Livin转录变体在结肠癌中的表达及其临床意义

目的:探讨凋亡蛋白抑制因子Livin 2种转录变体(Livin α和Livin β)在结肠癌中的表达及其临床意义.方法:采用以SYBR Green Ⅰ为染料的实时荧光定量-PCR(real-time fluorogentic quantitative PCR,RFQ-PCR),分析24例结肠癌组织中Livin α和Livin β2种转录变体的表达情况,并以癌旁正常组织和良性病变组织作为对照.结果:结肠癌组织中Livin α的表达阳性率为75%(18/24),明显高于癌旁正常组织的16.7%(4/24)和良性病变组的11.1%(1/9);Livin β的阳性率为83.3%(20/24),癌旁正常组织为16.7%(4/24),良性病变组为11.1%(1/9);Livin α和Livin β的表达率与患者的性别、癌症转移无相关性(P>0.05),与结肠癌Dukes病理分期也无明显相关性,但Livin α与结肠癌分化程度呈正相关(P<0.05).结论:凋亡蛋白抑制因子Livin 2种转录变体在结肠癌组织中高表达,且Livin α与结肠癌分化程度密切相关.     

结肠癌转移相关基因1在结肠癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨结肠癌组织中结肠癌转移相关基因1（MACC-1）的表达与结肠癌临床病理特征的关系。方法 采用实时荧光定量PCR和免疫印迹法（Western blotting）检测48例结肠癌组织及其相应癌旁组织中MACC-1 mRNA和蛋白的表达水平。结果 结肠癌组织中MACC-1 mRNA相对表达量为（8.52 ± 2.39）×10^-4,明显高于癌旁组织中的（1.47 ±1.24）×10^-5,差异有统计学意义（P＜0.05）。结肠癌组织中MACC-1蛋白表达的灰度值为7.73±0.03,高于癌旁组织的1.02±0.01（P＜0.05）。结肠癌患者组织中MACC-1 mRNA和蛋白的表达与肿瘤的分化程度、浸润深度、TNM分期显著相关（P＜0.05）,而与年龄、性别无关（P＞0.05）。结论 MACC-1表达的检测对结肠癌的诊断具有一定的临床意义,且MACC-1的表达水平与结肠癌的浸润和转移密切相关,可作为判断结肠癌转移的肿瘤标志物之一。     

miR-17 在结肠癌中的表达及其临床意义

目的探讨miR-17在结肠癌中的表达与临床病理特征间的关系。方法选取2012年1月至2013年6月经手术切除的50例原发性结肠癌及癌旁组织标本,采用实时荧光定量PCR分析miR-17的表达情况。结果相对于癌旁组织,50例结肠癌组织中miR-17表达下调(P<0.05),其表达与TNM分期以及浸润深度有关(均P<0.05)。结论 miR-17参与了结肠癌的发生发展。     

高迁移率族蛋白A2在子宫内膜癌中的表达及意义

目的：探讨高迁移率族蛋白A2（high mobility group proteinA2,HMGA2）在子宫内膜癌细胞系AN3CA、ECC-1、Ishikawa以及子宫内膜癌组织、正常子宫内膜组织中的表达及意义。方法：采用逆转录-多聚合酶链反应（RT—PCR）、免疫印迹法（Western Blot）检测HMGA2在体外培养的子宫内膜癌细胞系AN3CA、ECC-1、Ishikawa以及21例子宫内膜癌组织标本和18例正常子宫内膜组织标本中的表达。结果：HMGA2-mRNA在子宫内膜癌细胞系AN3CA、ECC-1、Ishikawa中均有表达;在Ⅰ期、Ⅱ期子宫内膜癌患者中表达的阳性率分别为8．3％（1／12）、88．9％（8／9）,HMGA2-mRNA表达的阳性率与手术-病理分期有关（P=0．000,P〈0．05）,在高分化腺癌、中低分化腺癌的组织标本中表达阳性率分别为66．7％（4／6）、33．3％（5／15）,HMGA2-mRNA表达阳性率与子宫内膜癌细胞的分化程度无关（P=0．331,P〉0．05）;HMGA2-mRNA在18例正常子宫内膜组织标本中无一例表达;Western Blot的结果与RT—PCR的结果相符合。结论：HMGA2基因可能参与了子宫内膜癌的发生和发展,在子宫内膜癌细胞的增殖与侵袭中可能发挥重要作用。     

高迁移率族蛋白A2在子宫内膜癌中的表达及意义

目的:探讨高迁移率族蛋白A2(high mobility group protein A2,HMGA2)在子宫内膜癌细胞系AN3CA、ECC-1、Ishikawa以及子宫内膜癌组织、正常子宫内膜组织中的表达及意义.方法:采用逆转录-多聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫印迹法(Western Blot)检测HMGA2在体外培养的子宫内膜癌细胞系AN3CA、ECC-1、Ishikawa以及21例子宫内膜癌组织标本和18例正常子宫内膜组织标本中的表达.结果:HMGA2-mRNA在子宫内膜癌细胞系AN3CA、ECC-1、Ishikawa中均有表达;在I期、Ⅱ期子宫内膜癌患者中表达的阳性率分别为8.3%(1/12)、88.9%(8/9),HMGA2-mRNA表达的阳性率与手术-病理分期有关(P=0.000,P<0.05),在高分化腺癌、中低分化腺癌的组织标本中表达阳性率分别为66.7%(4/6)、33.3%(5/15),HMGA2-mRNA表达阳性率与子宫内膜癌细胞的分化程度无关(P=0.331,P>0.05);HMGA2-mRNA在18例正常子宫内膜组织标本中无一例表达;Western Blot的结果与RT-PCR的结果相符合.结论:HMGA2基因可能参与了子宫内膜癌的发生和发展,在子宫内膜癌细胞的增殖与侵袭中可能发挥重要作用.     

EphA8在结肠癌组织中的表达和临床意义

目的 探讨EphA8在结肠癌组织中的表达情况和临床意义.方法 采用实时定量RT-PCR和Western blot检测EphA8 mRNA和蛋白在1种正常结肠黏膜细胞株和2种结肠癌细胞株中的表达情况.采用免疫组织化学法检测98例结肠癌组织和12例正常结肠组织中EphA8和血管内皮生长因子(VEGF)的蛋白表达情况,同时使用CD31染色检测肿瘤微血管密度(MVD)情况,并分析EphA8与VEGF和MVD的关系及其与病理分期、预后的关系.结果 EphA8的mRNA在结肠癌细胞株的表达明显高于正常结肠黏膜细胞株(t=11.98,13.54,均P＜0.001).EphA8蛋白在结肠癌细胞株的表达也明显高于正常结肠黏膜细胞株(=4.63,P=0.006;t =4.92,P=0.004).免疫组织化学结果表明EphA8蛋白在结肠癌组织高表达,且癌组织中EphA8的蛋白表达与肿瘤大小(X2=22.97,P＜0.001)、分期(P＜0.001)、分化程度(P=0.007)、淋巴结转移(P ＜0.001)、远处转移(x2=6.97,P=0.008)以及患者生存率(x2=17.3,P＜0.001)存在显著相关性,而与患者的性别和年龄没有明显相关性(X2=1.36,P=0.30;0=0.83,P=0.44).此外,EphA8与VEGF和MVD的表达呈正相关(r=0.434,P＜0.001;r=0.584,P＜0.001).结论 EphA8在结肠癌的恶性发展和转移中有重要作用,因此,EphA8对于结肠癌的治疗干预和预后判断具有潜在的临床应用价值.     

Dysadherin mRNA在肾透明细胞癌中的表达及其意义

目的探讨Dysadherin在。肾透明细胞癌（RCCC）中的表达情况及其临床意义。方法选取60例新鲜RCCC组织及其癌旁肾组织。患者男35例,女25例;年龄37-78岁,中位年龄61岁;肿块直径〉7cm24例,≤7cm36例;核分级Ⅰ、Ⅱ级39例,Ⅲ、Ⅳ级21例,应用反转录．聚合酶链反应（RT-PCR）及免疫组织化学的方法分别在mRNA及蛋白水平检测Dysadherin的表达情况。结果RCCC组织中Dysadherin mRNA表达水平为2．0043±0．2890,明显高于癌旁肾组织的0．8461±0．2479（t=6．8020,P〈0．05）。Dysadherin在RCCC中的表达与肿瘤的核分级有关,其中核分级为Ⅲ、Ⅳ级的表达量明显高于Ⅰ、Ⅱ级,二者mRNA表达量分别为1．6224±0．3194、2．7780±0．2288（t=6．5750,P〈0．05）,蛋白表达阳性率分别为64．1％（25／39）和95．2％（20／21）（χ^2=5．495,P〈0．05）,而在患者不同性别（t=1．0530,χ^2=0．023）、年龄（t=0．0511,χ^2=0．089）、肿块直径（t=1．0330,χ^2=0．370）之间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论Dysadherin的表达随着RCCC肿瘤细胞核分级的升高而升高,可能成为RCCC有价值的预后标志物之一。     

Claudin-4在胃癌中的表达及临床病理意义

目的探讨Claudin-4在胃癌中的表达及其临床病理意义。方法收集福建医科大学附属厦门第一医院2007年9月至2009年9月部分胃癌手术标本共68例。其中20例分别制成石蜡切片和留取新鲜冰冻标本,分别应用免疫组织化学染色方法和实时定量PCR方法检测该20例胃癌标本中Claudin-4蛋白和mRNA在胃癌组织、正常胃组织中的表达情况。另48例胃癌手术标本仅制成石蜡切片,采用免疫组织化学染色方法检测Claudin-4蛋白在胃癌组织中的表达情况。分析Clau-din-4表达情况与胃癌分化、浸润、转移和组织分型间的相关性。结果胃癌组织中Claudin-4的表达显著高于正常胃上皮组织（P〈0.05）;Claudin-4在Lauren分型肠型胃癌和BorrmannⅠ型、Ⅱ型胃癌组织中的表达分别显著高于弥漫型胃癌和BorrmannⅢ型、Ⅳ型胃癌（P〈0.05）;Claudin-4的表达与胃癌分化相关,胃癌分化越好,Claudin-4表达越高（P〈0.05）。结论 Claudin-4与胃癌的发生、发展及胃癌的生物学行为密切相关,并可能成为预测胃癌生物学行为的重要指标。     

β-catenin与wisp-1在结肠癌中的表达及意义

目的：探讨β-catenin与wisp-1 在原发性结肠癌中表达及临床意义。方法：分别用免疫组化Envision法和实时荧光定量PCR法检测β-catenin、wisp-1 蛋白和基因在53例结肠癌及53例配对正常结肠中的表达。分析两因子表达与临床病理的关系。结果：β-catenin、wisp-1蛋白在结肠癌的异常表达率均高于正常结肠中异常表达率（P〈0.05）。结肠癌中β-catenin蛋白异常表达与淋巴结转移、Duke分期和部位有关（P〈0.05）。wisp-1蛋白异常表达与淋巴结转移、Duke分期有关。β-catenin基因在结肠癌中平均表达是其在正常结肠中的3.237倍（P〈0.05）,其异常表达与肿瘤部位及淋巴结转移有关（P〈0.05）。wisp-1基因在结肠癌中平均表达是其在正常结肠中的2.908倍（P〈0.05）,其异常表达与肿瘤类型有关（P〈0.05）。结论：β-catenin与wisp-1异常表达特点提示两者与结肠癌的发生发展有密切关系。     

上皮来源的肿瘤细胞表达免疫球蛋白A

目的 证实上皮来源的肿瘤细胞表达免疫球蛋白,确定所表达的免疫球蛋白的类别。方法 采用免疫组化、Western blot及ELISA等方法检测MCF－7（人乳腺癌细胞系）、SW480（人结肠癌细胞系）、MGC（人胃癌细胞系）、HeLa(人宫颈癌细胞系）、CNE1－LMP1（稳定表达LMP1的鼻咽癌细胞系）、HNE2（鼻咽癌细胞系）和Tet-on-LMP1-HNE2(受四环素诱导可调控的鼻咽癌细胞系）等7种上皮来源的细胞系的细胞蛋白提取液及培养上清中的免疫球蛋白。结果 在7种上皮来源的瘤细胞系的蛋白提取液及培养上清中均检测到了人免疫球蛋白A。结论 上皮来源的肿瘤细胞表达免疫球蛋白A。     

In vitro chemotherapy sensitivity patterns of human colon carcinoma continuous cell lines

The cells obtained from four established human colon carcinoma cell lines were cultured in soft agar in the presence of eight chemotherapeutic agents that have been used clinically in patients with metastatic colorectal carcinoma. 5-Fluorouracil, mitomycin C, adriamycin, and cis-platinum were highly cytotoxic in vitro at the concentrations employed. These findings were in marked contrast to in vitro chemotherapy sensitivity patterns previously reported by us for a large series of primary human colorectal carcinomas cultured in soft agar. The possible reasons behind these differences are discussed.     

癌相关基因在结肠癌中的表达及其甲基化调控

目的 探讨癌相关基因APC、p16^INK4A,p21^WAF1和c-myc等在结肠癌中的表达及其受甲基化的调控。方法 培养结肠癌细胞SWlll6、Colo-320、HT29，分别用不同浓度的5-aza-dC干预细胞。提取细胞的RNA，用RT-PCR的方法检测p16INK4A、,021WAFl、APC和c-myc等多种基因的表达情况；同时以流式细胞仪分析SWlll6和Colo-320的细胞周期。结果 (1)三种细胞在干预前有较弱的p16^INK4A和APC的表达，而在用5-aza-dC干预后表达增强，且在不同的结肠癌细胞株5-aza-dC作用发挥最佳的时间与浓度不同。(2)p21WAF1在干预前后均不表达，c-myc在干预前后表达无明显变化。结论 三株人结肠癌细胞中，5-aza-dC均可诱导p16^INK4A和APC的表达，但对p21WAF1和c-myc无明显影响。     

OCT4在肝细胞癌中的表达及其临床意义

背景与目的:近年关于肝癌干细胞问题备受关注,已发现部分干细胞标志物在肝细胞癌中表达并与预后有关,其中OCT4基因是POU转录因子的重要组员,是维持胚胎干细胞自我更新能力和分化潜能的关键因子。本研究旨在检测OCT4A在肝细胞癌中的表达情况,并探讨其与病理因素和预后的关系。方法:用半定量RT-PCR检测5株人肝癌细胞系和1株永生化肝细胞系,以及107例肝细胞癌组织、相应的癌旁肝组织和20例正常无肝硬化肝组织中OCT4A mRNA的表达,并结合肝癌临床病理因素及预后进行分析。结果:OCT4A mRNA在人肝癌细胞系SMMC-7721、BEL-7402、Hep-G2、MHCC-97L、MHCC-97H中均表达,而在永生化肝细胞系L-02中无表达。OCT4A mRNA在肝癌组织中表达率为72.0%,明显高于癌旁肝组织的30.8%(P<0.001),在正常无肝硬化肝组织中无表达。肝癌组织中OCT4A mRNA的表达与肿瘤大小、血管侵犯及TNM分期有关(P<0.05)。OCT4A mRNA阳性肝癌患者及阴性患者的3年总生存率分别为48.0%和83.7%,3年无瘤生存率分别为34.1%和58.0%,差异均有统计学意义(P<0...     

S100A8和S100A9在子宫颈鳞癌组织中的表达

目的:探讨S100A8、S100A9在子宫颈鳞癌及正常宫颈组织中的表达及其意义。方法:采用半定量的RT-PCR技术和免疫组织化学的方法,从mRNA及蛋白水平检测32例子宫颈鳞癌和15例正常宫颈组织中S100A8、S100A9的表达,及与不同临床病理参数的关系。结果:子宫颈鳞癌组织中,S100A8、S100A9在mRNA及蛋白水平上均低表达(P<0.05),其中,低分化肿瘤的表达明显低于高、中分化肿瘤(P<0.05)。结论:S100A8、S100A9在子宫颈鳞癌组织中低表达,且可能与鳞状细胞的分化程度相关。提示S100A8、S100A9低表达可能与子宫颈鳞癌的发生发展有关系。     

连环蛋白ｐ１２０在胰腺癌细胞株中的表达及其意义

目的：了解连环蛋白ｐ１２０（ｐ１２０ｃｔｎ）及ＶＥＧＦ在胰腺癌细胞株中的表达情况,探讨ｐ１２０ｃｔｎ对胰腺癌细胞生物学行为的影响。方法：采用ＲＴ-ＰＣＲ、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ方法检测５株胰腺癌细胞及胰腺星状细胞中ｐ１２０ｃｔｎ及ＶＥＧＦ的表达情况;选取表达差异明显的ｐａｎｃ １及Ｐａｔｕ８９８８细胞株,利用细胞侵袭迁移试验观察其生物学行为。结果：与胰腺星状细胞相比,胰腺癌细胞株中ｐ１２０ｃｔｎ的表达均上调,但在不同胰腺癌细胞株中表达存在差异;在同一细胞株中,ｐ１２０ｃｔｎ与ＶＥＧＦ的表达量呈正相关;高表达ｐ１２０ｃｔｎ的胰腺癌细胞,其侵袭迁移能力要明显低于低表达的细胞。结论：胰腺癌细胞株中ｐ１２０ｃｔｎ的表达明显上调,并与ＶＥＧＦ的表达存在相关性,胰腺癌细胞ｐ１２０ｃｔｎ高表达其侵袭转移能力可能下降。     

姜黄素抗大肠癌作用研究

 目的 姜黄素（curcumin）已被证明可抑制体内外多种肿瘤细胞的生长，但机制仍不清楚，本文旨在探讨姜黄素抑制人结肠癌细胞（Lovo）增殖及其机制。方法 采用细胞生长曲线、集落形成实验和噻唑蓝还原法（MTT）观察姜黄素抑制Lovo细胞增生的作用；采用流式细胞术（FCM）测定姜黄素对细胞周期的影响；采用吖啶橙荧光染色、透射电镜观察和DNA琼脂糖凝胶电泳观察姜黄素诱导细胞凋亡作用。结果 姜黄素对Lovo细胞体外生长具有抑制作用，并具有剂量效应关系。姜黄素具有抑制细胞集落形成和细胞毒作用。FCM结果认为，姜黄素主要使细胞大量堆积于S、G2／M期，以致使细胞不能进入下一个周期。细胞荧光染色和超微结构观察姜黄素处理后的细胞均呈凋亡特征性改变，DNA凝胶电泳也显示姜黄素处理后的细胞DNA呈特征性凋亡梯形带。结论 姜黄素可抑制人结肠腺癌Lovo细胞的增生。其机制可能阻滞细胞周期的S、G2／M期，使细胞不能进入下一个周期，以及诱导细胞凋亡。     

抑癌基因p53对人胃癌细胞系放射敏感性的作用

目的评价野生型抑癌基因（正常）ｐ５３对人胃癌细胞系放射敏感性的控制作用。方法用流式细胞仪分析４Ｇｙ照射后８和２４小时４种不同ｐ５３状态的人胃癌细胞系细胞周期分布和凋亡的反应。以４Ｇｙ细胞存活份数和１０Ｇｙ照射后的肿瘤生长曲线比较４种细胞的放射敏感性。结果照射４Ｇｙ后８小时和２４小时的ｐ５３正常的ＢＧＣ８２３细胞出现强烈的Ｇ１期阻滞（分别占原细胞总数的６７．９％和６１．１％）,比无照射的该细胞Ｇ１期比例有显著的增高（Ｐ＜０．０５）,并出现明显的预示凋亡的亚Ｇ１峰（ＳｕｂＧ１）,凋亡细胞比例分别达１３．０％和１５．３％;同样条件下其他３种ｐ５３异常的细胞Ｇ１期比例没有显著的变化（Ｐ＞０．０５）,都没有出现亚Ｇ１峰,凋亡细胞比例均为０．０％。ｐ５３正常的ＢＧＣ８２３细胞４Ｇｙ的存活份数明显低于其它３种细胞（Ｐ＜０．０５）;且细胞移植肿瘤１０Ｇｙ照射后比其它３种的生长受到更明显抑制（Ｐ＜０．０５）。结论以上的结果证实了野生型ｐ５３基因促进了照射后肿瘤细胞的Ｇ１期阻滞和凋亡,从而明显地提高肿瘤细胞的放射敏感性。     

RBM4 inhibits the growth of clear cell renal cell carcinoma by enhancing the stability of p53 mRNA

RBM4 has been reported as a tumor suppressor gene in cancers, including lung cancer, colon cancer and gastric cancer. However, the role of RBM4 in clear cell renal cell carcinoma (ccRCC) remains unclear. Therefore, the present study investigated the expression and biological function of RBM4 in ccRCC. Analysis of the differential expression of RBM4 and its relationship with clinicopathological features using ccRCC samples data from TCGA database deminstrated that RBM4 expression in tumor samples of ccRCC was lower than that in normal samples, and RBM4 expression was closely related to the survival time of patients. RBM4 overexpression (RBM4-oe) cell lines were constructed to investigate the effect of RBM4 on biological function using CCK-8, EdU, flow cytometry and wound-healing assays. In addition, the regulatory effect of RBM4 on signaling pathways was investigated by GSEA and WB assays. RBM4-oe significantly reduced the proliferation of ccRCC cells by controlling the p53 signaling pathway, inhibited cell cycle progression and promoted apoptosis. In addition, RBM4-oe suppressed the migration and invasion of cells by EMT. Mechanistically, RBM4-oe facilitated the activity of the p53 signaling pathway by enhancing the stability of p53 mRNA. Finally, RBM4-oe markedly inhibited the growth of tumors formed with 786-O cells in vivo. In summary, there findings suggeated that RBM4 inhibits the progression of ccRCC by promoting p53 signaling pathway activity by enhancing the stability of p53 mRNA, suggesting that RBM4 may be a potential target for the treatment of patients.