抗CD47单克隆抗体对卵巢癌细胞靶向治疗的体外研究

  目的   探讨抗CD47单克隆抗体在体外对巨噬细胞吞噬卵巢癌细胞作用的影响。  方法   收集天津医科大学附属肿瘤医院2011年6月至2011年12月手术切除的卵巢组织样本45例(包含卵巢癌组织样本39例, 正常卵巢组织样本6例), 获得的组织细胞通过流式细胞术分析CD47的表达水平, 通过细胞功能学实验观察抗CD47单克隆抗体在体外对小鼠巨噬细胞吞噬卵巢癌细胞的靶向治疗作用。  结果   流式细胞术分析显示, 卵巢癌细胞系SKOV-3细胞和卵巢癌组织细胞中CD47表达水平均明显高于正常人卵巢上皮细胞, 差异具有统计学意义(P < 0.01), 且与疾病的分化程度相关(P < 0.05)。细胞功能学实验结果显示, 抗CD47单克隆抗体在体外可促进巨噬细胞对卵巢癌细胞的吞噬作用, 各实验组(1μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL)分别较空白对照组吞噬指数显著增加, 并且随抗体浓度的增加吞噬指数呈浓度依赖性, 差异均具有统计学意义(P < 0.01)。统计学分析显示, 10μg/mL浓度组吞噬指数达到峰值, 同20μg/mL浓度组吞噬指数无显著性差异(P > 0.05)。  结论   CD47高表达于卵巢癌组织细胞, 且与组织分化程度相关。抗CD47单克隆抗体在体外可促进巨噬细胞对卵巢癌肿瘤细胞的吞噬作用, 为卵巢癌的靶向治疗提供了实验依据。      

靶向CD47 抗肿瘤治疗的研究进展

[摘要] CD47 是细胞表面高度糖化的穿膜蛋白，是一种“别吃我”信号，可与信号调节蛋白α（SIRPα）等形成CD47-SIRPα 抑制信号复合体，从固有免疫和适应性免疫两方面同时逃避机体的免疫监视。研究发现，CD47 在血液肿瘤和多种实体瘤中高表达，通过与巨噬细胞上的SIRPα 配体结合，启动一系列抑制性的信号转导而躲避吞噬，其高水平表达既能促进肿瘤细胞的生长又能促进肿瘤细胞的转移。通过抗CD47 抗体阻断CD47-SIRPα 信号通路，达到抑制肿瘤细胞的免疫逃逸，增强巨噬细胞的吞噬作用和适应性免疫应答，是免疫治疗肿瘤的新途径。目前，国内外开展了越来越多靶向CD47-SIRPα 的药物或抗体的基础研究和临床试验，有望从抗体分子设计和重组蛋白等方面解决靶向CD47 抗肿瘤治疗时发生的贫血和输液相关不良反应等问题。本文就CD47 的分子结构与生理功能、CD47-SIRPα 表达调控机制、CD47 抗肿瘤治疗研究现状以及靶向CD47 导致的相关生物安全性问题和解决方案等方面进行综述，为CD47新靶点的基础研究和临床应用提供参考。     

CD47在淋巴瘤治疗中的研究进展

CD47作为一种跨膜蛋白,广泛分布于多种细胞,通过与巨噬细胞上信号调节蛋白α（SIRPα）结合,释放抑制信号,逃避巨噬细胞的吞噬。淋巴瘤细胞CD47表达上调是诱导免疫逃逸的重要机制之一,也是潜在的治疗靶点。文章就CD47诱导的免疫逃逸、靶向CD47的单克隆抗体和细胞免疫治疗等治疗手段在淋巴瘤治疗中的研究进展进行综述。     

CD13靶向治疗研究进展

1 CD13功能CD13是最早被认定的正常或恶性髓性细胞的表面标志物[1],多年来用于对白血病或淋巴瘤细胞的定性和分型。在骨髓单核细胞品系中,CD13多见于前体细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞和中性粒细胞。外周血和扁桃体淋巴细胞为阴性。然而,CD13并非仅在髓性细胞才表达,许多其他类     

抗CD47单克隆抗体制备及其促巨噬细胞吞噬作用鉴定

目的:制备可识别肿瘤细胞表达CD47蛋白的抗CD47单克隆抗体,并鉴定其抗肿瘤作用。方法:利用BL21(DE3)原核表达系统表达CD47胞外段蛋白,利用Ni-NTA层析纯化表达蛋白。免疫BALB/c小鼠,制备并筛选分泌抗CD47单克隆抗体的杂交瘤细胞株。利用正辛酸-硫酸铵沉淀方法纯化抗CD47单抗。利用流式细胞术检测纯化抗体的活性。利用巨噬细胞与肿瘤细胞共培养试验,检测抗CD47单抗的抗肿瘤作用。结果:表达并纯化了CD47胞外段蛋白,筛选到了分泌抗CD47单克隆抗体的杂交瘤细胞株—7D4,流式细胞术检测结果显示,抗体具有结合肿瘤细胞的活性,但是对不同肿瘤类型细胞的结合效率存在差异。巨噬细胞与肿瘤细胞共培养试验发现,利用抗体封闭肿瘤细胞CD47信号后,可以增强巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬作用。结论:抗CD47单抗—7D4可以促进巨噬细胞的吞噬作用,具有潜在应用价值。     

一株靶向CD90+MHCC97-L细胞单克隆抗体治疗肝癌的实验研究

目的:研究抗人肝癌干细胞单抗28C10体内外功能,为肝癌干细胞的靶向治疗提供有应用价值的候选治疗剂。方法:采用无血清成球实验、侵袭实验和CCK-8方法等检测分析28C10单抗对MHCC97-L sphere的细胞自我更新、侵袭和耐药的影响。裸鼠体内治疗实验研究单抗28C10联合顺铂对MHCC97-L移植瘤生长的作用。Western-Blot方法鉴定该单抗识别抗原的分子量。结果:流式细胞检测结果显示单抗28C10能够识别MHCC97-L中CD90阳性细胞的比例为2.75%。体外功能实验结果显示单抗28C10能显著抑制MHCC97-L sphere细胞的无血清成球能力和侵袭能力,抑制率分别达33.33%和53.8%。28C10能显著抑制MHCC97-L sphere的顺铂耐药能力,其IC50为0.74 μg/ml,而对照组的IC50为1.42 μg/ml。抗体体内治疗实验结果显示,低、高剂量抗体28C10均能抑制肝癌移植瘤的生长,抑制率分别达到了24.0%和67.7%,单独顺铂组肝癌移植瘤的抑制率为35.9%,而顺铂联合高剂量抗体28C10组对肝癌移植瘤的抑制率达到70.1%。Western-Blot结果显示单抗28C10识别的抗原蛋白分子量约100 kD。结论:筛选获得了1株抗肝癌干细胞的功能性单抗,为靶向肝癌干细胞治疗肝癌奠定了重要的基础。     

靶向CD47的抗肿瘤抗体研究进展

CD47是个多能分子,在肿瘤细胞逃避免疫监视过程中扮演重要角色,阻断CD47信号通道能有效激发巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬作用,成为非常有前景的肿瘤免疫治疗新途径。靶向CD47的单克隆抗体已成为近年来研究的新热点,目前的实验进展顺利,有必要进行更详尽的研究,使其早日进入临床应用。     

抗CD123抗体靶向治疗急性髓系白血病

白血病干细胞（leukemic stem cells,LSCs）被认为是白血病发生、发展、耐药、复发的根源,如何彻底根除LSCs已成为白血病治疗研究的一个重要方向。CD123是LSCs表面相对特异的抗原,针对其研发的靶向抗体治疗药物可有效杀伤急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）的LSCs,本文对抗CD123抗体靶向治疗AML的最新进展做一综述。     

CD47抑制剂在恶性肿瘤治疗中研究进展

目的 针对淋巴瘤和恶性实体肿瘤,多项以CD47为靶点单克隆抗体的Ⅰ-Ⅱ期临床试验已经展开,本研究对CD47抑制剂在多种恶性肿瘤临床应用中的研究进展进行综述.方法 应用PubMed及CNKI期刊全文数据库检索系统,以“CD47、巨噬细胞、免疫治疗、恶性肿瘤”为关键词,检索2009-01-2018-12的相关文献,共检索到...     

CD47 blockade inhibits tumor progression human osteosarcoma in xenograft models

Osteosarcoma is the most common bone tumors in children and adolescents. Despite intensive chemotherapy, patients with advanced disease still have a poor prognosis, illustrating the need for alternative therapies. In this study, we explored the use of antibodies that block CD47 with a tumor growth suppressive effect on osteosarcoma. We first found that up-regulation of CD47 mRNA levels in the tumorous tissues from eight patients with osteosarcoma when compared with that in adjacent non-tumorous tissues. Further western-blot (WB) and immunohistochemistry (IHC) demonstrated that CD47 protein level was highly expressed in osteosarcoma compared to normal osteoblastic cells and adjacent non-tumorous tissues. Osteosarcoma cancer stem cell markers staining shown that the majority of CD44⁺ cells expressed CD47 albeit with different percentages (ranging from 80% to 99%). Furthermore, high CD47 mRNA expression levels were associated with a decreased probability of progression-free and overall survival. In addition, blockade of CD47 by specific Abs suppresses the invasive ability of osteosarcoma tumor cells and further inhibits spontaneous pulmonary metastasis of KRIB osteosarcoma cells in vivo. Finally, CD47 blockade increases macrophage phagocytosis of osteosarcoma tumor cells. In conclusion, our findings demonstrate that CD47 is a critical regulator in the metastasis of osteosarcoma and suggest that targeted inhibition of this antigen by anti-CD47 may be a novel immunotherapeutic approach in the management of this tumor.     

CD44与消化系统肿瘤的关系及靶向治疗研究进展

消化系统恶性肿瘤发病率和死亡率较高,一直以来影响着人类健康,更有效的诊治策略可提升患者预后.近年来,肿瘤干细胞(CSCs)被认为是肿瘤发生发展的内在因素,是肿瘤复发、转移及放化疗抵抗的重要原因.CD44是一种可与多种配体结合的跨膜单链糖蛋白,已被证实是多种恶性肿瘤的CSCs标志物.经选择性剪切,CD44可产生标准型(C...     

大肠癌分子靶向治疗

大肠癌为消化道常见恶性肿瘤之一，但传统的化疗效果仍不理想。新近在分子靶向治疗方面已经取得了实质性的进展，其高效低毒的特性越来越引起人们的重视。本文就目前在大肠癌分子靶向治疗方面的新进展进行综述。     

功能性单克隆抗体40E11靶向治疗肺癌的实验研究

目的:检测分析抗肺癌单克隆抗体40E11识别的靶抗原在肺癌细胞系及肺癌组织中的表达,研究单克隆抗体40E11体内外抑瘤功能,并初步鉴定其识别的抗原蛋白,为肺癌的靶向治疗提供候选抗体药物及靶标.方法:应用细胞免疫荧光检测单克隆抗体40E11所识别的靶抗原在肺癌细胞系中的表达及定位,免疫组化检测其在人肺癌组织中的表达;CCK-8法检测分析40E11对肺癌细胞增殖的影响.裸鼠体内治疗实验研究40E11对移植瘤生长的抑制作用.Western bloting鉴定该单克隆抗体识别的抗原的分子量.结果:单克隆抗体40E11识别的抗原在人肺腺癌细胞(A549、GLC-82、ANIP-973)、人肺鳞癌细胞(GLC-P)的胞内及胞膜均有表达;该抗原在84.6％的人肺癌组织中的表达较癌旁组织显著上调;CCK-8法检测结果显示单克隆抗体40E11明显抑制肺癌细胞体外生长;抗体治疗实验结果表明单克隆抗体40E11明显抑制体内肺癌细胞生长,其抑制率达64.4％,P＜0.05;蛋白质印迹法显示40E11识别的抗原相对分子质量约为100×103.结论:抗肺癌单克隆抗体40E11在体内外能显著抑制肺癌细胞的生长,为肺癌的靶向治疗提供具有重要应用价值的候选抗体药物.     

抗肺癌单克隆抗体15A1的靶抗原在肺癌细胞中的表达及其转位特征

目的:分析抗肺癌单克隆抗体15A1的靶抗原在肺癌细胞的表达、亚细胞定位和转位的特征,研究15A1的体内外抑瘤功能,为肺癌靶向治疗提供候选抗体药物及靶标。方法:采用免疫荧光及细胞流式术检测单克隆抗体15A1靶抗原在肺癌细胞中的表达及定位,免疫组化分析其在人肺癌组织中的表达;CCK-8法和裸鼠移植瘤体内抗体抑瘤实验评估该单克隆抗体对肺癌细胞的抑制作用。结果:单克隆抗体15A1识别的抗原在人肺腺癌细胞(A549、ANIP-973、GLC-82、Calu-3、H157、H1299)、人肺鳞癌细胞(GLC-P、H520)、人小细胞肺癌细胞(H446、H209)、人大细胞肺癌细胞(PG、H460)共12种细胞的胞内及胞膜上均有表达,肺腺癌细胞的表达强度明显高于其他病理类型肺癌细胞;该抗原在75%的人肺癌组织中非常特异地上调表达。该抗原在肺腺癌细胞中相当一部分从胞核转位至胞质,在肺鳞癌细胞中仅有小部分从细胞核转位至细胞质;转位抗原的一部分表达于膜表面,并同样是肺腺癌细胞的表达强度强于肺鳞癌细胞。该单克隆抗体体内外显著抑制肺癌细胞的生长,抑瘤率在25%～80%。结论:单克隆抗体15A1在体内外能显著抑制肺癌的生长,其靶抗原在人肺癌组织和细胞中特异上调表达,并能以特定转位模式表达于肺癌细胞膜上,可能是一个肺癌靶向治疗的潜在靶标。     

肿瘤靶向治疗现状和发展前景

近年来,随着分子生物学技术的提高,以及从细胞受体和增殖调控的分子水平对肿瘤发病机制的进一步认识,人们开始进行以细胞受体、关键基因和调控分子为靶点的治疗,亦称之为靶向治疗（targeted therapy）。     

肿瘤分子靶向治疗研究现状

分子靶向治疗药物成为近年来肿瘤治疗发展领域的研究热点，以低毒高效的特点逐步成为临床肿瘤治疗的重要部分，大量的临床试验集中于研究该类药物的疗效和毒副反应。本文拟对肿瘤分子靶向治疗药物的最新研究情况加以概述。     

CD 33 as a target of therapy in acute myeloid leukemia: current status and future perspectives

CD33 is a myeloid cell surface antigen that is expressed on blast cells in acute myeloid leukemia (AML) in a majority of all patients regardless of age or subtype of disease. The antigen is also expressed on leukemic stem cells in many cases, but is not expressed on normal hematopoietic stem cells. In an attempt to improve therapy in AML, a CD33-targeted drug has been developed. The drug, gemtucumab ozogamicin (GO; Mylotarg®), consists of a humanized CD33 antibody (hP67.6), a pH-dependent linker, and a highly potent chemotherapy agent, calicheamicin 1,2,-dimethyl hydrazine dichloride. Based on its clinical activity, GO has been approved for application in chemotherapy-refractory AML in various countries and is effective as a monosubstance as well as in combination with conventional chemotherapy. However, despite high efficacy and a certain specificity for leukemic (as opposed to normal) stem cells, the drug does not work in all patients, and can produce significant side-effects, including veno-occlusive disease (VOD), especially in patients who undergo stem cell transplantation. These side-effects have to be balanced against the benefit of GO therapy in patients with relapsed or refractory AML.