α-硫辛酸对视网膜缺血-再灌注损伤大鼠视网膜中血管内皮生长因子和基质金属蛋白酶表达的影响

目的探讨α-硫辛酸对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤中血管内皮生长因子（VEGF）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达的影响及作用机制。方法按随机数字表法将78只SPF级健康成年Wistar大鼠分为正常对照组6只及α-硫辛酸组和缺血-再灌注组各36只。α-硫辛酸组和缺血-再灌注组根据再灌注时间的不同分为6、12、24、48h,3d和7d组。采用前房灌注生理盐水升高眼压的方法建立视网膜缺血-再灌注动物模型,其中α-硫辛酸组大鼠自造模前3d开始腹腔注射α-硫辛酸100mg/（kg.d）,缺血-再灌注组大鼠以同样的方法注射等体积生理盐水。在上述时间点分别处死大鼠并摘除眼球,行苏木精-伊红染色评估各组大鼠在各时间点视网膜组织的结构变化;应用免疫组织化学法检测大鼠视网膜缺血-再灌注损伤后不同时间点视网膜组织中VEGF和MMP-9的表达,并对各组VEGF和MMP-9的表达量进行比较。结果缺血-再灌注组大鼠在再灌注后6h出现视网膜水肿和视网膜神经节细胞（RGCs）的轻度改变,随着时间的延长,RGCs的结构改变明显加重。α-硫辛酸组视网膜水肿和RGCs结构的异常变化过程同缺血-再灌注组,但程度较轻。实验前后正常对照组大鼠视网膜中未见VEGF的表达;缺血-再灌注组于再灌注后12h开始出现VEGF的表达,随着时间的延长VEGF表达逐渐增加,到再灌注后48h达到高峰。各时间点缺血-再灌注组和α-硫辛酸组VEGF在视网膜的表达水平明显高于正常对照组,差异均有统计学意义（P〈0.05）,但各时间点α-硫辛酸组VEGF在视网膜的表达水平明显低于缺血-再灌注组,差异均有统计学意义（P〈0.05）。正常对照组大鼠视网膜未检测到MMP-9的表达;缺血-再灌注组在再灌注后6h可检测到MMP-9在视网膜中的表达,24h后其表达水平达到高峰。各时间点缺血-再灌注组MMP-9的表达明显高于正常对照组（P均〈0.05）,α-硫辛酸组视网膜中MMP-9的表达与缺血-再灌注组比较明显下降,差异均有统计学意义（P〈0.05）。缺血-再灌注组视网膜VEGF和MMP-9的表达呈正相关（r=0.834,P〈0.05）。结论视网膜缺血-再灌注损伤可诱导VEGF及MMP-9的表达在视网膜中过度表达,α-硫辛酸可通过抑制视网膜缺血-再灌注损伤中VEGF及MMP-9的表达而对视网膜起保护作用。     

VEGF和MMP-9在大鼠视网膜缺血再灌注损伤中表达及相关性研究

目的：研究VEGF和MMP-9在大鼠视网膜缺血再灌注中的表达以及两者的相关性。 方法：将84只健康成年Wistar大鼠随即分为正常对照组和缺血再灌注后6,12,24,48 h;3,7 d组,每组12只。采用升高眼内压的方法建立视网膜缺血再灌注模型,应用免疫组织化学法检测大鼠视网膜缺血再灌注损伤（ retinal ischemia/reperfusion injury,RIRI）后视网膜组织 VEGF 和MMP-9表达的变化。 结果：正常对照组未见VEGF阳性表达,视网膜缺血再灌注后12 h开始出现VEGF的表达,48 h达到高峰,差异有统计学意义（P〈0.01）。缺血再灌注后6h MMP-9的表达开始增加,24 h 后达到高峰。正常对照组几乎未检测到MMP-9的表达,差异有统计学意义（ P〈0.01）。经相关性分析发现,缺血组视网膜VEGF和MMP-9的表达呈正相关（r=0.834,P〈0.05）。 结论：VEGF和MMP-9在视网膜缺血再灌注损伤中的表达呈正相关,两者可能协同作用,在视网膜缺血性病变的发生发展中起重要作用。     

重组人促红细胞生成素对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤的保护作用

目的 制作Sprague-Dawley (SD)大鼠视网膜缺血-再灌注(RIR)损伤模型,探讨腹腔内注射重组人促红细胞生成素(rHuEPO)对急性RIR损伤所致的大鼠视网膜神经元损伤的保护作用及其对热休克蛋白72(HSP72)表达的影响.方法 采用前房灌注的方式建立RIR损伤模型,灌注压110 mm Hg(1 mm Hg=0.133kPa),缺血时间1h;腹腔注射rHuEPO.78只SD大鼠随机分组:正常组6只,EPO组、EPO+槲皮黄酮组、RIR组各24只,均以右眼为实验眼.采用免疫组织化学法和末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)分别测定正常对照组和各实验组大鼠再灌注24h、48 h、72 h和1周视网膜中HSP72及凋亡细胞的表达,观察各组大鼠视网膜病理学改变.结果 ①正常组大鼠视网膜中HSP72表达微弱,各实验组大鼠视网膜中HSP72表达自再灌注12 h开始增强,24h达到高峰,随后逐渐减弱,72 h时表达稍高于正常.再灌注后各时间段,EPO组大鼠视网膜中HSP72表达均高于RIR组、EPO+槲皮黄酮组(P＜0.05).②正常大鼠视网膜中几乎没有凋亡细胞.再灌注后12 h,各实验组大鼠视网膜中可见凋亡细胞,24 h达高峰,48 h后凋亡细胞数逐渐减少;再灌注后各组大鼠视网膜中凋亡细胞数比正常组多(P＜0.05).③再灌注后,RIR组,EPO+槲皮黄酮组大鼠内层视网膜明显水肿,炎性细胞侵入,膜结构逐渐破坏;EPO组大鼠视网膜结构保持相对完整,炎性细胞相对较少.结论 ①HSP72在正常大鼠视网膜中表达微弱,RIR损伤后表达增多.腹腔注射EPO可以明显诱导大鼠视网膜中HSP72的表达增多.②EPO可以减少大鼠RIR损伤后视网膜细胞凋亡,减少视网膜内炎性细胞的浸润,保护视网膜结构,对视网膜具有明显的保护作用.其机制可能与使HSP72表达上调有关.(中国眼耳鼻喉科杂志,2012,12:30-35)     

内毒素诱导性葡萄膜炎眼中NO含量和基质金属蛋白酶-9及其组织型金属蛋白酶抑制剂-1与诱导型NO合酶的表达

目的 观察基质金属蛋白酶（MMP）-9及其组织型金属蛋白酶抑制剂（TIMP）-1、一氧化氮（NO）和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）在内毒素诱导性葡萄膜炎（EIU）眼组织中的变化。 方法 90只Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为实验组(81只)和对照组(9只)。实验组大鼠双后足垫注射伤寒杆菌内毒素(LPS)200 μl建立EIU模型；对照组大鼠不予注射。在LPS注射后0、6、12、18、24、48、72、96h和7d分别处死9只实验组大鼠，观察眼部改变并进行组织病理学检查。检测血浆、房水和葡萄膜组织的NO含量和房水蛋白浓度。免疫组织化学方法和计算机图像分析系统检测MMP-9、TIMP-1和iNOS的表达及其平均吸光度［A, 旧称光密度（OD）］值。 结果 虹膜、睫状体的上皮细胞和渗出的炎性细胞表达iNOS、MMP-9和TIMP-1。房水蛋白浓度，血浆、房水和葡萄膜组织中NO含量，以及MMP-9的A值与炎症程度呈正相关，iNOS和TIMP-1的A值与炎症程度无明显相关性。iNOS在LPS注射后6h可见表达，12h达高峰，以后逐渐下降。TIMP-1表达出现于24h，72h时达高峰。 结论 在EIU发生、发展过程中, MMP-9、TIMP-1、NO、iNOS的含量或表达发生变化，提示它们参与EIU的病理过程。 (中华眼底病杂志, 2005, 21: 371-374)     

视网膜缺血再灌注后即早基因C-FOS、C-JUN的表达

目的观察大鼠视网膜缺血再灌注(retinal ischemia reperfusion，RIR)后，凋亡即早基因c-los、e—jun及白介素1β(IL-1β)多肽在视网膜各层细胞中的表达变化，进一步明确凋亡即早基因和白介素1β与RIR损伤发生机制的关系。方法采用前房灌注生理盐水，形成130mmHg(17．3kPa)高眼压，诱导大鼠视网膜缺血60min，解除高眼压，建立RIR模型。缺血60min，再灌注1h、3h．6h、12h、24h后作视网膜石蜡切片，观察c—fos、c-jun及IL-1β的免疫组化结果。结果正常对照组未见c—fos、c-jun及IL-1β的表达，RIR后，c-fos、c—jun在视网膜神经节细胞层(ganglion cell layer，GCL)和内核层(inner nuclear layer，INE)的表达为，再灌注1h少量表达，3h达到高峰，6h开始下降，12h、24h几乎趋于正常组表达。IL-1β在再灌注12h、24h出现表达。而外核层(outer nuclear layer，ONE)几乎均无无阳性表达。结论c—fos、c-jun及IL-1β参与RIR损伤的发生，RIR中视网膜节细胞层和内核层细胞存在凋亡征象。     

大鼠视网膜缺血再灌注后IL-1β的免疫组化研究

目的：观察大鼠视网膜缺血再灌注(retinal isehemia reperfusion，RIR)后，白细胞介素1β(IL-1β)多肽在视网膜表达变化。方法：采用前房灌注生理盐水，形成130mmHg(17．3kPa)高眼压，诱导大鼠视网膜缺血60min，解除高眼压，建立RIR模型。缺血60min，再灌注12h、48h作视网膜冰冻切片，IL-1β免疫组化观察。结果：正常对照组未见IL-1β表达，RIR后12h、48h，视网膜神经节细层可见IL-1β表达。结论：结果提示：IL-1β多肽在蛋白质水平参与RIR损伤发生。     

MMP-9及TIMP-1在内毒素诱导性葡萄膜炎大鼠中的表达

目的 探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及其组织型抑制剂(tissue inhitor of metallopoteinase-1，TIMP—1)在内毒素诱导性葡萄膜炎(endotoxin induced uveitis,EIU)模型中的表达及意义。方法 200μg伤寒杆菌内毒素注射于SD大鼠双后足垫。建立EIU模型。在内毒素注射后的不同时间点处死大鼠。采用免疫组织化学方法和计算机图像分析系统检测MMP-9和TIMP-1在不同时间点的表达及其积分吸光度(A)值。结果内毒素注射6h开始出现炎症，以后炎症加重。于24h达到炎症高峰，以后炎症减轻。7d时基本消退。虹膜上皮细胞，睫状体上皮细胞和渗出的炎症细胞表达MMP-9和TIMP-1。MMP-9在6h出现表达，18～24h达高峰，以后逐渐下降，7d消失。TIMP—1于24h出现表达，72h达高峰，以后逐渐下降。结论 大鼠EIU模型炎症早期MMP-9活性增高，继而TIMP-1分泌增多，MMP-9活性受抑，炎症减轻。提示MMP-9可能是参与EIU的重要调控因子，而TIMP-1则在炎症的抑制过程中发挥了重要作用。     

一氧化氮合酶在大鼠视网膜缺血再灌注损伤中的表达及意义

目的：探讨诱导型一氧化氮舍酶(iNOS)在大鼠视网膜缺血再灌注损伤中的表达及意义。方法：建立结扎颈总动脉的大鼠视网膜缺血再灌注损伤模型，60只SD大鼠被随机分为缺血再灌注组和对照组。每组按再灌注后不同时间段相应分为1h、6h、12h、24h、48h、72h小组，每小组5只大鼠，以免疫组织化学法(SABC法)检测视网膜组织中iNOS的表达情况。结果：在缺血再灌注损伤1h时，未见到iNOS的表达，在缺血再灌注6h时，iNOS开始表达，至第24小时表达最强，第48小时开始减弱，但第72小时仍有表达。而对照组视网膜中未能检测到iNOS的表达。结论：iNOS可能在视网膜缺血再灌注损伤中发挥重要作用。     

基质金属蛋白酶抑制剂GM6001干预外伤性增生性玻璃体视网膜病变的研究

目的 观察外伤性增生性玻璃体视网膜病变(tPVR)和外伤后应用GM6001的大鼠视网膜组织基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9及基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)、TIMP-2在病程中的表达变化.评价GM6001干预tPVR的效果.设计 实验研究.研究对象 SD大鼠108只.方法 将大鼠随机分为生理盐水(实验对照)组、tPVR组和外伤后应用GM6001组.分别于外伤后1、3、7、14、21、28天(d)对各组大鼠视网膜组织MMP-2、MMP-9及TIMP-1、TIMP-2的表达进行Western印迹法检测.主要指标 大鼠视网膜组织MMP-2、MMP.9及TIMP-1、TIMP-2的表达情况.结果 Western印迹法结果显示大鼠视网膜中的MMP-2在tPVR组外伤后3、7、14、21、28 d表达显著增高;外伤后14、21、28 d,应用GM6001组MMP-2表达明显低于tPVR组.MMP-9在tPVR组各个亚组表达显著增高;外伤后1、3、7、14、21 d,应用GM6001组与tPVR组比较,MMP-9表达明显降低.tPVR组大鼠视网膜中的MMP-2/TIMP-2比值在14、21、28 d增高,在外伤后应用GM6001组明显低于tPVR组.MMP-9/TIWP-1比值在tPVR组各个亚组均增高,在外伤后应用GM6001组均明显低于tPVR组.结论 MMP-2与TIMP-2、MMP-9与TIMP-1失衡参与了tPVR发生发展的病理过程,GM6001可促进其动态平衡重新建立,在干预tPVR的发生发展中起重要作用.     

Fas/FasL系统在大鼠视网膜缺血再灌注凋亡损伤中的作用及bFGF的影响

目的：探讨Fas／FasL在大鼠视网膜缺血再灌注损伤中的表达与细胞凋亡的关系及碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth Factor,bFGF)的影响。方法：前房加压法制作大鼠视网膜缺血再灌注损伤模型，28只大鼠随机分为正常组和手术组，其中手术组大鼠左眼为缺血再灌注组，右眼为治疗组，手术组又按照再灌注后不同时间段分为1，6，12，24，48，72h组。应用末端脱氧核酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记法检测视网膜神经细胞凋亡指数(apoptosis index，AI)，免疫组织化学法检测视网膜组织中Fas，FasL的表达。结果：视网膜神经细胞的凋亡出现于再灌注后6h，并逐渐递增，24h达到高峰，48h开始下降，72h组不明显。Fas，FasL表达改变与凋亡的神经细胞改变基本一致。bFGF治疗组各观察指标表达变化规律与缺血组基本一致，但AI值在12，24，48h组明显低于缺血组(P＜0．05)；Fas表达在6，12，24h组较缺血组显下降(P＜0．05)；FasL表达在12，24，48h组较缺血组明显下降(P＜0．05)。结论：Fas／FasL死亡诱导系统参与视网膜缺血再灌注损伤，导致神经节细胞的凋亡；bFGF可抑制Fas、FasL的表达，减少神经节细胞凋亡，对视网膜缺血再灌注损伤有治疗作用。     

Expression of matrix metalloproteinases and their inhibitors in experimental retinal ischemia-reperfusion injury in rats

Matrix metalloproteinases (MMPs) are endopeptidases that degrade the extracellular matrix (ECM) and are involved in the pathogenesis of retinal degeneration along with tissue inhibitors of metalloproteinases (TIMPs). The present study examined the expression and activation of two specific members of MMPs (MMP-2 and MMP-9) and their related inhibitors (TIMP-1 and TIMP-2) in an experimental retinal ischemia-reperfusion injury. Retinal ischemia-reperfusion injury (RIRI) was induced in adult rats with a ligation method. After one hour of ischemia and a varied reperfusion time (0, 3, 6, 12, 24, 48 and 76 hr), the rat eyes were enucleated. Retinal extracts underwent zymographic analysis to measure the activity of MMP-2/9. The activity of TIMP-1 and TIMP-2 was measured by reverse zymography. The protein level was examined by Western blot. Immunohistochemistry analysis was undertaken to assess the anatomical distribution of MMP-9 in the retina after RIRI. The gelatinolytic activity of ProMMP-2 (72 kDa) was increased markedly at 6 hr after RIRI. ProMMP-9 (92 kDa) was not detected in the control specimens, while it appeared at 3 hr, increased markedly at 6 hr, and reached maximal levels at 24 hr after RIRI. The gelatinolytic activity found ian retinal extracts was shown to be inhibited by 10 m M EDTA and activated in vitro by a known metalloproteinase activator (4-aminophenylmercuric acetate (APMA)), indicating that these enzymes were of the metalloproteinase class. By western blot, MMP-2/9 levels increased parallel to protein activity level in zymography. No corresponding increase in TIMP-1 and TIMP-2 protein activity and protein level was detected by reverse zymography and western blot. Elevated levels of MMP-9 and its distribution in retina were confirmed by immunohistochemistry. Expression of MMP-9 was detected in the inner and outer segments of rat retina, and the level becomes stronger at 24 hr after RIRI. In this study, ProMMP-2 and ProMMP-9 were expressed and increased significantly, but their inhibitors (TIMP-1 and TIMP-2) remained relatively unaltered in ischemic retina after RIRI in rats. These results suggest that MMP-2 and MMP-9 may play an important role in the pathomechanism of retinal ischemic injury.     

Regulation of MMPs and TIMPs by IL-1beta during corneal ulceration and infection

PURPOSE: This study was conducted to investigate the role of IL-1beta in the regulation of matrix metalloproteinases (MMPs) and tissue inhibitors of metalloproteinases (TIMPs) in a mouse model of experimental keratitis and corneal injury. METHODS: Mice were injected subconjunctivally with 10 micro g of anti-mouse IL-1beta antibody 2 hours before challenge with Pseudomonas aeruginosa (strain 6294). Control animals received an equal volume and concentration of isotype control antibody at the same time. Eyes were enucleated at 0, 8, 24, and 72 hours, after bacterial challenge and processed for histologic examination. Some eyes were homogenized and used to evaluate production of MMP-2, MMP-9, TIMP-1, and TIMP-2 protein, by zymography and reverse zymography. RESULTS: Injury without bacterial infection resulted in increases in both MMP-2 and -9 and a slight but significant downregulation of TIMP-1. Administration of anti-IL-1beta just before injury and without bacterial infection resulted in a significant reduction in expression of MMP-2 (at 8 hours), MMP-9 (at 8 hours), TIMP-1 (at 8 and 72 hours), and TIMP-2 (at 8 hours). Mice treated with anti-IL-1beta antibody, before bacterial challenge, demonstrated markedly reduced corneal damage compared with the severe corneal injury and massive neutrophil infiltration observed in infected mice treated with control antibody. Administration of the neutralizing anti-IL-1beta antibody resulted in a significant reduction of MMP-9 and a change in the time course of TIMP-1 and -2 expression. The reduction in MMP-9 by anti-IL-1beta during infection was much greater than the reduction without infection. CONCLUSIONS: The results imply that IL-1beta has a central role in corneal destruction during bacterial keratitis and suggests that targeting IL-1beta may be a novel therapeutic strategy for microbial keratitis.     

骨形态发生蛋白-6对氧化应激状态下的视网膜色素上皮细胞基质金属蛋白酶及其抑制剂的影响

目的　探讨骨形态发生蛋白-６（ｂｏｎｅｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃｐｒｏｔｅｉｎ-６,ＢＭＰ-６）保护视网膜色素上皮细胞免受氧化应激损伤的可能作用机制。方法　将ＡＲＰＥ-１９细胞分别置正常对照、７５μｍｏｌ·Ｌ－１ Ｈ２Ｏ２（Ｈ２Ｏ２ 组）、７５μｍｏｌ·Ｌ－１ Ｈ２Ｏ２ ＋１５０ｎｇ·ｍＬ－１ＢＭＰ-６（Ｈ２Ｏ２ ＋ＢＭＰ-６组）及１５０ｎｇ·ｍＬ－１ＢＭＰ-６（ＢＭＰ-６组）环境中培养０ｈ、３ｈ、６ｈ、９ｈ及１２ｈ后,用ＭＴＴ法观察细胞的活性,确定试剂的干预时间。选定作用时间后采用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ及ＲＴ-ｑＰＣＲ测定基质金属蛋白酶-２（ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ-２,ＭＭＰ-２）、基质金属蛋白酶-９（ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ-９,ＭＭＰ-９）以及基质金属蛋白酶抑制剂（ｔｈｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｏｆｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ-１,ＴＩＭＰ-１）蛋白及ｍＲＮＡ水平的变化。结果　作用３ｈ及６ｈ后,Ｈ２Ｏ２组、ＢＭＰ-６组及Ｈ２Ｏ２＋ＢＭＰ-６组细胞活性（３ｈ为０．５２４８±０．０２４０、１．０１２５±０．０１７７、０．５９１７±０．０９９８;６ｈ为０．４５９３±０．０３０９、１．０７７５±０．０２１４、０．５８２０±０．０１３９）差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。ＭＭＰ-２、ＭＭＰ-９、ＴＩＭＰ-１的ｍＲＮＡ及蛋白水平的检测结果是一致的,Ｈ２Ｏ２ 组、ＢＭＰ-６组及Ｈ２Ｏ２ ＋ＢＭＰ-６组两两比较差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）,各组的不同时间差异也均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。Ｈ２Ｏ２组随着作用时间的延长,ＭＭＰ-２、ＭＭＰ-９在蛋白及ｍＲＮＡ水平的含量表达明显增加,而ＴＩＭＰ-１在蛋白及ｍＲＮＡ水平的表达均是降低的。ＢＭＰ-６组ＭＭＰ-２、ＭＭＰ-９在蛋白及ｍＲＮＡ水平的表达明显降低,而ＴＩＭＰ-１在蛋白及ｍＲＮＡ水平的表达均是升高的。ＢＭＰ-６＋Ｈ２Ｏ２ 组ＭＭＰ-２、ＭＭＰ-９的水平均较单纯Ｈ２Ｏ２组的水平低,而ＴＩＭＰ-１的水平是升高的。结论　Ｈ２Ｏ２是通过打破基质金属蛋白及其抑制剂的平衡起到氧化损伤作用。而ＢＭＰ-６可以保护视网膜色素上皮细胞免受氧化应激的损伤,其可能机制是通过基质金属蛋白酶系统起作用的。     

PDGF对人RPE细胞中MMP-2、MMP-9和TIMP-1表达的影响

背景研究表明血小板源性生长因子（PDGF）能调节多种细胞中基质金属蛋白酶／基质金属蛋白酶组织抑制剂（MMP／TIMP）的表达和平衡,但视网膜色素上皮（RPE）细胞中MMP／TIMP的表达与PDGF作用剂量和作用时间的关系尚不明确。目的观察PDGF对RPE细胞中MIP-2、MMP-9和TIMP-1表达的影响。方法体外培养人RPE细胞系ARPE-19,将达到70％～80％融合的细胞分为5个组。分别将0、0．1、1、10、50mg／LPDGF加入RPE细胞培养基作用36h,分别采用逆转录PCR（RT—RCR）法和Western blot法检测各组RPE细胞中MMP-2、MMP-9和TIMP-1 mRNA及其蛋白的表达。PDGF组采用10mg／LPDGF组PDGF分别刺激RPE细胞24、36和48h,对照组用不含PDGF的培养液培养,采用逆转录PCR（RT—RCR法和Western blot法分别检测RPE细胞中MMP-2、MMP-9和TIMP-1 mRNA及蛋白的表达。结果随着PDGF质量浓度的增加和刺激时间的延长,RPE细胞生长速度加快,细胞增生明显。PDGF刺激RPE细胞36h,随着PDGF质量浓度的增加,MMP-2 mRNA和MMP-9 mRNA在RPE细胞中表达相对值逐渐增加,各组间差异均有统计学意义（MMP-2 mRNA：F=79．304,P=0．000;MMP-9 mRNA：F=8．465,P=0．003）,其中1、10、50mg／LPDGF组RPE细胞中MMP-2 mRNA和MMP-9 mRNA表达相对值明显高于0mg／L PDGF组,差异均有统计学意义（P〈0．05）。RPE细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达相对值随着PDGF质量浓度的增加而逐渐增加,各组间差异均有统计学意义（MMP-2：F=26．550,P=0．000;MMP-9：F=80．993,P=0．000）,其中1、10、50mg／LPDGF组RPE细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达相对值明显高于0mg／L PDGF组,差异均有统计学意义（P〈0．05）。各质量浓度PDGF组RPE细胞中TIMP-1 mRNA和蛋白表达相对值差异均无统计学意义（F=0．143,P=0．962;F=1．955,P=0．178）。随着10mg／L PDGF刺激RPE细胞时间的延长,RPE细胞中MMP-2 mRNA和MMP-9 mRNA表达逐渐增加,差异均有统计学意义（MMP-2 mRNA：F时间=83．250,P=0．002;MMP-9 mRNA：F时间=6．785,P=0．019）;各时间点RPE细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达相对值明显增加,差异均有统计学意义（MMP-2：F时间=11．185,P=0．041;MMP-9：F时间=968．413,P=0．000）。PDGF作用不同时间点对照组与PDGF组间MMP-2、MMP-9 mRNA及蛋白在RPE细胞中的表达差异均有统计学意义（分组：均P=0．000,时间点：P〈0．05）,而各时间点2个组间RPE细胞中TIMP-1表达相对值的差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论PDGF上调PRE细胞中MMP-2和MMP-9的表达,其作用呈剂量和时间依赖性,但对PRE细胞中TIMP-1的表达无明显影响。PDGF导致RPE细胞中MMP／TIMP的平衡失调,从而导致细胞外基质的破坏,促进RPE细胞的迁移。     

MMP-1、TIMP-1及TIMP-2在正常人眼前段组织的表达

目的观察正常人眼前段组织中基质金属蛋白酶1(MMP-1)、基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)和TIMP-2的表达,探讨正常生理状态下MMP及TIMP在小梁网房水流出及葡萄膜巩膜房水流出通道中的作用。方法应用酶免疫组织化学技术,检测正常人眼前段组织中MMP-1、TIMP-1和TIMP-2的定位。阳性结果应用图像分析系统进行定量分析。结果免疫组织化学结果显示MMP-1和TIMP-2广泛分布于人眼的虹膜、睫状体(包括睫状突上皮细胞和睫状肌)、小梁网、视网膜色素上皮(RPE)层、脉络膜及巩膜,TIMP-1分布于除小梁网外的其余组织。结论MMP-1、TIMP-2广泛分布于人眼小梁网及葡萄膜巩膜房水流出通道、RPE、脉络膜,TIMP-1广泛分布于人眼葡萄膜巩膜房水流出通道及RPE、脉络膜,对维持人眼正常房水流出及维持RPE、脉络膜功能可能具有一定作用。     

自发性高血压大鼠缺血再灌注后视网膜毛细血管细胞凋亡及p53基因表达

目的 探讨凋亡相关基因p53在自发性高血压大鼠(SHR)视网膜缺血再灌注损伤（RIR）后视网膜毛细血管细胞凋亡中的作用。方法 将60只SHR随机分为假手术组(SHR-SH)和缺血组(SHR-RIR),每组各30只大鼠;每组又按照不同再灌注时间分别再分为再灌注后2、6、24、72 h和7 d共5个小组,每小组各6只大鼠。选取60只Wistar-Kyoto大鼠（WKY）同样分为假手术组(WKY-SH)和缺血组(WKY-IIR)作为对照。建立大鼠RIR损伤动物模型,采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP 缺口翻译法（TUNEL）法观察大鼠视网膜毛细血管细胞凋亡,通过免疫组织化学链酶卵白素-生物素复合体法(SP)检测RIR后不同时段视网膜组织中p53基因的表达变化。结果 SHR视网膜毛细血管细胞凋亡率在RIR后2、6、24、72 h和7 d时分别为（8.64±0.56）%、（14.92±0.99）%、（24.72±2.98）%、（16.53±1.80）%和（7.12±1.10）%。SHR视网膜毛细血管在RIR后2 h p53表达即开始增加,6 h继续增多,24 h达到高峰,72 h仍维持在较高水平,7 d时仍有少量表达,与SHR SH比较,差异有统计学意义（P＜0.01）。WKY-SH和SHR-SH组各时间点细胞凋亡和p53表达无明显差异。WKY RIR与SHR RIR相应时间点比较,差异有统计学意义（P＜0.01）。结论 p53可能通过诱导或促进细胞凋亡参与大鼠RIR;高血压状态下发生RIR视网膜毛细血管细胞凋亡更为严重,且尤以缺血再灌注后24 h为著。     

Nogo-A和NgR在大鼠视网膜缺血再灌注损伤中的表达

目的：观察轴突生长抑制因子Nogo-A及其受体NgR在视网膜缺血再灌注（retinal ischemia-reperfusion,RIR）急性损伤中的表达,研究两者在RIR损伤中的作用及相关性。 方法：SD大鼠90只随机分为：正常对照组（n=6）;假手术组(n=42);RIR组（n=42）,假手术组及RIR组分为再灌注后0,6,12,24,48,72,168h亚组,每组6只;采用结扎单侧颈总动脉的方法制备大鼠RIR模型,HE染色观察组织形态学改变,免疫组织化学检测Nogo-A和NgR蛋白的表达。 结果：假手术组各时间点Nogo-A及NgR表达与正常组相比无统计学差异（P>0.05）,实验组大鼠与假手术组相比：Nogo-A的表达在12h开始升高（P<0.05）,48h达到高峰（P<0.01）,72h下降（P<0.05）,168h达到正常基线水平（P>0.05）;NgR的表达在6h即出现上升,持续至48h达到最高峰（P<0.01）,72h下降,168h达到正常基线水平。实验组大鼠Nogo-A与NgR的表达呈正相关（P<0.01）。 结论：Nogo-A和NgR在RIR各时间点均有表达,其表达水平沿时间点呈抛物线形,在再灌注48h时均达到峰值,NgR先于Nogo-A表达,两者协同作用,与RIR损伤后抑制节细胞轴突修复再生有关。