胃癌组织TGF-β对miR-200c/141表达影响的研究

目的 TGF-β能够诱导肿瘤细胞发生上皮间质转化,促进肿瘤发生侵袭转移.miR-200c/141能够抑制上皮间质转化的发生.但TGF-β在胃癌中的表达情况及其对miR-200c/141表达影响尚不清楚.本研究旨在探讨胃癌组织中TGF-β表达水平与胃癌患者临床病理特征的关系,及对miR-200c和miR-141表达影响.方法 收集河北医科大学第四医院普外科2012-05-01-2013-01-01胃癌根治性手术切除标本64例,采用qRT-PCR技术检测TGF-β、miR-200c及miR-141在胃癌组织和配对癌旁非癌组织中的表达.分析TGF-β表达水平与胃癌患者临床病理特征的关系及与miR-200c和miR-141水平的相关性.TGF-β处理胃癌细胞株SGC-7901,观察其对miR-200c和miR-141表达的影响.结果 TGF-β在胃癌组织中的表达上调率为66.67%,其在胃癌组织中的表达显著高于癌旁非癌组织[Median,Interquartile Range(2.50,2.43:0.84,0.42);P=0.005].miR-200a、miR-200b、miR-429、miR-200c和miR-141在胃癌组织中的表达下调率分别为53.13%、48.44%、50.00%、78.13%和76.19.miR-200c和miR-141在胃癌组织中的表达显著低于癌旁非癌组织,均P<0.001.miR-200c和miR-141的表达存在正相关关系,r=0.840,P<0.001.TGF-β表达水平与miR-200c和miR-141的表达水平呈显著负相关关系,均P<0.001.TGF-β能够诱导胃癌细胞株SGC-7901中miR-200c和miR-141表达显著降低.TGF-β的表达水平与淋巴结转移情况及脉管瘤栓情况存在显著相关性,与患者性别、年龄、组织学分级、TNM分期、肿瘤侵袭深度和肿瘤远处转移情况无相关性,均P>0.05.     

胃癌ERCC1基因甲基化与蛋白表达的关系及其意义

  目的  检测胃癌组织、相应癌旁组织及正常胃组织中ERCC1蛋白表达情况，探讨ERCC1基因启动子CpG岛甲基化与蛋白表达的关系及其意义。  方法  采用甲基化特异性PCR技术，检测30例胃癌组织、相应癌旁组织、10例正常胃组织中ERCC1基因启动子CpG岛甲基化状态。采用免疫组织化学SP法检测胃癌组织、相应癌旁组织及正常胃组织中ERCC1蛋白的表达情况。  结果  胃癌组织中ERCC1基因启动子CpG岛完全甲基化率为46.7%（14/30），部分甲基化率为30.0%（9/30），总甲基化率为76.7%（23/30），显著高于相应癌旁组织中该基因的甲基化率13.3%（4/30），差异有统计学意义（P < 0.05）。10例正常胃组织中未检测到该基因的甲基化（0/10）。30例胃癌组织中ERCC1蛋白阴性表达率为70.0%（21/30），显著高于相应癌旁组织中蛋白阴性表达率33.3%（10/30），差异有统计学意义。10例正常胃组织中ERCC1蛋白均阳性表达。胃癌组织中发生ERCC1基因启动子CpG岛甲基化其ERCC1蛋白表达率明显低于胃癌组织中未发生ERCC1基因启动子CpG岛甲基化其ERCC1蛋白表达率。  结论  ERCC1基因启动子CpG岛甲基化与其蛋白表达呈负相关，ERCC1基因启动子CpG岛甲基化可能是导致其蛋白表达下调的主要原因之一。      

胃癌患者血清miR-26a/b的表达水平及诊断价值

  目的  探讨胃癌患者血清miR-26a/b诊断胃癌的价值及其与临床病理特征的关系。  方法  采用qRT-PCR法检测121例胃癌患者和116例正常人(对照组)血清miR-26a/b的表达量,分析miR-26a/b与胃癌临床病理特征的关系,构建受试者工作特征曲线(ROC),分析miR-26a/b诊断胃癌的价值。  结果  胃癌患者血清miR-26a和miR-26b相对表达水平均低于对照组(1.60±1.02 vs.5.35±0.44;1.44±0.71 vs.5.35±0.71;P < 0.05),miR-26a/b的表达水平与患者TNM分期相关,且miR-26a的相对含量还与浸润深度、有无淋巴结转移相关(P < 0.05)、性别、分化程度、组织学类型等其他临床病理特征无显著相关(P>0.05);miR-26a的ROC曲线下面积为0.828(95% CI:0.776~0.881),灵敏度为73.3%,特异度为81.0%;miR-26b的ROC曲线下面积为0.853(95%CI:0.801~0.906),灵敏度为68.1%,特异度为99.2%。  结论  miR-26a/b在胃癌患者血清中表达显著降低,并且其表达水平与胃癌的临床分期、浸润深度及有无淋巴结转移相关,有着较高的诊断价值。      

miR-200c在胃癌中的表达水平与患者临床病理特征的关系

目的:探讨miR-200c在胃癌组织中的表达水平与胃癌患者临床病理特征及无病生存期(diease free survial,DFS)的关系.方法:收集河北医科大学第四医院普外科2012年5月至2013年1月64例胃癌手术切除的标本及相关临床资料,采用实时荧光定量PCR技术检测miR-200c在胃癌组织和配对癌旁非癌组织中的表达.回顾性分析miR-200c表达水平与胃癌患者的临床病理特征及DFS相关性.结果:胃癌组织中miR-200c的表达水平显著低于癌旁非癌组织(3.29vs5.91,P＜0.01).miR-200c的表达水平与肿瘤TNM分期、浸润深度、转移和脉管瘤栓呈显著负相关(均P＜0.01).miR-200c高表达组患者中位DFS明显长于低表达组患者(22.0 vs 13.5个月,P＜0.01),其表达水平与患者DFS呈正相关(P＜0.01).结论:miR-200c在胃癌组织中低表达,其表达水平与肿瘤TNM分期、肿瘤浸润深度和脉管瘤栓呈负相关,与DFS呈正相关,在胃癌的发生发展及预后中具有重要作用.     

MicroRNA-100在胃癌患者血清中的表达及临床意义

  目的  探讨MicroRNA-100（miR-100）在胃癌患者血清中的表达及临床意义。  方法  选择蚌埠医学院第一附属医院手术及随访资料完整的胃癌患者（40例）和健康对照者（40例）为研究对象,提取血清总miRNA,在建立了稳定、敏感的血清miR-100绝对定量检测方法（qRT-PCR）的基础上,检测胃癌和健康对照者血清中miR-100表达水平。分析胃癌和健康对照者血清中miR-100表达差异及血清中miR-100表达水平与胃癌临床病理参数的关系。  结果  胃癌患者血清中miR-100的表达水平为（2.78±1.92）fmol/L,显著高于健康对照者[（0.19±0.15）fmol/L,P < 0.01],同时miR-100的受试者工作特征曲线显示,血清miR-100对胃癌诊断具有良好的特异度和敏感度（曲线下面积0.985）;进一步分析发现:血清中miR-100的表达与性别、年龄、肿瘤直径大小、浸润深度、分化程度、淋巴结转移数量、TNM分期等无明显差异（P > 0.05）。  结论  血清miR-100的检测可能有助于胃癌的诊断。      

miR-141-3p在胃癌组织和患者血浆中的表达及其临床意义

目的:检测miR-141-3p在胃癌组织及患者血浆中的表达水平,探讨其表达水平与患者病理特征和预后的关系.方法:收集河北医科大学第四医院普外科2012年5月至2013年1月胃癌根治性手术切除的组织标本及术前外周静脉血标本44例,每例标本采集肿瘤组织(非坏死部分)和配对的癌旁组织.采用实时荧光定量PCR法检测miR-141-3p在胃癌组织、癌旁组织、血浆及健康志愿者血浆(25例)的表达情况,分析miR-141-3p的表达水平与胃癌患者DFS及临床病理特征的关系.结果:miR-141-3p在胃癌组织中的表达明显降低,在血浆中的表达水平明显升高(均P＜0.01).在胃癌组织中miR-141-3p高表达组DFS明显高于低表达组(21.8 vs 10.3个月,P＜0.01),且miR-141-3p在癌组织中的表达水平与患者DFS呈正相关(P＜0.01).在血浆中miR-141-3p的高表达组DFS明显低于低表达组(9.1 vs 21.0个月,P＜0.01),且miR-141-3p血浆中的表达水平与患者DFS呈负相关(P＜0.01).miR-141-3p在胃癌患者血浆中表达水平与肿瘤TNM分期、淋巴结转移及脉管瘤栓相关(P＜0.01).结论:miR-141-3p在胃癌组织中表达显著降低且与患者预后呈正相关,其在患者血浆中表达显著升高且与患者预后呈负相关,表明miR-141-3p可作为胃癌早诊早治及患者临床预后判定的潜在标志物.     

乳腺癌患者血浆中三种microRNA的表达水平分析

  目的  分析乳腺癌患者血浆、血清中三种microRNA（miRNA）的表达水平,探讨血浆、血清中miRNA表达水平之间关系以及血浆中miRNA作为乳腺癌肿瘤标志物的可行性。  方法  于2010年12月至2011年3月间收集符合入选条件的31例患者的血液标本,分离血浆、血清,提取其中miRNA,通过定量PCR,检测其中miR-31、miR-155及miR-200c表达水平。  结果  三种miRNA在血清、血浆中表达水平基本相同;乳腺癌患者血浆中的miR-155较非乳腺癌表达上调,miR-200c表达下调;两组间miR-31表达差异无统计学意义;miR-155的表达与肿瘤的大小、淋巴结转移、临床病理分期、ER、PR表达状态有关;miR-200c的表达与肿瘤的大小、淋巴结转移、临床病理分期、ER表达状态有关,与PR的表达状态无关;miR-31的表达与肿瘤的大小有关,与淋巴结转移、临床病理分期、ER、PR表达状态无关。  结论  乳腺癌患者血清、血浆中三种miRNA的表达水平相同;血浆中三种miRNA的表达与乳腺癌的临床病理特征密切相关,因此血浆中miRNA有望成为乳腺癌新一代的肿瘤标志物。      

miR-17-92基因簇在骨肉瘤中的表达及其临床意义

  目的  探讨人骨肉瘤组织和邻近正常骨组织中miR-17-92基因簇的表达情况及其临床意义。  方法  运用Q-PCR法检测63例骨肉瘤组织及邻近部位正常骨组织中miR-17-92基因簇的表达水平, 并分析miR-17-92基因簇表达与患者临床病理特征及预后的关系。  结果  miR-17-92在所有组织中均有表达, 且在肿瘤组织中表达明显高于在正常组织中的表达(P < 0.05), 另外, miR-17-92基因簇高表达患者预后更差, 差异有统计学意义(P=0.027)。  结论  miR-17-92基因簇在骨肉瘤组织和邻近正常骨组织中表达存在差异性, 可能在骨肉瘤发生、发展过程中起重要作用, 有望成为骨肉瘤患者预后一种新的指标。      

miR-30通过调节CD90表达抑制肝细胞肝癌

  目的  miRNA能通过转录后调节靶基因的表达量,并在致癌过程中发挥抑癌或促癌作用。研究发现miR-30家族在人类肿瘤中起着重要作用,并参与维持干细胞特性的上皮细胞间质化过程,本研究主要识别miR-30家族与肝细胞肝癌的关系。  方法  应用qRT-PCR实验方法检测93例肝细胞肝癌患者癌组织和癌旁正常组织中miR-30c,miR-30b和miR-30e表达水平,另对121例肝细胞肝癌患者癌组织进行miR-30家族的表达及CD90免疫组织化学表达检测,分析miR-30家族与CD90在肝细胞肝癌中的相关性。  结果  本研究发现miR-30c(P < 0.001)、miR-30b(P=0.004)和miR-30e(P < 0.001)与癌旁正常组织相比,癌组织中表达显著下调。CD90蛋白在癌组织中的表达水平显著高于癌旁正常组织(P=0.007)。MiR-30c(P=0.032)和miR-30e(P=0.015)在CD90阴性表达的患者中表达水平显著高于CD90阳性表达的患者。  结论  miR-30家族在肝细胞肝癌中可作为抑癌miRNA,并通过调节CD90蛋白来发挥这一作用。      

血清外泌体miR-148a联合miR-106a检测用于胃癌筛查的研究探讨

  目的  寻找合适的外泌体miRNA作为肿瘤生物标志物，辅助临床进行胃癌筛查。  方法  将miR-148a及miR-106a作为潜在标志物，研究两种miRNA在癌组织及癌旁组织表达的差异性。选取2017年9月至2018年9月在福建省立医院诊治的初诊胃癌术后标本共37对（胃癌组织及癌旁组织）进行组织学miRNA检测。选取初诊胃癌患者83例为胃癌组，良性病变的患者78例为对照组，全部进行血清外泌体miRNA检测。  结果  与癌旁组织相比，癌组织中miR-148a表达水平降低，miR-106a表达水平升高，联合检测2-△△CP[△CP=CP_{（miR-148a）}-CP_{（miR-106a）}]值降低。与对照组相比，胃癌患者中血清外泌体miR-106a表达水平降低，联合检测2-△△CP值升高。血清外泌体联合检测2-△△CP值对胃癌组和对照组鉴别的曲线下面积[AUC为0.844（95%CI:0.782~0.905，P < 0.001）]，大于miR-148a及miR-106a单独检测，其cut-off值为0.315 3，敏感度为91，6%，特异度为64.1%。  结论  血清外泌体miR-148a联合miR-106a检测的2-△△CP值可以作为胃癌筛查的手段。      

Clinical significance and correlation of miR-200c and P-gp expression in gastric cancer and the effects on multidrug resistance

BackgroundPoor prognosis is common in gastric cancer patients due to multidrug resistance (MDR)-induced recurrence and metastasis. In the present study, we investigated the expression of microRNA (miR)-200c in gastric cancer tissues and cell lines and its relationship with the expression of the drug resistant gene ABCB1, which encodes P-glycoprotein (P-gp).MethodsThe basic characteristics of 102 patients with gastric cancer were reviewed. Real time-polymerase chain reaction (PCR), immunohistochemistry, and Western blot were employed to detect the expression levels of miR-200c and P-gp in gastric carcinoma tissues and cell lines. The correlation of miR-200c messenger RNA (mRNA) level with clinicopathological characteristics and P-gp protein expression were analyzed. SGC7901/vincristine (VCR) cells were transfected with miR-200c mimics or a specific small interfering RNA (siRNA) targeting the ABCB1 gene. The methyl thiazolyl tetrazolium (MTT) assay and flow cytometry were used to determine the role of miR-200c and ABCB1 on the viability and apoptosis of gastric carcinoma cell lines.ResultsThe level of miR-200c in carcinoma tissues was significantly lower than that in adjacent tissues, and the expression level of P-gp in carcinoma tissues was obviously higher than that in adjacent tissues (P<0.01, P=0.029). The expression levels of miR-200c and P-gp were associated with the malignant characteristics of gastric cancer, and patients with high expression of miR-200c or negative expression of P-gp had a better prognosis (P=0.006, P=0.022). MiR-200c negatively regulated the ABCB1 gene in gastric cancer cell lines. MiR-200c overexpression and ABCB1 down-regulation increased the sensitivity of SGC7901/VCR cells to VCR and reversed MDR by promoting cell apoptosis.ConclusionsThe expression level of miR-200c decreases in gastric carcinoma tissues and drug-resistant gastric cancer SGC7901/VCR cells. Overexpression of miR-200c may enhance the sensitivity of SGC7901/VCR cells to VCR by regulating the expression of P-gp.     

泛癌整合分析miR-200家族靶标肿瘤基因异质性的研究

目的 探讨miR-200家族对不同肿瘤预后的影响及其靶标基因调控异质性的机制。方法 从癌症基因图谱（the Cancer Genome Atlas,TCGA）下载泛癌研究项目（PanCanAtlas）中21种不同组织病理学恶性实体瘤样本的转录组数据和临床表型,并分析miR-200家族与肿瘤预后的关系。进一步选择生存风险评估结果互相矛盾的5种肿瘤进行miR-200家族靶标基因的WGCNA聚类分析。收集膀胱癌组织标本,采用免疫组织化学法和荧光定量PCR验证肿瘤组织中与miR-200家族表达显著相关的靶标基因的表达,并分析其对患者生存的影响。结果 miR-200家族高表达是膀胱癌和胃腺癌预后的保护因素（HR=0.55~0.68,P=0.0001~0.0340;HR=0.61~0.72,P=0.0055~0.0170）,是肝细胞癌和胸腺瘤预后的不利因素（HR=1.46~1.65,P=0.0061~0.0120;HR=7.44~13.04,P=0.0002~0.0210）;miR-141和miR-429对肾乳头状细胞癌生存的影响相反。基因聚类分析显示,miR-200家族靶标TIMP2基因表达可延长膀胱癌患者生存时间,miR-141负调控肾乳头状细胞癌EPHA2基因而延长患者生存时间。膀胱癌组织的TIMP2蛋白与miR-200家族表达呈负相关,miR-200家族高表达患者预后较好。结论 miR-200家族对不同肿瘤预后的影响存在异质性,可能是miR-200家族靶标分子在不同肿瘤的表达存在差异,导致miR-200家族调控生物学功能的异质性。     

miR-200c inhibits breast cancer proliferation by targeting KRAS

The microRNA, miR-200c, is involved in the tumorigenesis and progression of a variety of cancers. The purpose of this study was to investigate the expression, mechanism and prognostic roles of miR-200c in breast cancer. We found that miR-200c was downregulated in both breast cancer tissue and cell lines using quantitative real-time PCR (qRT-PCR). In situ hybridization (ISH) and microarrays showed that low miR-200c expression was associated with poor patient overall survival (OS) and disease free survival (DFS). We used luciferase reporter plasmids to find that miR-200c inhibited the AKT and ERK pathways by directly targeting KRAS. Repression of KRAS by miR-200c suppressed the proliferation and survival of breast cancer cells in vitro and in vivo. miR-200c also had an anti-tumor effect by negatively regulating KRAS in a xenograft mouse model. Our findings provide clues regarding the role of miR-200c as a tumor suppressor in breast cancer through the inhibition of KRAS translation both in vitro and in vivo. miR-200c could be a potential therapeutic target in breast cancer.     

Methylation-associated silencing of microRNA-34b/c in gastric cancer and its involvement in an epigenetic field defect

Altered expression of microRNA (miRNA) is strongly implicated in cancer, and recent studies have shown that the silencing of some miRNAs is associated with CpG island hypermethylation. To identify epigenetically silenced miRNAs in gastric cancer (GC), we screened for miRNAs induced by treatment with 5-aza-2'-deoxycytidine and 4-phenylbutyrate. We found that miR-34b and miR-34c are epigenetically silenced in GC and that their downregulation is associated with hypermethylation of the neighboring CpG island. Methylation of the miR-34b/c CpG island was frequently observed in GC cell lines (13/13, 100%) but not in normal gastric mucosa from Helicobacter pylori-negative healthy individuals. Transfection of a precursor of miR-34b and miR-34c into GC cells induced growth suppression and dramatically changed the gene expression profile. Methylation of miR-34b/c was found in a majority of primary GC specimens (83/118, 70%). Notably, analysis of non-cancerous gastric mucosae from GC patients (n = 109) and healthy individuals (n = 85) revealed that methylation levels are higher in gastric mucosae from patients with multiple GC than in mucosae from patients with single GC (27.3 versus 20.8%; P < 0.001) or mucosae from H. pylori-positive healthy individuals (27.3 versus 20.7%; P < 0.001). These results suggest that miR-34b and miR-34c are novel tumor suppressors frequently silenced by DNA methylation in GC, that methylation of miR-34b/c is involved in an epigenetic field defect and that the methylation might be a predictive marker of GC risk.     

miR-141和lncRNA-H19在宫颈癌中的表达及临床意义

目的:检测宫颈癌组织中微小RNA-141（miR-141）与长链非编码RNA-H19（lncRNA-H19）表达情况，并探究其临床意义。方法:选取2013年9月至2014年12月本院确诊收治的宫颈癌患者62例，取宫颈癌组织及癌旁组织；取血清检测肿瘤指标鳞状细胞癌抗原（SCCA）。利用实时定量PCR（qRT-PCR）法检测宫颈癌及癌旁组织中miR-141、lncRNA-H19表达情况，采用全自动化学发光免疫分析仪检测患者血清SCCA水平。结果:与癌旁组织相比，宫颈癌组织中miR-141和lncRNA-H19表达水平显著升高；宫颈癌组织中miR-141表达与患者临床分期、血清SCCA水平显著相关；宫颈癌组织中lncRNA-H19表达与患者有无淋巴结转移、血清SCCA水平显著相关；Pearson分析发现，宫颈癌组织中miR-141和lncRNA-H19表达水平显著正相关；miR-141低表达患者3年总生存率为37.50%，显著高于miR-141高表达者的8.00%；lncRNA-H19低表达患者3年总生存率为41.67%，显著高于lncRNA-H19高表达者的13.16%。结论:miR-141和lncRNA-H19在宫颈癌组织中的表达显著升高，与宫颈癌疾病严重程度有关，可能作为判断宫颈癌患者预后的生物指标。