HPLC同时测定大豆磷脂中磷脂酰胆碱和溶血磷脂酰胆碱含量

目的建立同时测定大豆磷脂中磷脂酰胆碱（PC）和溶血磷脂酰胆碱（LPC）含量的方法。方法采用高效液相色谱法,色谱柱为Phenomenex silica柱（4.6 mm×150 mm,5μm）,流动相为正己烷-异丙醇-水（5∶80∶20）,流速：0.7 mL.min-1,检测波长：206 nm,柱温：25℃。结果 PC在0.4~2.4 mg.mL-1内呈良好的线性关系,平均回收率为99.4%,RSD为0.40%（n=6）;LPC在10~60μg.mL-1内呈良好的线性关系,平均回收率为98.0%,RSD为1.65%（n=6）。结论本试验方法简便、重复性好、专属性强,可作为大豆磷脂中PC,LPC的检测方法。     

高效液相色谱法测定多烯磷脂酰胆碱软胶囊中磷脂酰胆碱和溶血磷脂酰胆碱的含量

目的建立HPLC法测定多烯磷脂酰胆碱软胶囊中磷脂酰胆碱和溶血磷脂酰胆碱的含量以及有关物质方法。方法采用蒸发光散射检测器SEDEX55,MERCK的Li Chrospher 100 Diol-5色谱柱(125mm×4.0 mm,5μm);流动相A为正己烷-异丙醇-冰醋酸-三乙胺(814∶170∶15∶0.8),流动相B为异丙醇-超纯水-冰醋酸-三乙胺(844∶140∶15∶0.8),梯度洗脱。结果磷脂酰胆碱在0.912~2.736mg·mL~(-1),溶血磷脂酰胆碱在0.072~0.216 mg·mL~(-1)内与峰面积线性关系良好(R~2均为0.999)。磷脂酰胆碱的平均回收率为101.2%,RSD为1.3%;溶血磷脂酰胆碱的平均回收率为100.5%,RSD为1.9%。溶血磷脂酰胆碱的检测限为0.57μg。结论本检测方法专属性强,结果可靠,专属性强,重复性良好,可用于多烯磷脂酰胆碱软胶囊的质量评价。     

溶血磷脂酰胆碱刺激脑微血管平滑肌细胞增殖的细胞内信号转导途径

通过测定［³H］胸腺嘧啶核苷(［³H］TdR)参入和结晶紫染色法测定平滑肌细胞增殖,研究了溶血磷脂酰胆碱(LPC)刺激牛脑微血管平滑肌细胞(BCMSMC)增殖的细胞内信号转导途径. 结果显示,LPC能浓度依赖性(1 nmol·L^-1-10 μmol·L^-1)诱导BCMSMC摄取［³H］TdR,在LPC的浓度为10 μmol·L^-1时作用达最大,cpm由366±142升至1761±296(P<0.01);LPC亦能浓度依赖性(1 nmol·L^-1-10 μmol·L^-1)诱导BCMSMC增殖,在LPC浓度为1 μmol·L^-1时促增殖作用达坪值,A_{595 nm}由0.060±0.009增至0.100±0.015(P<0.01). 丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)特异性抑制剂PD 98059(2-50 μmol·L^-1),血小板衍生生长因子受体抑制剂酪氨酸磷酸化抑制剂AG 1296(2-50 μmol·L^-1)以及蛋白质酪氨酸激酶抑制剂除莠霉素A(2-10 μmol· L^-1)能浓度依赖性地抑制LPC的上述作用. 表明LPC能促进BCMSMC增殖,其细胞内信号转导与MAPK途径有关.     

溶血磷脂酰胆碱刺激脑微血管平滑肌细胞增殖的细胞内信号转导途径

通过测定 [3 H]胸腺嘧啶核苷 ( [3 H]Td R)参入和结晶紫染色法测定平滑肌细胞增殖 ,研究了溶血磷脂酰胆碱 ( LPC)刺激牛脑微血管平滑肌细胞( BCMSMC)增殖的细胞内信号转导途径 .结果显示 ,LPC能浓度依赖性 ( 1 nmol· L-1- 1 0μmol·L-1)诱导 BCMSMC摄取 [3 H]Td R,在 LPC的浓度为 1 0μmol· L-1时作用达最大 ,cpm由 366± 1 42升至 1 761± 2 96( P<0 .0 1 ) ;LPC亦能浓度依赖性( 1 nmol· L-1- 1 0μmol· L-1)诱导 BCMSMC增殖 ,在 LPC浓度为 1 μmol· L-1时促增殖作用达坪值 ,A595nm由 0 .0 60± 0 .0 0 9增至 0 .1 0 0± 0 .0 1 5( P<0 .0 1 ) .丝裂原激活蛋白激酶 ( MAPK)特异性抑制剂 PD980 59( 2 - 50 μmol· L-1) ,血小板衍生生长因子受体抑制剂酪氨酸磷酸化抑制剂 AG 1 2 96( 2 -50 μmol· L-1)以及蛋白质酪氨酸激酶抑制剂除莠霉素 A( 2 - 1 0μmol· L-1)能浓度依赖性地抑制LPC的上述作用 .表明 LPC能促进 BCMSMC增殖 ,其细胞内信号转导与 MAPK途径有关 .     

HPLC测定多烯磷脂酰胆碱胶囊中的溶血磷脂酰胆碱

目的 采用HPLC-ELSD测定多烯磷脂酰胆碱胶囊中溶血磷脂酰胆碱的含量.方法 色谱柱为硅胶(250 mm×4.6mm,5 μm),流动相A为正己烷-异丙醇(3:4),流动相B为正己烷-异丙醇-水(3:4:0.75),梯度洗脱,流速为1.5 mL·min~(-1),空气流速为3.0 L·min~(-1),蒸发管温度为100 ℃.结果 溶血磷脂酰胆碱0.1～1.5 mg·mL~(-1)与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9997),平均回收率为99.90%.结论 所用方法简便、专属性好,可用于多烯磷脂酰胆碱胶囊中溶血磷脂酰胆碱的含量检测.     

丙泊酚中/长链脂肪乳注射液中溶血磷脂酰胆碱和溶血磷脂酰乙醇胺的含量测定

目的建立HPLC法测定丙泊酚中/长链脂肪乳注射液中溶血磷脂酰胆碱(LPC)和溶血磷脂酰乙醇胺(LPE)的含量。方法采用HPLC法,色谱柱:Lichrospher 100 DIOL(250 mm×4 mm,5μm);流动相:乙腈-水-冰醋酸-三乙胺(85∶15∶0.45∶0.05)为流动相A,正己烷-异丙醇(18∶30)溶液为流动相B;梯度洗脱;柱温:35℃。结果溶血磷脂酰胆碱和溶血磷脂酰乙醇胺的线性范围分别为0.03～0.25(r₁=0.999 7)和0.01～0.10(r₂=0.996 2)mg·mL^-1,定量限分别为0.72和0.31μg。结论该方法准确、可行,精密度高,可用于溶血磷脂酰胆碱和溶血磷脂酰乙醇胺的含量测定。     

HPLC-ELSD法同时测定氟比洛芬酯注射液中溶血磷脂酰胆碱和溶血磷脂酰乙醇胺的含量

摘要：目的:建立同时测定氟比洛芬酯注射液中溶血磷脂酰胆碱（LPC）和溶血磷脂酰乙醇胺（LPE）含量的方法。方法:采用HPLC法,蒸发光散射检测器,色谱柱为Zorbax RX-SIL（250 mm×4.6 mm,5μm）柱,以流动相A:甲醇-水-冰醋酸-三乙胺（85∶15∶0.45∶0.05）,流动相B:正己烷-异丙醇-流动相A（20∶48∶22）梯度洗脱,流速为1.0 ml·min-1,柱温为40℃,漂移管温度为75℃,雾化气流速为1.5 L·min-1,进样量为20μl。结果:LPC和LPE分别在82.72～517.03μg·ml-1（r=0.999 9）、19.19～119.93μg·ml-1（r=0.999 0）范围内,浓度的对数值与其峰面积的对数值呈现良好线性关系; LPC和LPE的回收率分别为95.44%（RSD=1.10%,n=9）,97.54%（RSD=1.52%,n=9）。36批制剂中均检出LPC和LPE,并且溶血磷脂含量随时间和温度增加而增加。结论:建议贮藏条件为25℃以下密闭储存,不可冷冻,有效期为12个月。该方法操作简便,可用于氟比洛芬酯注射液中有害杂质溶血磷脂的含量测定。     

银杏叶提取物对溶血磷脂酰胆碱引起的脑微血管细胞损伤的保 …

研究银杏叶提取物对溶血磷脂酰胆碱引进的小牛脑微血管内皮细胞损伤及小牛脑微血管平滑肌细胞增殖的保护作用。方法；以乳酸脱氢酶释放量为指标测定ＢＣＭＥＣ损伤，用结晶紫染色法测定ＢＣＭＳＭＣ增殖。     

普伐他汀对非对称性二甲基精氨酸促血管平滑肌细胞增殖的影响

目的　探讨非对称性二甲基精氨酸 (ADMA)对血管平滑肌细胞增殖的作用和普伐他汀对ADMA促平滑肌细胞增殖的影响及其机制。方法　用[3H]TdR掺入法和MTT比色法检测ADMA对培养的牛胸主动脉平滑肌细胞增殖作用的量效关系和时效关系 ,以及普伐他汀等药物对ADMA刺激平滑肌细胞增殖的影响。结果　用 30～ 30 0 μmol·L- 1ADMA分别孵育平滑肌细胞后 ,都明显增加血管平滑肌细胞DNA的合成 ,表现在 [3H]TdR掺入量由对照组的(6 38± 134)cpm增加到大剂量ADMA组的 (12 79±111)cpm。用 30 0 μmol·L- 1ADMA孵育细胞 2 4～ 96h呈时间依赖性地促进血管平滑肌细胞增殖 ,表现为 [3H]TdR掺入量随着时间的延长分别增加为对照组的 1.5 ,2 .7,4 .3和 5 .6倍。普伐他汀 (10 0 μmol·L- 1)可逆转ADMA所致的细胞DNA合成的增加 ,[3H]TdR掺入量由ADMA单独孵育组的 (6 10± 2 0 2 )cpm降低至普伐他汀处理组的 (35 6± 12 6 )cpm。此外 ,一氧化氮供体硝普钠和抗氧化剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐处理后也可逆转这种增加。MTT法测定细胞数也证明 ,30～ 30 0 μmol·L- 1普伐他汀呈剂量依赖性地对抗ADMA所致的平滑肌细胞增殖。结论ADMA可促进血管平滑肌细胞的增殖 ;普伐他汀对ADMA所诱导的平滑肌细胞增殖具有抑制作用 ;这两者均可能与细?     

普洛托品对兔胸主动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的　观察普洛托品 (Pro)对正常和内皮素 (ET)诱导的血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖的影响。方法　采用组织块贴壁法培养兔胸主动脉VSMC ,应用细胞计数、[3 H] TdR参入量、微量MTT比色测定及电镜法 ,观察Pro对VSMC增殖、DNA合成和细胞超微结构的变化。结果　ET对VSMC的增殖和DNA合成有显著的促进作用 ;1、10、10 0μmol·L-1浓度Pro能够逆转ET所致的 [3 H] TdR参入量、MTT比色的吸光度、细胞计数的增多及电镜下细胞超微结构的改变 ,且随着浓度的增加及时间的延长 ,抑制作用愈显著 ;10、10 0 μmol·L-1浓度Pro对未经ET处理的VSMC有抑制其增殖作用 ,但其抑制作用弱于ET处理组。结论　Pro可显著地抑制正常及ET诱导的VSMC增殖 ,并且对ET诱导的VSMC增殖抑制作用更明显 ,提示Pro可作为临床防治动脉粥样硬化的有效药物。     

牛磺酸拮抗溶血磷脂酸诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖作用

目的　观察牛磺酸 (Tau)对溶血磷脂酸 (LPA)诱导的大鼠血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖作用的影响。方法　在培养的大鼠血管平滑肌细胞上 ,测定3 H 胸腺嘧啶核苷(3 H TdR)参入和丝裂素活化蛋白激酶 (MAPK)活性 ;硫代巴比妥酸盐 (TBA)法测脂质过氧化终产物丙二醛 (MDA)含量。结果　LPA (1× 10 -9～ 1× 10 -7mol·L-1)呈浓度依赖性增加VSMC 3 H TdR参入 ,5、10和 2 0mmol·L-1Tau及MAPK抑制剂PD0 980 59预孵育后分别使LPA (1× 10 -7mol·L-1)诱导的3 H TdR参入较单独LPA组减少 15 %、34%、4 8%和 5 4 % (P <0 0 5或P <0 0 1)。LPA增加VSMCMAPK活性 ,5、10和 2 0mmol·L-1Tau预孵育降低LPA(1× 10 -7mol·L-1)刺激的MAPK活性 ,较单纯LPA孵育低14 %、35 %和 4 4 % (P <0 0 5或P <0 0 1)。随着加入LPA的浓度增加 ,细胞MDA含量增加。与 1× 10 -7mol·L-1LPA组比较 ,5、10和 2 0mmol·L-1Tau预处理的细胞较LPA单独孵育组细胞MDA含量分别低 18%、2 7%、4 5 % (P<0 0 5或P <0 0 1) ,LPA诱导细胞MDA生成的作用不受PD0 980 59预孵育的影响 (P >0 0 5 )。结论　LPA呈浓度依赖性促进VSMC增殖和脂质过氧化 ,前者与其细胞内信号传导MAPK途径有关 ,Tau可有效拮抗LPA诱导的VSMC增殖、MAPK激活和脂质过氧化损伤 ,Tau     

重组人白介素-10对大鼠血管平滑肌细胞增殖和细胞周期的影响

目的　观察重组人白介素 10 (rhIL 10 )分别对肿瘤坏死因子 (TNF α)和血小板源性生长因子 (PDGF BB)刺激下离体大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖和细胞周期的影响。方法　体外培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞 ,采用MTS/PES法确定血管平滑肌细胞的增殖状态 ,应用流式细胞术测定细胞周期。结果　与对照组相比 ,肿瘤坏死因子和血小板源性生长因子均对血管平滑肌细胞增殖具有明显的刺激作用 (P <0 0 5 )。rhIL 10单独应用对血管平滑肌细胞生长没有影响 (P >0 0 5 )。在TNF α和血小板源性生长因子分别刺激下 ,rhIL 10均可抑制血管平滑肌细胞的生长(P <0 0 5 )。流式细胞术测定的结果显示rhIL 10分别可以使TNF α和PDGF BB作用下的VSMCs大部分处于G0 /G1期 ,与对照组相比差异有显著性 (P <0 0 1)。结论　重组人白介素 10可抑制细胞因子和生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖     

拉马克啉对内皮素-1诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖及蛋白激酶C表达的作用

目的：探讨拉马克啉（levcromakalim）对内皮素-1（ET-1）诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖及蛋白激酶C（protein kinase C，PKC）表达的影响。方法：体外培养Wistar大鼠主动脉血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell，VSMCs），用ET-1诱导其增殖，用不同浓度拉马克啉共培养，MTT法评价VSMCs增殖情况，3H—TdR检测DNA合成，流式细胞术检测VSMCs凋亡，逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR），Western blot检测PKCamRNA及蛋白表达。结果：拉马克啉对ET-1所致VSMCs增殖有显著抑制作用，随浓度增加，其MTT活性细胞含量和3H—TdR掺入量都明显减少（P〈0．05）；拉马克啉呈剂量依赖性地增加G0／G1期VSMCs（P〈0．05），促使VSMCs凋亡增多（P〈0．05）；拉马克啉抑制VSMCs内PKCamRNA及蛋白表达。结论：拉马克啉抑制ET-1诱导的VSMCs增殖作用，可能的机制是通过下调VSMCs内PKCa表达水平而影响vSMCs增殖和凋亡。     

龙胆苦苷对大鼠血管平滑肌细胞增殖、迁移的影响

目的 观察龙胆苦苷对血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMC）增殖、迁移能力的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 体外分离培养大鼠血管平滑肌细胞,将血管平滑肌细胞随机分为分为control组、GPS处理组、PF-3758309+GPS组。采用噻唑蓝(MTT)法观察各组细胞增殖能力,计算细胞增殖抑制率;采用细胞划痕实验观察各组细胞迁移能力,计算细胞迁移率。采用Western blotting法检测各组细胞Pak4及MMP-2表达情况。结果 与对照组相比,龙胆苦苷处理组细胞增殖率及迁移率明显降低（P<0.01）,GPS组细胞内Pak4、MMP-2 表达水平明显降低（P<0.01）;而与GPS组相比,PF-3758309+GPS组可明显增加细胞增殖率及迁移率（P<0.05）,血管平滑肌细胞内 MMP-2 表达水平明显上调（P<0.05）。 结论 龙胆苦苷具有抑制血管平滑肌细胞增殖及迁移,其机制可能与抑制Pak4相关。     

Sauchinone inhibits angiotensin II-induced proliferation and migration of vascular smooth muscle cells

Hypertension is a common type of cardiovascular disease that remains a major cause of death in the world. Vascular remodelling is an important complication of hypertension, and vascular smooth muscle cells (VSMCs) play a major role in vascular remodelling. Sauchinone is one of the active lignins which has been found to possess vascular protective effects. However, the functional role of sauchinone in hypertension has not been investigated. The aim of this study was to evaluate the role of sauchinone in the angiotensin II (Ang II)-induced vascular remodelling model in VSMCs. The results showed that treatment of sauchinone inhibited Ang II-induced VSMCs proliferation and migration in VSMCs. Sauchinone treatment suppressed the reactive oxygen species (ROS) production and NADPH oxidase (NOX) activity in Ang II-induced VSMCs. The inhibitory effects of Ang II on expressions of VSMCs phenotype markers including α-smooth muscle actin (α-SMA), calponin, osteopontin were mitigated by sauchinone treatment. Furthermore, sauchinone inhibited Ang II-induced over-activation of TGF-β1/Smad3 signalling pathway in VSMCs. Taken together, this study identified sauchinone as a potential agent for preventing vascular remodelling in hypertension.     

金粉蕨素抑制大鼠主动脉平滑肌增殖作用及机制

目的 :观察金粉蕨素对牛血清刺激的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用 ,并对其作用机制进行初步探讨。方法 :体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞 ,以终浓度为 10 %的新生牛血清 (NCS)作为刺激因素 ,用噻唑蓝 (MTT)比色法和细胞计数法观察细胞增殖状况 ,用流式细胞仪分析细胞周期 ,用Westernblot实验测定蛋白表达。结果 :与 10 %牛血清组相比 ,不同浓度金粉蕨素组的MTT测定值与细胞数目均明显下降 (P <0 .0 5 ) ,其下降幅度呈浓度依赖性 ;10 μmol·L-1时达峰值 (P <0 .0 1) ;细胞周期分析显示 ,金粉蕨素组G1期百分比 (85 .1% )高于10 %牛血清组 (70 .0 % ) ,而S期比例 (4 .3% )低于10 %牛血清组 (16.4 % ) ;Westernblot结果显示给药组P ERK1 2蛋白表达明显低于同时间点牛血清组。结论 :金粉蕨素能阻止细胞周期由G0 G1期向S期推进 ,抑制血管平滑肌细胞增殖 ,此作用与其抑制ERK1 2磷酸化、影响MAPK ERK通路激活有关。