结核分支杆菌早期分泌靶抗原6在结核病诊断中的应用

结核病是一种严重危害人类健康的慢性呼吸道传染病,在科技高度发展的今天,结核病依然是一个全球性的难题。近年来,全球特别是发展中国家的发病率呈现上升趋势,我国结核病的发病率近年来也在上升,而且发病者年轻化。据WHO估计,全球每年新增病例达800～1000万,约300万死亡。     

近红外荧光标记-免疫磁珠偶联法定量检测结核分枝杆菌ESAT-6蛋白

目的建立定量检测结核分枝杆菌早期分泌抗原靶-6(ESAT-6)的近红外荧光标记-免疫磁珠偶联法。方法以近红外荧光染料(Dylight 800)标记靶向ESAT-6的单克隆抗体,靶向ESAT-6的多克隆抗体包被在纳米磁珠表面。采用双抗体夹心法,磁性分离结合物和游离物,采用便携式高灵敏度低噪声激发式荧光检测仪检测磁性结合物的荧光强度,从而检测待检样品中ESAT-6水平。结果该方法的检测线性范围为2.4~750.0ng/mL,最低检测限为0.48ng/mL;10ng/mL水平加样回收率为96%,50ng/mL水平加样回收率为95%;批间变异系数(CV)为5.8%,批内CV为4.3%。该方法检测胸腔积液标本ESAT-6的特异度为80%,灵敏度为95%。结论该方法检测ESAT-6的线性范围广、灵敏度高、稳定性好。     

结核分支杆菌ESAT-6疫苗研究进展

结核分支杆菌引起的结核病是一种人兽共患的慢性传染病,当前唯一可用的疫苗———卡介苗(BCG)免疫保护效果极不稳定,因此开发安全、有效的新型疫苗势在必行。该文拟对结核分支杆菌ESAT-6亚单位疫苗、DNA疫苗、重组BCG疫苗、重组St疫苗、重组MVA疫苗的构建及其免疫机制等方面的研究进展作一综述。     

结核分枝杆菌蛋白抗原诊断试剂的临床价值研究

目的研究和评估基于结核分枝杆菌蛋白抗原(TB-SA)研制的结核诊断试剂盒在结核病诊断中的应用价值。方法运用胶体金法分别检测结核组、非结核其他呼吸系统疾病组、健康对照组血清TB-SA结核抗体。结果 TB-SA结核抗体检测结核的灵敏度为72.2%,特异度95.8%,检测结核病患者阳性率(72.2%)明显高于涂片法(44.9%)和培养法(37.1%),差异均有统计学意义(P0.05)。结论 TB-SA抗体检测具有较好的敏感性和特异性,对结核病诊断和鉴别诊断有较高的临床应用价值。     

结核分枝杆菌H37Rv株菌体抗原及分泌抗原分析

目的 对比分析人型结核枝杆菌（结核菌）H37Rv株固体培养菌、液体培养菌及分泌蛋白中抗原成分的差异，寻找结核菌的主要免疫抗原。方法 应用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术、免疫印迹技术及单克隆抗体技术分析人型结核菌H37Rv株固体培养、液体培养及其分泌蛋白中的抗原成分。结果 固体培养菌与液体培养菌具有基本一致的多肽抗原成分，其主要成分分子量为79000、64000、54000、50000、28000～38000、23000等，而分泌蛋白差异稍大，其主要成分分子量为66000、63000～65000、55000、42000、32000～34000、24000、16000等。单克隆抗体进一步证明66000、55000、16000为分泌蛋白。多克隆抗体免疫印迹分析表明，菌体主要免疫原有79000、54000、38000～50000、28000蛋白成分，而分泌蛋白主要免疫原为分子量66000、55000～64000、30000～34000、24000、16000成分。结论 人型结核菌H37Rv株菌体蛋白和分泌蛋白具有不同的主要免疫原，将有助于认识H37Rv株的总体蛋白组成及寻找与结核病相关的特异性抗原成分。     

ESAT-6 INF-γ和ADA在结核性脑膜炎早期诊断中的应用

目的：探讨早期分泌性靶抗原-6（ESAT-6）、干扰素-γ（INF-γ）和腺苷脱氨酶（ADA）在结核性脑膜炎患儿早期诊断中的应用价值。方法采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测ESAT-6和INF-γ水平，采用酶动力学终点法检测ADA水平，并将各组结果进行对比分析。结果结核性脑膜炎患儿急性期ESAT-6、INF-γ和ADA浓度均显著高于其恢复期水平和对照组（P<0.05）。重症组ESAT-6、INF-γ和ADA浓度均显著高于轻症组，轻症组明显高于对照组（P<0.05）。单项检测阳性率较低，三项联合检测能提高阳性检出率。结论 ESAT-6、INF-γ和ADA对结核性脑膜炎患儿早期诊断具有重要的临床价值，三者联合检测能减少漏诊。     

结核分泌蛋白MPT64用于101例结核病快速诊断的研究

目的：比较痰菌检查、结明试验、PPD实验和MPT64蛋白抗体检测，评价MPT64蛋白在结核病血清学诊断中的价值。方法：对101例结核病患者进行分析，同时进行痰菌检查、结明试验、PPD实验和MPT64蛋白抗体检测，对结果进行比较对照分析。结果：痰检阳性率20．8％0，结明试验45．5%，PPD试验77．2％，PPD抗体79．2%，MPT64抗体74．2％；在肺结核患者，MPT64抗体与PPD试验一致率为75．6％；在胸膜炎患者，MPT抗体检测特异性高达86．7％。结论：PPD试验仍是目前结核病早期诊断与鉴别诊断的重要方法，分泌蛋白MPT64可作为新型结核病快速诊断试剂的组分。     

早期分泌性抗原靶6、脂阿拉伯甘露聚糖诊断结核性脑膜炎的价值

目的探讨早期分泌性抗原靶6(Esat6)、脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)检测在结核性脑膜炎诊断中的应用价值。方法采用酶联免疫吸附试验(Elisa法)检测结核性脑膜炎患者(结脑组,20例)、非结核性脑膜炎患者(非结脑组,20例)和对照组(以头痛为主诉者,20例)脑脊液及血清中Esat6和LAM含量,并进行比较。结果结脑组患者脑脊液、血清中的Esat6及LAM含量均明显高于非结脑组和对照组(均P<0.05);非结脑组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结核性脑膜炎患者脑脊液及血清中Esat6与LAM水平存在显著相关性(r=0.961,r=0.894,均P<0.05)。结论脑脊液、血清中Esat6和LAM检测可作为结核性脑膜炎的辅助诊断指标。更多还原     

两种常见非结核分枝杆菌与结核分枝杆菌基因同源抗原、B细胞抗原表位和抗体交叉反应研究

目的 探讨我国常见两种非结核分枝杆菌与结核分枝杆菌蛋白抗原的交叉免疫反应状况，为以非结核分枝杆菌研制新型结核疫苗提供参考依据。方法 平均核酸一致性计算器计算胞内分枝杆菌、脓肿分枝杆菌和结核分枝杆菌的基因组同源性，OrthorFinder软件分析3种菌的同源基因，与结核分枝杆菌B细胞抗原表位编码基因进行比对。分别制备3种菌的灭活菌体抗原和全菌蛋白抗原，对新西兰大白兔进行皮下注射免疫。采用间接酶联免疫吸附试验技术，分别检测3种免疫兔血清抗体Ig G水平及交叉免疫的血清抗体Ig G水平。结果 脓肿分枝杆菌、胞内分枝杆菌与结核分枝杆菌同源基因分别为2 350个和2 740个，其同源基因中分别有479个和521个富含B细胞抗原表位。结核分枝杆菌、胞内分枝杆菌和脓肿分枝杆菌的蛋白抗原均能刺激兔产生较高水平的抗体滴度，分别达到1∶320 000、1∶160 000和1∶80 000。胞内分枝杆菌和脓肿分枝杆菌免疫兔血清均可与结核分枝杆菌抗原产生高水平的交叉反应，抗体滴度分别达到1∶40 000和1∶80 000。结论 胞内分枝杆菌、脓肿分枝杆菌与结核分枝杆菌之间均存在高水平的抗体交叉免疫反应，提示上...     

基于结核分枝杆菌分泌抗原的新型结核诊断试剂研究

目的 基于克隆表达多个结核分枝杆菌分泌抗原,研制新型结核酶联抗体诊断试剂,并与国家批准上市的同类试剂进行比较.方法 克隆表达结核分枝杆菌分泌抗原38kD,CFP10,ESAT6,并将其串联实现嵌合抗原表达,研制间接酶联免疫结核抗体诊断试剂,并与市售同类产品同时检测临床结核病患者结核菌阳性或阴性血清样品.结果 47例结核病样品中菌阳35例,菌阴12例,研制的试剂菌阳检出率91.4%(32/35)、菌阴66.7%(8/12) ,而市场同类产品菌阳检出率88.6%(31/35)、菌阴58.3%(7/12).研制的试剂与市场同类产品对45例献血员检测特异度分别为95.6%,91.1%.结论 结核分枝杆菌嵌合分泌抗原研制的结核酶联抗体诊断试剂具有较好的敏感度和特异度,可用于临床结核病的辅助诊断.     

结核分枝杆菌耐药机制和治疗的最新研究进展

结核病（tuberculosis,TB）是由结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis, MTB）引起的慢性传染病。近年来,结核分枝杆菌的耐药性变异尤为突出,耐药结核病已成为一个不可忽视的全球公共卫生问题。一直以来,国内外诸多研究聚焦于耐药结核发病机制及治疗方法的研究,并且不断形成新的机制理论和治疗方案。该文着重于对MTB耐药机制及治疗的最新进展进行综述,从而为耐药结核的新药研制及制定更合理的治疗方案提供参考。     

不同佐剂在ESAT-6亚单位结核基因疫苗中的研究

目的 结核分支杆菌ESAT-6抗原是在人或动物结核病早期细胞介导免疫的主要作用靶点，本研究旨在评价不同佐剂在ESAT-6作为试验性结核疫苗方向的潜能。方法 将溴化二甲基双十八烷基铵（dimethyl dioctadecyl ammonium bromide，DDA）和单磷酰脂质体A（monophosphoryl lipid A，MPL）联合应用作为佐剂，用酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）分析干扰素γ（IFN-γ）和免疫球蛋白G（IgG）含量，并比较2种佐剂的免疫效果。结果 将ESAT-6为基础的实验性疫苗与含有已知的保护性抗原成分的抗原85B复合体（antigen 85B，Ag85B）和短期培养滤液（ST-CF）等的疫苗进行平行比较，以DDA为佐剂免疫小鼠可以对Ag85B和ST-CF产生强的保护性免疫应答，而DDA佐剂用于ESAT-6时则作用轻微，未见细菌负荷的明显下降。采用DDA和MPL联合应用效果比单用DDA或单用MPL效果显著（P〈0．05）。结论 DDA和MPL的联合应用使得ESAT-6疫苗的接种成为可能，作为诊断性工具鉴别结核感染和接种免疫等方面具有强大潜能，为结核控制和预防提出了新的思路。     

肝素结合血凝素蛋白在结核病诊断中的应用研究

目的制备天然和重组肝素结合血凝素（HBHA）蛋白,探讨其在结核杆菌感染诊断中的应用价值。方法用聚合酶链反应从结核分枝杆菌H37Rv基因组扩增出HBHA基因片段。结核分枝杆菌HBHA基因克隆至PQE80L克隆表达载体中,序列测定正确后,将其转化到大肠埃希菌BL-21中,再经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导表达HBHA蛋白,表达蛋白经SDS-PAGE及免疫印迹法分析后,亲和层析法纯化蛋白,并以此免疫新西兰兔制备多克隆抗体。同时将7H9液体培养基中的卡介苗（BCG）培养至稳定生长期,用CL-6B层析柱分离纯化HBHA蛋白。观察抗体对不同浓度天然HBHA和重组HBHA诱导BCG聚集效应的影响。结果所得天然和重组HBHA蛋白均有诱导BCG聚集的作用,并均可被多克隆抗体抑制。结论成功获得天然HBHA和重组HBHA蛋白;证实了两者均具有促进BCG聚集的功能,并可被由重组HBHA诱导产生的多克隆抗体所抑制。从而为进一步研究HBHA的临床诊断价值提供了实验依据。     

结核病免疫学实验室检测技术新进展

每年有数百万人罹患结核病,早期诊断和治疗可以避免大量患者死亡。当前结核病的诊断方法存在许多局限性。对于所有形式的结核病,即肺结核、肺外结核、结核病-艾滋病联合感染和潜伏结核感染等,仍然缺乏可靠和准确的快速诊断技术。随着基础免疫学的发展和多学科诊断技术的交融,具有简单、快速和低成本等优势的结核病免疫学实验室检测技术不断出现。该文主要回顾近几年国内外结核病免疫学实验室检测新技术,包括以结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)为代表的体外免疫检测技术、重组蛋白体内皮试试验为代表的体内免疫检测技术以及采用多学科交融手段检测结核分枝杆菌特异性抗原(TBAg)的体液免疫检测技术等。     

结核抗体蛋白芯片法对老年肺结核的诊断价值研究

目的探讨结核抗体蛋白芯片法对老年肺结核的诊断价值。方法选择93例肺结核及77例肺部非特异性感染老年患者,均行痰涂片抗酸染色试验,均采用结核分枝杆菌IgG抗体检测试剂盒(蛋白芯片)检测抗结核分枝杆菌脂阿拉伯甘露醇(LAM)、基因工程重组的16 kD和38 kD的IgG抗体,计算两种方法诊断结核分枝杆菌感染的敏感性及特异性;并分别构建受试者工作特征曲线,通过比较曲线下面积(area under the curve,AUC)评价其诊断效能。结果蛋白芯片法和痰涂片抗酸染色试验诊断结核分枝杆菌感染的敏感性分别为68.82%和33.33%,特异性分别为100.00%和97.40%;AUC分别为0.84和0.65,提示蛋白芯片法的诊断效能显著高于痰涂片抗酸染色法,差异有统计学意义(P0.01)。结论蛋白芯片法检测抗结核分枝杆菌LAM、16 kD和38 kD抗体快捷简便,对诊断老年肺结核有较高的实用价值。     

结核分枝杆菌耐利福平诊断试验的系统评价

目的采用Meta分析的方法评价LiPA和phage-based assays法检测结核分枝杆菌耐利祸平诊断试验的准确性：方法通过检索PubMed、EMbase、CBMWeb、CSJD、CJFD数据库和其他方式广泛收集文献：根据QUADAS质量评价标准评价纳入文献的质量，用Meta-Disc软件对其敏感度、特异度、阳性似然比、阴性似然比等进行合并分析，并进行异质性检验，对无异质性的研究绘制SROC曲线。结果最终纳入42篇文献：（1）LiPA法检测结核分支杆菌耐利福平时，7个研究以BACTEC460法为参考，合并敏感度0.98，合并特异度0.98，SROC（AUC）=0.9924；6个研究以proportion法为参考，合并敏感度0.97，合并特异度1.00，SROC（AUC）=0.9961；3个研究以BACTEC460、Proportion法作为参考，合斤敏感度0.92，合并特异度0.98，SROC（AUC）=0.9842；（2）噬菌体扩增法（商用）检测结核分枝杆菌耐利福平的7个研究，以BACTEC460、Proportion法为参考，合并敏感度0.95，合并特异度0.95，SROC（AUC）=0.9842，（3）噬菌体扩增法（内部的）检测结核分支杆菌耐利福平的7个研究，以BACTEC460、比例法、绝对浓度法和电阻率法为参考，其合并敏感度0.98，合并特异度0.98，SROC（AUC）=0.9949；（4）光素酶噬菌体报告技术检测结核分枝杆菌耐利福平的7个研究，以BACTEC460、比例法、绝对浓度法为参考，其合并敏感度0.98，合并特异度0.98，SROC（AUC）=0.9788。结论现有研究证实：（1）采用分离培养时，噬菌体检测法存检洲结核分枝杆菌耐利福平方面具有较高的敏感度和特异度，在提高耐多药结核病诊断准确性方面具有潜力、（2）LiPA任检测结俊分枝杆菌耐利福平方面也具有较高的敏感度和特异度，但直接应用临床标本检测时敏感度似乎稍有下降一上述结果尚需更多设计严谨、科学的临床试验进一步证实。     

四川德阳地区结核分枝杆菌耐药基因突变位点的分布特点及基因型耐药的分析

目的探讨四川德阳地区结核分枝杆菌耐药基因突变位点的分布特点及基因型耐药的分析。方法收集在2010年2月-2013年3月检出的257例肺结核病患者结核分枝杆菌DNA阳性的痰液标本,采用聚合酶链式反应（PCR）和反向点杂交（RDB）相结合的基因芯片技术对结核分枝杆菌耐药基因突变位点进行检测和分析。结果 257例肺结核患者中检测出49例存在结核分枝杆菌耐药基因位点突变,其中发生katG 315、rpsL43、embB 306和rpoB 531丝氨酸（S531L）位点突变的分别为30例（11.67%）、18例（7.00%）、11例（4.28%）和10例（3.89%）。234例初治肺结核患者对异烟肼、利福平、乙胺丁醇及链霉素的基因型耐药率分别为9.83%、4.27%、3.42%和5.13%,耐多药率为2.99%;23例复治肺结核患者对上述药物的基因型耐药率分别为52.17%、26.09%、13.04%和43.48%,耐多药率为13.04%。初治患者的基因型耐药率及耐多药率均明显低于复治患者。结论四川德阳地区结核分枝杆菌常见耐药基因突变位点分别为katG 315、rpsL 43、embB 306和rpoB 531丝氨酸（S531L）突变位点;肺结核初治患者的基因型耐药率及耐多药率均明显低于复治患者;该地区肺结核的耐多药率相对较低。     

Xpert MTB/RIF检测痰标本结核分枝杆菌与利福平耐受性的临床应用研究

目的分析Xpert MTB/RIF方法用于临床快速检测结核分枝杆菌(MTB)与利福平耐受性的临床意义。方法收集2015年1-12月在惠州市结核病防治研究所及5个县区医院结核科就诊的肺结核患者痰标本552例,进行涂片镜检、Xpert MTB/RIF核酸检测和改良罗氏培养,并对培养阳性者进行药敏实验。评价各种方法 MTB检测灵敏度与特异度,对比传统药敏方法和Xpert MTB/RIF检测利福平耐药性的结果并分析。结果 Xpert MTB/RIF与改良罗氏培养法对MTB检测结果相比,敏感度95.3%、特异度93.1%;耐药性对比结果中,所有阳性标本中利福平耐药的敏感度82.1%,特异度97.8%;Xpert MTB/RIF检测MTB分级与改良罗氏培养分级一致性分析中,kappa=0.688,提示两者结果具有良好的一致性。结论 Xpert MTB/RIF可用于临床早期快速检测结核分枝杆菌与利福平耐药检测的筛查,有利于临床快速决策。