miR-6732-3p对鼻咽癌放射抗拒细胞株CNE-2R放射敏感性的影响

目的 探讨miR-6732-3p表达对人鼻咽癌CNE-2R细胞放射敏感性的影响。方法 采用RT-qPCR检测miR-6732-3p在CNE-2和CNE-2R细胞株中的表达。用miR-6732-3p慢病毒转染CNE-2R细胞后,将CNE-2R细胞分为三组,分别为CNE-2R组（正常对照组）、miR-6732-3p NC组（转染对照组）、miR-6732-3p inhibition组（转染组）。RT-qPCR检测各组细胞中miR-6732-3p的表达,CCK-8、流式细胞术和克隆形成实验分别检测转染前后的细胞增殖、凋亡能力及放射敏感性。结果 RT-qPCR检测结果显示,miR-6732-3p在CNE-2R细胞中的表达量明显高于CNE-2细胞（P=0.036）。采用慢病毒转染CNE-2R细胞后,转染组细胞miR-6732-3p 的表达量均较转染对照组和正常对照组低（P＜0.05）。CCK-8法检测结果显示,与两个对照组相比,转染组细胞生长受抑制（P＜0.001）;在不同照射剂量下,转染组细胞的存活分数均明显降低（P＜0.001）。流式细胞仪检测结果显示,未经照射（0 Gy）和接受8 Gy照射后转染组细胞凋亡率均较转染对照组及正常对照组明显升高（P＜0.05）。克隆形成实验结果显示,转染组的放射生物学参数D0、Dq、SF2值均低于两个对照组（P＜0.05）;在不同照射剂量下,转染组细胞存活分数亦低于两个对照组（P＜0.001）。结论 沉默miR-6732-3p可提高鼻咽癌CNE-2R细胞的放射敏感性,为鼻咽癌放射抗拒的分子靶向治疗提供新思路。     

ST6GalⅠ抑制TNFR1表达调控肾透明细胞癌凋亡

目的 ST6GalⅠ和TNFR1在肾透明细胞癌细胞中的表达。构建ST6GalⅠ差异表达肾透明细胞癌细胞株，采用流式细胞术检测细胞凋亡水平，并分析ST6GalⅠ和TNFR1表达的相关性，qRT-PCR和Western blot检测差异表达ST6GalⅠ细胞中TNFR1的表达，采用流式细胞术检测同时差异表达ST6GalⅠ和TNFR1的A498和Caki-1细胞的凋亡水平。结果 与ST6GalⅠ在5种肾透明细胞癌细胞中均高表达（P＜0.05）；抑制ST6GalⅠ表达后A498细胞凋亡率升高（P＜0.01），Caki-1细胞过表达ST6GalⅠ后细胞凋亡率降低（P＜0.001）。TNFR1 mRNA和蛋白在5种肾透明细胞癌细胞株中均低表达，且与ST6GalⅠmRNA和蛋白表达呈负相关（r=-0.9667，-0.9928，均P<0.01）；抑制ST6GalⅠ表达 TNFR1表达增加（P＜0.001），而ST6GalⅠ过表达TNFR1表达降低（P＜0.001）；A498细胞同时抑制ST6GalⅠ和 TNFR1表达后细胞凋亡率低于单独抑制ST6GalⅠ（P＜0.01），Caki-1细胞同时过表达ST6GalⅠ和TNFR1后细胞凋亡率高于单独抑制ST6GalⅠ（P＜0.01）。结论 ST6GalⅠ可通过抑制TNFR1表达而抑制肾透明细胞癌的凋亡。     

干细胞基因Lgr5在食管鳞癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨干细胞基因Lgr5在食管鳞癌组织及其成球细胞中的表达意义。方法 采用免疫组织化学法（IHC）检测280例食管鳞癌和150例癌旁组织中Lgr5蛋白的表达水平;低黏附培养法培养食管鳞癌细胞KYSE70形成成球细胞,Quantitative real-time PCR（qRT-PCR）、Western blot法检测干性相关基因SOX2、ALDH1A1、NANOG以及Lgr5在亲代细胞和成球细胞中的表达差异;Transwell实验检测成球细胞的迁移和侵袭能力、qRT-PCR法检测成球细胞中上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）相关标志物Vimentin和N-cadherin的表达水平。结果 Lgr5在食管鳞癌组织的表达水平明显高于癌旁正常食管组织（P＜0.05）,且与淋巴结转移、浸润深度、肿块大小、分化程度、肿瘤分期密切相关（P均＜0.05）。与亲代细胞相比,食管鳞癌成球细胞中干性相关基因SOX2、ALDH1A1、NANOG表达水平升高（P均＜0.05）,Lgr5在食管鳞癌成球细胞中的表达水平也明显升高（P＜0.05）,并且其迁移和侵袭能力增强（P＜0.05）,EMT相关标志物Vimentin和N-cadherin的mRNA表达水平升高（P均＜0.05）。结论 Lgr5可能为食管鳞癌复发、进展、侵袭转移的标志之一,Lgr5高表达的食管鳞癌细胞可能具有干细胞样特性,并且可能为食管鳞癌细胞的一个干性调控基因。     

miR-497-5p靶向调控CCNE1基因抑制胰腺癌细胞增殖

目的 明确miR-497-5p在胰腺癌（PaCa）中的表达及临床意义,并探究其对PaCa细胞增殖的影响及机制。方法 实时荧光定量PCR实验检测miR-497-5p的表达,卡方检验和Kaplan-Meier生存法分析miR-497-5p的表达与临床病理特征及预后的关系;CCK-8实验和流式细胞术检测过表达miR-497-5p对Capan-2和PANC-1细胞增殖和周期的影响,Spearman相关性检验分析miR-497-5p表达与G₁/S特异性细胞周期蛋白E1（cyclin E1, CCNE1）mRNA表达的关系;双荧光素酶报告基因实验和蛋白质印迹法验证miR-497-5p对CCNE1表达的调控作用。结果 miR-497-5p在癌组织中的表达显著低于癌旁正常组织（P<0.001）,T3+T4期患者癌组织中miR-497-5p的表达显著低于T1+T2期癌组织（P<0.001）;低表达miR-497-5p 与较高的T分期相关（P=0.003）;低表达miR-497-5p的患者5年总体生存率显著低于高表达者（P=0.036）。与对照组相比,miR-497-5p过表达组细胞增殖显著降低,G₀/G₁期比例增加,S期比例减少。CCNE1 mRNA在癌组织的表达显著高于癌旁正常组织（P<0.001）,且与miR-497-5p表达呈负相关（P<0.001）。miR-497-5p可直接与CCNE1 mRNA 3’-UTR互补结合从而抑制CCNE1蛋白的表达。结论 miR-497-5p在PaCa中低表达,且与较高的T分期及不良预后相关;过表达miR-497-5p通过靶向调控CCNE1基因诱导细胞周期阻滞进而抑制PaCa细胞增殖。     

NF-κB与放射线诱导的人食管癌细胞上皮间质转化间的关系

目的 探讨NF-κB与放射线诱导的人食管癌细胞上皮间质转化（EMT）间的关系。方法 累积照射食管癌Eca109细胞60 Gy,得到Eca109R60细胞,克隆形成实验检测其放射抵抗性,显微镜下观察细胞形态学变化。Real-time PCR和免疫细胞化学检测Eca109和Eca109R60细胞NF-κB、E-cadherin和Vimentin的表达情况。结果 Eca109R60细胞具备了EMT样表型且放射抵抗性更强。Eca109R60细胞中E-cadherin mRNA表达明显下调（P=0.003）,Vimentin、NF-κB mRNA表达升高（P=0.004,P=0.004）。相关性分析显示NF-κB与E-cadherin mRNA表达呈负相关,与Vimentin未见有明显相关性,但已显示出正相关的趋势。免疫细胞化学法检测Eca109R60细胞E-cadherin阳性染色程度明显减弱,Vimentin、NF-κB p65阳性染色程度明显增强。结论 Eca109R60细胞放射抗性可能由EMT与NF-κB信号通路相互作用调控。     

环氧合酶-2对人SGC-7901胃癌细胞E-cadherin的表达及迁移能力的影响

目的 研究环氧合酶-2（COX-2）通过调控E-钙黏素（E-cadherin）对胃癌细胞侵袭迁移能力的影响。方法 分别应用塞来昔布（Celecoxib）及前列腺素E2(PGE2)对体外培养的人胃癌细胞SGC-7901进行干预,采用实时荧光定量反转录PCR检测COX-2、E-cadherin mRNA的表达;运用免疫荧光标记法结合激光共聚焦荧光显微镜分析E-cadherin的蛋白表达量;应用Transwell法检测细胞迁移能力的变化。结果 实时荧光定量反转录PCR检测塞来昔布明显抑制体外培养人胃癌细胞SGC-7901中COX-2 mRNA的表达（P＜0.01）,而E-cadherin mRNA的表达随着COX-2的表达下降而呈浓度与时间依赖性升高（P＜0.01）;运用PGE2干预后E-cadherin mRNA表达呈浓度与时间依赖性下降（P＜0.05或P＜0.01）。塞来昔布30 μmol/L干预人胃癌细胞SGC-7901 24、36、48 h后,激光共聚焦荧光显微镜检测E-cadherin的蛋白表达量明显升高（P＜0.05）;PGE2 1 μmol/L干预24、48 h后,E-cadherin蛋白表达量明显下降（P＜0.05）。塞来昔布组穿过Transwell小室的细胞数明显少于对照组（P＜0.01）,PGE2组穿过Transwell小室的细胞数明显高于对照组（P＜0.05）。结论 COX-2特异性抑制塞来昔布通过抑制COX-2的表达,上调E-cadherin表达量,抑制体外培养人胃癌细胞SGC-7901的迁移能力;外源性PGE2能够下调SGC-7901胃癌细胞E-cadherin表达量从而促进肿瘤细胞的迁移能力。     

RAB22A在乳腺癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨RAB22A在乳腺癌组织中的表达及临床意义。方法 采用实时荧光定量PCR检测60例乳腺癌及其相应癌旁组织中RAB22A mRNA的表达,分析其与乳腺癌患者临床病理特征的关系。结果 RAB22A mRNA在乳腺癌组织中的表达高于癌旁组织 （4.9±1.1 vs 1.1±0.3,P＜0.01）。不同年龄、肿瘤大小以及不同ER、PR、HER-2表达状况乳腺癌患者中RAB22A mRNA的表达差异无统计学意义（P＞0.05）,但不同淋巴结转移数患者RAB22A mRNA表达差异有统计学意义（P＜0.05）,高表达RAB22A患者的总生存期较低表达患者差（P＜0.05）;多因素Cox比例风险回归模型分析结果显示RAB22A和淋巴结转移数是影响预后的独立因素（P＜0.05）。结论 RAB22A在乳腺癌组织中表达升高,可能与乳腺癌转移和不良预后有关。     

MDA-7/IL-24对Burkitt淋巴瘤细胞的诱导分化作用

目的:研究黑色素瘤分化相关基因-7(melanoma differentiation associated gene 7,MDA-7)/IL-2对Burkitt淋巴瘤细胞的促分化作用并探讨其作用机制.方法:构建稳定过表达MDA-7/IL-24的人Burkitt淋巴瘤Raji和Daudi细胞株,MTS法检测稳定转染MDA-7/IL-24对Raji和Daudi细胞活力的影响;Transwell小室实验检测转染MDA-7/IL-24对Raji和Daudi细胞侵袭和迁移能力的影响;流式细胞术检测细胞凋亡水平及免疫表型;Western blotting技术检测转染MDA-7/IL-24对Raji和Daudi细胞表达分化相关蛋白Myb、BLIMP1及BCL-6的影响;建立裸鼠Raji细胞移植瘤模型,检测在体内环境中稳定转染MDA-7/IL-24对Raji细胞生物活性的影响.结果:过表达MDA-7/IL-24的Raji和Daudi细胞其增殖(P.＜0.05)、侵袭(P＜0.01)及迁移(P＜0.01)能力均明显下降,但凋亡细胞无明显增加(P＞0.05),表达CD45及CD138的水平均明显增加(P＜0.01),而表达CD10的水平明显下降(P＜0.01).过表达MDA-7/IL-24的Raji和Daudi细胞表达BLIMP1的水平明显增加(P＜0.01),而表达Myb及BCL-6的水平均明显减低(P＜0.01).MDA-7/IL-24过表达组裸鼠模型Raji细胞移植瘤质量明显低于对照组[(1.23±0.21)vs(1.96±0.24)g,P＜0.01].结论:转染MDA-7/IL-24可能通过诱导分化作用抑制Burkitt淋巴瘤细胞的生物活性.     

盐霉素通过靶向调控ALDH影响三阴性乳腺癌细胞MDA-MB- 231增殖和凋亡

目的 探讨盐霉素（salinomycin,Sal）对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法 采用流式细胞术筛选ALDH高表达乳腺癌细胞系;采用MTT法检测不同浓度Sal（1~32 μmol/L）对细胞增殖的影响;采用流式细胞仪检测Sal对细胞凋亡以及肿瘤干细胞表面标志物ALDH表达的影响;采用qRT-PCR、Western blot检测凋亡相关分子Caspase-3、Bax、Bcl-2、PARP mRNA和蛋白表达;TCGA（the Cancer Genome Atlas）数据库下载乳腺癌患者数据集（n=1 218）,采用Pearson法分析ALDH与凋亡相关分子表达的相关性。结果 Sal在24 h、48 h、72 h均可以剂量依赖的方式抑制MDA-MB-231细胞增殖（均P<0.001）;Sal作用MDA-MB-231细胞48 h后,与对照组比较,2 μmol/L组、4 μmol/L组、8 μmol/L组的细胞凋亡率均升高（均P<0.05）;Bcl-2、PARP、Caspase-3 mRNA表达下降（均P<0.05）,Bax mRNA表达升高（均P<0.05）;Bcl-2、Caspase-3 蛋白表达下降（均P<0.05）,PARP、Bax 蛋白表达升高（均P<0.05）;MDA-MB-231乳腺癌干细胞表面标志物ALDH表达下降（均P<0.05）。TCGA数据库分析显示,ALDH与抗凋亡分子Bcl-2、Caspase-3的表达呈正相关（r=0.209,P=0.007;r=0.235,P=0.002）,与Bax、PARP的表达呈负相关（r=-0.326,P＜0.001;r=-0.453,P＜0.001）。结论 Sal可抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长,可能通过下调肿瘤干细胞表面标志物ALDH表达实现。     

miR-383-3p对鼻咽癌6-10B细胞生物学功能的影响及其可能作用机制

目的:探讨miR-383-3p对鼻咽癌6-10B细胞功能的影响及其可能作用的靶基因。方法:采用脂质体介导法将miR-383-3p模拟物（miR-383-3p mimic）、miR-383-3p抑制物（miR-383-3p inhibitor）以及对照模拟物（NC）转染6-10B细胞,MTT 法检测各组6-10B细胞的增殖能力,Annexin V-FITC/PI双染法检测各组6-10B细胞的凋亡情况,Transwell实验检测各组6-10B细胞的迁移能力,双荧光素酶报告基因实验确定miR-383-3p与高迁移率族蛋白A2(high mobility group A2,HMGA2)的靶向作用情况,qRT-PCR检测不同鼻咽癌细胞中miR-383-3p及各组6-10B细胞中miR-383-3p和HMGA2 mRNA表达水平,Western blot检测各组6-10B细胞中水通道蛋白5（aquaporins 5,AQP5)、环磷腺苷效应元件结合蛋白（cAMP-response element binding protein,CREB)、p-CREB以及HMGA2蛋白表达水平,免疫荧光染色检测各组6-10B细胞中AQP5和核因子-κB（nuclear factor-kappa B,NF-κB)的荧光强度。结果:与NP69细胞相比,miR-383-3p在鼻咽癌细胞CNE1、CNE2、HONE1、HNE-1、C666-1、6-10B中的表达量均明显下降（P＜0.05或P＜0.001）;与NC组相比,miR-383-3p mimic 组能够显著抑制鼻咽癌6-10B细胞的增殖和迁移并诱导细胞凋亡（P＜0.05）,而miR-383-3p inhibitor组6-10B细胞增殖和迁移能力明显升高,细胞凋亡水平则明显下降（P＜0.05）;HMGA2是miR-383-3p的靶基因,与NC组相比,miR-383-3p mimic 组HMGA2 mRNA 和蛋白的表达水平下降（P＜0.05）,而miR-383-3p inhibitor组明显升高（P＜0.05）;与NC组相比,miR-383-3p mimic 组AQP5和p-CREB蛋白表达量明显升高（P＜0.05）,而miR-383-3p inhibitor组明显下降（P＜0.05）;与NC组相比,miR-383-3p mimic组AQP5荧光信号较强,而 NF-κB荧光信号较弱,miR-383-3p inhibitor组检测结果与此相反。结论:miR-383-3p可能通过负调控HMGA2的表达来抑制鼻咽癌细胞的增殖与迁移,进而促进鼻咽癌细胞凋亡,该作用可能与AQP5/CREB途径的信号通路有关。     

EB病毒miRNAs在鼻咽癌细胞株C666-1和CNE-2Z中的差异性表达分析

目的：探讨ebv-miRNA在低分化NPC细胞株C666-1（EBV＋）和CNE-2Z（EBV表达水平随传代次数增加而逐渐降低）中的差异性表达进而分析其功能.方法：常规培养NPC细胞株C666-1和CNE-2Z,分别提取总RNA并进行质检;RT-PCR检测LMP-1和LMP-2A mRNA的表达以判断EBV的感染情况;miRNA芯片技术检测EBV miRNAs的表达并对其表达谱进行差异性分析;荧光定量RT-PCR进行验证;复习文献了解ebv-miRNA调控的靶基因以了解其功能.结果：从C666-1和CNE-2Z两株细胞抽提的总RNA纯度高,A260/A280〉2.0,A260/A230〉2.1,RNA完整性好.C666-1具有比CNE-2Z更高的LMP-1和LMP-2A mRNA表达.ebv-miRNA表达谱的差异分析表明39个ebv-miRNAs中19个在两株细胞显著差异性表达;荧光定量RT-PCR结果证实ebv-miR-BHRF1-1和ebv-miR-BART14＊在C666-1中表达升高而ebv-miR-BART8＊表达降低,与芯片结果趋势一致;复习文献,EBV miRNAs功能远不清楚,少数已知的靶基因涉及信号转导、转录调控、细胞凋亡、增殖、免疫反应和病毒DNA复制等方面.结论：ebv-miRNA在低分化NPC中具有差异性表达并广泛参与基因调控.不同NPC细胞中EBV miRNA表达差异预示着基于ebv-miRNA的NPC个性化治疗的可能性.     

不同转移特性的人鼻咽癌细胞株中Tiam-1表达及其意义

目的探讨Tiam-1在不同转移特性的人鼻咽癌细胞株中的表达,分析Tiam-1表达与鼻咽癌侵袭转移特性的关系。方法采用免疫组化SP-9000法和RT-PCR方法 ,分别从蛋白表达水平和mRNA水平检测Tiam-1在人鼻咽癌细胞5-8F、6-10B、C666-1和CNE2中的表达。结果①Tiam-1蛋白分布于人鼻咽癌细胞胞质中,在具有高转移特性的5-8F细胞中呈棕黄、棕褐色强表达,在没有转移特性的6-10B细胞中呈淡黄色弱表达或不表达,在具有一定转移特性的C666-1、CNE2细胞株中呈黄色中度表达。②Tiam-1mRNA在5-8F细胞中灰度密度比值为（0.817±0.040）,在6-10B细胞中为（0.103±0.015）,在C666-1、CNE2细胞株中分别是（0.383±0.025、0.497±0.047）,各灰度密度比值比较具有统计学差异（F=220.770,P〈0.05）,且与细胞株转移特性呈正相关（γs=0.852,P〈0.05）。结论 Tiam-1在不同转移特性的人鼻咽癌细胞株中呈现不同程度的表达,与细胞株转移特性密切相关。提示Tiam-1可作为鼻咽癌恶性程度及其预后的判断指标。     

EBV-miR-BART5-3p靶向p53对鼻咽癌细胞放射敏感性的影响

目的:研究爱泼斯坦-巴尔病毒（EBV）-miR-BART5-3p对鼻咽癌细胞放射敏感性的影响,并探讨其作用机制。方法:体外培养人EBV阳性鼻咽癌细胞（C666-1）和人鼻咽癌细胞（CNE-2Z）,将CNE-2Z组细胞设置为正常组,C666-1细胞随机分为对照组、EBV-miR-BART5-3p NC组、EBV-miR-BART5-3p mimics组和EBV-miR-BART5-3p inhibitor组。用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测各组细胞及EBV阴性鼻咽癌患者和EBV阳性鼻咽癌患者癌组织中EBV-miR-BART5-3p表达情况,噻唑蓝（MTT）法检测各组细胞存活率,平板克隆实验评估各组放疗敏感性变化情况,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶（Annexin V-FITC/PI）法检测各组细胞凋亡敏感性变化,蛋白免疫印迹分析法检测转染后各组细胞p53、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、半胱天冬氨酸酶-3（caspase-3）和Bcl-2蛋白表达情况,双荧光素酶报告实验验证EBV-miR-BART5-3p与p53的靶向关系。结果:与EBV阴性组相比,EBV阳性组鼻咽癌组织中EBV-miR-BART5-3p表达水平显著升高（P＜0.05）。与正常组相比,对照组EBV-miR-BART5-3p表达、存活率、克隆数量和Bcl-2蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）,凋亡率、p53、Bax和caspase-3蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）。与对照组和EBV-miR-BART5-3p NC组相比,EBV-miR-BART5-3p mimics组EBV-miR-BART5-3p表达水平、存活率、克隆数量和Bcl-2蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）,凋亡率、p53、Bax和caspase-3蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）;与对照组和EBV-miR-BART5-3p NC组相比,EBV-miR-BART5-3p inhibitor组EBV-miR-BART5-3p表达水平、存活率、克隆数量和Bcl-2蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）,凋亡率、p53、Bax和caspase-3蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）。双荧光素酶报告实验结果显示,与TP53-3' UTR-WT+EBV-miR-BART5-3p NC组比较,TP53-3' UTR-WT+EBV-miR-BART5-3p inhibitor组荧光素酶活性降低（P＜0.05）。结论:下调EBV-miR-BART5-3p可能通过靶向促进p53蛋白表达,提高人EBV阳性鼻咽癌细胞的放射敏感性。     

Profiling of Epstein-Barr virus-encoded microRNAs in nasopharyngeal carcinoma reveals potential biomarkers and oncomirs

BACKGROUND:

Epstein‐Barr virus (EBV) microRNAs are abundant in nasopharyngeal carcinoma (NPC) tumors. With recent advances in serum microRNA detection, the distinct presence of EBV microRNAs in serum could aid in screening endemic regions for NPC. A proposed network of genes targeted by these microRNAs could also shed light on EBV‐associated tumorigenesis.

METHODS:

MicroRNA microarray profiling of 5 paired NPC biopsies was followed by validation of 12 up‐regulated EBV microRNAs (BART1‐3p, 2‐5p, 5, 6‐5p, 6‐3p, 7, 8, 9, 14, 17‐5p, 18‐5p, 19‐3p) in 15 additional cases by real‐time polymerase chain reaction. Tumor (cellular) and serum microRNA copy numbers from the same 15 patients were correlated. Expression of the same microRNAs were also examined in EBV‐positive cell lines C666 and NP460hTERT+EBV. Bioinformatic tools helped predict cellular target genes, which were later confirmed by gene expression analysis.

RESULTS:

The authors' high‐throughput approach shows that EBV microRNAs are generally more up‐regulated than microRNAs of human origin. Twenty‐nine of 39 EBV microRNAs were significantly up‐regulated in tumor versus their nontumor biopsies (P < .05). Upon successfully validating 12 selected EBV microRNAs in 15 additional paired NPC cases, the authors found that their distinct presence in the serum of NPC patients positively correlated with cellular copy numbers of EBV microRNAs. Further investigation of potential EBV microRNA target genes revealed inhibition of tumor suppressor genes (eg, PTEN) and extensive deregulation of several pathways frequently involved in NPC (eg, Wnt signaling).

CONCLUSIONS:

Increasing knowledge of host‐virus interaction via microRNAs may provide feasible explanations underlying NPC tumorigenesis along with the development of biomarkers for screening high‐risk populations. Cancer 2012;. © 2011 American Cancer Society.     

LncRNA PRNCR1靶向miR-653-5p调控鼻咽癌细胞恶性生物学行为

目的探讨前列腺癌非编码RNA 1(prostate cancer non-coding RNA 1,PRNCRl)对鼻咽癌细胞恶性生物学行为的影响及其可能的机制。方法采用RT-qPCR法检测鼻咽癌细胞系(5-8F、6-10B、C666-1)及鼻咽上皮细胞NP69中PRNCR1和miR-653-5p表达。分别将si-PRNCR1、miR-653-5p mimics或两者共转染至鼻咽癌6-10B细胞,采用CCK-8法检测细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞的凋亡情况,划痕实验检测细胞的迁移能力,Transwell小室实验检测细胞的侵袭能力,双荧光素酶报告基因实验验证PRNCR1和miR-653-5p的靶向关系。结果鼻咽癌细胞系(5-8F、6-10B、C666-1)中PRNCR1的表达水平均高于鼻咽上皮细胞NP69(均P<0.001),而miR-653-5p表达水平均低于NP69细胞(均P<0.001)。敲减PRNCR1或过表达miR-653-5p后,鼻咽癌6-10B细胞的增殖能力、划痕愈合率及侵袭细胞数均降低(均P<0.001),而凋亡率升高(均P<0.001)。双荧光素酶报告基因实验证实PRNCR1与miR-653-5p存在靶向关系。敲减PRNCR1后,6-10B细胞中miR-653-5p的表达水平升高(P<0.001)。敲减miR-653-5p可逆转敲减PRNCR1对鼻咽癌6-10B细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。结论PRNCR1在鼻咽癌细胞系中高表达,敲减PRNCR1表达可抑制鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,其作用机制可能与靶向负调控miR-653-5p有关。     

Dual regulation by microRNA-200b-3p and microRNA-200b-5p in the inhibition of epithelial-to-mesenchymal transition in triple-negative breast cancer

Epithelial to mesenchymal transition (EMT) involves loss of an epithelial phenotype and activation of a mesenchymal one. Enhanced expression of genes associated with a mesenchymal transition includes ZEB1/2, TWIST, and FOXC1. miRNAs are known regulators of gene expression and altered miRNA expression is known to enhance EMT in breast cancer. Here we demonstrate that the tumor suppressive miRNA family, miR-200, is not expressed in triple negative breast cancer (TNBC) cell lines and that miR-200b-3p over-expression represses EMT, which is evident through decreased migration and increased CDH1 expression. Despite the loss of migratory capacity following re-expression of miR-200b-3p, no subsequent loss of the conventional miR-200 family targets and EMT markers ZEB1/2 was observed. Next generation RNA-sequencing analysis showed that enhanced expression of pri-miR-200b lead to ectopic expression of both miR-200b-3p and miR-200b-5p with multiple isomiRs expressed for each of these miRNAs. Furthermore, miR-200b-5p was expressed in the receptor positive, epithelial breast cancer cell lines but not in the TNBC (mesenchymal) cell lines. In addition, a compensatory mechanism for miR-200b-3p/200b-5p targeting, where both miRNAs target the RHOGDI pathway leading to non-canonical repression of EMT, was demonstrated. Collectively, these data are the first to demonstrate dual targeting by miR-200b-3p and miR-200b-5p and a previously undescribed role for microRNA processing and strand expression in EMT and TNBC, the most aggressive breast cancer subtype.     

Cisplatin chemotherapy plus adenoviral p53 gene therapy in EBV-positive and -negative nasopharyngeal carcinoma

We have previously shown that the introduction of human recombinant wild-type p53 mediated by an adenoviral vector (Ad5CMV-p53), either alone or delivered in combination with ionizing radiation, was cytotoxic to two nasopharyngeal carcinoma (NPC) cell lines. To further explore the potential therapeutic role for gene therapy, the combination of Ad5CMV-p53 and cisplatin was examined in two NPC cell lines, CNE-1 and C666-1. The C666-1 cells are particularly relevant because they express Epstein-Barr virus latent gene products analogous to human NPC in situ. Cells were infected with 5 pfu/cell of Ad5CMV-p53 or Ad5CMV-beta-gal, followed by exposure to increasing doses of cisplatin. Clonogenic and MTT assays were used to assess the sensitivity of cells to these treatments, and apoptosis was also quantified. The combination of Ad5CMV-p53 and cisplatin resulted in approximately 25% greater cytotoxicity compared to that observed with cisplatin alone in either cell line. Apoptosis was induced in approximately 50% of cells following administration of both Ad5CMV-p53 and cisplatin, but was induced in considerably fewer cells following either treatment alone. The two modalities appeared to interact in an additive manner. Ad5CMV-p53 gene therapy resulted in the expression of biologically active p53 protein, shown by induction of p21(WAF1/CIP1). Cisplatin treatment showed little effect on either p53 or p21(WAF1/CIP1) expression. Therefore, both p53 gene therapy and cisplatin chemotherapy demonstrated cytotoxicity mediated by apoptosis despite the presence of EBV gene products in the C666-1 cells, but it appears that the two modalities induce cytotoxicity by independent pathways.     

新疆鼻咽癌226例临床病理分析

目的研究．LMP1在新疆地区鼻咽癌中的表达及EB病毒与鼻咽癌的关系。方法应用免疫组化法检测100例鼻咽癌中EBVLMP1的表达情况。结果100例鼻咽癌中,LMP1阳性表达为60％（60／100）,35例淋巴结转移病例中,LMP1阳性表达为80％（28／35）。EB病毒LMP1阳性表达与鼻咽癌淋巴结转移显著相关,与年龄、性别、民族及组织分型无明显相关性。结论新疆地区鼻咽癌与EBV感染密切相关,EBVLMP1在鼻咽癌发生、发展中扮演重要角色。     

鼻咽癌组织中 EBV-BARF0基因序列的测定

目的： EB病毒 (Epstein-Barr virus,EBV)存在的变异影响到其生物学功能（如 LMP1基因）。 BamHI A区右向框 0（ BamHI A rightward fram0, BARF0）是在鼻咽癌 (Nasopharyngeal Carcinoma,NPC)病人中检出率很高的一个 EB病毒基因,对其变异性的研究尚未见报道,本研究是为了明确广东鼻咽癌组织中 EBV-BARF0基因的序列及其变异。方法：应用 PCR技术从 20例鼻咽癌组织中,扩增 EBV基因 BARF0,并对它们的序列进行测定。结果：与标准株 B95-8相比,鼻咽癌组织中 EBV-BARF0均有 4个位点发生突变： 160473（ G→ T）、 160545（ C→ T）、 160701（ C→ A）、 160707（ G→ C）,并导致相应的氨基酸的改变： 2（ Ala→ Ser）、 26（ Leu→ Phe）、 78（ Arg→ Ser）、 80（ Ala→ Pro）。结论：由于 EBV的 BARF0基因在鼻咽癌细胞株及活检组织中 100％表达,在淋巴瘤组织及淋巴瘤细胞株中表达较低或不表达,本研究首次报道鼻咽癌组织中 EBV-BARF0的序列分析,与 B95-8相比存在变异,并导致了蛋白质的一级结构的改变,推测该基因很可能在鼻咽癌变过程中起着重要的作用。