Fas、Bcl-2蛋白在重度子痫前期胎盘滋养叶细胞凋亡的实验研究

目的探讨凋亡相关蛋白Fas、Bcl-2在胎盘滋养叶细胞中的表达及其意义,滋养叶细胞凋亡与Fas、Bcl-2两种蛋白的关系,从而于细胞凋亡的角度探讨重度子痫前期的发病机制。方法用免疫组织化学SP法检测重度子痫前期患者54例（试验组）,同时选择同期正常晚孕妇女20例（对照组）做胎盘组织中Fas、Bcl-2蛋白的表达及滋养叶细胞凋亡检测。结果细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Fas在重度子痫前期及正常孕妇胎盘组织中均有表达。其中Bcl-2蛋白的表达在试验组低于对照组（P〈0.05）;而Fas蛋白的表达在试验组明显高于对照组（P〈0.05）;在试验组及对照组均可观察到细胞凋亡现象,在滋养层细胞（合体细胞滋养层及细胞滋养层）、间质细胞、血管内皮细胞胞浆及细胞核内均有表达,尤以合体细胞最多见。试验组细胞凋亡较对照组明显增多（P〈0.05）。重度子痫前期时,Bcl-2与Fas蛋白的表达呈负性相关;Bcl-2蛋白表达与胎盘细胞凋亡呈负性相关,而Fas蛋白的表达与胎盘细胞凋亡呈正性相关（P〈0.01）。结论重度子痫前期的发病原因可能与胎盘滋养叶细胞凋亡及Bcl-2、Fas基因异常表达有关。     

葛根素对子痫前期患者胎盘细胞凋亡的影响

目的研究葛根素对子痫前期（PE）患者相关Bax、bcl-2及Caspase-3在胎盘绒毛中的表达的影响,探讨葛根素治疗PE对凋亡相关表达的影响及治疗机制。方法选择正常妊娠妇女60例,硫酸镁治疗后PE患者60例（对照组）,硫酸镁与葛根素治疗后PE患者54例（研究组）,分娩后取胎盘组织,采用免疫组织化学方法检测凋亡相关蛋白的BCL-2,BAX,Caspase-3表达情况;采用末端脱氧核苷酸转移酶介导脱氧核苷酸切口末端标记法（TUNEL法）检测胎盘细胞凋亡情况。结果研究组胎盘绒毛滋养细胞的凋亡率明显高于正常妊娠组,但低于对照组（P〈0．05）胎盘绒毛中有Bax、bcl-2、Caspase-3表达主要分布于合体滋养层细胞,研究组Bax和Caspase-3阳性表达率分别为（49．6±5．7）％和（29．5±4．1）％,与正常妊娠比较,表达水平显著增加（P〈0．01）,与对照组比较,Bax、Caspase-3表达水平显著降低,（P〈0．01）。结论胎盘组织中Bax、Caspase-3在子痫前期发病中可能起重要作用;葛根素治疗能使胎盘绒毛Bax、Caspase-3表达改变,抑制胎盘绒毛的细胞凋亡,提高子宫-胎盘-胎儿血供。     

硝酸甘油对持续心肌缺血模型动物心肌细胞凋亡及凋亡相关基因的影响

目的：研究硝酸甘油对持续心肌缺血心肌细胞凋亡以及对凋亡相关基因的影响。方法：采用大鼠动物模型，用原位标记与半定量分析检测心肌细胞凋亡程度；以S-P免疫组化分别检测Fas基因蛋白。结果：持续心肌缺血组与假手术组相比，心肌细胞凋亡程度明显增加，Fas-L蛋白、Bcl-2蛋白的表达都有明显增高，差异有极显著性（P〈0．01）；硝酸甘油组与持续心肌缺血组比较，心肌细胞凋亡程度明显降低，差异有极显著性（P〈0．01）；Bcl-2蛋白表达增高，差异有显著性（P〈0．05）、Fas—L蛋白表达降低，差异有显著性（P〈0．05）。结论：硝酸甘油能够减轻持续心肌缺血过程中心肌细胞凋亡程度。     

Bcl一2／Bax在溃疡性结肠炎肠黏膜中的表达及与细胞凋亡的关系

目的研究溃疡性结肠炎患者肠黏膜中的凋亡调控蛋白Bcl-2／Bax表达状态及其与细胞凋亡的关系,探讨溃疡性结肠炎的发病机制。方法应用脱氧核糖核酸转移酶介导的缺口末端标记技术和免疫组化方法分析36例溃疡性结肠炎患者和25例正常对照肠黏膜细胞凋亡、凋亡调控蛋白Bcl-2／Bax的表达。结果溃疡性结肠炎组凋亡调控蛋白Bcl-2／Bax：的表达指数显著高于正常对照组（P〈0．05）,凋亡调控蛋白Bcl-2／Bax的表达与凋亡指数呈正相关（r=0．709,P=0．000;r=0．589,P=0．000）。结论溃疡性结肠炎患者肠黏膜凋亡调控蛋白Bel-2／Bax表达增加,诱导肠黏膜细胞凋亡。     

安脑丸对大鼠大脑皮质神经元氧糖剥夺损伤的防护作用

目的探讨安脑丸对神经元缺氧缺糖损伤大鼠模型细胞凋亡的防护作用。方法体外培养新生sD大鼠皮层神经元,完全随机分为正常对照组、模型组及安脑丸高、中、低剂量组。正常对照组正常培养,模型组及安脑丸各剂量组建立氧糖剥夺模型,安脑丸各剂量组加不同浓度（分别稀释10、20、30倍）含药血清的培养液,测定各组细胞存活率及凋亡率,免疫印迹法检测caspase-12、细胞色素C、葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、Bcl-2表达量的变化。结果与正常对照组相比,氧糖剥夺模型组细胞凋亡率增加[（22．0±2．2）％比（3．2±0．6）％,P〈0．05],存活率明显降低[（62．4±4．6）％比（100．0±3．1）％,P〈0．05];GRPT8表达上调（P〈0．05）,细胞色素c蛋白表达增加（P〈0．05）,caspase-12表达增加（P〈0．05）,Bcl-2表达减少（P〈0．05）。安脑丸低、中、高剂量组细胞存活率分别为（74．9±2．7）％、（83．0±2．2）％、（75．2±2．8）％,均明显高于模型组（均P〈0．05）;安脑丸中剂量组细胞存活率明显高于安脑丸低、高剂量组（均P〈0．05）。安脑丸中剂量组与模型组比较,24h凋亡率明显减少[（10．4±0．7）％比（22．0±2．2）％,P〈0．05];细胞Bcl-2表达增加（P〈0．05）,细胞色素c释放和caspase-12的表达减少（均P〈0．05）。结论安脑丸对氧糖剥夺诱导的皮层神经元细胞凋亡有防护作用。     

凋亡相关蛋白Bel-2和Bax在糖尿病骨骼肌病变中的变化及意义

目的：探讨糖尿病骨骼肌凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的变化及意义。方法：选用Wistar大鼠24只,随机分成正常对照组、单纯缺血组、糖尿病组和糖尿病缺血组,每组6只。以四氧嘧啶50mg／kg尾静脉注射制造糖尿病模型。造模后2周结扎右股动脉制造缺血模型。10周后,以免疫组化方法观察腓肠肌中凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax表达情况。结果：糖尿病组骨骼肌表现为普遍性萎缩,肌纤维变性坏死。与对照组比较糖尿病可使骨骼肌凋亡相关蛋白Bcl-2表达降低（P〈0．05）,Bax表达增高（P〈0．05）。缺血可使骨骼肌Bax蛋白表达增高（P〈0．05）,但对Bcl-2表达的影响与对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。糖尿病与缺血对骨骼肌Bcl-2和Bax蛋白表达的影响无交互作用（P〉0．05）。结论：糖尿病骨骼肌病变可能与Bcl-2与Bax蛋白比例下降促进细胞凋亡有关。     

子痫前期患者胎盘组织中MKP-1的表达及意义

目的：探讨MAPK磷酸酯酶-1（MKP-1）在子痫前期患者胎盘组织中的表达及意义。方法：采用免疫组织化学方法检测60例子痫前期患者及30例正常妊娠妇女胎盘组织中MKP—1的表达。结果：正常妊娠组及轻、重度子痫前期组胎盘组织中MKP-1表达逐渐减弱,各组间差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论：子痫前期患者胎盘中MKP-1表达水平的变化导致胎盘滋养细胞凋亡与子痫前期的发病及病情发展有关。     

L-硝基精氨酸对大鼠内毒素性肺损伤治疗作用及其机制的研究

目的探讨L-硝基精氨酸（NG—nitro-L—arginine,L—NA）对内毒素性肺损伤大鼠肺表面活性物质（PS）和细胞凋亡的影响,探讨L—NA对肺损伤的保护作用及其机制。方法健康雄性SD大鼠采用舌下静脉注射脂多糖（LPS）复制肺损伤模型,分别于给予LPS 1h和6b后给予0．9％氯化钠溶液（对照纽及LPS组,静脉给药）和L-NA（20mg／kg,静脉给药）（L-NA治疗组）,治疗3h,取肺组织,原位杂交法（ISH）测定肺组织肺表面活性物质蛋白A（SP-A）mRNA;流式细胞术（FCM）检测肺细胞凋亡率;Western blot法检测Caspase-3蛋白的表达;免疫组化法测定Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果与对照组比较,大鼠肺损伤后SP-A mRNA表达明显下降（P〈0．01）;细胞凋亡率、Caspase-3和Bax蛋白表达明显升高（P〈0．01）,Bcl-2蛋白表达和Bcl-2／Bax降低（P〈0．01）;肺损伤1h用L—NA治疗3h后,SP-A mRNA阳性细胞表达明显增强（P〈0．05）,细胞凋亡率降低（P〈0．05）;但Caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表达、Bcl-2／Bax与LPS组比较没有明显的变化（P〈0．05）,肺组织病理改变减轻,肺损伤6h用L—NA治疗3h对LPS引起的以上变化没有明显影响。结论肺损伤1h后给予L—NA可减轻内毒素性肺损伤,增强PS表达,减少细胞凋亡是其机制之一。     

黄芪对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用及其对细胞凋亡影响的研究

目的探讨黄芪对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用及其对细胞凋亡影响的可能机制。方法采用无创伤动脉夹夹闭双侧肾动脉建立肾脏缺血再灌注损伤大鼠模型方法,将大鼠分为A组（缺血再灌注组）、B组（黄芪治疗组）和C组（正常对照组）,观察三组大鼠肾脏缺血再灌注损伤后血肌酐（cr）、尿素氮（BUN）、血浆超氧化物歧化酶（SOD）、血清丙二醛（MDA）、凋亡调控基因Bcl-2、Bax的表达及肾脏细胞凋亡指数（AI）的变化。结果黄芪治疗组SOD水平显著性高于缺血再灌注组（P〈0．05）,MDA、BUN和cr指标与缺血再灌注组比较,显著降低（P〈0．05）。正常对照组Bcl-2、Bax表达极少,缺血再灌注组Bcl-2、Bax表达均明显增强（Bcl-2：P〈0．05、Bax：P〈0．01）;黄芪治疗组较缺血再灌注组Bax表达明显下降（P〈0．05）,Bcl-2表达显著增强（P〈0．01）。黄芪治疗组凋亡指数显著低于缺血再灌注组（P〈0．05）。结论黄芪对肾脏缺血再灌注损伤具有保护作用,可能是通过影响凋亡调控基因Bcl-2、Bax的表达以降低肾脏细胞凋亡指数实现的。     

SB203580对大鼠再灌注损伤肺细胞凋亡的干预

目的：探讨P38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）特异性抑制剂SB203580对再灌注损伤肺细胞凋亡的影响。方法：30只SD大鼠随机分为3组：假手术对照（control,C）组,肺缺血／再灌注（I／R）组,肺缺血／再灌注＋SB203580（S组）;TUNEL法检测肺组织细胞凋亡的改变：免疫组化法检测Bcl-2、Bax蛋白的表达;电镜观察肺组织形态学改变。结果：I／R组与C组比较,Bcl-2蛋白和Bax蛋白表达均明显上调（均P〈0．01）,Bcl-2／Bax比值显著下降（P〈0．01）,凋亡指数（AI）显著增高（P〈0．01）,肺组织超微结构明显异常;使用SB203580后,Bcl-2蛋白表达上调（P〈0．01）,Bax蛋白表达下调（P〈0．01）,Bcl-2／Bax比值上升（P〈0．01）,AI显著下降（P〈0．01）,肺组织超微结构异常改变不同程度减轻。结论：SB203580可通过上调Bcl-2蛋白的表达、下调Bax蛋白的表达、调控Bcl-2／Bax蛋白之间的平衡而减轻细胞凋亡,对肺缺血／再灌注损伤发挥积极的防治作用。     

异丙酚对油酸性急性肺损伤模型大鼠肺组织细胞凋亡的影响

目的:探讨静脉麻醉药异丙酚对油酸性急性肺损伤(ALI)模型大鼠肺组织细胞凋亡的影响。方法:取40只SD大鼠随机分成正常对照组、ALI组及异丙酚低、中、高剂量(4、8、16mg·kg-1·h-1)组。除正常对照组不输注油酸外,其余4组大鼠均于颈静脉输注油酸,之后各组输注相应药物4h腹主动脉放血处死,留取肺组织,光镜观察肺病理变化,流式细胞仪检测肺组织细胞凋亡率及凋亡相关蛋白Fas/FasL、Bax/Bcl-2的表达情况。结果:与正常对照组比较,ALI组肺组织细胞凋亡率显著升高(P<0.05);Bax、Fas和FasL蛋白表达均显著增强(P<0.05);Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05)。与ALI组比较,异丙酚中、高剂量组肺组织细胞凋亡率、Bax、Fas和FasL蛋白表达均显著降低(P<0.05),Bcl-2蛋白表达均显著增强(P<0.05),但低剂量组上述指标变化均不显著。结论:异丙酚可能通过调控油酸性ALI时肺组织Bax/Bcl-2、Fas/FasL系统的活化而显著抑制肺组织细胞凋亡,减轻肺损伤,从而发挥一定的保护作用。     

正常早孕与稽留流产绒毛组织结构中Bax和Bcl-2蛋白表达的对比研究

目的：研究凋亡调控蛋白Bcl-2和Bax在正常早孕与稽留流产绒毛组织结构中的表达及其意义,探讨稽留流产原因。方法选择本院就诊的稽留流产患者和早孕人工流产患者各60例,分为A组、B组。流产后立即留取胚胎绒毛组织送病理。分别应用光镜观察各组绒毛组织细胞形态结构的改变;同时应用免疫组织化学方法和计算机图文分析系统检测Bax、Bcl-2在各组绒毛的表达及细胞凋亡情况。结果稽留流产组绒毛滋养细胞中凋亡指数为（33.32±0.79）%,明显高于对照组B组的（18.90±0.63）%,差异有统计学意义（P〈0.01）。Bax和Bcl-2在两组合体滋养细胞中的阳性率比较显示,稽留流产组中Bax阳性率增高, Bcl-2阳性率下降, Bcl-2/Bax比值降低,差异均有统计学意义（P〈0.01）。结论蜕膜绒毛中Bax阳性率增高和Bcl-2阳性率下降可使绒毛合体滋养细胞凋亡明显增加,并进一步导致稽留流产发生。     

咪达唑仑对大鼠肝脏缺血再灌注损伤时细胞凋亡的影响

目的探讨咪达唑仑对大鼠肝脏缺血再灌注时细胞凋亡的影响及其保护作用。方法成年健康SD大鼠54只,随机分为3组:假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(IR组)、咪达唑仑组(M组),每组18只。制作70%肝脏缺血再灌注模型,实验结束后即刻取肝左叶做标本。用免疫组织化学法检测Bcl-2与Bax蛋白表达量,TUNEL法检测肝细胞凋亡指数(AI)。结果与Sham组比较,各组肝组织Bcl-2、Bax蛋白含量、凋亡指数差异有统计学意义(P<0.05);与IR组比较,M组Bcl-2蛋白表达增加、Bax蛋白表达和AI减少(P<0.05)。IR、M组各组内各时相以再灌注6h最高。结论咪达唑仑可以通过调节Bcl-2、Bax蛋白表达,使肝细胞凋亡减轻,从而对大鼠缺血再灌注肝脏有一定的保护作用。     

河豚毒素对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

目的研究河豚毒素（TTX）心脏停搏液对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响。方法取Wistar大鼠24只,建立Langendorff-Neely离体心脏灌注模型,随机分为3组（n=8）：基础组、STH-2组、TTX组。用TUNEL法检测心肌细胞凋亡指数,免疫组化测定凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、p53的表达,Westernblot检测Bcl-2蛋白表达。结果STH-2组凋亡指数（AI）（11.20±0.79）%高于TTX组（6.92±1.10）%和基础组（1.34±0.23）%（P〈0.01）。TTX组Bcl-2的PEI为（22.63±1.10）%高于STH-2组（13.51±0.67）%和基础组（2.52±0.58）%（P〈0.01）;STH-2组Bax的PEI为（8.04±0.57）%高于TTX组（6.05±0.46）%和基础组（2.14±0.57）%（P〈0.01）。TTX组Bcl-2/Bax为3.78±0.41高于STH-2组1.75±0.15（P〈0.01）。TTX组Bcl-2的相对蛋白含量为（86.1±0.98）%高于STH-2组（53.2±1.76）%和基础组（23.7±2.61）%（P〈0.01）。p53蛋白在各组均未见明显阳性表达。结论与STH-2比较,TTX能减少缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡数,其抗凋亡的机制可能与上调Bcl-2表达,下调Bax表达,提高Bcl-2/Bax比值有关。     

白血病抑制因子（LIF）在子痫前期患者胎盘组织中的表达

目的探讨白血病抑制因子（LIF）在子痫前期患者胎盘组织中表达的临床意义。方法采用链霉菌抗生物素蛋白－过氧化酶连接（SP）法,对在正常妊娠（正常妊娠组）、子痫前期（轻度子痫前期组和重度子痫前期组）孕妇胎盘组织中LIF的表达进行组织学定位和半定量分析。结果3组孕妇胎盘组织中LIF均呈现阳性表达,阳性染色主要位于滋养细胞胞质中．胞核无明显着色。轻度子痫前期组和重度子痫前期组分别与正常妊娠组比较,胎盘组织的染色强度及范围显著减弱．差异有统计学意义（P〈0．01）,而轻度子痫前期组和重度子痫前期组的胎盘组织染色范围和强度比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。结论LIF对维持正常妊娠有一定的保护作用;LIF在胎盘组织中的低表达．影响了滋养细胞的浸润导致胎盘浅着床．从而失去对正常妊娠的保护作用。LIF可能参与子痫前期的形成机制。     

TSP-1在子痫前期患者血清及胎盘组织中的表达研究

目的：通过研究血小板反应蛋白（thrombospondin,TSP）-1在子痫前期（preeclampsia,PE）患者血清及胎盘组织中的表达,探讨其与子痫前期发病的关系及其临床意义。方法选取子痫前期患者30例,其中轻度子痫前期15例,重度子痫前期15例,选取同期正常孕妇15例作为对照组,采用ELISA法检测三组孕妇血清中TSP-1的表达水平;同时采用免疫组化SP法检测相应胎盘组织中的TSP-1的表达水平。结果血清表达：①轻度子痫前期与重度子痫前期分别与对照组的比较,P＜0.05,有统计学意义。②轻度子痫前期与重度子痫前期患者之间比较,P＞0.05,差异无统计学意义。胎盘表达：①轻度子痫前期与重度子痫前期分别与对照组的比较,P＜0.05,差异有统计学意义。②轻度子痫前期与重度子痫前期患者之间比较,P＞0.05,差异无统计学意义。结论血小板反应蛋白-1在子痫前期患者血清及胎盘组织中表达均较正常产妇升高,与子痫前期的发病有关,但与子痫前期的严重程度关系不大。     

重度子痫前期并发胎盘早剥的临床特征及对母婴的影响观察

目的分析探讨重度子痫前期并发胎盘早剥的临床特征及对母婴的影响。方法回顾性分析本院于2010年12月-2011年7月收治的80例重度子痫前期患者的临床资料,27例重度子痫前期并发胎盘早剥的患者为观察组,53例重度子痫前期未并发胎盘早剥的患者为对照组,对两组患者的临床特征、分娩结局、母婴结局等进行对比分析。结果观察组患者早产率为88．9％,对照组早产率为62．2％,观察组明显高于对照组（P〈0．05）;两组患者在血性羊水、胎儿窘迫、宫腔积血以及各项实验室检查指标等临床特征上比较,观察组患者发生率明显高于对照组（P〈0．05）;两组母婴结局中新生儿窒息、死胎、产后出血、子宫切除、胎盘卒中、凝血功能障碍的发生率比较,观察组发生率明显高于对照组（P〈0．05）。结论重度子痫前期并发胎盘早剥对母婴结局会造成很大的影响,对于发现重度子痫前期的孕妇要进行早期预防和积极治疗。对于降低胎盘早剥的发生率和改善母婴结局有重要意义。对于已并发胎盘早剥的重度子痫前期孕妇,为了保证孕妇生命安全要尽早结束妊娠。     

子痫前期孕妇血清及胎盘组织血管内皮生长因子受体1表达及与脂代谢的关系

目的 探讨孕妇血清及胎盘组织中血管内皮生长因子受体1（sFlt-1）表达变化在子痫前期（PE）发病中的作用,及与脂代谢异常、胰岛素抵抗（IR）的关系。方法 选择2009年10月至2011年5月我院产科住院分娩的PE孕妇及同期正常对照组各60例,采用ELISA方法检测孕妇血清sFlt-1,采用RT-PCR技术检测胎盘组织中sFlt-1mRNA的表达。结果 1）早发型及晚发型PE组孕妇血清中sFlt-1水平分别为（3 608±1 210）及（2 609±865）ng/L,均高于对照组（P〈0.05）。2）早发型及晚发型PE组孕妇血清FINS、胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）水平分别为（25.0±4.2）mU/L、5.4±1.0及（24.7±4.3）mU/L、4.9±1.3,均高于对照组（P〈0.05）;早发型与晚发型PE组FINS及HOMA-IR比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）。3）早发型和晚发型PE组孕妇胎盘组织中sFlt-1mRNA的表达水平分别为3.30±1.70及2.28±1.07,均高于孕周≥34周对照组（P〈0.05）,且早发型PE组高于晚发型PE组（P〈0.05）。4）孕妇血清中sFlt-1水平与胎盘组织中sFlt-1mRNA表达水平呈正相关（P〈0.05）;孕妇血清sFlt-1水平与血TG、TC、FINS、HOMA-IR、UA、SP、DP、MAP、孕时BMI均呈正相关（P〈0.05）,与血HDL-C无明显相关。结论 PE孕妇血清sFlt-1水平及胎盘组织中sFlt-1mRNA表达水平明显升高,两者呈正相关。PE孕妇存在IR、高胰岛素血症、高脂血症,该变化可能与PE的发病有关。