siRNA 沉默HIF-1α在缺氧状态下对食管鳞癌细胞VEGF表达的影响

 目的 观察体外乏氧培养条件下食管鳞癌细胞系EC9706中HIF-1α和VEGF的表达，探讨HIF-1α在低氧条件下对食管鳞癌血管生成的调控作用。方法 CoCl2化学缺氧法模拟肿瘤缺氧环境，RT-PCR、免疫组化法和免疫印迹法分别检测缺氧状态下HIF-1α和VEGF在mRNA和蛋白水平的表达。采用化学合成小干扰RNA（siRNA）介导的RNA干扰技术（RNAi）用siRNA转染EC9706细胞。观察转染后HIF-1α沉默效果。结果 低氧条件下，EC9706细胞HIF-1amRNA水平稳定，蛋白表达显著升高，而VEGFmRNA和蛋白的表达均显著升高。SiRNA转染EC9706后能够显著下调HIF-1α的基因表达，同时VEGF基因的表达也受到明显抑制。结论 缺氧促使EC9706细胞HIF-1α在蛋白水平表达升高，并通过转录激活VEGF的机制调控食管鳞癌血管生成。     

缺氧对骨肉瘤SaOS-2细胞系HIF-1α和VEGF表达的影响

目的：观察缺氧条件下骨肉瘤SaOS-2细胞系缺氧诱导因子HIF-1α和血管生长因子VEGF表达的变化。方法：建立骨肉瘤细胞体外缺氧培养模型，观察缺氧培养不同时相(8、16、24h)HIF-1α和VEGF的表达。半定量RT—PCR方法检测HIF-1α和VEGF mRNA的转录水平，免疫组化(SP法)和免疫印迹(Western blot)检测HIF-1α蛋白表达情况，免疫组化和ELISA法检测细胞和培养上清液中VEGF蛋白表达。结果：缺氧处理后，HIF-1α mRNA转录水平没有明显改变，蛋白表达随缺氧时间延长而升高。VEGF mRNA以及蛋白的表达在缺氧条件下均显著增强。结论：骨肉瘤细胞系SaOS-2在缺氧条件下．缺氧诱导因子HIF-1α和血管牛长因子VEGF蛋白表达上调。     

短发夹状RNA使骨肉瘤细胞缺氧诱导因子HIF-1α基因沉默

目的构建低氧诱导因子HIF-1α发夹状小干涉RNA真核表达载体，观察发夹状双链小干涉RNA对骨肉瘤细胞HIF-1的转录后的基因沉默效果?方法体外合成两对互补的寡核苷酸链，分别针对缺氧诱导因子HIF-1αmRNA序列的两个靶位点。退火形成双链，插入pSilencer^TM neoU62．1真核表达载体。将构建好的载体经脂质体介导转染骨肉瘤SaOS-2细胞，观察HIF-lα基因的沉默效果。半定量RT—PCR检测HIF-1αmRNA的抑制程度，免疫荧光和免疫印迹(Western Blot)检测HIF-1α蛋白表达情况。结果测序证实成功构建HIF-1α发夹状小干涉RNA真核表达载体。转录生成的发夹状小干涉能够特异抑制HIF-1α表达。RT—PCR结果显示针对HIF-1αmRNA序列的两个靶位点的沉默效果分别为69％和92％，免疫荧光显示转染后荧光强度显著降低，免疫印迹显示两个靶位点的发夹状小干涉RNA分别使HIF-1α蛋白表达下降66％和90％。结论通过体内转录生成的发夹状小干涉RNA能够使骨肉瘤细胞缺氧诱导因子HIF-1α基因沉默。     

siRNA沉默HIF-2α对缺氧培养的BGC-823胃癌细胞中VEGF表达的影响

目的:观察乏氧培养条件下胃腺癌细胞系BGC-823中HIF-2α和VEGF的表达,探讨HIF-2α在低氧条件下对胃癌血管生成的调控作用.方法:采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和Western blot法分别检测低氧状态下HIF-2α和VEGF在mRNA和蛋白水平的表达.进一步采用化学合成小干扰RNA(siRNA)介导的RNA干扰技术(RNA interference,RNAi)转染BGC-823细胞.观察转染后HIF-2 α沉默效果.结果:与常氧时比较,缺氧后BGC-823细胞HIF-2α、VEGF的mRNA水平稳定,而蛋白的表达水平均明显升高(P＜0.05),siRNA转染BGC-823后能够显著下调HIF-2α的基因表达,同时VEGF基因的表达也受到明显抑制.结论:缺氧可促使BGC-823细胞HIF-2α在蛋白水平表达升高,并通过激活VEGF的机制调控胃癌血管生成,切断HIF-2α途径可能会有效阻止胃癌血管生成.     

RNAi抑制HIF-1α基因逆转卵巢癌多药耐药的实验研究

目的 探讨靶向缺氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)载体表达的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)逆转卵巢癌细胞多药耐药的可行性.方法 构建靶向HIF-1α短发夹状siRNA 基因表达载体,脂质体介导转染人卵巢癌COC1/DDP细胞.Western blot法检测HIF-1α蛋白和P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的表达;实时定量PCR(real time PCR)检测HIF-1α和多耐药基因1(mdr-1)mRNA的表达;MTT法检测COC1/DDP细胞对化疗药物顺铂的抗性.结果 转染HIF-1α短发夹状siRNA真核表达载体的COC1/DDP细胞,低氧条件下HIF-1α蛋白及mRNA表达水平下降,同时mdr-1基因的mRNA及其编码的P-gp蛋白水平也明显下降,对顺铂的药物敏感性增加.结论 HIF-1α短发夹状siRNA真核表达载体可有效地抑制卵巢癌COC1/DDP细胞HIF-1α和mdr-1基因的表达,逆转卵巢癌细胞的多药耐药.     

HIF-1α基因干扰对大鼠CBRH-7919肝癌细胞HIF-1α与VEGF表达影响的研究

目的:探讨沉默缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)对肝癌细胞在缺氧状态下表达HIF-1α及血管内皮生长因子(VEGF)的影响.方法:选用大鼠CBRH-7919肝癌细胞株作为研究对象,利用氯化钴(CoCl2)模拟缺氧状态,构建3组特异性较强的HIF-1α siRNA表达载体,采用小分子RNA干扰技术沉默细胞HIF-1α的基因表达,分别利用real time RT-PCR和蛋白质印迹法检测肝癌细胞HIF-1α和VEGF在mRNA及蛋白水平的表达变化.结果:在不同浓度CoCl2模拟缺氧条件下,随着CoCl2浓度的增高及时间的推移,肝癌细胞HIF-1α和VEGF的表达(mRNA及蛋白水平)较常氧对照组(0 μmol/L CoCl2)显著增多,差异均有统计学意义,P＜0.05.应用3组不同HIF-1α和siRNA表达载体转染缺氧条件下的肝癌细胞后,细胞的HIF-1α和VEGF的基因(mRNA)表达量与未转染HIF-1α siRNA表达载体对照组相比较明显减少,同步检测两者的蛋白表达亦明显减少,与对照组差异均有统计学意义,P＜0.05.结论:缺氧可以诱导肝癌细胞HIF-1α和VEGF的表达,siRNA沉默HIF-1α能显著抑制缺氧状态下诱导的VEGF表达.     

低氧影响卵巢癌细胞对泰素的敏感性及其机制

目的研究低氧、低氧诱导因子-1α(HIF-1α)对卵巢癌细胞多药耐药基因(mdr-1)及其编码P-糖蛋白(P-gp)表达的调控,探讨低氧影响卵巢癌细胞对泰素的敏感性及其机制。方法对常氧(21%O2)和低氧(1%O2、5%O2)培养的A2780细胞,应用免疫细胞化学、逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、蛋白免疫印迹法(Western blot)和四氮唑蓝(MTT)法等,检测HIF-1αmRNA、蛋白以及mdr-1、P-gp的表达水平和对泰素的敏感性。利用RNA干扰(RNAi)技术,构建针对HIF-1α的短发夹状干扰RNA真核表达载体pSiHIF-1α,并转染A2780细胞,检测转染后HIF-1α的基因沉默效果、对mdr-1和P-gp表达的影响及其对泰素敏感性的改变。结果低氧能显著诱导A2780细胞HIF-1αmRNA和蛋白表达水平的上调,HIF-1αmRNA的表达水平与低氧浓度无关,而HIF-1α蛋白表达呈低氧浓度依赖性;低氧能诱导A2780细胞的表达上调,且呈低氧浓度依赖性;低氧A2780细胞对泰素的敏感性较常氧明显降低(P<0.05)。pSiHIF-1α转染后,低氧A2780细胞能显著下调HIF-1α的表达,明显抑制mdr-1和P-gp的表达,其对泰素的敏感性显著增加。结论低氧能降低A2780细胞对泰素的敏感性,其机制可能是通过HIF-1α调控mdr-1和P-gp的表达而实现的。     

HIF-1α反义寡核苷酸对骨肉瘤细胞系MG-63 HIF-1α和VEGF表达的影响

目的：观察缺氧诱导因子HIF—1α反义寡核苷酸（antisense oligonucleotides，ASODN）在缺氧环境下对骨肉瘤细胞系MG-63 HIF—1α和血管内皮生长因子VEGF表达的影响。方法：设计针对HIF—1α RNA亚基模板序列的反义、正义寡核苷酸（sense oligodeoxynucleotides，SODN），并建立骨肉瘤细胞体外缺氧培养模型，观察缺氧培养不同时相HIF-1α反义寡核苷酸对骨肉瘤细胞系MG-63 HIF-1α和VEGF的表达的影响。RT-PCR方法检测HIF-1α和VEGF mRNA水平，免疫组化和免疫印迹方法检测HIF-1α和VEGF蛋白表达情况。结果：与常氧组比较。单纯缺氧组及SODN缺氧组的HIF-1α转录水平未见明显改变。蛋白表达水平却随缺氧时间延长明显升高：而VEGF mRNA以及蛋白的表达水平较常氧组均显著增强。然而在ASODN缺氧组。HIF-1α、VEGFmRNA活性以及蛋白的表达水平明显减弱，且HIF-1α蛋白水平与VEGF转录活性有明显的相关性。结论：在缺氧环境下，转染HIF-1α反义寡核苷酸能够抑制HIF-1α活性。从而使VEGF mRNA和蛋白的表达水平明显下降。     

Pokemon在缺氧微环境中对肝细胞癌血管形成的作用

目的 探讨在缺氧微环境下Pokemon对肝细胞癌血管形成的影响。方法 选取肝细胞癌细胞株HepG2和Huh7,采用短发夹RNA稳定转染并筛选稳定沉默Pokemon基因表达的肝细胞癌细胞株。通过RT-PCR验证沉默Pokemon之后血管形成相关基因的表达。在缺氧条件下通过Western blot法验证Pokemon基因沉默后缺氧诱导因子-1α (hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)表达的影响。结果 成功构建Pokemon干扰质粒。HepG2和Huh7细胞在Pokemon基因沉默后,血管形成相关基因促血管生成素2(angiopoietin-2,ANG2)、血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)以及血管内皮生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR2)的mRNA表达均受到抑制（均P<0.05）。在缺氧条件下,HepG2和Huh7细胞在Pokemon基因沉默后HIF-1α蛋白表达均下调（均P<0.05）。将...     

N端截短的视网膜母细胞瘤基因对人骨肉瘤细胞株SaOS一2生长的影响

目的研究N端截短的视网膜母细胞瘤基因(Rb66)对骨肉瘤细胞Saos-2生长的影响.方法构建携带Rb66cDNA片段的真核细胞表达载体pcDNA3-1-Rb,用脂质体LIPOFECTAMIMETM2000将真核表达载体pcDNA3-1-Rb、空载体对照pcDNA3-1转染至SaOS-2细胞中.RT-PCR及免疫细胞化学检测转染后SaOS-2中Rb66mRNA及蛋白的表达;观察细胞形态的改变;测定细胞倍增时间及生长曲线的改变;流式细胞仪检测对细胞周期的影响.结果成功地将N端截短的Rb66cDNA导入骨肉瘤细胞SaOS-2中,并在mRNA及蛋白水平获得了表达.转染后的SaOS-2细胞胞浆展开,细胞核浆比例变小;Rb66导入后,SaOS-2细胞生长减慢,群体倍增时间延长,细胞周期呈现G1期阻滞.结论Rb66可通过阻止细胞G,→S期进展而抑制骨肉瘤细胞SaOS-2的增殖.     

食管平滑肌瘤10例临床治疗体会

我院１９７５年６月～１９９０年７月共收治食管平滑肌瘤１０例，占同期食管肿瘤总数的０．１９２％（１０／１０９２）。位于食管上段２例，中段５例，下段３例。Ｘ线食管钡餐造影是诊断本病的主要方法。行食管粘膜外肿瘤摘除９例，食管部分切除１例，效果良好。本文就其诊断与手术治疗进行了讨论。     

仙人掌原液毒性的初步研究

背景与目的： 研究仙人掌原液的毒性。 材料与方法： 小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。 结果： 仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g/kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论： 在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

中晚期贲门癌148例的外科治疗

目的　总结贲门癌手术治疗影响生存率的因素 ,提供今后工作参考。方法　对 14 8例经手术治疗的贲门癌患者进行术后并发症、绝对生存率的X2 检验。结果　本组切除率为 94.5 9% ,近半胃切除占 72 .14 % ,1、3、5年生存率分别为 67.9%、45 %和 2 4.3 %。病期、外侵程度和淋巴结转移等因素对 5年生存率有显著影响 (P <0 .0 1)。术后并发症以吻合口瘘及肺癌并发症为多见 ,其发生率为 3 .6% ,手术死亡率 1.4%。结论　提高生存率的关键在于早期诊断 ,根治手术和术后积极综合治疗。     

胆囊癌29例分析

目的探索胆囊癌的防治方法。方法分析29例胆囊癌病人临床资料、治疗方法及结果。结果术前诊断明确者21例，剖腹探查发现已属晚期，9例为Ⅳ期行根治术，12例为Ⅴ期未行根治术，均于术后1年内死亡。术前怀疑胆囊癌者5例，剖腹探查冰冻切片证实为Ⅴ期及Ⅳ期者各1例，Ⅴ期未行根治术，Ⅳ期行根治术，均于术后1年内死亡；Ⅲ期者3例，行胆囊癌根治术分别于术后10月、13月、17月死亡。2例术中冰冻切片发现的Ⅱ期胆囊癌，行胆囊癌根治术，分别于术后23月、26月死亡。1例意外胆囊癌属Ⅰ期胆囊癌，术后5年半死亡。结论要减少胆囊癌危害，重在及时治疗胆囊结石。     

仙人掌原毒性的初步研究

背景与目的:研究仙人掌原液的毒性。材料与方法:小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。结果:仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g／kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论:在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

Management of intracranial metastases of differentiated carcinoma of thyroid

Summary Brain metastases in differentiated carinoma of the thyroid is a rare occurrence. We treated five documented cases of carcinoma of thyroid with brain metastases out of 400 cases of thyroid cancer treated between 1972 to 1993. 4 were females out of which one was pregnant during the appearance of brain metastases. All cases were treated with thyroidectomy, and radioiodine as primary therapy. Brain metastases developed 6 months to 11 years following treatment of the primary and were treated with radiotherapy and suppressive levothyroxine. We observed the beneficial effect of suppressive thyroxine and the poor prognosis associated with pregnancy and withdrawl of thyroid replacement therapy. 3 of the 5 patients are alive 12–23 months after treatment for brain metastases, while 2 patients died at 4 months and 7 years post brain metastases due to pulmonary and hepatic failure, respectively.     

Clinico-Pathological Study of 50 Cases of Tumours of Larynx

Otoacoustic emissions have been advocated in the management of otitis media with effusion. However, otoacoustic emissions cannot differentiate different types of hearing loss. This study was conducted to find factor that can differentiate otitis media with effusion from other common causes of hearing loss in children. Children were enrolled in the study and divided in four groups consisting of 25 ears each after pure tone and impedance audiometry: (1) Otitis media with effusion group, (2) Normal ear group, (3) Sensory-neural hearing loss group, (4) Chronic suppurative otitis media group. Otoacoustic emissions were recorded and results were analyzed statistically. The normal hearing group had significant difference from other groups but total band reproducibility of transient evoked otoacoustic emissions did not show any statistical difference in the cases groups. In distortion product otoacoustic emissions, group 1 showed significant difference from group 3 and group 1 had significant difference from all other groups at 4 kHz. The study did not find any factor that differentiates otitis media with effusion from other diseases. Although, distortion product otoacoustic emissions can indicate otitis media with effusion but impedance audiometry should be the main tool in the management of otitis media with effusion.     

乳腺叶状囊肉瘤320例诊治分析

目的探讨乳腺叶状囊肉瘤临床诊断和治疗方法。方法回顾分析经手术病理确诊为乳腺叶状囊肉瘤的320例患者的诊断和治疗情况。结果行乳腺X片检查121例,B超检查25例,近红外检查21例,针吸细胞学检查42例;15例(12.4%)乳腺X片检查及3例(14.3%)近红外检查诊断为乳腺叶状囊肉瘤。临床诊断正确率为17.5%(56/320),误诊率为82.5%(264/320)。随访253例患者,其中局部复发45例(17.8%),远处转移死亡13例(5.1%)。结论乳腺叶状囊肉瘤诊断需常规病理检查,治疗宜行局部广泛切除或全乳切除。     

胆囊腺瘤癌变的相关因素分析

目的:探讨胆囊腺瘤癌变与临床因素的相关性。方法:应用ROC曲线,计算胆囊腺瘤癌变的肿瘤大小临界值。应用χ2独立性检验,计算胆囊腺瘤癌变与临床因素的相关性、临床表现与肿瘤位置的相关性。结果:肿瘤良恶性临界值为2.27 cm。胆囊腺瘤癌变与患者的性别、年龄、是否合并结石无明显相关性（P＞0.05）,而与肿瘤大小、肿瘤数目、形态、超声下是否有血流(P＜0.05)等临床病理特征有明显相关性。临床症状与肿瘤是否位于胆囊颈部有明显相关性(P＜0.05)。结论:胆囊腺瘤在超声扫描下表现为单发、无蒂、有血流、直径大于2.27 cm,应高度怀疑已有恶变。肿瘤位于胆囊颈部可引起右上腹胀痛、疼痛向右背部放射、恶心呕吐等临床表现。