双歧杆菌对实验性大肠癌蛋白酪氨酸激酶信号传导链的影响

目的：从信号转导这一层次探索青春型双歧杆菌的抑瘤途径。方法：以大肠癌裸鼠移植瘤为动物模型，用膜结合法、激光共聚焦显微镜和免疫组织化学分别测定了大肠癌组织蛋白酪氨酸激酶（PTK）、蛋白激酶C（PKC）α，βⅠ，βⅡ，γ，ε和ζ的活性以及核因子（NF－κB的活化状况。结果：双歧杆菌注射组大肠癌组织PTK的活性、PKCα和βⅡ的平均荧光强度以及NF－κB的阳性细胞密度均明显低于肿瘤对照组（P＜0．01），而PKCβⅠ，γ，ε和ζ的平均荧光强度在两组间差异无显著性（P＞0．05）。结论：青春型双歧杆菌体内能显著降低大肠癌PTK和PKCα，βⅡ的活性，同时也能抑制其NF－κB的活性。     

As2O3对人乳腺癌中NF-κB p65、survivin和caspase-3的作用及相关性研究

目的探讨As2O3对人乳腺浸润性导管癌裸鼠移植瘤组织中NF-κB p65、survivin及caspase-3表达的影响.方法复制人乳腺浸润性导管癌裸鼠移植瘤模型,共22只,随机分为3组:对照组、顺铂组及不同浓度(1.5、3.0 mg/kg)的As2O3组(简称As2O3组).用原位杂交法检测survivin mRNA的表达;用免疫组化法检测肿瘤组织NF-κB p65、survivin及caspase-3蛋白的表达.结果人乳腺浸润性导管癌裸鼠移植瘤中NF-κB p65蛋白及survivin mRNA和蛋白表达的阳性细胞密度As2O3组明显低于顺铂组和对照组(P＜0.01),顺铂组也低于对照组(P＜0.01);而caspase-3蛋白表达结果则相反(P＜0.01).NF-κB p65蛋白、survivin蛋白及survivin mRNA阳性表达间相互呈正相关,而三者的表达均与caspase-3蛋白表达呈负相关.结论 As2O3可能通过抑制NF-κB p65的活性抑制survivin,从而激活caspase-3,诱导人乳腺浸润性导管癌细胞的凋亡,且呈剂量依赖性.     

靶向糖原合成酶激酶-3β抗骨肉瘤的实验研究

 目的 研究糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)在骨肉瘤细胞增殖中的作用及相关分子机制,探讨其在骨肉瘤靶向治疗中的价值。方法 Western blot检测人成骨细胞及骨肉瘤细胞p-GSK-3β(Ser9)表达水平,观察GSK-3β抑制剂及siRNA干扰对细胞增殖、凋亡的影响,利用凋亡蛋白芯片筛查并验证GSK-3β调控骨肉瘤细胞的分子机制,通过裸鼠体内实验评估靶向GSK-3β对于骨肉瘤的治疗价值。结果 在骨肉瘤细胞中p-GSK-3β(Ser9)表达水平明显低于成骨细胞。GSK-3β特异性抑制剂及siRNA干扰均可明显抑制骨肉瘤细胞增殖并诱导凋亡蛋白cleave-caspase 3表达量明显上调。通过蛋白芯片筛查显示一组NF-κB调控的靶基因蛋白survivin、cIAP-1、XIAP及Bcl-2明显下调。Western blot验证了上述芯片结果,并发现氯化锂处理后p-IκBα水平下降,核内NF-κB p65表达量下降。NF-κB双荧光素酶报告系统检测稳定过表达持续活化GSK-3β细胞中NF-κB转录活性与空载体组细胞相比明显升高,而稳定干扰GSK-3β的细胞中NF-κB转录活性与空载体组细胞相比明显下降。裸鼠体内动物实验发现稳定干扰GSK-3β和采用氯化锂均可明显抑制骨肉瘤皮下移植瘤的生长。结论 GSK-3β在骨肉瘤中处于相对活化状态,可通过上调NF-κB转录活性调控骨肉瘤细胞增殖;靶向GSK-3β是骨肉瘤潜在的治疗新策略。     

NF-κB P65亚基siRNA增强吉西他宾诱导胰腺癌细胞凋亡作用的实验研究

目的 探讨NF-κB P65亚基siRNA(NF-κB P65 siRNA)在体内外增强吉西他宾诱导胰腺癌细胞凋亡的作用及机制.方法 培养人胰腺癌细胞株BxPC-3和PANC-1,分为空白对照组、阴性干扰序列对照组、吉西他宾组、NF-κB P65 siRNA组和联合治疗组.MTT方法检测细胞增殖情况;Western blot方法检测NF-κB P65及凋亡相关蛋白的表达水平;Annexin V-FITC/PI染色流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测胰腺癌细胞凋亡情况;电泳凝胶迁移实验检测NF-κB的DNA结合活性.BxPC-3接种裸鼠皮下建立胰腺癌移植瘤模型.治疗后监测肿瘤体积;TUNEL染色检测移植瘤组织细胞凋亡指数.结果 转染后72 h,与其他组相比,联合治疗组显著降低了细胞活力指数(P<0.05),下调了Bel-2和proeaspase-3的表达水平,同时上调了Bax的表达水平;流式细胞仪检测结果显示,联合治疗组细胞凋亡率高于其他组(P<0.05);EMSA实验结果证实,NF-κB P65 siRNA组和联合治疗组NF-κB的DNA结合活性低于对照组(P<0.05).联合治疗能够通过诱导凋亡而抑制裸鼠移植瘤生长(P<0.01).结论 NF-κB P65 siRNA可以通过抑制NF-κB的DNA结合活性,调控凋亡相关蛋白的表达水平,激活线粒体凋亡途径,从而增强吉西他宾对胰腺癌细胞的促凋亡作用.     

CMTM5对人前列腺癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的:探讨CMTM5(CKLF-like MARVEL transmembrance domain containing)对人前列腺癌裸鼠移植瘤的抑制作用,并初步探索其作用机制。方法:13只雄性裸鼠连续腹腔注射环磷酰胺2.5 mg/(d.只),建立裸鼠皮下前列腺移植瘤模型,3周后11只裸鼠种植部位可见肿瘤,随机将其分成两组:实验组(6只),对照组(5只)。实验组肿瘤局部注射CMTM5腺病毒,对照组不作处理。每日监测裸鼠体重和肿瘤大小,2周后处死。取出完整肿瘤组织,利用免疫组化方法检测过表达CMTM5对裸鼠前列腺移植瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)及核转录因子κB(NF-κB)蛋白表达的影响。结果:CMTM5组肿瘤体积为(573.39±175.24)mm3明显小于对照组(1482.50±327.86)mm3,P=0.03。CMTM5组肿瘤重量为(0.55±0.11)g明显小于对照组(1.31±0.29)g,P=0.027。免疫组化法检测结果显示,与对照组比较,CMTM5组VEGF和NF-κB蛋白的表达明显降低。结论:CMTM5抑制前列腺癌的生长,其作用机制可能通过下调与肿瘤细胞增殖密切相关的血管内皮生长因子VEGF和核转录因子NF-κB的表达相关。     

沉默蛋白激酶C 对高糖刺激成纤维细胞Toll 样受体及核因子kappa B 基因表达的影响

目的:探索siRNA 沉默蛋白激酶C(PKC)对高糖刺激成纤维细胞在Toll 样受体(TLRs)信号传导通路中TLRs 及核因子kappa B(NF-κB) 表达的影响。方法:高糖刺激下用real-time PCR 检测TLR2、TLR4 的表达水平,确定何种受体发生改变后进行后续实验。设计并合成针对PKC 不同亚单位的特异性siRNA :PKC-αsiRNA、PKC-βsiRNA、PKC-δsiRNA,在高效率转染的基础上,对PKC 进行沉默,高糖刺激后用real-time PCR 方法检测TLRs、NF-κBp50 和NF-κB p65 的表达情况,以低糖培养作对比。结果:成纤维细胞中高糖刺激下TLR2 的mRNA 水平显著升高(P ＜ 0.05),而TLR4 的mRNA 表达无明显变化(P ＞ 0.05)。在高糖刺激下PKC-αsiRNA、PKC-δsiRNA 可下调TLR2、NF-κB p65的mRNA 水平(P ＜ 0.05),而PKC-βsiRNA 对TLR2、NF-κB p65 的mRNA 水平无影响(P ＞ 0.05)。与低糖培养条件对比,高糖刺激下NF-κB p50 水平无改变(P ＞ 0.05),而且PKC-α siRNA、PKC-β siRNA 和PKC-δ siRNA 转染后不改变细胞中NF-κB p50 的水平。结论:成纤维细胞信号传导通路中PKC-α、PKC-δ 位于TLR2、NF-κB p65 的上游。     

二氢青蒿素联合吉西他宾治疗胰腺癌的实验研究

目的 探讨二氢青蒿素联合吉西他宾治疗胰腺癌的作用及其机制.方法 培养胰腺癌细胞株BxPC-3和Panc-1,通过MTT法检测二氢青蒿素联合吉西他宾对胰腺癌细胞生长的抑制作用;通过Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术和激光共聚焦显微镜检测细胞凋亡情况;通过EMSA检测NF-κB与DNA结合活性的改变;通过Western blot法检测细胞中NF-κB/P65和NF-κB下游增殖、凋亡相关蛋白的表达情况.裸鼠皮下注射BxPC-3细胞建立胰腺癌裸鼠移植瘤,监测给药后肿瘤体积的变化,TUNEL染色检测肿瘤细胞凋亡情况.结果 二氢青蒿素联合吉西他宾对BxPC-3和Panc-1两株细胞的增殖抑制率可达(81.1±3.9)%和(76.5±3.3)%;凋亡率可达(53.6±3.8)%和(48.3±4.3)%,与吉西他宾组[(24.8±2.9)%和(21.8±3.5)%]相比,差异有统计学意义(P<0.01).在裸鼠体内,各治疗组均可抑制胰腺癌裸鼠移植瘤的生长;联合组肿瘤的体积和增殖凋亡指数分别为(262±37)mm~3和(50±4)%,与吉西他宾组[(384±56)mm~3和(25±3)%]相比,差异有统计学意义(P<0.05).EMSA和Western blot结果显示,二氢青蒿素能抑制胰腺癌细胞NF-κB与DNA结合活性,联合组较吉西他宾组NF-κB活性有显著的降低;二氢青蒿素下调BxPC-3和Pane-1细胞核P65的表达,联合组较对照组显著下调NF-κB靶基因蛋白Cyclin D1、Bcl-xL、Bel-2的表达,上调Bax的表达,降低Bel-2/Bax的比例,进一步增加Caspase-3的活化.结论 二氢青蒿素抑制吉西他宾所诱导激活的NF-κB的活性,下调NF-κB下游靶基因蛋白的表达可能是其增敏吉西他宾抗胰腺癌作用的分子机制.     

柳氮磺胺吡啶和5-氟尿嘧啶对裸鼠皮下移植瘤胰腺癌细胞BxPC-3凋亡基因的影响

目的 探讨5-氟尿嘧啶(5-FU)和柳氮磺胺吡啶(sulfasalazine, SZ)对裸鼠皮下移植瘤胰腺癌细胞BxPC-3凋亡基因的作用.方法 用RT-PCR和Western blot法分别检测5-FU及SZ单独或联合作用后裸鼠皮下移植瘤凋亡相关基因NF-κB (p65)、bcl-2及cyclinD1 mRNA和蛋白表达水平以及Bax蛋白表达水平的变化.结果 5-FU (7.5和15 mg/kg)和SZ(10和20 mg/kg)单独或联合作用裸鼠皮下移植瘤,其NF-κB (p65) mRNA表达相对含量和蛋白表达水平与各自对照组比较,除SZ组2个亚组外,其余各组均明显降低(P＜0.01); bcl-2和cyclinD1 在mRNA和蛋白水平以及Bax蛋白表达量与各自对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.01); 上述指标经多因素方差分析显示二者间有明显的交互作用.结论 Bax水平上调, bcl-2、cyclinD1及NF-κB (p65)水平下调可能是SZ可协同增强5-FU诱导裸鼠皮下移植瘤胰腺癌细胞BxPC-3凋亡的机理之一.     

白细胞介素-1β激活核转录因子-κB介导A549细胞分泌白细胞介素-8的研究

目的研究白细胞介素-1β(IL-1β)对肺II型上皮A549细胞分泌白细胞介素-8(IL-8)的诱导作用,探讨相关的细胞内信号通道的激活和传导的机理。方法以1ng/ml终浓度的IL-1β干预经核转录因子-κB(NF-κB)的IKK2复合物抑制物(AS602868)预处理的A549细胞,Western blot检测IL-1β干预后细胞内磷酸化IκBα(p-IκBα)和IκBα蛋白的表达水平;激光扫描共焦显微镜(LSCM)检测NF-κB的p65和p50蛋白的核转移过程;ELISA检测NF-κB的p65和p50蛋白与DNA结合活性及IL-8蛋白的释放。结果IL-1β干预后细胞内p-IκBα蛋白明显升高,IκBα蛋白明显下降;LSCM扫描显示p65和p50蛋白从胞浆向胞核转移,同时p65和p50与DNA结合活性明显升高(P<0.01);IL-8的蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。细胞经AS602868的预处理,阻断了细胞内p-IκBα蛋白升高和IκBα蛋白降解;减少了p65和p50蛋白的核转移和与DNA结合活性(P<0.01);降低了IL-8蛋白的表达水平(P<0.01)。结论IL-1β通过激活NF-κB介导了A549细胞分泌IL-8,结果提示可能通过抑制NF-κB信号通道的方法,减轻呼吸机相关肺损伤(VALI)的生物性损伤。     

并发闭塞性细支气管炎的移植气管组织中核因子κB和肿瘤坏死因子的表达及意义

目的 探讨小鼠移植气管组织中核因子κB(NF-κB)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达及其在闭塞性细支气管炎(OB)中的作用.方法 实验分为实验组和同系移植对照组,实验组受者为C57BL/6小鼠,同系移植对照组受者为Balb/c小鼠,供者均为Balb/c小鼠.将2支供者气管分别移植于受者两侧背部,术后7、14、21 d 2组分别处死受者7只,取移植气管,于光学显微镜下观察并计算移植气管截面的管腔闭塞率.用免疫组织化学法和Western印迹法检测移植气管组织中NF-κB和TNF-α的表达;用凝胶电泳迁移率改变法检测NF-κB的转录活性;用逆转录聚合酶链反应法检测TNF-α mRNA的表达.结果 实验组移植后14 d和21 d时的管腔闭塞率分别为(31±7)%和(80±17)%,并可见移植气管发生OB病理改变,而同系移植对照组未见此改变.免疫组织化学法和Western印迹法结果均显示.实验组各个时点移植气管组织中NF-κB和TNF-α的表达均高于同系移植对照组.实验组移植后7、14和21 d时,NF-κB基冈的转录活性分别为1.35±0.52、1.72±0.43和2.43±0.33,均高于同时点同系移植对照组的转录活性(P＜0.01,P＜0.05,P＜0.05);实验组各时点TNF-α mRNA的表达均高于同系移植对照组(P＜0.05,P＜0.05,P＜0.05).结论 发生OB的小鼠移植气管组织中NF-κB出及其下游靶基因TNF-α的表达升高.     

胫骨干骨折的手术治疗对策

目的：明确不同固定器械在胫骨干不同骨折类型固定中的特点，以指导临床应用。方法：68例胫骨干骨折，行加压钢板螺钉、交锁髓内钉、单侧外固定架固定后，作临床疗效分析。结果：加压钢板固定组42例，感染5例，骨不连1例，平均愈合时间3．8个月；交锁髓内钉固定组13例，无感染及骨不连，平均愈合时间5．4个月；单侧外固定架组13例，骨不连1例，踝关节背伸受限3例，平均愈合时间4．5个月。结论：胫骨骨折交锁髓内钉固定并发症少，功能恢复好，适用范围广，但要注意及时进行动力加压。加压钢板及外固定架固定应选择各自的最佳适应证，以达到理想的疗效。     

不同方法重建指尖离断静脉回流的疗效分析

目的：探讨不同方法重建指尖离断静脉回流的疗效。方法：2008年3月-2013年2月收治指尖离断患者80例,38例吻合指侧方静脉重建回流,术中吻合动静脉比例1：1或1：2或2：2,平均1：2;22例吻合指腹静脉重建回流,术中吻合动静脉比例1：1;20例未吻合静脉,术中仅吻合1条动脉,行侧切口或甲床放血。观察各组治疗效果。结果：吻合指侧方静脉组手指全部成活,无一例发生回流障碍;吻合指腹静脉组19例发生静脉危象,其中4例手指坏死;未吻合静脉组20例均发生回流障碍,其中6例手指坏死。58例获随访,随访时间6~28个月。吻合指侧方静脉组32例,指尖外形佳、指腹饱满;吻合指腹静脉组14例,指体轻度萎缩,指甲生长不平整;未吻合静脉组12例,指体萎缩明显。吻合指侧方静脉组指甲生长近平整,长度长于其他两组[（14.4±3.2）mm比（12.5±2.3）mm和（12.2±2.2）mm],远侧指间关节活动度大于其他两组[（63±5）°比（48±3）°和（45±7）°],两点分辨觉小于其他两组[（4.6±0.4）mm比（7.1±1.2）mm和（7.3±0.6）mm],感觉级别高于其他两组[S（3.45±0.39）级比S（2.57±0.42）级和S（2.55±0.49）级],差异均具有显著性（P〈0.05）。吻合指腹静脉组和未吻合静脉组在指甲长度、运动和感觉方面差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：吻合指侧方静脉能有效解决指尖再植静脉回流问题,可避免回流障碍,成活率高,促进指甲生长,可恢复 DIPJ 活动度及感觉。     

膝关节后交叉韧带断裂治疗临床分析

目的 对35例膝关节后交叉韧带断裂治疗进行临床分析,重点探讨了有关交叉韧带断裂的治疗问题。方法 经明确诊断后,分析采用胫骨附着处撕脱骨折复位固定手术治疗26例、早期髌韧带中1／3移植重建3例、单纯长腿石膏固定6例。结果 本组病例全部进行随访,随访时间13个月－5年,胫骨附着处撕脱骨折复位固定及髋韧带中1／3移植重建29例为优良、单纯长腿石膏固定6例为差。结论 后交叉韧带断裂后应该及时给予手术修复;膝后外侧手术入路,操作简单,暴露充分;少于3个月的陈旧性病例仍适应手术治疗。