两种酶联免疫吸附试验方法检测人血清抗严重急性呼吸道综合征冠状病毒IgG抗体

目的　为观测不同人群 ,尤其是≤ 1 4岁正常儿童血清中抗严重急性呼吸道综合征 (SevereAcuteRespiratorySyndrome,SARS)冠状病毒IgG抗体的存在状况和分布特征 ,印证分析不同酶联免疫吸附试验 (ELISA)方法的可靠性和一致程度 ,评估特异性IgG抗体检测在诊断SARS中的实用价值。 方法　分别用以全病毒裂解液或纯化N蛋白为抗原的ELISA方法 ,检测 70例SARS患者、55名 3～ 6月龄正常婴儿、2 97名≤ 1 4岁正常儿童、1 56名≥ 1 5岁正常人的血清特异性抗体。以敏感性、特异性、阳性预测值 (PPV)、阴性预测值 (NPV)、准确度评价其诊断价值 ,以Kappa值和卡方值评价检测结果的一致性及差异。结果　全病毒裂解液试剂检测SARS患者、3～ 6月龄正常婴儿、≤ 1 4岁正常儿童、≥ 1 5岁正常人血清 ,抗体阳性率分别为 75.71 %、36 36%、2 3.91 %、1 .92 %。≤ 1 4岁正常儿童按 <1、1、2、3、4、5～ 9、1 0～ 1 4岁组划分 ,抗体阳性率依次为 51.1 6%、41. 86%、30 . 95%、1 8.60 %、1 6.67%、2.38%、4.76% ,随年龄增长阳性率呈下降趋势。以纯化N蛋白为抗原的试剂检测上述血清 ,除SARS患者抗体阳性率为 80 .0 0 %外 ,正常人群血清抗体全部阴性。两种方法检测≥ 1 5岁人群 (含正常人群和SARS患者 )血清 ,检测结果高度一致 ,Kap     

间接免疫荧光法在检测SARS冠状病毒特异性抗体中的应用

目的 利用间接免疫荧光技术(IFA)建立SARS冠状病毒(SARS—CoV)特异性抗体血清学诊断方法。方法 采用组织培养技术，用SARS病人的咽漱液样本，在Vero—E6细胞中培养，分离SARS冠状病毒；用已制备的SARS病毒抗原片与临床确诊为SARS的病人双相血清和正常人对照血清作用，再用荧光标记羊抗人IgM/IgG抗体与之结合，在荧光显微镜下观察荧光图像。结果 通过建立检测SARS冠状病毒特异性抗体的间接免疫荧光方法，在44份SARS临床病例标本中，检出IgG抗体阳性3l份，与临床诊断符合率为70．45％。31份IgG阳性者的急性期血清中IgM检出率为38．70％，IgM最早产生于发病第3天，发病7d以上的6例的IgM抗体均为阳性，滴度在发病12～15d达到高峰(1：80)；恢复期血清中IgG抗体最早产生于发病第8天，滴度在发病15～20d达到高峰(1：320～1：640)。97份正常人的血清标本中IgG抗体阳性率为3．09％，IgM抗体为阴性。结论 利用此方法，证实被SARS冠状病毒感染后，在机体中产生有特异性的IgM／IgG抗体；本方法检测结果与临床诊断符合率较高，可以用于早期临床诊断SARS病毒感染和辅助临床做出鉴别诊断。     

五种SARS冠状病毒-IgG抗体检测试剂的比较

目的 比较五种SARS冠状病毒—IgG抗体诊断试剂，检测SRS冠状病毒特异性抗体的敏感性和特异性。方法 分别用间接免疫荧光(IFA)和四种ELISA诊断试剂(其中SLISA—1为全病毒抗原建立的间接法，ELISA—2为表达抗原片断建立的双抗原夹心法，ELISA—3/4为表达抗原建立的间接法)检测IgG抗体。100份血清标本分别采自发病7d以上的临床确诊SARS病例34例和疑似病例42例、发病6d以内临床确诊病例1例和疑似病例23例。结果 用IFA及四种ELISA诊断试剂检测34份发病7d以上临床确诊SARS病例的血清样本，其IgG检出率与临床诊断的符合率分别为：IFA44．12％，SLISA—1、4为41．17％、ELISA—2、3为23．52％；对42例疑似病例的检出率，IFA、ELISA—3为11．9％，ELISA—-1、2、4为9、52％；发病1～6d内的确诊和疑似病例血清中未能检出特异性的IgG抗体。结论 五种诊断试剂都可以帮助临床做出符合诊断和鉴别诊断，可以作为SARS血清学诊断方法，但其检出率与临床诊断的符合率均较低。     

SARS患者特异性抗体水平的动态监测

目的探讨SARS患者不同时期体内特异性抗体水平的变化. 方法采用间接ELISA法检测34例早期、恢复期SARS患者,39例治愈后随访者,201例一线医护人员及30例健康体检者血清中SARS病毒IgG和IgM抗体,同时对18例SARS患者及40例医护人员的泪液也做了检测. 结果 IgM抗体的阳性率在疾病早期和恢复期差异无显著性(P>0.05),而IgG抗体的阳性率在恢复期高于早期差异具有非常显著性(P<0.005);12例系列血清IgG抗体含量在恢复组和随访组差异无显著性(P>0.05),而IgM抗体含量在随访组大大降低,差异有显著性(P<0.05);一线医护人员IgG抗体的阳性率为1.99%,健康体检者IgG和IgM抗体均为阴性;SARS早期、恢复期患者及一线医护人员的泪液中均未检出SARS病毒抗体. 结论 SARS病毒IgM抗体在发病3个月后基本阴转,而IgG抗体仍持续高水平阳性,有可能成为保护性抗体;SARS病毒特异性抗体的动态监测可用于流行病学调查和血清学诊断.     

太原市SARS病例血清流行病学分析

我们对2003年春太原市SARS爆发期间感染的患者进行了血清学方面的研究,为SARS的深入研究和临床诊断提供一定的科学依据。 1.材料与方法:资料来源于太原市疾病预防控制中心SARS病例报告数据库、SARS病例个案流行病学调查表数据库和SARS病例密切接触者数据库;抽取患者静脉血;采用军事医学科学院微生物流行病研究所分离的冠状病毒(变异株)感染正常Vero E_6细胞,经培养后,将冠状病毒裂解液和Veto E_6超声粉碎的细胞液包被微孔板,与酶标记的抗人IgG及其他试剂制成试剂盒。采用间接ELISA法定性检测人血清或血浆中冠状病毒IgG抗体。试剂选用北京华大吉     

SARS-CoV特异性抗体产生规律的初步研究

目的 研究严重急性呼吸综合征(SARS)患者感染后体内病毒特异性抗体产生规律。方法 收集临床确诊为SARS患者的血清和非SARS人群血清标本,用IgM捕获法、间接法和抗原夹心法三种不同方法检测抗SARS病毒特异性IgM、IgG和总抗体。结果 检测146份临床诊断为SARS的患者不同发病时间血清标本,三种抗体阳性率分别为61.64％、53.43％和69.86％;SARS病毒特异性IgM、IgG抗体的最早检出时间分别在发病第7天和第12天,特异性IgM抗体最短在发病后42天消失。三种方法检测70份甲型肝炎患者血清时,均有2份非特异阳性反应,检测127份其他病种血清均阴性,1例密切接触SARS患者的医务人员SARS特异性IgG抗体和总抗体均阳性,三种检测方法均不受类风湿因子影响。结论 与其他病毒感染相比,SARS病毒感染者的特异性IgM抗体检出时间较晚,且持续时间较短;三种检测方法均有较好的特异性和敏感性,可用于SARS的流行病学调查和临床诊断的确认和补充,但不适用于SARS的早期诊断。     

SARS患者7年随访血清抗体变化规律及胃肠道免疫组化研究

目的 连续7年随访严重急性呼吸综合征(SARS)患者血清特异性IgM、IgG及N蛋白抗体滴度变化,应用胃肠镜观察胃肠道的病理改变并进行免疫组织化学研究.方法 应用免疫荧光(IFA)和双抗原夹心ELISA方法,对SARS患者发病1年后采用每隔1年检测一次血清SARS病毒(SARS-CoV)特异性IgM、IgG及N蛋白抗体滴度;用抗SARS-CoV N蛋白单克隆抗体对SARS恢复期患者胃肠道组织进行免疫组化研究.结果 14例SARS患者特异性IgG抗体1年后平均滴度为1/71(95%CI:1/58～1/85),连续追踪7年呈下降趋势,7年后大部分患者IgG抗体滴度消失,特异性IgM抗体1年后消失,N蛋白抗体1年后平均滴度为1/146(95%CI:1/122～1/171),与IgG抗体变化同时呈下降趋势.7年后其中9例患者检测N蛋白抗体全部为阴性,另5例临床症状较重的患者,N蛋白抗体仍检测阳性,其中3例N蛋白抗体滴度维持在1/156～1/210之间,2例N蛋白抗体滴度接近正常.该5例患者行胃肠镜检测和细胞免疫组化试验,血中N蛋白抗体检测阳性的3例患者胃组织黏液腺上皮细胞免疫组化呈阳性表达,大部呈胞浆着色.其中1例患者在肠组织浆液柱状上皮及间质细胞亦有表达,另2例血清N蛋白抗体检测接近正常的患者,细胞免疫组化为阴性.5例患者病理活检:1例明确诊断为"胃印戒细胞癌并直肠多发转移"、1例"胃息肉"、1例"浅表性胃窦炎",其余2例正常.结论 SARS患者血清特异性IgM、IgG、N蛋白抗体在恢复期呈下降趋势,7年后大部分消失;N蛋白抗体变化规律与病情轻重程度有关.     

SARS患者7年随访血清抗体变化规律及胃肠道免疫组化研究

目的 连续7年随访严重急性呼吸综合征(SARS)患者血清特异性IgM、IgG及N蛋白抗体滴度变化,应用胃肠镜观察胃肠道的病理改变并进行免疫组织化学研究.方法 应用免疫荧光(IFA)和双抗原夹心ELISA方法,对SARS患者发病1年后采用每隔1年检测一次血清SARS病毒(SARS-CoV)特异性IgM、IgG及N蛋白抗体滴度;用抗SARS-CoV N蛋白单克隆抗体对SARS恢复期患者胃肠道组织进行免疫组化研究.结果 14例SARS患者特异性IgG抗体1年后平均滴度为1/71(95%CI:1/58～1/85),连续追踪7年呈下降趋势,7年后大部分患者IgG抗体滴度消失,特异性IgM抗体1年后消失,N蛋白抗体1年后平均滴度为1/146(95%CI:1/122～1/171),与IgG抗体变化同时呈下降趋势.7年后其中9例患者检测N蛋白抗体全部为阴性,另5例临床症状较重的患者,N蛋白抗体仍检测阳性,其中3例N蛋白抗体滴度维持在1/156～1/210之间,2例N蛋白抗体滴度接近正常.该5例患者行胃肠镜检测和细胞免疫组化试验,血中N蛋白抗体检测阳性的3例患者胃组织黏液腺上皮细胞免疫组化呈阳性表达,大部呈胞浆着色.其中1例患者在肠组织浆液柱状上皮及间质细胞亦有表达,另2例血清N蛋白抗体检测接近正常的患者,细胞免疫组化为阴性.5例患者病理活检:1例明确诊断为"胃印戒细胞癌并直肠多发转移"、1例"胃息肉"、1例"浅表性胃窦炎",其余2例正常.结论 SARS患者血清特异性IgM、IgG、N蛋白抗体在恢复期呈下降趋势,7年后大部分消失;N蛋白抗体变化规律与病情轻重程度有关.     

SARS患者7年随访血清抗体变化规律及胃肠道免疫组化研究

目的 连续7年随访严重急性呼吸综合征(SARS)患者血清特异性IgM、IgG及N蛋白抗体滴度变化,应用胃肠镜观察胃肠道的病理改变并进行免疫组织化学研究.方法 应用免疫荧光(IFA)和双抗原夹心ELISA方法,对SARS患者发病1年后采用每隔1年检测一次血清SARS病毒(SARS-CoV)特异性IgM、IgG及N蛋白抗体滴度;用抗SARS-CoV N蛋白单克隆抗体对SARS恢复期患者胃肠道组织进行免疫组化研究.结果 14例SARS患者特异性IgG抗体1年后平均滴度为1/71(95%CI:1/58～1/85),连续追踪7年呈下降趋势,7年后大部分患者IgG抗体滴度消失,特异性IgM抗体1年后消失,N蛋白抗体1年后平均滴度为1/146(95%CI:1/122～1/171),与IgG抗体变化同时呈下降趋势.7年后其中9例患者检测N蛋白抗体全部为阴性,另5例临床症状较重的患者,N蛋白抗体仍检测阳性,其中3例N蛋白抗体滴度维持在1/156～1/210之间,2例N蛋白抗体滴度接近正常.该5例患者行胃肠镜检测和细胞免疫组化试验,血中N蛋白抗体检测阳性的3例患者胃组织黏液腺上皮细胞免疫组化呈阳性表达,大部呈胞浆着色.其中1例患者在肠组织浆液柱状上皮及间质细胞亦有表达,另2例血清N蛋白抗体检测接近正常的患者,细胞免疫组化为阴性.5例患者病理活检:1例明确诊断为"胃印戒细胞癌并直肠多发转移"、1例"胃息肉"、1例"浅表性胃窦炎",其余2例正常.结论 SARS患者血清特异性IgM、IgG、N蛋白抗体在恢复期呈下降趋势,7年后大部分消失;N蛋白抗体变化规律与病情轻重程度有关.     

丽水市疫区返乡人员血清SARS冠状病毒抗体检测报告

严重急性呼吸综合征(SARS)冠状病毒是引起SARS的病原体.人体感染SARS病毒后,血清中可出现SARS病毒IgM和IgG抗体,其作为SARS感染的标志存在于该病患者的血清中.目前,尚没有报道在正常人群的血清中查到SARS病毒抗体.我们对丽水市无偿献血者的血清作过检测,结果也未发现阳性血清.为了作更大范围的调查,我们对丽水市部分从北京和广东两个疫区返乡的人员进行了SARS病毒IgM和IgG抗体检测.现将结果报告如下.     

佛山地区重症SARS病例存在抗SARS冠状病毒抗体

目的：求证佛山地区首批临床诊断的SAILS患者血清中是否存在抗SARS冠状病毒抗体。方法：以SARS冠状病毒全病毒裂解液作抗原，利用ELLSA技术检测佛山地区首批出现急性呼吸窘迫综合征并具有明显传染特征的SARS康复患者和患者居住地“健康者”血清中抗SARS冠状病毒抗体。结果：4组有流行病学关系的19例SARS患者血清中抗SARS冠状病毒抗体全部阳性，而400名患者居住地的“健康者”血清中抗SAILS冠状病毒抗体则全部阴性。结论：佛山地区首批SARS病例血清学调查结果发现在所有的患者血中均发现有抗SAILS冠状病毒抗体，支持其病原体为SARS冠状病毒；抗SARS抗体IgG在ESARS康复者血清中至少可存在6个月。     

抗重组SARS病毒N蛋白单克隆抗体制备及性质初步研究

目的：制备抗重组SARS病毒N蛋白单克隆抗体。方法：重组SARS病毒N蛋白免疫BALB／c雌性小鼠获得免疫脾细胞，利用杂交瘤技术将免疫脾细胞同骨髓瘤Sp2／0细胞融合，间接ELISA方法筛选阳性克隆并扩增。结果：获得了能稳定分泌抗重组SARS病毒N蛋白抗体的杂交瘤细胞株，经鉴定分泌的抗体IgG亚类为IgM。结论：制备了鼠源性单克隆抗体并初步研究了该抗体性质。     

间接免疫荧光抗体试验在传染性非典型肺炎诊断中的应用

目的：评价应用间接免疫荧光抗体试验(IFA)在传染性非典型肺炎[严重急性呼吸综合征(SARS)]诊断中的可靠性，探讨SARS患者发病后血清抗体在体内的产生规律。方法：采用IFA方法检测不同发病时间的临床确诊SARS病例、疑似病例和其他人群的血清SARS病毒抗体，同时对每一个研究对象采用调查表进行一般情况调查。结果：在发病10天内，SARS患者血清IgG阳性率为55.1％，IgM阳性率为16．3％；发病10天后SARS患者IgG阳性率达89．8％，IgM阳性率达65．3％；发病25天以后SARS患者IgG、IgM阳性率均为90．9％。对发病时间与抗体阳性率采用趋势x^2检验，结果：显示SARS患者血清IgG、IgM抗体阳性率随着发病时间而上升(IgG趋势检验x^2＝16．376，P＝0．00005；IgM趋势检验x^2＝28．736，P＝0．000 00)。IFA法用于检测SARS患者发病10天后血清抗体，结果：显示灵敏度、特异度及与临床诊断的符合率均在90％以上。结论：IFA法适于SARS发病10天后作为实验室辅助诊断方法。     

四种试剂盒在SARS实验室早期诊断中的作用分析

目的 比较4种检测严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)基因、抗原和抗体的试剂盒在SARS患者早期实验室诊断的可能作用。方法 用3种酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测SARS-CoV IgG、SARS-CoV IgM和SARS-CoV N蛋白，用荧光定量聚合酶链反应(F-PCR)检测SARS-CoV核酸。结果 根据162份血清的检测结果，发病15天，N抗原的阳性率可达90．2％(55／61)；发病后的第1518天IgG和IgM阳性率为92．8％(13／14)；根据82份咽拭子的检测结果，F-PCR法在发病后15天的阳性率可达56．3％(14／24)，69天可达71．4％(10／14)。结论 除了检测SARS-CoV病毒基因的F-PCR方法以外，对疑似患者血清标本进行N蛋白的检测，具有早期预报意义。     

清远市小学学生SARS冠状病毒抗体血清流行病学研究

目的了解清远市小学学生SARS冠状病毒(简称SARS-CoV)抗体水平。方法分别于2005年10月和2006年4月,采集清远市2所乡镇小学学生及2003年SARS-CoVIgG检测阳性儿童的血液,用酶联免疫法检测血清中SARS-CoV抗体IgG。结果共检测小学学生血清样本449份,SARS-CoV IgG总阳性率为1.78%(8/449),男、女学生之间阳性率差异无统计学意义(P>0.05);其中在9、10、11、12岁年龄组学生中检出SARS-CoV IgG,阳性率分别为2.70%(1/37)、7.58%(5/66)、2.13%(1/80)、0.99%(1/101),4个年龄组阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05);8份SARS-CoV IgG阳性血清样本均来自同一学校;对17名2003年SARS-CoV lgG检测阳性的儿童进行追踪重新采血检测,阳性率为11.76%(2/17)。结论该地区小学学生SARS-CoV抗体阳性率较低,存在隐性感染及聚集现象,SARS-CoV抗体IgG水平随时间延长会逐渐下降,甚至消火。     

Animal models and antibody assays for evaluating candidate SARS vaccines: summary of a technical meeting 25-26 August 2005, London, UK

Severe acute respiratory syndrome (SARS) emerged in the Guangdong province of China in late 2002 and spread to 29 countries. By the end of the outbreak in July 2003, the CDC and WHO reported 8437 cases with a 9.6% case fatality rate. The disease was caused by a previously unrecognized coronavirus, SARS-CoV. Drawing on experience with animal coronavirus vaccines, several vaccine candidates have been developed and evaluated in pre-clinical trials. Available data suggest that vaccines should be based on the the 180kDa viral spike protein, S, the only significant neutralization antigen capable of inducing protective immune responses in animals. In the absence of clinical cases of SARS, candidate vaccines should be evaluated for efficacy in animal models, and although it is uncertain whether the United States Food and Drug Administration's "animal rule" would apply to licensure of a SARS vaccine, it is important to develop standardized animal models and immunological assays in preparation for this eventuality. This report summarizes the recommendations from a WHO Technical Meeting on Animal Models and Antibody Assays for Evaluating Candidate SARS Vaccines held on 25-26 August 2005 in South Mimms, UK, provides guidance on the use of animal models, and outlines the steps to develop standard reagents and assays for immunological evaluation of candidate SARS vaccines.     

发热患者SARS冠状病毒抗体分析

目的了解临床发热患者中是否存在严重急性呼吸综合征（SARS）冠状病毒（SARS-CoV）隐性感染或亚临床感染。方法对2003年5月～7月，SARS流行期间湖北地区临床发热患者373例血清进行SARS冠状病毒（SARS-CoV）抗体（IgG、IgM、N蛋白抗体）酶联免疫吸附法（ELISA）检测和分子生物学（RT—PCR）检测。结果373例发热患者中，检出冠状病毒抗体阳性者24例，阳性率6．43％（24／373），其中SARSIgG抗体、IgM抗体、N蛋白抗体阳性率分别为0．54％，1．34％和5．09％，但SARS-CoVRT—PCR检测均为阴性。结论临床发热患者可能存在SARS-CoV隐性或亚临床感染，患者体内产生针对SARS-CoV的保护性抗体，应具有免疫力和抵抗力。     

四川省首起传染性非典型肺炎病例的病原学及血清学研究

目的：对四川省首起传染性非典型肺炎病例病原学及血清学进行研究。方法：病原分离及血清学检测。结果：细胞及鸡胚培养未分离到相应病原；病例甲、病例乙的SARS冠状病毒IgM和IgG抗体阳性，病例丙的肺炎衣原体IgM抗体阳性。结论：两例患者为SARS冠状病毒感染，另一例可能合并肺炎衣原体感染。     

北京地区SARS康复者冠状病毒IgM、IgG抗体水平的变化

目的探讨SARS康复者康复后及其1年内血清冠状病毒IgG、IgM抗体的产生水平及动态变化,为该病的下一步预防和疫苗的保护效力提供依据.方法采用ELISA法对SARS康复者冠状病毒IgG、IgM抗体进行检测,对IgG或IgM抗体连续两次检测都为阳性者继续随访1年;对二者连续两次都为阴性者放弃随访;随访结果用stata 7.0软件分析.结果 81.2%的康复者连续两次IgG抗体检测阳性;18.8%的康复者连续两次IgG抗体阴性;对311例IgG抗体阳性者进行了1年的随访,除1例在出院后85 d时抗体变为阴性外,其他310例康复者1年后IgG抗体仍为阳性,但抗体平均水平下降了约35.8%;22例IgG抗体阳性康复者(2003年4月3日～5月21日出院)进行了IgM抗体检测,2003年5月30日检测时,22.7%的康复者IgM抗体阳性,2003年6月14日检测时,IgM抗体全为阴性.结论 IgM抗体在康复后短期内很快消失;约有81.2%的康复者能够产生IgG抗体;1年随访中,除1例康复者IgG抗体由阳性转为阴性外,其他IgG抗体阳性者1年后该抗体仍为阳性,但抗体水平有所下降.