沉默FAM83D基因调控上皮-间质转化对食管鳞癌放射敏感性影响

目的 探讨沉默FAM83D对X线照射后食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞增殖、存活能力及侵袭、迁移能力的影响及机制。方法 采用免疫组化法检测 69例ESCC患者组织中FAM83D、E-cadherin、vimentin的表达。免疫印迹法检测ECA109、KYSE30细胞FAM83D基因沉默效果。MTS、克隆形成实验和Transwell方法检测ECA109、KYSE30细胞增殖活性、存活能力及侵袭能力。流式细胞术和免疫印迹法检测ECA109、KYSE30细胞凋亡分布、上皮-间质转化(EMT)及凋亡相关蛋白表达。结果 ESCC组织中55%(38/69) FAM83D强表达,36%(25/69) E-cadherin强表达,61%(42/69) vimentin强表达;FAM83D强表达与E-cadherin强表达呈负相关(r=-0.350,P<0.01),与vimentin强表达呈正相关(r=0.470,P<0.01)。ECA109、KYSE30细胞沉默FAM83D后降低了FAM83D蛋白表达(P<0.01)。MTS和克隆形成实验数据显示照射后沉默FAM83D显著抑制了ECA109、KYSE30细胞增殖水平(P<0.05)、增加了放射敏感性(P<0.01)。照射后FAM83D shRNA组ECA109、KYSE30细胞侵袭力降低(P<0.01)、E-cadherin表达增加,而N-cadherin、vimentin、Snail、p-Akt、p-GSK-3β表达降低(P<0.01)。照射后FAM83D shRNA组ECA109、KYSE30细胞凋亡率明显增加(P<0.01),同时Bcl-2、Mcl-1表达下调,Cleaved caspase-3的表达上调(P<0.01)。结论 FAM83D与ESCC的侵袭发展密切相关。沉默ECA109、KYSE30细胞FAM83D表达联合X线照射降低了其增殖、侵袭和存活能力,诱导了细胞凋亡,增加了放射敏感性,该作用可能通过Snail/Akt/GSK-3β信号途径来调控EMT。     

长链非编码RNA SNHG3在食管鳞状细胞癌中的表达及其对ECA-109细胞迁移和侵袭的影响

  目的  探究长链非编码RNA SNHG3在食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma，ESCC）组织中的表达及其对ECA-109细胞迁移和侵袭的影响。  方法  收集安阳市肿瘤医院2011年6月到2014年6月收治的60例ESCC患者癌及对应癌旁组织样本，采用qRT-PCR检测ESCC癌与癌旁组织、ESCC细胞ECA-109和人正常食管上皮细胞HEEC中lncRNA SNHG3的表达水平，分析ESCC患者组织中lncRNA SNHG3的表达与ESCC患者临床特征的关系。采用siRNA-SNHG3质粒转染ECA-109细胞，以敲降lncRNA SNHG3的表达水平。采用Kaplan-Meier法分析lncRNA SNHG3表达与患者预后的关系。采用Transwell实验检测ECA-109细胞的迁移和侵袭能力。采用qRT-PCR和Western blot实验检测ECA-109细胞中SNAIL和TWIST的mRNA及蛋白的表达水平。  结果  ESCC肿瘤组织中lncRNA SNHG3的表达水平显著高于癌旁组织（P < 0.05），ECA-109细胞中lncRNA SNHG3的表达水平显著高于人正常食管上皮细胞HEEC（P < 0.05）。ESCC患者组织中lncRNA SNHG3的表达水平与肿瘤分化程度、TNM分期及淋巴结转移情况显著相关（P < 0.05）。siRNA-SNHG3质粒转染ECA-109细胞后，lncRNA SNHG3的表达水平显著降低（P < 0.05）。lncRNA SNHG3的高表达与ESCC患者预后不良显著相关。敲降lncRNA SNHG3后，ECA-109细胞的迁移和侵袭能力显著降低（P < 0.05），SNAIL和TWIST的mRNA及蛋白的表达水平显著降低（P < 0.05）。  结论  lncRNA SNHG3在ESCC肿瘤组织和细胞中高表达，通过调控SNAIL和TWIST蛋白的表达，促进ECA-109细胞的迁移和侵袭。      

NCOR2 基因通过调控PI3K/AKT 通路促进食管鳞状细胞癌KYSE450细胞迁移和侵袭

目的：探究核受体辅阻遏物2(NCOR2)基因对食管鳞状细胞癌（ESCC）发生发展的影响及其潜在的分子调控机制。方法:收集2017年5月至2018年7月间在山西省肿瘤医院确诊的155例ESCC患者的癌及癌旁组织标本及临床资料,利用患者的转录组和临床病理数据进行生存预后分析及临床关联性分析。采用qPCR法检测6种ESCC细胞（TE-1、TE-5、TE-9、KYSE150、KYSE180和KYSE450）中NCOR2基因的表达水平,筛选NCOR2基因高表达的KYSE450细胞进行siRNA敲低实验,构建敲降NCOR2的细胞模型。利用CCK-8、克隆形成、细胞划痕和Transwell实验检测敲低NCOR2对KYSE450细胞增殖活性、克隆形成、迁移和侵袭能力的影响。对NCOR2敲低的KYSE450细胞进行转录组测序分析,筛选差异表达基因,进行GO和KEGG富集分析,解析NCOR2可能影响的信号调控网络。结果：NCOR2在ESCC组织中表达水平显著高于癌旁组织（P<0.01）,NCOR2高表达ESCC患者的预后较差（P<0.05）。敲低NCOR2基因表达后,KYSE450细胞划痕愈合...     

lncRNA NUP50-AS1 在食管鳞癌组织中的表达及其对Eca109 细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨长链非编码RNA（long non-coding RNA, lncRNA）NUP50-AS1 在食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell cancer, ESCC）组织及细胞株中的表达及其对人食管癌Eca109 细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法：选取自2015 年1 月至2016 年12 月河北医科大学第四医院生物标本库的49 例ESCC手术患者的癌组织和相应癌旁组织,qRT-PCR检测ESCC癌组织、癌旁组织及5 种食管癌细胞株（TE1、TE13、Eca109、Kyse150 和Kyse170）中NUP50-AS1 表达水平。shRNA 转染NUP50-AS1 后,选用sh2 -NUP50-AS1 进行后续功能实验。采用MTS法、克隆形成实验检测敲减NUP50-AS1 表达对Eca109 细胞增殖的影响,划痕实验检测敲减NUP50-AS1 表达对细胞迁移的影响,Transwell 小室实验检测敲减NUP50-AS1 表达对细胞侵袭的影响。结果：NUP50-AS1 在ESCC组织中的相对表达量显著高于癌旁组织(2.003±0.870 vs 1.000±0.000,P<0.05）;NUP50-AS1 在ESCC组织中的表达水平与淋巴结转移及TNM分期相关（均P<0.01）,NUP50-AS1 在5 株食管癌细胞系中相对表达量均明显上调（P<0.05）,其中Eca109 细胞的NUP50-AS1 表达水平最高。转染后,sh2-NUP50-AS1 转染组干扰效率最高,敲低NUP50-AS1 可明显抑制Eca109 细胞增殖、迁移和侵袭能力。结论：ESCC组织中lncRNA NUP50-AS1 表达明显高于癌旁组织,且与癌症分期和淋巴结转移有关,敲减其表达明显抑制食管癌细胞增殖、迁移和侵袭能力,NUP50-AS1 的高表达可能与ESCC的发生发展密切相关。     

AJUBA调控MST1 YAP1和TAZ因子促进食管鳞状细胞癌细胞体外增殖 迁移和侵袭

  目的  探讨AJUBA在食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）细胞中表达以及是否通过调控MST1、YAP1和TAZ因子影响细胞增殖、侵袭和迁移。  方法  采用Western blot 法检测AJUBA 蛋白在食管癌细胞系KYSE30、KYSE150与KYSE450中的表达水平,构建shRNA 干扰载体AJUBA转染至KYSE150食管癌细胞系;通过体外克隆形成实验、流式细胞术、划痕实验和Transwell实验探究AJUBA对KYSE150细胞的增殖、周期、迁移和侵袭能力的影响。采用RT-PCR和Western blot检测MST1、YAP1和TAZ mRNA和蛋白的表达;核质分离实验检测AJUBA、YAP1和TAZ蛋白表达情况。  结果  稳定干扰AJUBA基因后,平板克隆实验结果显示,与阴性对照组相比,shAJUBA组的细胞克隆形成数量明显减少,差异具有统计学意义（P<0.001）;流式细胞周期实验结果显示,shAJUBA组中的细胞阻滞于G₀/G₁期,G₂/M期与S期细胞显著减少（P<0.05）;划痕实验和Transwell侵袭实验结果显示,与AJUBA空染组相比,shAJUBA组细胞迁移能力和侵袭能力均明显减弱（P<0.001）;RT-PCR与Western blot实验结果显示,shAJUBA组细胞中的MST1、YAP1、TAZmRNA与蛋白表达水平均显著降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。核质分离实验结果提示AJUBA蛋白在正常食管鳞状上皮细胞株（SHEE）细胞核中表达,而在KYSE150细胞胞质与胞核中表达;YAP1和TAZ蛋白在SHEE细胞中不表达,在KYSE150细胞质与细胞核中表达,上述结果差异均具有统计学意义（均P<0.05）。  结论  AJUBA促进食管癌细胞的增殖、侵袭与迁移,可能与激活MST1、YAP1、TAZ因子的表达而影响食管鳞状细胞癌进展有关。      

circ_0000619通过调控miR-595/GLS轴对食管鳞状细胞癌细胞增殖及谷氨酰胺代谢的影响

目的:探讨circ_0000619/miR-595/GLS轴对人食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）KYSE150细胞增殖、迁移、侵袭和谷氨酰胺代谢的影响及其可能的机制。方法:采用qPCR法检测KYSE150细胞中circ_0000619、miR-595、谷氨酰胺酶（glutaminase,GLS）mRNA等表达水平,Western blot检测KYSE150细胞中GLS蛋白的表达情况,使用细胞计数试剂盒-8（cell counting kit-8,CCK-8）试剂盒、Transwell法分别检测KYSE150细胞增殖、迁移及侵袭能力,使用相应的检测试剂盒检测KYSE150细胞谷氨酰胺消耗、谷氨酸产生及ATP产生水平,利用生物信息学分析技术及双荧光素酶报告基因实验分析并检测circ_0000619、miR-595与GLS mRNA之间的相互作用关系。结果:circ_0000619在ESCC细胞系中呈现高表达,其亲本基因DENND4A mRNA在食管癌组织中呈高表达（P<0.01）;敲减circ_0000619显著抑制KYSE150细胞的增殖、侵袭和迁移能力（P<0.01）,并显著抑制KYSE150细胞的谷氨酰胺消耗、谷氨酸及ATP产生水平（P<0.01）;敲减circ_0000619显著上调miR-595表达（P<0.01）,抑制GLS mRNA（P<0.01）及蛋白的表达;双荧光素酶报告基因实验显示在KYSE150细胞中,circ_0000619与miR-595存在靶向结合、miR-595与GLS存在靶向结合（P<0.01）。circ_0000619敲低显著降低了KYSE150细胞谷氨酰胺代谢和细胞增殖,并且这些作用被miR-595抑制或GLS过表达部分逆转。结论:circ_0000619能通过靶向调控miR-595/GLS轴增强ESCC细胞谷氨酰胺代谢及细胞增殖,并可能成为潜在的ESCC治疗靶点。     

WISP1在食管鳞癌组织和细胞中的表达及对细胞侵袭迁移的影响

目的探讨Wnt诱导的分泌型蛋白1(WISP1)在食管鳞癌(ESCC)组织和细胞中的表达及其对ESCC细胞增殖和侵袭迁移的影响。方法应用基因芯片技术筛选ESCC的差异表达基因,免疫组化检测43例ESCC组织的WISP1蛋白水平,实时定量PCR(qPCR)检测78例ESCC组织及人食管上皮细胞HET-1A和ESCC细胞(TE-1、KYSE150、Eca109、KYSE450和EC9706)的WISP1 mRNA水平;脂质体法将靶向WISP1的小干扰RNA(si-WISP1)和阴性siRNA(si-NC)转染Eca109和KYSE450细胞,采用MTT比色法检测增殖活力,Transwell小室实验检测迁移和侵袭能力。结果按照差异倍数≥2.0、P≤0.05的标准在ESCC中筛选出108个差异有统计学意义的基因,其中高表达61个、低表达47个,上调倍数最高的基因依次为WISP1、HOXC8和HMGA2,而下调最高的基因依次为HLF、PLA2G2A和LOC729264。ESCC组织的W1SP1高表达率为72.09%(31/43),高于癌旁组织的32.56%(14/43),ESCC组织中WISP1 mRNA水平为1.882±1.551,高于癌旁组织的-1.784±1.383(P<0.05),分层分析发现有淋巴结转移者的WISP1 mRNA水平高于无淋巴结转移者(P<0.05)。与HET-1A细胞相比,ESCC细胞的WISP1水平升高(P<0.05),而Eca109和KYSE450细胞转染si-WISP1后的WISP1水平、增殖活力和穿膜细胞数均低于转染si-NC的细胞(P<0.05)。结论WISP1在ESCC组织和细胞中均为高表达且参与了ESCC转移过程,下调WISP1可抑制ESCC细胞的增殖和侵袭迁移能力,有望成为ESCC诊治的潜在新靶标。     

miRNA-26b-3p通过靶向STAT3调控食管鳞状细胞癌细胞的增殖和迁移

目的：观察miR-26b-3p在食管鳞状细胞癌（ESCC）组织中的表达水平及其对ESCC细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响,并探讨其分子调控机制。方法: 选取河北医科大学第四医院2018年4月1日至2018年12月25日手术切除的ESCC组织及相应癌旁组织各60例,利用qPCR法检测ESCC组织、癌旁组织和ESCC细胞中miR-26b-3p的表达。选取miR-26b-3p表达水平较低的ESCC细胞TE1和KYSE150,转染miR-26b-3p mimic,并设立阴性对照。利用细胞增殖实验、划痕愈合实验和Transwell实验检测过表达miR-26b-3p对TE1和KYSE150细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。荧光素酶报告基因实验检测miR-26b-3p与STAT3的 3''UTR 靶点部位的结合情况。随后同时转染 miR-26b-3p mimic 和 pcDNA3.0-STAT3,利用细胞增殖实验、划痕愈合实验和Transwell实验检测STAT3是否可逆转过表达miR-26b-3p对细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。qPCR 和 WB法检测甲基化酶抑制剂5-Aza-DC对ESCC细胞甲基化的影响和miR-26b-3p与STAT3表达的影响。结果: miR-26b-3p在ESCC组织中的表达低于癌旁组织（P<0.01）,其在 ESCC 细胞TE1、KYSE150和LYSE170中表达水平显著低于人正常食管上皮细胞HEEC（均P<0.01）。与miR-26b-3p NC组相比,miR-26b-3p mimic转染可明显上调TE1和KYSE150细胞中miR-26b-3p的表达（均P<0.01）,但可明显抑制两种细胞的增殖、迁移和侵袭能力（P<0.05或P<0.01）。荧光素酶报告基因实验结果表明,在TE1和KYSE150细胞中,miR-26b-3p明显抑制了野生型STAT3载体的荧光素酶活性（P<0.05或P<0.01）,而突变型的荧光素酶活性不受影响。同时转染miR-26b-3pmimic和pcDNA3.0-STAT3可部分逆转miR-26b-3p mimic对TE1 和 KYSE150 细胞增殖、迁移和侵袭能力的抑制作用（P<0.05或P<0.01）。5-Aza-DC 处理后 ,TE1 和 KYSE150 细胞中 miR-26b-3p 表达上调（均 P<0.01）、STAT3 mRNA 和蛋白水平降低（P<0.05）,miR-26b-3p呈现去甲基化状态。结论: miR-26b-3p的启动子高甲基化导致其在ESCC组织和细胞中的表达下调,其作为抑癌因子可通过靶向STAT3而抑制ESCC细胞的增殖、侵袭和迁移能力。     

过表达lncRNA LINC00886 抑制食管鳞状细胞癌Eca109 细胞的恶性生物学行为

[摘要] 目的: 检测lncRNA LINC00886 在食管鳞状细胞癌（ESCC）组织及细胞系中的表达及其对Eca109 细胞体外增殖、迁移及侵袭的影响。方法: 收集2014 年6 月至2016 年12 月河北医科大学第四医院生物标本库69 例ESCC手术患者的癌及对应的癌旁组织标本,以及ESCC细胞系Eca109、TE13、TE1、Kyse150、Yes-2 和Kyse170,用qPCR 法检测LINC00886 在ESCC组织及细胞系中的表达情况。分别用pIRES2-LINC00886、pIRES2-NC转染Eca109 细胞,用qPCR法检测pIRES2-LINC00886 转染Eca109细胞后LINC00886 的过表达效率;用MTS、克隆形成实验、划痕愈合实验、Transwell 侵袭实验分别检测过表达LINC00886 对Eca109 细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。结果: 在ESCC组织中LINC00886 表达水平明显低于癌旁组织（P<0.01）,其表达水平与肿瘤TNM分期和淋巴结转移相关（均P<0.05）。LINC00886 在ESCC 细胞中的表达水平也低于对照组（均P<0.01）。转染pIRES2-LINC00886 后,Eca109 细胞中LINC00886 的表达水平显著高于对照组（均P<0.05）。与对照组相比,过表达LINC00886 明显抑制Eca109 细胞的增殖、迁移和侵袭能力(均P<0.01)。结论: lncRNA LINC00886 低表达可能与ESCC的发生发展相关,过表达LINC00886可抑制ESCC细胞的增殖、迁移与侵袭能力。     

食管鳞癌中lncRNA uc061hsf.1的表达及对Eca109、KYSE450细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的:探讨uc061hsf.1基因在食管鳞癌（esophageal squamous cell carcinoma，ESCC）中表达及其对Eca109与KYSE450细胞增殖、凋亡、侵袭能力的影响。方法:本文对34例ESCC组织及癌旁组织进行RT-PCR检测，分析uc061hsf.1的表达与ESCC临床病理特征关系；通过在Eca109与KYSE450细胞系中沉默和上调uc061hsf.1表达，分别检测两组细胞增殖、凋亡、侵袭能力的变化。结果:uc061hsf.1在ESCC组织中低表达，其表达水平在分化差、淋巴结转移的患者中更低（P均＜0.05），与年龄、性别等无明显相关性；沉默uc061hsf.1可导致Eca109与KYSE450细胞系增殖及侵袭能力均明显升高，细胞凋亡无明显变化；相反，上调uc061hsf.1在这两组细胞系中的表达，则两组细胞系的增殖和侵袭能力均明显降低，且细胞凋亡率明显增加。结论:uc061hsf.1沉默可促进食管鳞癌Eca109与KYSE450细胞增殖和侵袭能力；而过表达uc061hsf.1能够抑制Eca109与KYSE450细胞增殖和侵袭，且促进细胞凋亡。     

linc00941通过miR-203/CCL2轴调控食管鳞状细胞癌细胞增殖、侵袭和 糖酵解

目的：探究linc00941作为ceRNA吸附miR-203上调CC-趋化因子配体2（CC chemokine ligand 2,CCL2）的表达在食管鳞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）中的作用机制。方法：选取南阳医学高等专科学校第一附属医院58例ESCC患者的癌组织和癌旁组织,其中,男性患者 33 例,年龄（49.3±18.6）岁,女性患者 25 例,年龄（44.6±20.7）岁。qPCR 法检测linc00941、miR-203、CCL2 在 ESCC 组织和 4 株人 ESCC 细胞系（EC9706、KYSE30、ECA109 和 TE1）以及人正常食管上皮细胞株HET-1A 细胞系中的表达。构建 linc00941-wt、linc00941-mut、CCL2-wt、CCL2-mut 质粒并分别与 miR-203 NC 或 miR-203 模拟物共转染到 293T细胞中。双荧光素酶报告基因实验验证 linc00941、miR-203、CCL2之间的相互作用。CCK-8和 Transwell实验检测细胞的增殖与侵袭能力。乳酸含量检测评价细胞的糖酵解能力。流式细胞术检测细胞的凋亡情况。糖酵解抑制剂2-DG以及linc00941共同干预ESCC细胞,以进一步观察linc00941对ESCC细胞的调控作用。结果：在ESCC组织中和细胞系中linc00941、CCL2表达均上调,miR-203表达下调（均P<0.05）。linc00941与miR-203、miR-203与CCL2的相互作用在ECA109细胞中得到证实。下调 linc00941 能够抑制 ECA109 细胞的增殖、侵袭和糖酵解,并诱导细胞凋亡,该作用被 miR-203 抑制剂部分逆转（均P<0.05）。过表达 CCL2 可以部分逆转敲减 linc00941 对 ECA109 细胞增殖、侵袭、糖酵解和凋亡的影响（均 P<0.05）。结论：linc00941能够吸附miR-203进而上调CCL2的表达,促进ESCC细胞的增殖、侵袭和糖酵解,诱导细胞凋亡。linc00941对ESCC细胞增殖、侵袭和凋亡的影响可能是通过调控糖酵解实现的。     

MicroRNA-373 promotes migration and invasion in human esophageal squamous cell carcinoma by inhibiting TIMP3 expression

Esophageal squamous cell carcinoma (ESCC) is the predominant pathological type of esophageal carcinoma in Asia. MicroRNAs (miRNAs) are a class of 19-22-nucleotide non-coding RNAs acting on target mRNAs that function as either oncogenes or anti-oncogenes. It has been confirmed that miR-373 expression varies among different tumor types. However, its mechanism is still unclear in ESCC. In our current study, we found that miR-373 expression was upregulated in ESCC tissues compared with matched adjacent normal tissues, as well as in the plasma of ESCC patients compared with that of healthy volunteers. Overexpression of miR-373 in ECA109 cells enhanced proliferation, G1-phase cell proportion, migration, and invasion. On the other hand, suppression of miR-373 in KYSE410 cells decreased proliferation, G1-phase cell proportion, migration, and invasion and also improved cell apoptosis. Moreover, we found that TIMP3, which was reported to suppress invasion and metastasis of ESCC, was a direct target of miR-373. Overexpression of miR-373 in ECA109 caused a reduction of TIMP3 mRNA and protein, whereas suppression of miR-373 in KYSE410 led to an increase of TIMP3 mRNA and protein. Introducing TIMP3 in miR-373 over-expressed cells or knocking down TIMP3 in miR-373 suppressed cells could partially abrogate the effect of miR-373 on migration and invasion. Therefore, these results prove that as an oncogene, miRNA-373 would be an important and reliable biomarker for ESCC diagnosis and treatment by targeting TIMP3.     

Claudin-2蛋白在食管鳞癌组织中的表达及其对KYSE450细胞恶性生物学行为的影响

目的:分析Claudin-2蛋白在食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)组织中的表达及其与患者临床病理特征、5年生存率的关系,探索其对ESCC细胞KYSE450的增殖、迁移和侵袭的影响.方法:选取河南省肿瘤医院2010至2013年间初治的ESCC患者手术切除肿瘤组织5...     

RNA干扰HMGB1基因对食管鳞癌细胞X线照射后增殖与迁移能力影响

目的 RNAi技术干扰人食管鳞癌细胞中HMGB1基因表达,观察X线照射后细胞增殖活性、迁移和存活能力及细胞周期分布。方法 RT-PCR和Western blot法检测HMGB1 mRNA和蛋白表达;分别采用MTS和Transwell方法检测食管鳞癌细胞ECA109、KYSE30细胞增殖活性和迁移能力;克隆形成实验检测各组细胞的存活能力;流式细胞术检测照射后各组的细胞周期分布。结果 照射组ECA109、KYSE30细胞中HMGB1 mRNA和蛋白表达水平较未照射组明显增加(P<0.05),且存在剂量-效应和时间-效应关系;MTS结果显示食管鳞癌细胞的增殖水平在照射后不同时间点均明显降低(P<0.01);HMGB1沉默组细胞中HMGB1 mRNA和蛋白的表达均明显低于对照组和NC组(P<0.01);克隆形成实验结果显示HMGB1表达降低后,肿瘤细胞的放射敏感性明显增加(P<0.01);Tanswell侵袭小室模型检测显示照射后4 h沉默组穿膜细胞数明显降低(P<0.01),且沉默组G0/G1期比例明显高于对照组和NC组,S期比例显著低于其他组,照射后这种趋势更明显(P<0.01)。结论 RNAi干扰技术降低食管鳞癌细胞中HMGB1的表达,降低了细胞增殖和迁移能力,通过诱导照射后G0/G1期阻滞增加了放射敏感性。     

RNA干扰HMGB1基因对食管鳞癌细胞X线照射后增殖与迁移能力影响

目的 RNAi技术干扰人食管鳞癌细胞中HMGB1基因表达,观察X线照射后细胞增殖活性、迁移和存活能力及细胞周期分布。方法 RT-PCR和Western blot法检测HMGB1 mRNA和蛋白表达;分别采用MTS和Transwell方法检测食管鳞癌细胞ECA109、KYSE30细胞增殖活性和迁移能力;克隆形成实验检测各组细胞的存活能力;流式细胞术检测照射后各组的细胞周期分布。结果 照射组ECA109、KYSE30细胞中HMGB1 mRNA和蛋白表达水平较未照射组明显增加(P<0.05),且存在剂量-效应和时间-效应关系;MTS结果显示食管鳞癌细胞的增殖水平在照射后不同时间点均明显降低(P<0.01);HMGB1沉默组细胞中HMGB1 mRNA和蛋白的表达均明显低于对照组和NC组(P<0.01);克隆形成实验结果显示HMGB1表达降低后,肿瘤细胞的放射敏感性明显增加(P<0.01);Tanswell侵袭小室模型检测显示照射后4 h沉默组穿膜细胞数明显降低(P<0.01),且沉默组G0/G1期比例明显高于对照组和NC组,S期比例显著低于其他组,照射后这种趋势更明显(P<0.01)。结论 RNAi干扰技术降低食管鳞癌细胞中HMGB1的表达,降低了细胞增殖和迁移能力,通过诱导照射后G0/G1期阻滞增加了放射敏感性。     

IQGAP1 在食管鳞状细胞癌中的表达及其对TE-2 细胞恶性生物学行为的影响

[摘要] 目的：探讨具有IQ 结构域的GTP 激酶活化蛋白1（Ras GTPase-activating-like protein, IQGAP1）在食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）组织与细胞中的表达及其对TE-2 细胞增殖及侵袭能力的影响。方法: 收集2015 年1 月至2016 年12 月郑州大学附属肿瘤医院125 例ESCC手术切除的癌及癌旁组织标本,以及ESCC细胞系TE-2、TE-3、ECA109 和正常食管上皮细胞株Het-1A。用免疫组化染色法检测癌组织中IQGAP1 的表达,分析其表达水平与临床病理特征的关系;用qPCR和Western blotting 检测ESCC细胞中IQGAP1 mRNA和蛋白的表达。用si-IQGAP1（阳性转染组）、si-CTRL（阴性对照组）质粒转染TE-2 细胞,用MTT法、Transwell 小室法和Western blotting 分别检测沉默IQGAP1 对TE-2 细胞增殖、侵袭能力以及上皮钙黏蛋白和神经钙黏蛋白表达的影响。结果: IQGAP1 在ESCC组织中的阳性表达率明显高于癌旁组织（P<0.05）,其高表达与肿瘤分期和分级密切相关（均P<0.05）;IQGAP1 mRNA和蛋白在TE-2、TE-3、ECA109 细胞中表达水平显著高于Het-1A细胞（均P<0.05）。沉默IQGAP1 后,与阴性对照组和空白组比较,阳性转染组TE-2 细胞中IQGAP1 mRNA及蛋白的表达水平明显下降（均P<0.05）;细胞的增殖和侵袭能力显著降低（均P<0.05）,上皮钙黏蛋白表达水平升高（P<0.05）,神经钙黏蛋白表达水平下降（P<0.05）。结论: IQGAP1 在ESCC组织中高表达,敲减IQGAP1 可抑制ESCC细胞的增殖和侵袭能力,其在ESCC的发生发展过程中起重要的作用。     

尼美舒利对不同COX-2表达水平的食管鳞癌细胞的抑制作用

目的：比较选择性环氧合酶-2（COX-2）抑制剂尼美舒利对不同COX-2表达水平的食管鳞癌细胞的抑制作用。方法：选取食管鳞癌细胞株EC 109、KYSE 150和TE-1,采用Western blot方法测定COX-2蛋白表达、MTT法检测细胞增殖抑制,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,观察尼美舒利对各组细胞的增殖抑制和促凋亡作用。结果：COX-2蛋白在EC 109细胞中呈高表达,KYSE 150细胞中呈中等度表达,TE-1细胞不表达COX-2蛋白。尼美舒利在50μmol/L-400μmol/L浓度区间可抑制EC 109、KYSE 150细胞的增殖（P〈0.05）,并呈剂量依赖性,在400μmol/L时对TE-1细胞有抑制作用。EC 109细胞尼美舒利的IC50值最低,KYSE150次之,TE-1最高。尼美舒利可使EC 109和KYSE 150的细胞周期阻滞于G0/G1期,并诱导细胞凋亡,但对TE-1细胞无上述作用。结论：尼美舒利对表达COX-2的食管鳞癌细胞有较好的增殖抑制和促凋亡作用。