成骨生长肽对大鼠骨髓基质细胞增殖分化的影响

目的 研究成骨生长肽(osteogenic growth peptide, OGP)在体外对骨髓基质细胞增殖和成骨向分化的影响.方法 在体外培养的大鼠骨髓基质细胞中加入不同浓度的OGP(10-11～10-7 mol/L),用MTT法检测细胞增殖,酶联免疫法检测细胞内碱性磷酸酶(ALP)的表达,RT-PCR法检测细胞内核心结合因子1(Cbfa1) mRNA的表达.结果 OGP对骨髓基质细胞增殖有促进作用(P《0.05),最大效应浓度为10-9 mol/L;能增加细胞内ALP活性(P《0.05),最大效应浓度为10-8 mol/L;可诱导Cbfa1 mRNA的表达(P《0.05).结论 OGP可促进骨髓基质细胞的增殖,并通过诱导其内Cbfa1 mRNA的表达促进其成骨向的分化.     

成骨生长肽羧基端片段及其衍生物G38I对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响

目的探讨成骨生长肽(OGP)羧基端片段[OGP(10~14)]及其衍生物G38I对大鼠成骨细胞增殖和分化的影响。方法大鼠颅盖骨成骨细胞体外培养至第3代,分别加入10-15~10-7mol/L的OGP(10~14)或G38I,48h后行细胞计数,并用噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖情况。细胞分为实验组[OGP(10~14)组和G38I组]及对照组,实验组给予10-11mol/L的药物干预48h。电镜观察细胞超微结构的变化,测定培养上清液碱性磷酸酶(ALP)含量,用免疫组织化学方法比较细胞中Ⅰ型胶原蛋白含量的变化,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定细胞中核结合因子a1(Cbfa1)和Ⅰ型胶原mRNA表达水平的变化。结果在较低浓度时,随药物浓度升高,OGP(10~14)和G38I促进细胞数增加、提高细胞活性的作用增强,10-11mol/L药物作用时成骨细胞数分别为37×104/ml和30×104/ml,进一步升高药物浓度反而抑制细胞增殖。电镜下实验组细胞粗面内质网发达,胞质中有大量分泌囊泡。对照组细胞囊泡中可见钙盐结晶。OGP(10~14)组和G38I组与对照组比较,细胞培养上清液ALP含量高(4·47U/g、3·82U/g vs2·21U/g),细胞中Ⅰ型胶原蛋白含量多,Cbfa1和Ⅰ型胶原mRNA表达水平较高,差异均具有统计学意义(P<0·01,P<0·05)。结论OGP(10~14)及其衍生物G38I具有与OGP全长肽相同的促进成骨细胞增殖、提高细胞活性的作用,OGP(10~14)和G38I可上调成骨细胞Cbfa1和Ⅰ型胶原mRNA表达水平,增加细胞中Ⅰ型胶原的合成,促进细胞分化和成骨作用。     

成骨生长肽对钛表面人牙周膜成纤维细胞增殖分化影响的研究

目的:研究成骨生长肽(Osteogenic growth peptide,OGP)对人牙周膜成纤维细胞(Periodontal ligament cells,PDLCs)在钛金属表面增殖分化的影响.方法:将纯钛试件放在12孔培养板内,取生长良好的第五代人牙周膜成纤维细胞接种在试件表面,加入不同浓度的OGP(10-11～10-7mol/L),分别在接种后1、3、5、7 d应用MTT法检测细胞增殖;接种后3、7、10 d应用酶联免疫法检测细胞内碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)活性的表达.结果:OGP在该浓度范围内时,对钛表面的人牙周膜成纤维细胞的增殖率有明显的促进作用(P＜0.05),并且能促进细胞内ALP表达活性(P＜0.05),最佳作用浓度为10-9mol/L.结论:OGP可促进钛片表面人牙周膜成纤维细胞的增殖活性,同时可以增强细胞碱性磷酸酶表达的活性,提示OGP在口腔种植领域中具有良好的应用前景.     

醛固酮对成骨细胞增殖分化及成骨相关基因表达的影响

目的 探讨外源性醛固酮对大鼠原代培养的成骨细胞增殖、碱性磷酸酶活性及成骨相关基因表达的影响及其机制.方法采用酶消化法体外培养大鼠成骨细胞,CCK-8试剂盒和AKP试剂盒分别检测成骨细胞的增殖和碱性磷酸酶活性情况,半定量RT-PCR和Western blotting检测成骨细胞骨形成活性相关标志物和上皮钠离子通道(α-ENaC)基因的mRNA和蛋白表达.结果与对照组相比,醛固酮浓度为1×10-2~1μmol/L范围内可以促进成骨细胞增殖,浓度为1×10-3μmol/L和10μmol/L时对成骨细胞增殖无显著影响;但醛固酮在1×10-3~10μmol/L浓度范围内对成骨细胞碱性磷酸酶活性均无明显影响.与对照组相比,醛固酮浓度为1×10-2~1μmol/L时均能上调成骨细胞中成骨细胞骨形成活性相关标志物I型胶原蛋白(Coll-Ia)、碱性磷酸酶(ALP)、骨桥蛋白(OPN)和α-ENaC基因的mRNA和蛋白的表达水平(P<0.05).结论醛固酮(1×10-2~1μmol/L)能明显促进成骨细胞增殖并上调成骨细胞骨形成活性相关标志物的表达,且同时上调ENaC基因的表达,提示ENaC可能是醛固酮调节成骨细胞功能的作用靶点之一.     

成骨生长肽对人牙周膜细胞增殖和总蛋白含量的影响

目的:研究成骨生长肽(Osteogenic growth peptide,OGP)对体外培养的人牙周膜细胞增殖和细胞总蛋白含量的影响.方法:在体外培养的人牙周膜细胞中加入不同浓度的OGP(10-11～10-7mol/L),用MTT法检测细胞的增殖率;考马斯亮蓝染色法检测细胞内总蛋白含量的变化.结果:OGP在该浓度范围内时,对人牙周膜细胞的增殖率有明显的促进作用(P<0.05),并且在该浓度范围内时,能叫显增加人牙周膜细胞总蛋白的合成(P<0.05),最佳作用浓度为10-9mol/L.结论:OGP可促进人牙周膜细胞的增殖活性,同时可以增强细胞总蛋白的合成,提示OGP在牙周组织再生领域中具有良好的应用前景.     

成骨生长肽对大鼠成骨细胞Ⅰ型胶原蛋白的影响

目的:研究成骨生长肽OGP在体外对大鼠颅盖骨成骨细胞Ⅰ型胶原蛋白的影响.方法:在体外培养的新生大鼠颅盖骨成骨细胞中加入浓度为10-11～10-7mol/L的OGP,处理7天后收集细胞爬片,采用SABC法行细胞免疫化学染色,通过图像分析系统观察不同OGP作用后,成骨细胞胶原蛋白的变化情况.结果:OGP作用于成骨细胞后,Ⅰ型胶原蛋白表达明显增强,其中OGP浓度为10-9mol/L时促进作用最为明显.结论:OGP可促进成骨细胞Ⅰ型胶原蛋白的表达.     

不同浓度降钙素基因相关肽对大鼠成骨细胞OPG mRNA表达的影响

目的 观察不同浓度降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)对大鼠成骨细胞OPG mRNA的表达影响.方法 采用新生大鼠颅盖骨组织块培养成骨细胞,加入不同浓度CGRP干预体外培养成骨细胞,观察成骨细胞增殖和ALP活性,检测OPG mRNA及RANKL mRNA的表达水平.结果 CGRP在浓度为1×10-8mol/L时对成骨细胞增殖的促进作用最强,在1×10-9mol/L时对成骨细胞ALP活性的促进作用最强;CGRP不仅能明显增强OPG mRNA的表达水平(P＜0.05),还能明显抑制RANKL mRNA的表达水平(P＜0.05),以10-8和l0-7浓度时表达最为明显,均呈剂量依赖性;且CGRP可明显上调OPG/RANKL的比值(P＜0.05).结论 CGRP对成骨细胞增殖和活性均有促进作用,可能通过上调成骨细胞OPG/RANKL,最终发挥抑制骨吸收的作用.     

木犀草素对小鼠体外培养前成骨细胞MC3 T3-E1增殖、分化、矿化和Wnt通路的影响

目的:探讨木犀草素对小鼠体外培养前成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化和矿化及Wnt通路的影响.方法:在体外培养的MC3T3-E1s培养基中加入木犀草素0.25~8.00μmol/L培养12、24和48 h,以洛伐他汀0.04μmol/L作为阳性对照,采用细胞计数试剂盒法检测细胞增殖情况;用碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测细胞内ALP的活性;茜素红S染色法检测细胞矿化能力;采用实时荧光定量反转录PCR法检测细胞Ⅰ型胶原、骨钙素、低密度脂蛋白受体相关蛋白5(Lrp5)、β-连环素、护骨素/细胞核因子κB受体活化因子配体mRNA表达水平.结果:木犀草素可以剂量依赖性和时间依赖性地促进成骨细胞MC3T3-E1增殖(P<0.05~P<0.01);木犀草素(2.00、4.00和8.00μmol/L)可以剂量依赖性地促进MC3T3-E1成骨细胞ALP活性,增强MC3T3-E1成骨细胞矿化能力并上调MC3T3-E1成骨细胞中Ⅰ型胶原、骨钙素、Lrp5、β-连环素和护骨素/细胞核因子κB受体活化因子配体mRNA表达.结论:木犀草素2.00、4.00和8.00μmol/L可以促进MC3T3-E1细胞的增殖、分化与矿化及Wnt通路中Lrp5和β-连环素mRNA的表达.     

淫羊藿苷对大鼠成骨细胞核结合因子α1、骨形成蛋白-2、骨形成蛋白-4 mRNA表达的影响

目的:研究淫羊藿苷对成骨细胞增殖、分化以及对核心结合因子α1(Cbfαl)、骨形成蛋白-2(BMP2)、骨形成蛋白-4(BMP4)mRNA表达的影响.方法:以酶序列消化法从新生大鼠颅骨分离、培养成骨细胞,采用碱性磷酸酶染色和钙结节茜素红染色法鉴定细胞.取第3-5代细胞,用CCK-8法检测经0 mol/L、10~(-8)mol/L、10~(-7)mol/L、10~(-6)mol/L、10~(-5)mol/L、10~(-4)mol/L的淫羊藿苷处理24、48、72 h后成骨细胞的增殖情况.分别用流式细胞技术和对硝基苯酚法检测上述各浓度的淫羊藿苷处理48 h后成骨细胞的增殖指数和碱性磷酸酶(ALP)活性.用real-timePCR法检测10～(-6)mol/L淫羊藿苷处理48 h后成骨细胞Cbfα1、BMP2和BMP4 mRNA表达的改变.结果:10~(-8)～10~(-4)moL/L的淫羊藿苷对成骨细胞均无增殖促进作用,但可促进成骨细胞的ALP活性;10~(-6)mol/L淫羊藿苷可以上调成骨细胞Cbfα1、BMP2和BMP4 mRNA的表达.结论:淫羊藿苷可能是通过上调Cbfα1、BMP2和BMP4 mRNA的表达而促进成骨细胞的分化.     

唑来膦酸对MC3T3-E1细胞增殖及Runx2、Osterix表达变化的影响

目的研究唑来膦酸(ZA)对前成骨细胞(MC3T3-E1细胞)增殖及Runx2、Osterix表达的影响。方法以不同浓度(10-3mol/L、10-8mol/L)ZA处理体外培养的MC3T3-E1细胞,采用四唑蓝比色试验(MTT)检测ZA对MC3T3-E1细胞增殖的影响;以qRT-PCR法检测成骨细胞分化相关基因Runx2、Osterix mRNA表达情况;以Western免疫印迹法检测R unx2、Osterix蛋白表达水平。结果高浓度(10-3 mol/L)ZA能抑制MC3T3-E1细胞增殖,作用48 h后与对照组具有显著性差异(P<0.05),低浓度(10-8mol/L)ZA对MC3T3-E1细胞增殖无明显影响(P>0.05)。高浓度(10-3 mol/L)ZA可降低R unx2、Osterix mR NA表达水平,与对照组相比差异具有显著性(R unx2:P<0.05;Osterix:P<0.01),而低浓度(10-8mol/L)ZA可使R unx2、Osterix mR NA表达水平升高,与对照组相比差异具有显著性(R unx2:P<0.01;Osterix:P<0.01)。结论高浓度ZA明显抑制MC3T3-E1细胞增殖,通过影响Runx2及其下游基因Osterix表达促进成骨细胞分化。     

成骨生长肽对大鼠成骨细胞骨架蛋白的影响

目的 研究成骨生长肽OGP在体外对大鼠颅盖骨成骨细胞细胞骨架的影响.方法 在体外培养的新生大鼠颅盖骨成骨细胞中加入浓度为10-8mol/L的OGP,处理30min,6、12h后收集细胞爬片,采用BODYPY-Phalloidin对骨架蛋白直接荧光染色,在激光扫描共聚焦显微镜下观察OGP作用后,不同时间点成骨细胞细胞骨架的变化情况.结果 OGP作用于成骨细胞后,细胞骨架出现解聚重组现象,在6h时解聚作用最为明显,12h后可见细胞骨架发生重组.结论 OGP可促进成骨细胞细胞骨架的重组.     

成骨生长肽调节大鼠成骨细胞样细胞3种mRNA表达和电镜观察

研究了成骨生长肽(简称OGP)调节大鼠成骨细胞样细胞多种mRNAs表达和超微结构。将细胞分为OGP实验组和对照组，用RT—PCR方法检测细胞的I型胶原mRNA、骨钙素mRNA、碱性磷酸酶mRNA，并以GAPDH(磷酸甘油醛脱氢酶)作为内标，可求出各种mRNAs的相对含量。透射电镜观察二组细胞的超微结构。电镜观察到OGP组培养细胞的粗面内质网比对照组丰富，OGP组管状粗面内质网末端膨大成池，核糖体附在粗面内质网的表面上，细胞分化较完善。与对照组比较，OGP组分别上调细胞I型胶原mRNA、骨钙素mRNA、碱性磷酸酶mRNA表达。在10^-12～10^-8mol／L OGP范围内，其浓度较高，细胞I型胶原mRNA和骨钙素mRNA表达也较高。结果表明OGP能促进细胞分化；上调细胞I型胶原mRNA、骨钙素mRNA、碱性磷酸酶mRNA表达。因此，OGP有促进骨形成功能。     

阿托伐他汀对骨髓基质细胞增殖及向成骨细胞分化的影响

目的比较不同浓度的阿托伐他汀对小鼠骨髓基质细胞向成骨细胞分化、矿化成骨的影响。方法分别将10^-8、10^-7、10^-6mol／L的阿托伐他汀和空白药物加入传代培养的小鼠骨髓基质细胞，通过细胞形态学观察、细胞增殖率检测、碱性磷酸酶（ALP）检测和钙结节染色，比较药物在成骨细胞分化过程中对细胞增殖和分化的影响。结果阿托伐他汀可以剂量依赖性方式抑制骨髓基质细胞的增殖，10^-7mol／L组和10^-6mol／L组较明显（均P〈0．05）。阿托伐他汀可以提高骨髓基质细胞ALP活性，培养10～22d，10^-7mol／L组和10^-6mol／L组ALP活性高于对照组和10^-8mol／L组（均P〈0．05）。矿化成骨染色显示在培养26d后，10^-6mol／L组染色明显深于其它各组。结论阿托伐他汀可促进骨髓基质细胞来源的成骨细胞的分化，抑制了细胞增殖，促进骨结节钙化。     

钠离子调节成骨细胞功能及其相关基因的差异性变化

目的探讨钠离子(Na+)对大鼠成骨细胞成骨功能的调节,及其相关基因mRNA的变化。方法应用CCK-8试剂盒和碱性磷酸酶(AKP)试剂盒检测5种不同浓度Na+对成骨细胞增殖和分化的影响。再从中选用低(1×10-4mol/L)、中(0.1 mol/L)、高(0.5 mol/L)3种浓度,于处理细胞15、30、120 min时,通过RT-PCR测定Na+对成骨细胞成骨功能相关基因OPN、Cbfa1 mRNA转录的影响。结果在1×10-4～1 mol/L范围内,与正常组相比,低浓度Na+明显促进成骨细胞分化,使AKP活性增加,高浓度则呈抑制作用,而Na+对成骨细胞的正常增殖无影响。RT-PCR结果显示与正常组相比,低浓度Na+显著地上调成骨细胞OPN、Cbfa1 mRNA的转录,高浓度则呈抑制作用。然而OPN、Cbfa1基因对Na+调节作出反应所需的时间存在差异,Cbfa1基因在经处理30 min时即可出现mRNA转录变化,而OPN基因则在处理120 min时才出现相应改变。结论 Na+可直接调节成骨细胞成骨功能,低浓度促进成骨细胞分化和相关功能基因OPN、Cbfa1的增加,而高浓度则显示抑制作用;且各基因转录变化具有时间差异。     

全反式维甲酸对人卵巢癌细胞株HO8910增殖、侵袭能力的影响

目的:观察全反式维甲酸(All-trans retinoic acid,ATRA)对体外培养人卵巢癌细胞株HO8910增殖、侵袭能力的影响,为ATRA应用于卵巢癌的临床治疗提供实验依据.方法:选用人卵巢癌细胞株HO8910进行体外培养,以不同浓度的ATRA处理HO8910细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖抑制情况,倒置显微镜进行形态学观察,Transwell小室体外侵袭实验检测细胞侵袭能力.结果:(1)ATRA浓度为10~(-7)～10~(-5)mol/L时,均明显抑制HO8910细胞的增殖(P<0.05),并具有时间-剂量依赖性.24、48、72 h ATRA抑制HO8910细胞增殖的IC_(50)值分别为2.331×10~(-5)、0.998×10~(-6)、0.891×10~(-7)mol/L.(2)倒置显微镜可观察到经10~(-6)mol/LATRA处理的HO8910细胞部分发生形态学的良性分化.(3)体外侵袭实验显示经10~(-6)mol/L ATRA处理的HO8910细胞,穿膜细胞数目明显减少(P<0.05).结论:ATRA能明显抑制人卵巢癌细胞株HO8910的增殖、侵袭能力,有望为ATRA应用于卵巢癌的临床治疗提供新的有效的途径.     

重组人甲状旁腺激素(1-34)对体外培养成骨细胞骨形成的作用

目的 体外观察重组人甲状旁腺激素[recombinant human parathyroid hormone（1-34），rhPTH（1-34）]对成骨细胞骨形成的刺激作用。方法采用酶消化法分离获得大鼠成骨细胞，间隙加药方法给予rhPTH（1-34），观察药物对成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响。结果 10^-12～10^-8mol／L浓度对成骨细胞的增殖、分化和矿化功能均显示刺激作用。10^-11～10^-8mol／L浓度组的MTT、ALP的A值及矿化结节形态计量结果与对照组比较，具有显著性增加（P〈0．05），增加率以10^-9mol／L浓度组为最高，并呈剂量一效应关系。结论 rhPTH（1-34）对体外培养成骨细胞的增殖、分化和矿化功能具有明显促进作用。     

成纤维生长因子(FGF) 23基因沉默对甲状旁腺激素(PTH)促成骨细胞分化作用的影响

 目的  研究内源性成纤维生长因子23(fibroblast growth factor 23,FGF23)对甲状旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)促成骨细胞分化作用的影响。方法  采用酶消化法分离培养新生SD大鼠头盖骨成骨细胞,应用小发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰技术(RNAi)沉默成骨细胞FGF23表达,应用MTT法和PNPP法检测细胞增殖和碱性磷酸酶(alkaline phosphates,ALP)活性,应用real-time RT-PCR法检测其FGF23、ALP和骨钙素(osteocalcin,OCN)等基因mRNA水平,研究PTH对培养成骨细胞和FGF23基因沉默细胞的作用。结果  rhPTH1-34对培养成骨细胞增殖促进作用明显,分化促进作用弱。1×10-10~1×10-8 mol/L rhPTH1-34 作用3天,细胞增殖率增加31.6%~50.5% (P<0.05),而细胞比活性未见明显改变。同时其ALP和OCN转录水平轻度上调,分别较对照组增加35%(P<0.05)和16%(P>0.05)。rhPTH1-34上调成骨细胞FGF23 mRNA水平(4倍),该作用可被针对FGF23特异的shRNA转染所抑制。FGF23基因沉默后PTH促分化作用明显增强,其ALP和OCN mRNA水平分别较对照组增加1.8倍(P<0.05)和5.8倍(P<0.05),显示内源性FGF23对PTH促分化的干扰作用。结论  内源性FGF23可能参与PTH促分化作用的调节,FGF23上调可干扰PTH的促成骨细胞分化作用。     

维甲酸对大鼠气道上皮细胞增殖影响实验研究

目的 探讨维甲酸对体外培养大鼠气道上皮细胞增殖的影响.方法 原代无血清培养法获取大鼠气道上皮细胞,细胞角蛋白CK19免疫组化染色进行鉴定,不同浓度维甲酸（10^-9～10^-4g/L）作用于气道上皮细胞,MTT法观察维甲酸对细胞增殖的影响,不同组进行PCNA免疫组化染色计阳性细胞数.结果 原代培养气道上皮细胞CK19免疫组化染色阳性,维甲酸作用后细胞增殖率高于对照组,其中10^-7g/L浓度组作用最强,PCNA阳性细胞数最高.结论 低浓度维甲酸可促进体外培养气道上皮细胞增殖.