中波紫外线诱导HaCaT细胞凋亡中TF-1细胞凋亡相关基因19的表达

目的：研究在中波紫外线(UVB）诱导正常永生化角质形成细胞(HaCaT）凋亡过程中，T细胞凋亡相关基因19(TFAR 19）的表达时相及位置，方法：使用流式细胞仪、膜联蛋白V(Annexin—V）、激光扫描共聚焦显微镜等方法进行研究。结果：在凋亡过程中，TFAR 19逐渐向核周聚积，最后向核膜内移位，在核膜及其周围以及核内表达。结论：在UVB诱导HaCaT细胞凋亡的早期和晚期过程中TFAR 19均有表达。     

中波紫外线诱导HaCaT细胞凋亡的研究

目的以不同剂量的中波紫外线(UVB)诱导体外培养的人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞)凋亡,探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是否参与凋亡过程。方法取对数生长期的HaCaT细胞,分别用10 mJ/cm2,15 J/cm2,20 J/cm2,25 J/cm2,30 J/cm2的UVB照射,并于照射24 h后检测HaCaT细胞的增殖活性,分析HaCaT细胞的凋亡率,测定HaCaT细胞上清液中TNF-α的水平,观察细胞形态及凋亡细胞特征。结果在10~30 mJ/cm2的UVB照射下,随照射剂量的增大,细胞的增殖活性逐渐下降,而细胞的凋亡率逐渐增加,当剂量达30 J/cm2时,细胞凋亡率最大,细胞的增殖活性和凋亡率呈直线负相关;随UVB照射剂量的增大,TNF-α的分泌量增加,细胞上清液中TNF-α的分泌量和凋亡率呈直线正相关;倒置显微镜及透射电镜进一步从形态学上证实了细胞的凋亡改变。结论UVB可诱导细胞凋亡,且呈剂量依赖性;照射产生的TNF-α可能参与了其凋亡过程。     

芍药苷对UVB所致HaCaT细胞凋亡的防护作用

目的：明确芍药苷对UVB所致HaCaT细胞凋亡的防护作用。方法：将HaCaT细胞分为8组,A组：空白对照组;B组：UVB照射对照组; C～H组分别为0.25mg/L, 0.5 mg/L,1 mg/L,2.5 mg/L,5 mg/L及10 mg/L芍药苷预处理组,均照射UVB。用流式细胞术检测细胞凋亡情况,RT-PCR检测P21mRNA的表达水平。结果：B组细胞凋亡率为4.840±0.836明显高于C～G组（0.423±0.179、1.127±0.535、1.633±0.417、 2.570±0.439、3.137±0.347）（P<0.05）。 B组与H组（4.203±0.655）比较,差异无统计学意义（P >0.05）;B组P21mRNA表达为1.040±0.007明显高于C～H组（0.440±0.015、0.551±0.013、0.857±0.017、0.848±0.027、0.850±0.052、0.923±0.035）（P<0.05）。结论：芍药苷在一定浓度内（0.25 mg～5 mg/L）对UVB致HaCaT细胞的凋亡有保护作用,并能减少P21mRNA的表达。     

甘草黄酮对UVB辐射后HaCaT细胞表达IL-10的影响

为评价甘草黄酮对中波紫外线(UVB)损伤皮肤角质形成细胞的保护作用及其机制.将甘草黄酮预处理培养的HaCaT细胞24 h后,采用30 mJ/cm2的UVB照射细胞,于照射后6、12、24、48 h后分别以ELISA法、实时荧光定量-PCR法检测上清中IL-10含量及细胞中IL-10 mRNA的表达水平.结果显示UVB对照组IL-10表达水平较空白对照组早期升高,12 h后显著降低(P＜0.05),不同剂量甘草黄酮处理后可显著上调IL-10的表达(P＜0.05),表达水平无剂量依赖关系(P＞0.05).UVB辐射导致HaCaT细胞表达IL-10降低,甘草黄酮可上调IL-10的表达.     

Tempol对UVB所致HaCaT细胞凋亡的抑制作用

目的:确定4-羟基-2,2,6,6-四甲基氧基哌啶(Tempol)对UVB所致HaCaT细胞凋亡的抑制作用。方法:HaCaT细胞分7组,A组:对照组;B组:UVB辐照组;C组:0.5 mM Tempol实验组;D组:1 mM Tempol实验组;E组:2 mM Tempol实验组;F组:4 mM Tempol实验组;G组:8 mM Tempol实验组。除A组外,其余组均辐照UVB,分析各组间HaCaT细胞增殖效应及细胞凋亡率差别。结果:与B和G组比较,各组HaCaT细胞增殖效应显著升高(P0.01);与A组比较,(除B组外),各组HaCaT细胞凋亡率随Tempol药物浓度的升高而显著升高(P0.01)。结论:Tempol对UVB所致HaCaT细胞凋亡有抑制作用,一定范围内其作用随Tempol浓度的升高而降低。     

双氢青蒿素对UVB诱导的人皮肤HaCaT细胞凋亡的保护作用

目的:明确双氢青蒿素(DHA)对UVB诱导人皮肤HaCaT细胞凋亡的保护作用。方法:将体外培养的HaCaT细胞分为空白对照组,UVB照射组和UVB+DHA(20、40、60、80μmol/L)组,采用MTT法检测细胞系的增殖情况,流式细胞仪检测细胞的凋亡率,RT-PCR法检测抗凋亡基因survivin和促凋亡基因caspease-3(激活型)mRNA水平,Western检测相关蛋白表达水平。结果:30 mJ/cm~2 UVB照射24 h后,UVB组和UVB+DHA(20、40、60、80μmol/L)组细胞的增殖率分别为空白对照组的(50.13±2.42)%,(60.23±2.30)%,(69.24±3.19)%,(79.37±2.47)%和(70.41±2.24)%。UVB组和UVB+60μmol/L DHA组中HaCaT细胞凋亡率分别为(46.7±3.2)%和(23.71±1.2)%。与UVB组比较,UVB+60μmol/L DHA组中HaCaT细胞caspase-3 mRNA及蛋白表达降低、survivin mRNA及蛋白表达升高。结论:DHA可抑制UVB所致HaCaT细胞的凋亡,其机制可能与survivin和caspase-3有关。     

当归多糖诱导HaCaT细胞凋亡的实验研究

目的从细胞凋亡的角度探讨当归多糖(APS)抑制HaCaT细胞增殖的机制。方法用细胞体外培养技术、台盼蓝拒染法与流式细胞术检测APS对HaCaT细胞增殖的影响,电镜观察细胞形态变化。结果细胞生长曲线显示25～2500mg/L的APS对HaCaT细胞有显著抑制作用,且呈剂量效应关系。流式细胞术结果显示250mg/L作用后S/G2+M期HaCaT细胞数减少,G0/G1期细胞增多。结论 APS对HaCaT细胞的增殖具有显著抑制作用,APS通过阻止HaCaT细胞进入S期而抑制其DNA合成。     

中波紫外诱导表皮细胞凋亡机制研究进展

中波紫外线作为日光紫外线的组成部分,可在表皮细胞引起多种生物学效应,也是诱导细胞凋亡的一种有效的刺激因子,其发生机制与多种因素有关,包括p53、bcl-2等基因表达的改变,p38丝裂原激活蛋白激酶、c-jun N-末端蛋白激酶、蛋白激酶C、白介素-1β转换酶等蛋白酶的激活吧及多种因子和抗氧化物的产生等。这种过程在角质形成细胞、黑素细胞、郎格汉斯细胞均可发生,在防止皮肤肿瘤发生中起着一定作用,与诱导皮肤局部免疫抑制也有密切关系。     

Caspase-3在UVB诱导人皮肤成纤维细胞凋亡中的作用

目的：评价caspase-3在UVB诱导皮肤成纤维细胞凋亡中的作用。方法：皮肤成纤维细胞经150mJ／cm2 UVB照射后,用MTF法检测细胞活性,用Hoechst33258染色法检测细胞凋亡,用抑制剂Z-DEVD-FMK抑制caspase-3活性后,检测凋亡细胞数量。结果：UVB明显抑制成纤维细胞的活性,并导致细胞凋亡,并呈时间-效应关系;加入抑制剂Z-DEVD-FMK抑制了UVB导致的细胞凋亡。结论：Caspase-3在UVB照射诱导皮肤成纤维细胞凋亡中发挥重要作用。     

中波紫外线诱导表皮细胞凋亡机制研究进展

中波紫外线作为日光紫外线的组成部分,可在表皮细胞引起多种生物学效应,也是诱导细胞凋亡的一种有效刺激因子,其发生机制与多种因素有关,包括p53、bcl-2等基因表达的改变,p38丝裂原激活蛋白激酶、c-jun N-末端蛋白激酶、蛋白激酶C、白介素-1β转换酶等蛋白激酶的激活以及多种因子和抗氧化物的产生等.这种过程在角质形成细胞、黑素细胞、郎格汉斯细胞均可发生,在防止皮肤肿瘤发生中起着一定作用,与诱导皮肤局部免疫抑制也有着密切关系.     

寻常性银屑病皮损中Survivin,Bcl-2,Caspase-3的检测及相关性分析

目的探讨Survivin、Bcl-2、Caspase-3在寻常性银屑病角质形成细胞凋亡中的可能作用。方法选择20例正常皮肤为对照组,60例寻常性银屑病患者取皮损标本,免疫组化方法对两组表皮中Survivin,Bcl-2,Caspase-3进行检测并做统计学分析,并检验Survivin与Bcl-2,Caspase-3的相关性。结果寻常性银屑病皮损中,Survivin及Caspase-3阳性细胞数明显高于正常皮肤,且进行期高于静止期(P<0.01),Bcl-2阳性细胞数明显低于正常皮肤(P<0.01),进行期与静止期无差异(P>0.05);寻常性银屑病皮损中,Survivin与Caspase-3呈正相关(P<0.01),与Bcl-2无相关性(P>0.05)。结论Sur-vivin,Bcl-2,Caspase-3在寻常性银屑病的角质形成细胞凋亡中可能起着重要作用。它们之间可能相互作用,维持寻常性银屑病表皮的良性增生状态。     

紫外线诱导角质形成细胞凋亡和表没食子儿茶酚没食子酸酯保护机理的探讨

目的探讨不同剂量的中波紫外线(UVB)辐射对体外培养的人角质形成细胞(HaCaT细胞株)凋亡和死亡的影响,探讨表没食子儿茶酚没食子酸酯(EGCG)对此影响的保护作用,以及与凋亡相关的bcl-2和Fas基因之间的关系。方法流式细胞仪检测不同剂量UVB辐照及EGCG处理后角质形成细胞凋亡和死亡数量以及bcl-2蛋白水平的变化,RT-PCR检测FasmRNA的表达水平。结果UVB辐照组凋亡细胞数和死亡细胞数显著高于对照组(P<0.01),bcl-2和FasmRNA量与对照组差异也有显著性(P<0.01)。UVB辐照126mJ/cm2组凋亡细胞数低于辐照42mJ/cm2组(t=2.39,P<0.05),但死亡细胞比例显著增加(t=4.82,P<0.01),两组bcl-2和FasmRNA表达量差异均无显著性(t=1.30,P>0.25;t=0.32,P>0.25)。UVB辐照42mJ/cm2立即加入EGCG组较辐照42mJ/cm2未加EGCG组凋亡和死亡细胞数降低(t=7.64,P<0.01;t=3.49,P<0.05),bcl-2增加(t=3.62,P<0.05),FasmRNA表达量减少(t=6.83,P<0.01)。结论小剂量UVB辐照可以诱导体外培养的角质形成细胞凋亡,大剂量UVB辐照则导致细胞死亡,EGCG通过与凋亡相关的bcl-2和Fas减少紫外线诱导的角质形成细胞凋亡。     

干扰素γ/Fas介导的HaCaT细胞凋亡及8种人参皂甙的作用

目的体外诱导角质形成细胞凋亡并研究人参皂甙对细胞凋亡的影响。方法将IFN-γ,Anti Fas Ab作用于体外培养角质形成细胞HaCaT诱导细胞凋亡,并检测人参皂甙对细胞凋亡的影响。结果50 ng/mL IFN-γ和25 ng/mL Anti Fas Ab共同作用可以诱导21.5%角质形成细胞HaCaT凋亡。8种人参皂甙中,Mx,CK和Re可逆转Anti Fas Ab诱导的HaCaT细胞凋亡,逆转率分别为18.4%,14.5%和9.6%。结论IFN-γ和Anti Fas Ab共同作用可诱导HaCaT细胞凋亡。人参皂甙Mx,CK和Re对Anti Fas Ab诱导的HaCaT细胞凋亡有一定的抑制作用。     

紫外线对HaCaT细胞结合珠蛋白mRNA表达的影响

目的 观察紫外线照射对人角质形成细胞系HaCaT细胞表达结合珠蛋白的影响。方法 用逆转录-聚合酶链反应法检测长波紫外线UVA、中波紫外线UVB照射后HaCaT细胞各时相结合珠蛋白mRNA表达水平。结果 UVA12J/cm²照射后HaCaT细胞结合珠蛋白mRNA表达明显升高。照射后20min结合珠蛋白mRNA表达已开始升高,6h达第一高峰,48h出现第二高峰。照射后2h、4h、6h、24h、48h组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)UVB30mJ/cm²照射HaCaT细胞后结合珠蛋白mRNA表达也出现时相变化:4h达第一高峰,48h出现第二高峰。照射后20min、2h、4h、6h、12h、48h、72h组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 紫外线UVA、311nmUVB上调HaCaT细胞结合珠蛋白mRNA表达,随照射时间,结合珠蛋白mRNA表达呈时相变化。     

黄芩甙对中波紫外线照射HaCaT细胞后光产物的影响

目的 探讨黄芩甙对UVB照射后HaCaT细胞光产物环丁烷嘧啶二聚体(CPD)的产生和清除的影响.方法 以一定剂量UVB照射HaCaT细胞,在照光后不同时间点采用免疫组织化学法检测CPD的产生和清除;以黄芩甙预先孵育HaCaT细胞,再观察黄芩甙对CPD的影响.结果 HaCaT细胞损伤程度随UVB照射剂量增大而加重.30mJ/cm²UVB照射后HaCaT光产物CPD的产生在0.5h左右达到高峰,同时细胞开始清除CPD,照射后4h内清除速率较快,至24h时基本清除CPD.黄芩甙预处理组UVB照射后细胞的CPD产生少于非加药组(U=2.324,P<0.05).结论 UVB照射对HaCaT细胞光损伤程度呈剂量递增性,HaCaT细胞对CPD的清除存在快速清除期及慢速清除期;黄芩甙可减少光产物生成.     

葡萄籽原花青素及UVA照射对HaCaT细胞增殖活性的影响

目的 观察葡萄籽原花青素（GSPE）和长波紫外线（UVA）对人角质形成细胞（HaCaT细胞）增殖的影响,以探讨GSPE有无光保护作用。方法 MTT法分别测定不同浓度GSPE以及不同剂量UVA对HaCaT细胞增殖活性的影响。结果 GSPE浓度为5-200μg/m L时,对HaCaT细胞增殖影响不明显,浓度为500μg/m L及以上时抑制细胞生长,且有统计学意义;UVA剂量超过10 J/cm2有抑制作用且随剂量增高抑制作用越明显,且有统计学意义,25 J/cm2时其抑制率达37.65%;浓度为50、100μg/mL的GSPE对25 J/cm2 UVA照射后的HaCaT细胞的增殖有明显促进作用。结论25 J/cm2的UVA对HaCaT细胞的增殖有明显抑制作用,而合适浓度的GSPE对HaCaT细胞增殖活性有光保护作用。     

复方青黛饮含药血清对体外HaCaT细胞增殖和凋亡的影响

目的体外观察复方青黛饮大鼠含药血清对人永生化角质形成细胞株HaCaT细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响,并探讨其作用机制。方法根据中药血清药理学方法,用SD大鼠制备实验血清,采用MTT法、流式细胞术、免疫荧光Hoechst染色,观察含药血清对细胞生长抑制率、凋亡率、细胞周期分布及细胞形态学的影响。结果体外培养HaCaT细胞24h和48h后,复方青黛饮高、中、低三个剂量不同浓度的含药血清组,对HaCaT细胞的生长均有不同程度的抑制,与空白血清组相比,差异有统计学意义(P<0.05),其中高剂量组抑制作用最明显。复方青黛饮含药血清组细胞凋亡率和G0/G1比例明显增加,与空白血清组相比,差异有统计学意义(P<0.05),在镜下呈现凋亡的特征性形态改变。结论复方青黛饮大鼠含药血清对体外培养的角质形成细胞株HaCaT细胞有生长抑制和诱导凋亡作用,并对细胞周期有一定的影响。     

慢性紫外线损伤小鼠模型皮肤角质形成细胞中Bax和Caspase-3的表达

目的观察对照组小鼠与慢性紫外线(Ultraviolet,UV)损伤组小鼠背部皮肤组织角质形成细胞中凋亡相关蛋白(Bax)与半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的表达情况,分析UV对小鼠慢性UV损伤中两指标表达变化的生物学意义。方法应用UV治疗仪对实验小鼠进行照射,建立慢性UV损伤小鼠模型,应用免疫组化PV二步法检测UV照光前、后小鼠皮肤角质形成细胞中Bax和Caspase-3表达的变化情况并进行对比。结果对照组小鼠实验前Bax和Caspase-3阳性率分别为30%和20%,实验后均为30%,差异均无统计学意义(P均>0.05)。慢性UV损伤组小鼠实验前Bax和Caspase-3阳性率分别为30%和20%,实验后均为100%,慢性UV损伤组小鼠显著高于对照组,且实验前、后两者差异均有统计学意义(P均<0.05)。造模后慢性UV损伤组小鼠表皮角质形成细胞内的Bax和Csapase-3的表达水平均明显增加,且二者增加程度有相关性(r=0.487,P<0.05)。结论重复UV照射可以诱导小鼠表皮角质形成细胞中Caspase-3表达上调和凋亡活性上升,且这种凋亡活性的上升与Bax的表达上调密切相关。