤移植瘤中VEGF和bFGF蛋白的检测

碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)蛋白表达的影响。方法以人恶性黑素瘤A375细胞株及Hpa-ASODN转染A375细胞株建立裸鼠体内移植瘤模型,采用免疫组化检测肿瘤组织Hpa-ASODN,VEGF和bFGF蛋白的表达。结果Hpa-ASODN转染后裸鼠移植瘤VEGF和bFGF蛋白表达低于对照组(P<0.05)。结论Hpa-ASODN可下调裸鼠移植瘤组织中VEGF和bFGF蛋白的表达。     

小檗碱对皮肤鳞状细胞癌裸鼠模型的抑制作用及其机制研究

【摘要】 目的 研究小檗碱对皮肤鳞状细胞癌（cSCC）-A431裸鼠移植瘤的体积、重量、细胞增殖及凋亡的影响，探索小檗碱抑制cSCC的可能机制。方法 培养A431细胞，于20只裸鼠背部皮下注射A431细胞悬液建立cSCC移植瘤裸鼠模型。接种第15天，将荷瘤裸鼠随机平均分为4组：低、中、高剂量组裸鼠腹腔分别注射10、20、25 mg/kg小檗碱溶液，对照组腹腔注射生理氯化钠溶液，每日1次，连续给药35 d。分别于给药前、给药第7、14、21、28、35天检测移植瘤体积。实验结束后，处死裸鼠并随即剥离瘤块称重，计算肿瘤生长抑制率。移植瘤行组织病理检查，免疫组化检测Ki67表达水平，TUNNEL染色检测移植瘤组织中凋亡细胞数，荧光定量PCR和Western印迹法分别检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、caspase-3和Ezrin mRNA和蛋白的表达。多组间比较采用单因素方差分析，各组与对照组比较采用Dunnett-t检验。结果 随小檗碱剂量升高和作用时间延长，肿瘤生长曲线逐渐变平缓，各小檗碱组肿瘤生长受到不同程度的抑制，其中高剂量组肿瘤生长抑制作用最明显。小檗碱低、中、高剂量组肿瘤生长抑制率分别为31.05%、66.68%、76.49%，瘤重均显著低于对照组（t = 4.07、6.33、7.26，均P < 0.01）。移植瘤组织病理检查显示，随小檗碱剂量的增加，肿瘤细胞坏死程度和范围增加。免疫组化显示，随小檗碱剂量的增加，Ki67阳性细胞逐渐减少。此外，低、中、高剂量组Ki67阳性细胞数均显著低于对照组（均P < 0.01），而凋亡细胞数均显著高于对照组（P < 0.05或 < 0.01）。4组Bax、Bcl-2、caspase-3、Ezrin mRNA及蛋白表达差异均有统计学意义（均P < 0.01）。其中，小檗碱低、中、高剂量组Bcl-2 mRNA的表达均显著低于对照组（均P < 0.01），中、高剂量组Bcl-2蛋白表达显著低于对照组（均P < 0.01）；高剂量组Bax mRNA及中、高剂量组caspase-3 mRNA的表达均显著高于对照组（P < 0.05或 < 0.01），而低、中、高剂量组Bax、caspase-3蛋白表达量均显著高于对照组（均P < 0.01）；仅高剂量组Ezrin mRNA表达显著高于对照组（均P < 0.01），而低、中、高剂量组Ezrin蛋白表达均显著低于对照组（均P < 0.01）。结论 小檗碱可抑制cSCC-A431裸鼠移植瘤细胞的增殖并促进凋亡，从而一定程度抑制cSCC-A431裸鼠移植瘤的生长，其机制可能与小檗碱上调Bax、caspase-3的表达，同时下调Bcl-2、Ezrin的表达有关。     

荷人皮肤鳞状细胞癌裸鼠移植瘤模型中干扰血管内皮生长因子的实验研究

目的 在沉默血管内皮生长因子(VEGF)的荷人裸鼠皮肤鳞状细胞癌(鳞癌)移植瘤中观察肿瘤生长,探讨靶向VEGF小发夹核酸(shRNA)的作用.方法 生物合成靶向人VEGF基因的shRNA干扰真核表达质粒(psilencer-VEGFl -shRNA、VEGF-s1;psilencer-VEGF2-shRNA、VEGF-s2),同时合成含随机靶序列的阴性对照表达质粒(psilencer-Target-off-shrank,T-off).将构建的质粒分别转染于筛选的人皮肤鳞癌细胞株(A431),获得稳转细胞株.实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应、双抗体夹心酶联免疫吸附法分别检测稳转细胞株中VEGF mRNA和VEGF蛋白的表达.用稳转细胞株制备荷人皮肤鳞癌裸鼠移植瘤模型,观察裸鼠体内肿瘤生长,6周后(20d)处死裸鼠进行肿瘤病理学研究,免疫组化染色检测瘤组织VEGF、增殖细胞核抗原( PCNA)和CD34蛋白的表达.应用stata 7.0统计学软件进行统计学处理.组间比较采用t检验.结果 转染VEGF-s1和VEGF-s2的A431细胞中VEGF mRNA表达分别为27.85±3.95和24.69±2.83,表达量显著低于未转染组(54.06±6.38,t值分别为6.05和7.29,P值均＜0.01);VEGF蛋白表达分别为32.67±2.52和29.27±1.10,亦显著低于未转染组(52.85±2.23,t值分别为8.04和11.53,P值均＜0.01).用转染VEGF-s1和VEGF-s2的A431细胞制备荷人皮肤鳞癌裸鼠移植瘤模型,裸鼠肿瘤体积分别为( 192.50±10.90) mm3和(203.67±3.21) mm3,明显小于未转染组(272.00±21.07 mm3,t值分别为5.80和5.55,P值均＜0.01);裸鼠肿瘤重量分别为(0.05±0.03)g和(0.13±0.04)g,与未转染组(0.25±0.02 g)比较明显减轻(t值分别为9.60和4.64,P值均＜0.01);裸鼠肿瘤细胞中VEGF蛋白表达率分别为52.00％±2.00％和56.67％±3.06％,PCNA阳性率分别为37.01％±2.41％和33.94％±3.25％,CD34阳性血管数分别为2.05±0.07和1.72±0.10,与未转染组(70.00％±2.00％、72.11％±3.02％和4.01±1.27)比较,均显著降低(P值均＜ 0.01).各项指标中,转染VEGF-s1和VEGF-s2组间、未转染组和T-off组间差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 靶向VEGF基因的shRNA能有效抑制A431细胞和荷人裸鼠皮肤鳞癌移植瘤中VEGF的表达,导致肿瘤生长受抑,肿瘤恶性表型减弱.     

光动力疗法对人宫颈癌Caski细胞裸鼠移植瘤MIF表达的影响

目的:探讨光动力疗法对人宫颈癌Caski细胞裸鼠移植瘤巨噬细胞移动抑制因子(MIF)表达的影响。方法:选取BALB/c裸鼠,皮下注射人宫颈癌Caski细胞,10d后将达到荷瘤标准的40只裸鼠采用随机数字表法分为四组,即A组、B组、C组和D组,各10只。A组作为阴性对照、B组给予单次光动力疗法、C组给予多次光动力疗法和D组给予顺铂腹腔注射。对比治疗前和治疗2周后肿瘤体积,治疗前后裸鼠体质量、瘤体积、瘤质量变化及抑瘤率,并分别采用western-blot和免疫组化法对各组裸鼠肿瘤组织MIF表达情况进行检测,行对比分析。结果:B组、C组和D组体质量、瘤体积和瘤质量变化和A组比较差异均有统计学意义(P<0.05),且C组和D组上述指标及抑瘤率和B组比较差异均有统计学意义(P<0.05),而C组和D组间各项指标差异均无统计学意义(P>0.05);电镜分析结果显示各组肿瘤胞浆可见明显空泡,团间有明显坏死灶,并且随着光动力疗法剂量增高,坏死区域增大越明显。B组、C组和D组MIF蛋白IOD值均较A组显著降低(P<0.05),且C组和D组MIF蛋白相对表达量和IOD值均较B组显著降低(P<0.05),而C组和D组MIF蛋白相对表达量和IOD值比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:采用多次光动力疗法对人宫颈癌Caski细胞裸鼠移植瘤效果和顺铂相近,且可显著降低MIF表达水平。     

A431鳞状细胞异种移植瘤模型中c-Kit信号通路诱导其对EGFRIs耐药机制的影响

目的建立EGFRIs(吉非替尼)耐药的EGFR野生型移植瘤模型,并研究其可能耐药机制。方法雌性BALB/c裸鼠皮下注射A431细胞,肿瘤生长到150×200mm~3,口服给予50mg/kg的吉非替尼,1次/d,连续25周后对EGFRIs产生耐药。比较敏感和耐药移植瘤的全基因组基因表达谱寻找目的基因。耐药模型分别接受空白对照组、吉非替尼、目的基因抑制剂(AMG706),或它们的混合物治疗21d,检测肿瘤组织生长、细胞凋亡、目的基因以及相关细胞因子表达情况。结果 C-kit在吉非替尼耐药的A431异种移植瘤中过表达,双重阻断EGFR和c-Kit信号有协同作用,引起细胞凋亡。结论 A431异种移植瘤模型中诱导的吉非替尼耐药可能与c-Kit过表达有关。EGFRIs和c-Kit抑制剂的联合治疗可能阻断这种耐药机制,抑制肿瘤细胞生长。     

白藜芦醇降低缺氧诱导因子1α蛋白SUMO化抑制皮肤鳞状细胞癌新生血管形成

目的从蛋白质泛素/类泛素化修饰平衡角度探讨白藜芦醇抑制皮肤鳞状细胞癌新生血管形成的内在机制。方法以人皮肤鳞状细胞癌A431细胞株为研究对象, 分别给予培养基中加入50 μmol/L和100 μmol/L白藜芦醇处理对数生长期A431细胞作为实验组, 以不加白藜芦醇培养基处理为对照组。按照上述实验分组, 培养48 h采用3-(4, 5-二甲基噻唑-2)-2, 5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)实验检测各组细胞增殖活性;采用血管模拟形成实验检测白藜芦醇处理12 h对A431细胞血管拟态形成能力的影响;采用Western印迹检测白藜芦醇处理48 h各组细胞泛素(ubiquitin)、小泛素相关修饰蛋白1(SUMO1)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子受体(VEGFR)相对表达水平。将24只8周龄BALB/c雄性去胸腺小鼠随机均分3组, 于腹股沟皮下接种A431细胞, 治疗组予1 mg/kg或2 mg/kg白藜芦醇腹腔注射给药, 对照组注射相同体积的生理NaCl溶液, 每3天注射1次, 第21天处死小鼠, 解剖肿瘤称重;采用免疫组化检测各组肿瘤组织中CD31的表达。多组间比较采用...     

基于Wnt/β联蛋白信号通路探讨EphB2抑制剂对皮肤鳞状细胞癌的影响及作用机制

【摘要】 目的 采用分子对接法筛选酪氨酸蛋白激酶受体B2（EphB2）小分子抑制剂,研究其对皮肤鳞状细胞癌（CSCC）的影响及可能机制。方法 利用 Schrodinger对接工具预测EphB2蛋白的三维结构及其配体结合位点,通过分子对接进行高通量虚拟筛选EphB2抑制剂,通过体内外实验验证筛出的EphB2抑制剂山奈苷与芦荟大黄素（AE）抗CSCC的作用及机制。体外实验中,将人CSCC细胞系A431、SCL-1及人永生化表皮细胞HaCaT分别分为空白对照组、二甲基亚砜组、AE组与山奈苷组,通过MTT实验（AE浓度：20、40、80、160 μmol/L;山奈苷浓度：12.5、25、50、100 μmol/L）、划痕实验及Transwell小室实验（AE浓度：80 μmol/L,山奈苷浓度：50 μmol/L）分析EphB2抑制剂对CSCC细胞增殖、迁移、侵袭的影响。体内实验中,SPF级BALB/c雌性裸鼠皮下注射0.2 ml A431细胞悬液,待成功长出瘤体以后,随机分为4组（n = 6）,空白对照组、二甲基亚砜组、AE组（腹腔注射AE 20 mg·kg-1·d-1 AE）与山奈苷组（腹腔注射山奈苷25 mg·kg-1·d-1）;每周测量裸鼠的肿瘤大小和体重;连续给药28 d后,剥取裸鼠移植瘤进行HE染色,qRT-PCR与Western blot分析AE和山奈苷对裸鼠移植瘤中上皮钙黏着蛋白、波形蛋白、磷酸化葡萄糖合成激酶3β（p-GSK-3β）、β联蛋白及GSK-3β表达的影响。组间比较采用单因素方差分析及t检验。结果 筛选出对EphB2具有较高抑制活性的两个小分子化合物AA-504/20999031（山奈苷）和AA-466/21162055（AE）。MTT实验结果表明,与HaCaT细胞相比,AE对SCL-1和A431细胞具有强烈的细胞毒性,且随AE浓度升高毒性变强（F = 17.95,P＜0.001）,作用48 h时,IC50分别为124.59 μmol/L和80.85 μmol/L;山奈苷对SCL-1和A431细胞具有强烈的细胞毒性,且随山奈苷浓度升高毒性变强（F = 11.34,P＜0.001）,作用48 h时,IC50分别为119.64 μmol/L和64.96 μmol/L。划痕实验显示,与二甲基亚砜组细胞迁移距离（88.1±1.4） μm相比,AE组和山奈苷组A431细胞迁移距离［（36.7±1.0） μm和（44.7 ± 3.5） μm］显著缩短（F = 52.34,P < 0.001）,而HaCaT细胞迁移距离差异无统计学意义（F = 1.73,P = 0.238）。Transwell小室实验表明,与二甲基亚砜组A431细胞跨膜细胞数量（195.3 ± 5.7）相比,AE组和山奈苷组A431细胞显著抑制（145.0 ± 2.5和94.7 ± 4.1,F = 72.85,P < 0.001）,而对HaCaT细胞则无明显抑制作用（F = 3.91,P = 0.055）。动物实验表明,与二甲基亚砜组裸鼠移植瘤体积（841.88 ± 84.63） mm3相比,AE组和山奈苷组显著下降［（407.42 ± 70.37） mm3与（368.77 ± 62.7） mm3,F = 73.78,P < 0.001］。HE染色证实,AE和山奈苷干预可改善其病理变化。qRT-PCR与Western印迹结果显示,AE和山奈苷明显上调瘤体组织中上皮钙黏着蛋白与p-GSK-3β mRNA和蛋白表达水平（均P < 0.001）,下调波形蛋白、β联蛋白及GSK-3β mRNA和蛋白表达水平（均P < 0.001）。结论 分子对接筛选的小分子抑制剂与EphB2可形成稳定复合物,并通过影响 Wnt/β联蛋白通路诱导的上皮间质转化现象来抑制CSCC进程。     

脑脊液诱导的骨髓源性神经样细胞移植的安全性研究

目的：研究脑脊液诱导的骨髓源性神经样细胞（BMSC-Ns）移植的安全性。方法将40只4~6周龄裸鼠采用随机数字表法分为5组（n=8）,其中致瘤性实验3组：阳性对照组（A组）,接种Hela细胞（2×107/0.2ml）;实验组（B组）,将BMSC-Ns按2×107/0.2 ml接种至裸鼠肋部皮下;阴性对照组（C组）,注射等体积生理盐水。接种后饲养1个月,大体观察肿瘤形成情况,1个月后处死动物取注射处局部皮肤、心脏、肝脏、肠道和肺组织,行H-E染色观察病理学改变。全身毒性实验2组：实验组（D组）,裸鼠尾静脉注射大鼠BMSC-Ns（5×106/0.2ml）;阴性对照组（E组）,注射等体积生理盐水。注射后即刻观察动物临床反应,以后每天观察1次,连续观察15天;将动物处死,采集血液标本行血液学检查。结果 BMSC-Ns接种于裸鼠肋部皮下1个月后未见接种部位肿瘤形成,局部皮肤、心脏、肝脏、肠道和肺组织病理学检查未见异常;尾静脉注射BMSC-Ns后动物一般情况无异常,至第15天裸鼠全部成活,血常规结果无异常。结论皮下接种或者尾静脉移植CSF诱导的BMSC-Ns对裸鼠是安全的,无致瘤性和全身毒性。     

基质金属蛋白酶2和金属蛋白酶组织抑制因子2在乙酰肝素酶ASODN转染的裸鼠A375细胞移植瘤中的表达

目的 探讨基质金属蛋白酶2(MMP2)和金属蛋白酶组织抑制因子2(TIMP2)在乙酰肝素酶反义寡核苷酸(ASODN)转染的裸鼠恶性黑素瘤移植瘤中的表达.方法 分空白组、无关序列(N-ODN)组、10 μmol/L ASODN组、20 μmol/L ASODN组和30μmol/L ASODN组5组,以脂质体包埋分别转染人恶性黑素瘤细胞株A375,后接种于裸鼠皮下,待成瘤后采用免疫组化SP法检测移植瘤中MMP2和TIMP2蛋白表达的变化.结果 各ASODN组裸鼠移植瘤中MMP2和TIMP2蛋白表达水平均较对照组、N-ODN组显著下调(P＜0.05);ASODN3个浓度组(10、20、30 μmol/L)相比,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 乙酰肝素酶ASODN对裸鼠体内恶性黑素瘤移植瘤中的MMP2和TIMP2蛋白的表达有显著抑制效应.     

HINT1对人黑素瘤A375细胞裸鼠皮下异种移植瘤模型肿瘤生长及凋亡的影响

目的 探讨组氨酸三聚体核苷结合蛋白1（HINT1）对人黑素瘤A375细胞裸鼠皮下异种移植瘤模型肿瘤生长及凋亡的影响。方法 三组裸鼠随机皮下接种HINT1-A375、neo-A375及未转染的A375细胞,观察各组移植瘤的生长情况,计算成瘤率。组织病理切片观察移植瘤组织形态学改变,并应用TUNEL法检测移植瘤组织中细胞凋亡情况。结果 三组裸鼠皮下异种移植瘤成瘤率均为100%。HINT1组移植瘤生长速度慢,接种后18 d移植瘤生长速度显著低于neo组及A375细胞组（P < 0.01）。HINT1组、neo组及A375细胞组肿瘤重量分别为（0.04 ± 0.00） g、（0.23 ± 0.00） g、（0.29 ± 0.03） g;肿瘤体积分别为（0.06 ± 0.04） cm3、（0.34 ± 0.15） cm3、（0.43 ± 0.19） cm3。HINT1组肿瘤重量及体积均显著低于neo组及A375细胞组（P值均 < 0.01）。组织病理结果显示,与neo组及A375细胞组相比,HINT1组肿瘤团块较小,细胞异形小,病理性核分裂象少见,瘤团内未见大片坏死灶。HINT1组中平均凋亡细胞百分比为12.87% ± 1.18%,显著高于neo组（3.22% ± 0.49%）及A375细胞组（3.00% ± 0.53%）（P值均 < 0.01）。结论 高表达HINT1可显著抑制A375细胞裸鼠皮下异种移植瘤模型肿瘤的生长,促进其凋亡,提示HINT1基因可能是人黑素瘤的抑癌基因之一。     

骨桥蛋白在黑素瘤中的表达

目的研究骨桥蛋白(OPN)的表达与黑素瘤浸润、转移的关系。方法采用免疫组化SP法检测OPN在黑素瘤(30例)、黑素细胞痣(30例)、正常皮肤组织(15例)以及在黑素瘤A375细胞株和不同浓度乙酰肝素酶反义寡核苷酸转染的裸鼠黑素瘤移植瘤中的表达。结果 OPN在黑素瘤、黑素细胞痣及正常皮肤组织中阳性表达率分别为86.67%(26/30),13.33%(4/30)和0(0/15),黑素瘤组与黑素细胞痣组及正常皮肤组OPN的阳性表达率比较差异有统计学意义(P=0.000)。3种不同浓度的乙酰肝素酶反义寡核苷酸在转染的裸鼠体内恶性黑素瘤移植瘤中表达表现出不同程度的抑制作用,30μmol/L实验组的抑制作用最强。OPN在人黑素瘤A375细胞株中呈强阳性表达。结论 OPN在黑素瘤中的表达明显高于其在黑素细胞痣和正常皮肤中的表达;乙酰肝素酶反义寡核苷酸对裸鼠体内黑素瘤移植瘤中OPN的表达有显著抑制作用;OPN在A375细胞株中呈强阳性表达。     

阿维A联合克拉霉素对裸鼠移植瘤生长及肿瘤血管生成的影响

目的 观察阿维A联合克拉霉素对人口腔表皮样癌裸鼠移植瘤生长的影响,探讨药物对肿瘤抑制的作用机制。 方法 用人口腔表皮样癌细胞建立裸鼠皮下移植瘤模型。采用随机双盲设计,将31只裸鼠随机分6组,对照组、安慰剂组、阿维A组、克拉霉素组、阿维A + 安慰剂组、阿维A + 克拉霉素组。对照组6只,余各组均为5只裸鼠。各组治疗3周后测量移植瘤体积和重量,用RT-PCR检测血管内皮生长因子（VEGF）和核转录因子κB（NF-κB）mRNA的表达。对移植瘤体进行病理学分析,采用免疫组化染色检测各组肿瘤中VEGF、细胞增殖指数Ki-67的表达及其微血管密度（MVD）。采用SPSS 19.0软件进行统计分析,计量资料的均数比较采用方差分析,组间两两比较采用LSD检验。 结果 阿维A + 克拉霉素组瘤体体积、瘤体重量均低于其他5组,差异有统计学意义（均P < 0.05）。实时荧光定量PCR检测,阿维A + 克拉霉素组VEGF、NF-κB mRNA的表达均低于对照组、克拉霉素组、阿维A组,差异均有统计学意义（均P < 0.05）。免疫组化检测,与对照组、克拉霉素组、阿维A组相比,阿维A + 克拉霉素组VEGF表达率均下调（均P < 0.01）,着色浅;MVD显著降低（均P < 0.01）,微血管分布较稀疏;Ki-67阳性指数均降低（均P < 0.05）,肿瘤细胞增殖减少。 结论 阿维A联合克拉霉素能协同抑制人口腔表皮样癌裸鼠移植瘤的生长,并下调VEGF表达,抑制血管生成和肿瘤增殖。     

白黎芦醇对人表皮样癌细胞端粒酶活性及其增殖、凋亡的影响

目的观察白藜芦醇诱导人表皮样癌A431细胞的凋亡情况,并探讨其对端粒酶活性和hTERT基因蛋白表达的影响。方法以不同浓度的白藜芦醇处理A431细胞,显微镜观察细胞的形态学改变;MTT法检测细胞增殖情况;采用TRAP-PCR-ELISA法测定A431细胞的端粒酶活性;蛋白质印迹法检测A431细胞hTERT蛋白水平。结果在白藜芦醇诱导A431细胞凋亡的过程中对端粒酶活性有显著抑制作用,且随着其浓度增加而抑制作用越强;白藜芦醇能降低A431细胞hTERT蛋白的表达,且呈浓度依赖性。结论白藜芦醇能下调hTERT蛋白表达,抑制A431细胞端粒酶活性,这可能是白藜芦醇抑制A431细胞增殖的重要机制之一。