同位素稀释液相色谱串联质谱法测定血清总甘油

目的 建立同位素稀释液相色谱串联质谱测定血清总甘油的方法.方法 以[13C3]-甘油作内标,用氢氧化钾异丙醇溶液水解血清甘油酯为游离甘油,将游离甘油转化为苯甲酸酯,用同位素稀释液相色谱串联质谱(LC/MS/MS)分离检测,用标准曲线法定量.结果 甘油/内标峰面积比与甘油浓度(0.565～4.517 mmol/L)线性相关系数大于0.999 9;测定不同浓度血清总甘油批内变异系数(CV)平均为0.52%(范围0.21%～2.62%),总CV平均为1.15%(范围0.62%～2.00%);分析国际和国家标准物质,测定值与认证值的偏倚小于1%(-0.20%～1.06%).结论 建立同位素稀释液相色谱串联质谱测定血清总甘油方法,方法特异、精密、准确,可望用作血清总甘油测定参考方法.     

游离甘油对血清甘油三酯测定结果影响的实验观察

目的探讨游离甘油对血清甘油三酯测定结果的影响。方法将300例血清标本和英国朗道公司两种不同水平的血清基质质控物,用两种不同方法的试剂盒同时上机检测甘油三酯。结果当甘油三酯浓度超过2.0 mmol/L时,两种方法测定的结果差异有统计学意义(P0.05),当浓度大于5.0 mmol/L时,差异也有统计学意义(P0.01),两种不同水平的质控物测定结果差异有统计学意义(P0.01)。结论随着总甘油三酯浓度的升高,游离甘油对测定结果的影响也越来越大,当甘油三酯浓度超过2.0 mmol/L时,最好做游离甘油空白校正,避免给临床治疗带来误导。     

北京居民血清游离甘油水平及其对甘油三酯水平分类的影响

目的调查血清游离甘油(FG)水平及其与血清甘油三酯(TG)、年龄、性别等的关系，探讨FG对血清TG水平划分的影响。方法用高效液相色谱法测定480例北京居民血清FG，用酶法测定总甘油(1TrG)，分析FG与TG、年龄和性别的关系及FG对TG水平划分的影响。结果480例北京居民血清FG平均值0．082mmol／L，中位数0．075mmol／L；FG／TG平均值8．0％，中位数6．4％；FG和FG／TG女性明显高于男性；TG和TTG高于目前医学决定水平1．69mmol/L(150mg／d1)的个体分别占22％和25％。结论按新的方案对血清TG水平划分，临床TG测定更需具备去除游离甘油的能力。     

不同方法检测冷冻红细胞甘油残留量的比较

目的通过比较过碘酸钠法、甘油三酯检测试剂盒和甘油检测试剂盒对冰冻红细胞甘油残留量的检测结果,选择一种快速简单、灵敏、结果准确、稳定、易于开展的甘油残留量检测方法。方法采用3种方法分别检测0.5g/L、1.0g/L、1.5g/L、2.0g/L甘油溶液,进行线性实验和回收率实验;并采用3种方法检测甘油含量均为1.0g/L的不同浓度血红蛋白甘油溶液;并分别测定本站成分科制备的20份冷冻解冻去甘油红细胞的甘油残留量。结果线性实验的r值均大于0.99,Y=0.05＋1.076X、Y=0.126＋0.912X、Y=0.006＋0.104X,表明甘油含量在（0.5-2）g/L范围内有较好的线性关系,回收率均在90%-110%,回收率较高;游离血红蛋白小于1g/L时,3种方法甘油回收率均在90%-110%,无明显干扰。过碘酸钠法血红蛋白浓度超过1.5g/L,甘油三酯检测试剂盒血红蛋白浓度超过2g/L,回收率超过110%,有较明显的干扰;用3种方法检测20份本站制备的冰冻解冻去甘油红细胞的甘油含量,经统计学处理,P均〉0.05,其游离血红蛋白均小于1g/L,甘油残留量均小于2g/L。结论游离血红蛋白在小于1g/L,甘油残留量小于2g/L时,3种方法均可用于冷冻去甘油红细胞甘油残留量的检测。甘油三酯试剂盒简单、快速、结果稳定、价格低廉,对仪器设备无特殊要求,更适合于一般实验室开展此项实验。     

酶法测定血清甘油三酯能否消除游离甘油的影响

现有酶法测定试剂不能去除血清中的游离甘油,使甘油三酯值偏高.尽管反应系统中不存在脂蛋白脂酶,但随着样品和反应系统预孵育时间的延长,再加入脂蛋白脂酶后,甘油三酯的测定值逐渐下降.说明现有酶法测定系统不能扣除血清中游离甘油对甘油三酯测定的影响.     

健康人与某些病人血清中游离甘油含量的调查

酶法测定血清中甘油三酯(TG),不经抽提必须考虑标本中游离甘油(FG)的干扰.为了弄清其干扰程度以采取排除措施,我们测定了健康人和某些病人血清中总甘油(T-G,包括TG 和FG)和FG 的含量.     

快速酶法测定冰冻红细胞中残留甘油含量

目的　建立快速测定冰冻红细胞中残留甘油含量的方法。方法　根据GPO PAP法测定甘油三脂的部分原理 ,将甘油用甘油激酶及三磷酸腺苷磷酸化 ,再以磷酸甘油氧化酶 ,氧化 3 磷酸甘油 ,生成H2 O2 ,并以 4 氨基比林与 4 氯酚显色 ,显色程度与甘油含量成正比。结果　含甘油 1 0 0mg/L与 1 4 0 0mg/L的定值样本批内cv值分别为 2 1 1 %、3 48% ,批间cv值分别为 3 78%、4 52 %。甘油含 (750～ 2 0 0 0 )mg/L样本的回收率为 97%～ 1 0 5 % ;甘油浓度在 (1 2 5～ 2 0 0 0 )mg/L有较好的线性关系 ,r =0 .9997,Y =0 .0 0 94- 0 .0 4 58。 结论　酶法测定冰冻红细胞中残留甘油含量 ,具有方法简单、快速、特异、灵敏之特点 ,结果客观、准确、稳定     

冰冻红细胞解冻后残留甘油含量测定方法初探

目的　建立快速测定冰冻红细胞中残留甘油含量的方法。方法根据GPO PAP法测定甘油三脂的部分原理 ,将甘油用甘油激酶及三磷酸腺苷 (ATP)磷酸化 ,再以磷酸甘油氧化酶 ,氧化三磷酸甘油 ,生成H2 O2 ,并以4 氨基安替比林 (4 AAP)与 4 氯酚显色 ,显色程度与甘油含量成正比。结果含甘油 2 0 0 /L与 1 2 0 0 /L的样本批内CV值分别为 4 .4 9%、3.5 3% ,日间CV值为 4 .6 % ;甘油含 75 0～ 2 0 0 0 /L样本的回收率为 96 %～ 1 0 3% ;甘油浓度在 2 5 0～ 2 0 0 0 /L有较好的线性关系 ,r =0 .9999,Y =0 .0 0 0 5 6 2X +0 .0 0 0 7。结论甘油磷酸氧化酶法测定冰冻红细胞中残留甘油含量 ,具有方法简单、快速、特异、灵敏之特点 ,结果客观、准确、稳定     

血清总胆固醇、总甘油、游离甘油和甘油三酯标准物质的研制

目的 研制与临床标本基质相似的血清总胆固醇(TC)、总甘油(TTG)、游离甘油(FG)和甘油三酯(TG)标准物质.方法 按国家标准物质技术规范的要求,制备4种血脂浓度的健康人新鲜混合血清,用酶法测定TC检测均匀性,用HPLC法检测稳定性并定值,评估不确定度.结果 4种血清均匀性检验数据方差分析P值分别为0.339、0.212、0.275、0.196(均＞0.05),说明均匀性良好;稳定性研究结果显示4种血清TC和TG在-20℃保存至少可稳定4年;4种血清的标准值和不确定度TC分别为(5.110±0.064)mmol/L、(4.761±0.062)mmol/L、(3.941±0.050)mmol/L和(3.158±0.041)mmol/L;TTG分别为(2.212±0.043)mmol/L、(1.679±0.033)mmol/L、(1.275±0.027)mmol/L和(1.067±0.023)mmol/L;FG分别为(0.142±0.005)mmol/L、(0.149±0.004)mmol/L、(0.146±0.003)mmol/L和(0.122±0.003)mmol/L;TG分别为(2.069±0.043)mmol/L、(1.530±0.033)mmol/L、(1.129±0.027)mmol/L和(0.945±0.023)mmol/L.结论 研制的血清总胆固醇、总甘油、游离甘油和甘油三酯标准物质均匀性和稳定性良好,定值可靠,已被国家质量监督检验检疫总局发布为国家一级标准物质(GBW 09145、GBW 09146、GBW 09147、GBW 09148).     

循环酶法双试剂测定血清同型半胱氨酸的方法学评价

目的对循环酶法双试剂测定血清同型半胱氨酸(Hcy)进行评价。方法样品中的氧化型Hcy被还原剂还原成游离型Hcy,游离型Hcy与试剂中的底物和酶发生反应,引起吸光度变化,通过检测反应中的吸光度变化的速率,可以计算出待测样本中Hcy的浓度。结果测定线性范围达0.6～65μmol/L;批内CV分别为2.85%、1.88%,日间CV分别为4.26%、3.19%,总CV分别为6.35%、5.33%;回收率93.5%～97.7%;本法和酶免疫分析法(ELA)比较:Y=1.040 0 X-0.549 8,r2=0.995 9,P>0.05,差异无统计学意义;样品中三酰甘油浓度小于或等于10mmol/L,血红蛋白浓度小于或等于4.5g/L,维生素C浓度小于或等于500mg/L,胆红素浓度小于或等于300μmol/L时,血氨小于或等于70μmol/L时,对结果无明显干扰。结论循环酶法双试刘测定Hcy,具有灵敏度高、线性范围宽、抗干扰因素强、精密度较好、易于自动化等特点,可作为临床实验室Hcy常规测定方法。     

How to make things work again--troubleshooting using the GC-IDMS determination of triacylglycerols as an example

This article describes the process of "repairing" a method which has gone out of control, using the gas-chromatographic isotope-dilution mass spectrometric (GC-IDMS) determination of total glycerides in serum, measured as glycerol. The original method used 13C2-glycerol as aqueous internal standard and 12C-tripalmitin dissolved in toluene as external standard. The modified method used tripalmitin as internal and external standard, the former being labelled uniformly on the glycerol moiety of tripalmitin (13C3-tripalmitin). In addition, glycerol-free human serum albumin was added to the external standards to "trap" the glycerol physically during evaporation of the extraction solvent after alkaline hydrolysis. The modified method was more stable than the original one and the intensity of the MS-signal in the modified method was at least 100 times stronger in the external standards than in the original method. The precision of the modified method in measuring total glycerides in serum samples (as total glycerol) was better than in the original method, the coefficients of variation being under 1.5% at concentrations between 0.8 and 3.5 mmol/l.     

电感耦合等离子体质谱测定血清钠

目的 建立一种应用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)测定血清中钠(Na)元素含量的候选参考方法.方法 以铝(Al)作为Na的内标用重量法加入到标准溶液和血清中,样品经过硝酸消解、稀释,以ICP-MS测定其23Na/27Al同位素比值,应用标准曲线法定量.结果 应用ICP-MS测定2份血清中Na的平均分析回收率分别为100.67%和100.15%,精密度分别为0.08%和0.04%.标准参考物质(SRM)909b两水平血清Na浓度的总变异系数分别为0.18%和0.22%,结果与认定值的中间值偏差分别为0.17%和0.14%,SRM956b 3水平血清Na浓度的总变异系数分别为0.41%、0.41%和0.66%,结果与认定值的中间值偏差分别为-0.09%、-1.05%和-0.48%.结论 建立了ICP-MS测定血清Na的方法,此法操作简单快速、准确、精密,有望成为血清Na测定的参考方法.     

An improved micromethod for theophylline determination by reversed-phase liquid chromatography.

We describe an improved micro-scale method for determining serum theophylline by reversed-phase liquid chromatography. Samples are deproteinized with two volumes of methanol containing beta-hydroxyethyltheophylline as an internal standard. The supernate is chromatographed with a methanol/sodium acetate buffer (15/85 by vol) mobile phase, and the amount of theophylline is calculated from the ratio between peak heights for theophylline and the internal standard at 273 nm. We also monitor for chemical interferences at 254 nm. We found no interferences from ampicillin, methicillin, cephalosporin, and cephalothin. None of the drugs tested or metabolites and compounds related to theophylline have been found to interfere. The method is rapid, accurate, sensitive, and specific for theophylline.     

Determination of serum cortisol by isotope-dilution liquid-chromatography electrospray ionization tandem mass spectrometry with on-line extraction.

A liquid chromatographic-mass spectrometric method for the determination of cortisol in serum using atmospheric pressure electrospray ionization and tandem mass spectrometry is described. During sample preparation, 150 microl of serum were deproteinized with methanol/zinc sulfate followed by on-line solid phase extraction employing column switching. Tri-deuterated cortisol was used as the internal standard. The following transitions were monitored: cortisol, 363>309 m/z; d3-cortisol, 366>312 m/z. The total run-time was 5 minutes. The method proved linear (0-500 microg/l; r=0.999), precise (total coefficient of variation between 5.0% and 3.2% at a mean cortisol concentration of 15.1 microg/l and 269 microg/l, respectively; n=16) and specific with regard to relevant endogenous and exogenous steroids.     

Iohexol in serum determined by capillary electrophoresis.

Iohexol, a nonionic compound used as a contrast medium for angiography and as a measure of the glomerular filtration rate, was quantified in serum by capillary electrophoresis. Comparable results were obtained for serum samples deproteinized with acetonitrile or analyzed directly after 50-fold dilution with borate buffer. Serum samples were electrophoresed for 2.6 min at 12 kV in a borate buffer with detection at 254 nm and with 3-isobutyl-1-methylxanthine as internal standard. Acetonitrile deproteinization gave a greater sensitivity than did sample dilution. Between-run CVs were between 4.7% and 6.7%, and within-run CVs were between 2.5 and 3.2%. Analytical recoveries were 95-105%. Results of the method compared well with those by high-performance liquid chromatography (slope 0.96, intercept 0.005 g/L). This method demonstrates the potential of capillary electrophoresis for rapid and simple quantification of small molecules.     

同位素稀释液相色谱串联质谱法测定血清葡萄糖

目的 建立一种使用同位素稀释液相色谱串联质谱法(ID-LC/MS/MS)测定血清葡萄糖的候选参考方法.方法 以[~(13)C_6]葡萄糖为内标,用重量法准确地与血清混合,除去蛋白后在碱性条件下与1-苯基-3-甲基-5-吡唑酮反应,用LC/MS/MS测定葡萄糖和内标衍生产物,以包括法定量.结果 血清葡萄糖测定的批内、批间和总变异系数的平均值分别为0.36%(范围0.28%-0.42%)、0.47%(范围0.20%-0.67%)和0.61%(范围0.42%-0.76%).加样回收试验的回收率范围为99.0%-100.9%.分析参考物质SRM 965a,测定结果与认定值的平均偏差为-0.20%(范围-0.39%-+0.11%).结论 建立了ID-LC/MS/MS法测定血清葡萄糖的方法,方法准确、精密、简便,可望作为血清葡萄糖测定的参考方法.     

石墨炉原子吸收法测定全血标本铅含量的3种前处理方法

目的比较石墨炉原子吸收法测定全血标本中铅的3种前处理方法优劣,从中筛选一种更简便、准确、灵敏的方法,从而达到提高检测质量,降低工作强度的目的。方法采用酸脱蛋白法、混合基体改进剂法、微波消解法对无铅接触史的健康成年人全血标本进行前处理,分别用石墨炉原子吸收法检测,对检测结果进行统计分析,比较标准曲线线性、相关系数（r）、相对标准偏差（RSD%）、准确度等指标。结果 3种方法标准曲线r分别为0.996 5、0.994 2、0.999 5;检出限分别为5.4、3.6、2.7μg/L;RSD%分别为4.1、4.5、2.8;回收率分别为95.7%～103.3%、98.7%～104.5%、98.3%～102.3%。结论微波消解处理全血标本各项指标均令人满意,是测量血铅较好的前处理方法。     

血清尿素同位素稀释气相色谱质谱法的建立和研究

目的 建立一种基于同位素稀释/气相色谱/质谱技术(isotope dilution/gas chromatography/mass spectrometry,ID/GC/MS)的血清尿素候选参考方法.方法 以[13C,15N2]尿素为内标,用无水乙醇沉淀、去除血清中的蛋白类物质,依次使用丙二醛-二甲基缩醛和N-甲基-(三甲基硅烷基)-三氟乙酰胺(MSTFA)将尿素衍生成为三甲基硅烷氧基嘧啶,用气相色谱/质谱(GC/MS)分析衍生产物,以包括法定量.结果 血清尿素测定的批内、批间和总变异系数的平均值分别为0.38%(范围0.12%～0.47%)、0.62%(范围0.49%～0.87%)和0.73%(范围0.51%～0.93%),回收率范围为99.37%～100.95%,分析美国国家标准和技术研究院(NIST)2个水平的血清标准物质SRM 909b,测定结果与靶值的偏差小于0.2%.结论 建立了ID/GC/MS技术测定血清尿素的方法,方法准确、精密、简便,可望作为血清尿素测定的参考方法.     

同位素稀释液相色谱串联质谱法测定血清肌酐

目的 建立一种使用同位素稀释液相色谱串联质谱法(ID-LC/MS/MS)测定血清肌酐的候选参考方法.方法 以[2H3]肌酐为内标,用无水乙醇沉淀血清中的蛋白质,用氯仿纯化上清液,用液相色谱串联质谱分离测定,以包括法定量.结果 血清肌酐测定的批内、批间和总变异系数的平均值分别为0.57%(范围0.52%～0.61%)、0.43%(范围0.11%～0.59%)和0.73%(范围0.62%～0.83%).加样回收试验的回收率范围为99.09%～101.13%.分析两种参考物质SRM909b和SRM 967b,测定结果与认定值的偏差小于0.4%.结论 建立了ID-LC/MS/MS法测定血清肌酐的方法,方法准确、精密、简便,可望作为血清肌酐测定的参考方法.