针对MAGE-3抗原的DC肿瘤疫苗的研究进展

树突状细胞(dendritic cell,DC)作为体内功能最强的专职抗原提呈细胞,广泛分布于各种组织器官中,在激活肿瘤特异性免疫中发挥重要作用。黑素瘤相关抗原3(melanoma-associated antigen 3,MAGE-3)是一种肿瘤-睾丸抗原(cancer-testis antigen,CTA),属于黑素瘤相关抗原家族(melanoma-associated antigen family,MAGE family),在上皮细胞来源的多种肿瘤细胞表面都有不同程度的表达。MAGE家族类肿瘤表面标志物能被用于早期发现肿瘤细胞,并针对该类抗原进行特异性的免疫治疗,是肿瘤免疫治疗的理想靶抗原。由于DC能将肿瘤相关性抗原提呈给T淋巴细胞,产生抗原特异性免疫反应,因此DC肿瘤疫苗为肿瘤免疫治疗提供了一种有效手段。目前,针对MAGE-3抗原的DC肿瘤疫苗研究已经广泛开展,可以通过多种不同的方式将MAGE-3负载DC,并取得了一定的临床疗效,为DC肿瘤疫苗的临床应用带来了曙光。     

联合表位肽诱导HLA-A2+人PBMC产生抗原特异性CTL及杀伤活性研究

目的:探讨MAGE-3,MAGE-n抗原表位体外联合诱导的CTL,并研究其特异性杀伤活性。方法:候选抗原表位以固相多肽合成技术合成,并用HPLC进行纯化,质谱法(MS)鉴定,以流式细胞仪筛选HLA-A2 人外周血PBMC,T2细胞负载抗原肽反复刺激活化诱导抗原特异性CTL,LDH检测其杀伤活性。结果:联合表位肽体外刺激人PBMC,能够较强地诱导抗原特异性CTL并产生特异性杀伤。结论:MAGE-3与MAGE-n的HLA-A2限制性CTL表位肽的联合应用能够产生较强的体外抗肿瘤免疫反应。     

肿瘤冻融抗原协同IL-2诱导的人脐血CTL细胞体外扩增及杀瘤活性的研究

目的观测经肿瘤冻融抗原体外诱导的脐血细胞毒T淋巴(Cytotoxic T Lymphayte,CTL)细胞体外扩增及杀瘤活性.方法以肿瘤冻融抗原协同IL-2体外诱导脐血干细胞,使其中的CD8+细胞得以扩增,获得CTL细胞,观测其表型变化及杀瘤活性.结果CD4+和CD8+T淋巴细胞表达呈增高趋势,但无明显统计学差异;CTL细胞杀瘤活性远高于LAK细胞,且可长期存活.结论CTL细胞可作为过继免疫疗法进行深入应用研究.     

MAGE-3/CEA(HLA-A2/A24+)肽疫苗冲击树突状细胞诱导消化道肿瘤患者CTL的研究

目的:树突状细胞(DC)是一种重要的抗原递呈细胞,在T细胞参与的HLA限制性免疫应答中起重要作用.已证实在动物模型中DC递呈抗原可以诱导出T细胞介导的免疫反应.我们在体外扩增获得肿瘤患者DC,观察其特点,并以MAGE-3/CEA(HLA-A2/A24+)肽疫苗冲击DC诱导特异性CTL,研究其杀伤活性.方法:选择MAGE-3-HLA-A2/A24+或CEA-HLA-A24+肿瘤患者,收集PBMNC中的贴壁细胞,在含有rhGM-CSF、rhIL-4的1640中培养诱导DC细胞,第7天加入HLA-A2-MAGE-3、HLA-A24-MAGE-3、HLA-A24-CEA肽冲击.以肽冲击后的DC与未经纯化的T细胞混合培养(T-DC-P)诱导的CTL作为效应细胞,Mel526,803,Raji,K562作为靶细胞,以LDH法检测特异性CTL的杀伤力.结果:体外扩增可获得高纯度的DC,高表达DC特异性表面标志CD40(74.18%±15.76%)、CD86(94.6%±3.80%)、HLA-DR(88.6%±10.94%).不同肿瘤患者DC得率表现出较大差异(7.07%±3.24%),反映出免疫功能的不同.T-IL-2细胞与T-DC-P细胞对Mel526和803细胞株的杀伤活性有显著性差异(P＜0.01),可以将特异性杀伤力提高25%～35%,而对Raji和K562细胞株的杀伤活性无显著性差异(P＞0.01).结论:rhGM-CSF、rhIL-4体外联合应用可扩增出高纯度DC,肽疫苗冲击后的DC可诱导出MAGE、CEA特异性的CTL应答.表明DC为基础的疫苗是肿瘤免疫治疗重要的新方法,因其具有简便、快速的特点,有良好的前景.     

基于结直肠癌高表达抗原PSG9的HLA-A2/A3限制性CTL表位预测

0 引言 研究发现,寻找更多的具有强的HLA-Ⅰ限制性的免疫原性的表位肽,发展以表位肽为基础的疫苗成为肿瘤免疫疗法中的一个有潜力的治疗策略.     

胃癌相关抗原及其与自身CTL细胞增殖及体外杀瘤活性关系的研究

探讨胃癌相关抗原与胃癌患者自身ＣＴＬ细胞增殖及体外杀瘤活性的关系。方法生化方法提取胃癌相关抗原,体外协同ＩＬ－２培养淋巴细胞,ＭＴＴ法测定细胞增殖及杀瘤活性,ＦＣＭ仪检测细胞表型变化。结果１２例胃癌相关抗原阳性患者ＣＴＬ细胞增殖快于９例阴性患者,差异有极显著性（Ｐ＜０．００１）。Ｅ：Ｔ为８０：１时,前者体外杀瘤活性均值也大于后者（Ｐ＜０．０１）,ＦＣＭ检测结果表明前者ＣＤ８及ＣＤ２５表达率也显著高于后者（Ｐ＜０．０１）。结论为解释胃癌等“不敏感群体”现象提供实验依据,提示该类抗原诱导的杀伤细胞可望用于胃癌临床免疫治疗;结合相关抗原筛查,可实施个体化免疫治疗。     

2(3)-叔丁基-4-羟基茴香醚对HBV转基因小鼠肝肿瘤的防护作用研究

观察抗氧化剂２（３）┐叔丁基┐４┐羟基茴香醚（ＢＨＡ）对ＨＢＶ转基因小鼠肝肿瘤的防护作用。方法２６只ＨＢＶ转基因和２４只非转基因小鼠,用生化法测定肝脏醌还原酶（ＱＲ）和谷胱甘肽Ｓ┐转移酶（ＧＳＴｓ）活性、丙二醛（ＭＤＡ）含量和免疫组化法研究肝肿瘤ＰＣＮＡ表达。结果转基因小鼠ＢＨＡ组肝癌发生率０,显著低于普饲组４２％（５／１２例）。ＢＨＡ诱导肝脏ＱＲ和ＧＳＴ活性升高３～７倍,降低ＭＤＡ。ＢＨＡ组肝腺瘤ＰＣＮＡ标记指数３．４９±２．４２％,显著低于普饲组（５．４８±２．２９％）。结论ＢＨＡ长期应用有效延缓了ＨＢＶ转基因小鼠肝肿瘤的发生发展进程。     

MAGE-1 MAGE-3及AFP基因在肝癌组织中的表达

目的:探讨MAGE-1、MAGE-3和AFP mRNA在肝癌组织中的表达及用于检测微小转移的可能性。方法:应用聚合酶链反应(PCR)检测86例原发性肝癌患者肝癌组织中MAGE-1、MAGE-3和AFP mRNA的表达。结果:86例原发性肝癌患者肝癌组织中MAGE-1、MAGE-3和AFP mRNA的阳性率分别为34.9%(30/86)、60.5%(52/86)和69.8%(60/86);所有患者肝癌组织至少表达其中一种mRNA。结论:MAGE-1、MAGE-3结合AFP mRNA在肝癌组织中表达率较高,有可能用于联合检测肝癌血行微小转移。     

黑色素瘤抗原基因MAGE-1、MAGE-3和抑癌基因p53在肺癌中表达的研究

目的:分析肺癌组织MAGE-1和MAGE-3基因以及p53基因表达及其相互关系。方法:取肺癌组织标本30例,另取癌周组织作为对照。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,检测MAGE-1和MAGE-3基因以及p53基因的表达。结果:MAGE-1,MAGE-3在肺癌中有较高表达,MAGE-3的表达高于MAGE-1的表达。p53在肺癌中表达较低,在正常组织中表达较高;MAGE-1在肺腺癌中表达较鳞癌高,MAGE-3在肺鳞癌中表达较高;MAGE-1,MAGE-3的表达可能与肿瘤分化程度无关;p53在小细胞肺癌中的表达有待进一步研究;p53与MAGE在体内表达成负相关。结论:MAGE-1、MAGE-3和p53在肺癌组织与正常组织中有不同的表达,MAGE-1、MAGE-3的表达与病理类型有关,与肿瘤分化无关。     

MAGE-3 原核重组表达载体的构建和表达

 目的 构建原核重组表达载体pGEX-4T-1-MAGE-3并检测其在大肠杆菌（E.coli）BL21中的表达。方法 RT-PCR法制备MAGE-3目的基因,采用DNA重组技术将其克隆至pGEM-TEasy和亚克隆至pGEX-4T-1载体,转化E.coliBL21株,经IPTG诱导,12%SDS-PAGE电泳分离和Western Blot表达鉴定。结果 扩增出349bp的MAGE-3目的基因并构建了原核重组表达载体pGEX-4T-1-MAGE-3;测序结果与Gen Bank收录序列相一致;在E.coli BL21中检测到含该重组表达载体的转化菌表达出分子量约35kD的融合蛋白并证实其为目的蛋白。结论 成功构建的原核重组表达载体pGEX-4T-1-MAGE-3及其所表达的融合蛋白,为以MAGE-3为基础的肽疫苗及特异诊断试剂的研制提供抗原打下了基础,为后续实验提供了依据。     

激光对荷瘤小鼠免疫系统影响的实验研究

 目的: 借助于低能量的He-Ne激光激活免疫机制, 抑制肿瘤的生长。方法: 采用双抗体夹心ELISA法及MTT法对荷瘤小鼠激光照射前后细胞因子（TL-1、IL-6、IL-8）的含量进行检测, 并对其抑制肿瘤作用进行研究。结果: 激光照射瘤鼠脾区具有促进IL-1、IL-8产生, 抑制IL-6及瘤细胞增殖的作用。与对照组相比有非常显著差异(P<0.01)。结论: 低能量激光照射具有调节患瘤鼠白细胞介素产生及抗肿瘤作用。     

人MAGE-3真核表达载体的构建与表达

目的 克隆人黑色素瘤特异性抗原MAGE-3基因，构建真核表达载体，建立MAGE-3阳性细胞株，制备肿瘤核酸疫苗。方法 用RT—PCR方法扩增MAGE-3cDNA，以pcDNA3．1 为载体，构建重组表达质粒pcDNA3．1／MAGE-3。重组质粒用脂质体转染鼠B16细胞，经RT—PCR、细胞免疫染色及免疫印迹法鉴定转化细胞中MAGE-3的表达。结果 正确构建了pcDNA3．1／MAGE-3重组质粒，并且在转化细胞中检测到了MAGE-3的表达。结论 成功构建了pcDNA3．1／MAGE-3真核表达质粒，建立了稳定表达人MAGE-3的鼠B16细胞株。     

人参皂苷Rg3与顺铂对荷卵巢癌裸鼠免疫功能及肿瘤相关蛋白的影响

[目的]观察人参皂苷Rg3联合顺铂对荷高转移人卵巢癌细胞系HO．8910PM转移瘤裸鼠白细胞介素．2（IL-2）、干扰素-γ（INF-γ）及nm23、血管内皮生长因子（VEGF）及增殖细胞核抗原（PCNA）的影响。[方法]移植瘤裸鼠随机分成6组腹腔给药：荷瘤空白对照组fA组）;不同Rg3浓度药物组：2．5mg／kg（B组）、5mg／kg（C组）和lOmg／kg（D组）;Rg3和顺铂联用组（E组）以及顺铂阳性对照组（F组）。分别测定各组裸鼠转移瘤体积变化、IL-2、INF-γ、nm23、VEGF及PCNA的变化情况。[结果]与A组比较,E组（P〈0．05）和F组（P〈0．01）小鼠血清中IL-2、INF-γ含量均能显著降低;B（P〈0．05）、C、D和E（P〈0．01）组小鼠移植瘤组织nm23的表达均增强。Rg3给药后,小鼠移植瘤组织VEGF、PCNA表达均呈下降趋势。[结论]人参皂苷Rg3和顺铂联用具有协同抗肿瘤及减毒的作用。Rg3可能通过增强mm23的表达．使VEGF及PCNA表达呈下降趋势等多途径产生抗肿瘤作用。     

放疗对恶性肿瘤患者红细胞膜带3蛋白表达和功能的影响

[目的]研究放疗对恶性肿瘤患者红细胞膜带3蛋白的表达和功能的影响.[方法]随机抽取8例恶性肿瘤患者并取其治疗前后的红细胞,应用Cl-荧光探针6-甲基-3-磺丙基-1-喹啉-水化合物(SPQ)检测其治疗前后红细胞膜带3蛋白的阴离子转运活性,并通过Westernblot检定治疗前后带3蛋白表达量的变化.[结果]8例恶性肿瘤患者放疗后红细胞膜带3蛋白的离子转运活性均明显减弱,其中6例患者红细胞膜带3蛋白表达减少.[结论]带3蛋白的表达和功能与肿瘤细胞的增殖和凋亡相关.     

重构型caspase-3的表达及其对SKBr3细胞的凋亡诱导作用

目的：探讨重构型caspase3基因的表达对肿瘤细胞的凋亡诱导作用。方法：用重组PCR的方法获得大、小亚基顺序颠倒的重构型caspase3基因并将其克隆入真核表达载体pcDNA3，转染乳腺癌细胞系SKBr3细胞，通过HE染色、流式细胞仪分析及免疫组化等方法观察其表达后对细胞的促凋亡活性，并将载体DNA直接注射荷瘤裸鼠研究其对肿瘤的抑制作用。结果：重构型caspase3基因可在SKBr3细胞内表达，转染组较同期对照组出现明显的细胞死亡现象，pcDNA3 revcasp3重组质粒直接注入对荷瘤裸鼠肿瘤生长有明显抑制作用。结论：重构型caspase3基因表达可诱导SKBr3细胞凋亡。