电离辐射诱导小鼠胸腺细胞G1期阻滞的分子调控初探

目的研究电离辐射诱导小鼠胸腺细胞Ｇ１期阻滞的分子通路。方法ＰＩ染色,流式细胞术检测细胞周期。单克隆抗体免疫荧光标记,流式细胞术检测蛋白表达。结果０５、１．０及２．０ＧｙＸ射线全身照射后１２小时及２．０Ｇｙ照射后２４小时小鼠胸腺细胞Ｇ１期细胞数明显增高。２．０Ｇｙ照射后ｐ５３蛋白表达在照射后１～８小时明显增高;ｐ２１蛋白表达在照射后４～４８小时明显增高;ＭＤＭ２蛋白表达在照射后４小时及８小时明显增高;而ＧＡＤＤ４５蛋白表达未见明显变化。结论０５～２．０ＧｙＸ射线全身照射可诱导小鼠胸腺细胞Ｇ１期阻滞。其分子通路主要是ｐ５３－ｐ２１通路。     

小鼠胸腺和牌细胞对淋巴因子反应的辐射剂量效应关系

作者研究了Ｃ５７ＢＬ／６小鼠经０．１～８．０ＧｙＸ射线全身照射后淋巴因子效应细胞反应性的变化．结果发现，照后２４小时胸腺细胞对ＩＬ－１反应的剂量效应曲线由两个斜率不同的成分组成，其Ｄ３７，分别为１．６５和４．０９Ｇｙ；照后１２和２４小时脾细胞对ＩＬ－２反应的Ｄ３７分别为５．５８和３．４６Ｇｙ；ＣＴＬＬ－２细胞在为０．５～１０Ｇｙ剂量范围内，对ＩＬ－２反应性呈剂量依赖性降低，Ｄ３７为８．７７Ｇｙ。提示ＩＬ－２效应细胞的辐射抗性高于ＩＬ－１效应细胞．     

X射线全身照射后脾细胞内［Ca2+］i对ConA反应性的变化

目的研究电离辐射对ＣｏｎＡ激活的脾细胞内游离钙离子（［Ｃａ２＋］ｉ）动员的影响,以探讨电离辐射免疫抑制作用的发生机理。方法采用Ｆｕｒａ２／ＡＭ双波长荧光测定法检测了Ｘ射线全身照射后的小鼠脾细胞内［Ｃａ２＋］ｉ对ＣｏｎＡ反应性的变化。结果小鼠接受０、０５、１、２、４和６Ｇｙ吸收剂量的Ｘ射线全身照射后２４小时,脾细胞内［Ｃａ２＋］ｉ对ＣｏｎＡ反应性呈剂量依赖性下降,表现为［Ｃａ２＋］ｉ上升幅度减小、上升至峰值时间延长。２ＧｙＸ射线全身照射后的时程观察表明,照后２小时细胞内［Ｃａ２＋］ｉ对ＣｏｎＡ反应性开始下降,２４小时达最低点,照后５天才略有回升。结论电离辐射所致免疫功能抑制与其抑制淋巴细胞内［Ｃａ２＋］ｉ动员等信息传递过程有关     

低剂量全身照射抑制小鼠癌细胞播散

小鼠受５０，７５，１００和１５０ｍＧｙＸ射线全身照射后２４小时经球后静脉注入Ｌｅｗｉｓ肺癌或Ｂ１６黑色素瘤细胞。注后１４天以计数肺肿瘤结节数为指标，发现受照小鼠癌细胞播散明显低于假照射对照小鼠。Ｌｅｗｉｓ肺癌细胞注入前２４小时接受７５ｍＧｙ全身照射小鼠与注入相同癌细胞数的假照射小鼠比较，发现照后２～６天脾脏ＮＫ细胞活性和ＩＬ－２分泌均增高。提示低剂量辐射可能通过增强免疫反应抑制癌细胞播散。     

小鼠胸腺和脾细胞对淋巴因子反应的辐射剂量效应关系

作者研究了Ｃ５７ＢＬ／６小鼠经０．１－８．０Ｇｙ Ｘ射线全身照射后淋巴因子效应细胞反应性的变。结果发现，照后２４小时胸腺细胞对ＩＬ－１反应的剂量效应曲线曲两个斜率不同的成分组成，其Ｄ３７分别为１．６５和４．０９Ｇｙ；照后１２和２４小时脾细胞对ＩＬ－２反应的Ｄ３７分别为５．５８和３．４６Ｇｙ；ＣＴＬＬ－２细胞在为０．５－１０Ｇｙ剂量范围内，对ＩＬ－２反应性呈剂量依赖性降低，Ｄ３７为８．７７Ｇｙ。提示     

低剂量X射线全身照射诱导小鼠胸腺细胞CD_3分子表达的适应性反应

采用免疫荧光流式细胞术（ＦＣＭ）观察了昆明种小鼠胸腺细胞ＣＤ３分子表达的变化。首次报道了０．０７５ＧｙＸ射线单次全身照射可诱导小鼠胸腺细胞ＣＤ３分子表达对其后１．５Ｇｙ攻击剂量照射的适应性反应。证实，１．５Ｇｙ全身照射后胸腺ＣＤ３阳性细胞明显减少，照后１８小时仅为假照射组的３３．７４％。当１．５Ｇｙ照射前６小时预先照射０．０７５Ｇｙ时，可明显减轻其后攻击剂量对ＣＤ３分子表达的抑制作用，此时，ＣＤ３阳性细胞数显著高于单纯攻击剂量对照组（Ｐ＜０．０１）。对其机理进行了讨论。     

低剂量X射线全身照射诱导小鼠胸腺细胞CD3分子表达的适应性反应

采用免疫荧光流式细胞术（ＦＣＭ）观察了昆明种小鼠胸腺细胞ＣＤ３分子表达的变化。首次报道了０．０７５ＧｙＸ射线单次全身照射可诱导小鼠胸腺细胞ＣＤ３分子表达对其后１．５Ｇｙ攻击剂量照射的适应性反应。证实，１．５Ｇｙ全身照射后胸腺ＣＤ３阳性细胞明显减少，照后１８小时仅为假照射组的３３．７４％。当１．５Ｇｙ照射前６小时预先照射０．０７５Ｇｙ时，可明显减轻其后攻击剂量对ＣＤ３分子表达的抑制作用，此时，ＣＤ３     

低剂量辐射对小鼠脾脏和胸腺Ⅰ型和Ⅱ型辅助性T细胞...

目的 研究低剂量辐射Ⅰ型辅助Ｔ细胞和Ⅱ型辅助性Ｔ细胞的影响，揭示低剂量辐射使Ｔｈ激活的分子机理。方法 采用分子杂交方法，检测Ｘ射线全身照射后小鼠脾脏和胸腺细胞ＩＦＮ－γ和ＩＬ－６ｍＲＮＡ的表达。结果 ７５ｍＧｙＸ射线全身照射后小鼠脾脏和胸腺ＩＦＮ－γ和ＩＬ－６ｍＲＮＡ表达水平明显增高。结论低剂量辐射射诱Ｔｈ１和Ｔｈ２矩形其分子机理调节Ｔｈ１，Ｔｈ２克隆发育的细胞因子的基因表达有关。     

低剂量辐射对小鼠脾脏和胸腺Ⅰ型和Ⅱ型辅助性T细胞的影响

目的研究低剂量辐射对Ⅰ型辅助性Ｔ细胞（Ｔｈ１）和Ⅱ型辅助性Ｔ细胞（Ｔｈ２）的影响，揭示低剂量辐射使Ｔｈ激活的分子机理。方法采用分子杂交方法，检测Ｘ射线全身照射后小鼠脾脏和胸腺细胞ＩＦＮ－γ和ＩＬ－６ｍＲＮＡ的表达。结果７５ｍＧｙＸ射线全身照射后小鼠脾脏和胸腺ＩＦＮ－γ和ＩＬ－６ｍＲＮＡ表达水平明显增高。结论低剂量辐射诱导Ｔｈ１和Ｔｈ２激活，其分子机理与其启动调节Ｔｈ１和Ｔｈ２克隆发育的细胞因子的基因表达有关     

不同剂量X射线全身照射后胸腺细胞游离钙浓度的变化时程

目的研究Ｘ射线全身照射后胸腺细胞游离钙浓度的变化时程，以揭示低剂量辐射免疫增强效应的分子机理。方法应用Ｆｕｒａ－２ＡＭ荧光探针，采用荧光分光光度法检测了小鼠胸腺细胞内游离钙浓度。结果７５ｍＧｙ全身照射后可使细胞内游离钙浓度增高，２４小时达峰值，７２小时回降至对照水平。结论低剂量辐射可促进Ｔ淋巴细胞信号传递     

X射线全身照射对免疫细胞共刺激分子表达的影响

目的：探讨低剂量电离辐射对免疫细胞表面分子的影响，方法：用流式细胞术FITC－CD28／PE－CTLA－4双染染法观察了小鼠胸腺和脾细胞的CD28和CTLA－4表达变化，用免疫细胞化学（ABC）法观察了小鼠腹腔巨噬细胞B7－1和B7－2的表达变化。结果：低剂量电离辐射和较高剂量电离辐射均能增强腹腔巨噬细胞B7分子的表达；同时发现，低量电离辐射显著增强胸腺和脾细胞CD28的表达，而CTLA－4的表达降低，脾细胞较胸腺细胞更明显。较高剂量电离辐射显著增强胸腺和脾细胞CTLA－4的表达，同时抑制两种细胞CD28的表达，以脾细胞为更显著，结论：共刺激分子CD28和B7的表达上调可能是低剂量电离辐射免疫兴奋效应机理中的重要因素。     

X射线全身照射后脾细胞内[Ca2+)]i对Con A反应性的变化

目的 研究电离辐射对ConA激活的脾细胞内游离钙离子[Ca²⁺]i)动员的影响, 以探讨电离辐射免疫抑制作用的发生机理。方法 采用Fura2/AM双波长荧光测定法检测了X射线全身照射后的小鼠脾细胞内[Ca²⁺]i对ConA反应性的变化。结果 小鼠接受0、0.5、1、2、4和6Gy吸收剂量的X射线全身照射后24小时, 脾细胞内[Ca²⁺]i对ConA反应性呈剂量依赖性下降, 表现为[Ca²⁺]i上升幅度减小、上升至峰值时间延长。2GyX射线全身照射后的时程观察表明, 照后2小时细胞内[Ca²⁺]i对ConA反应性开始下降, 24小时达最低点, 照后5天才略有回升。结论 电离辐射所致免疫功能抑制与其抑制淋巴细胞内[Ca²⁺]i动员等信息传递过程有关。     

电离辐射对p16基因转录及蛋白表达的影响

目的　研究电离辐射对p16基因转录及蛋白表达的影响。方法　采用Northernblot检测p16mRNA水平的变化 ;采用单克隆抗体免疫荧光标记及流式细胞术检测p16蛋白表达的变化。结果　研究证实 ,2 0Gy照射后 2～ 2 4h ,胸腺细胞p16mRNA水平明显增高 ,8～ 4 8hp16蛋白表达显著增高 (P <0 0 5～P <0 0 1) ;照射后 2～ 8h脾细胞p16mRNA水平明显增高 ,2 4hp16蛋白表达显著增高 (P <0 0 5 )。研究还证实 ,0 5～ 6 0Gy照射后 ,胸腺细胞p16mRNA水平呈剂量依赖性增高 ,p16蛋白表达在 1 0～ 4 0Gy组显著增高 (P <0 0 5～P <0 0 1) ;脾细胞p16mRNA水平亦增高 ,但增幅远低于胸腺细胞 ,p16蛋白表达在 1 0～ 4 0Gy组显著增高 (P <0 0 5～P <0 0 1)。结论　电离辐射可诱导p16基因转录及蛋白表达增高 ,其增高幅度表现出一定的细胞异质性。     

X射线全身照射诱导小鼠派伊氏板细胞凋亡及其机理的研究

目的 研究不同剂量X射线全身照射后小鼠派伊氏板细胞凋亡相关基因蛋白表达的变化规律。初步阐明凋亡调控的部分分子机理。方法 应用光、电镜技术观察小鼠派伊氏板细胞凋亡的形态改变,并用流式细胞术检测小鼠派伊氏板细胞Bcl-xL及Fas-L蛋白表达的变化。结果 2GyX射线全身照射后派伊氏板细胞凋亡增加,且Bcl-xL蛋白表达下降,Fas-L蛋白表达升高;75mGyX射线全身照射后,派伊氏板细胞凋亡减少,且Bcl-xL蛋白表达升高,Fas-L蛋白表达下降。结论 凋亡相关基因Bcl-xL、Fas-L在电离辐射诱导的派伊氏板细胞凋亡方面起重要的调控作用。     

X射线全身照射对小鼠腹腔巨噬细胞NO产生的影响

目的：观察７５ｍＧｙ、２．０ＧｙＸ射线全身照后不同的时间,小鼠腹腔巨噬细胞ＮＯ产生的时程变化及不同剂量照射后２４ｈ时ＮＯ、ｉＮＯＳ的含量变化。方法分光光度法及免疫组织化学方法。结果：ｉＮＯＳ和ＮＯ产的生与剂量呈正相关。２．０Ｇｙ照射后,ＮＯ从６ｈ到４８ｈ随时间推移产生量逐渐增加,４８ｈ达峰值,为对照的３．８倍,而后回降。结论电离辐射可刺激巨噬细胞合成ｉＮＯＳ及产生ＮＯ。     

电离辐射对小鼠骨髓细胞cyclinB1、cdc2基因转录的影响

目的　研究X射线全身照射对小鼠骨髓细胞cyclinB1、cdc2基因转录的影响 ,以探讨电离辐射诱导小鼠骨髓细胞G2 期阻滞的分子机理。方法　采用流式细胞仪检测了X射线全身照射后小鼠骨髓细胞周期进程的变化。采用半定量RT PCR方法分别检测cyclinB1、cdc2基因转录水平变化。结果　 2GyX射线全身照射后 4及 1 2hG2 +M期细胞百分率升高 (P <0 0 5) ;0 5～ 6Gy照射后 1 2hG2 +M细胞百分率呈剂量依赖性增加 (P <0 0 5～P <0 0 1 )。 2GyX射线照射后 2～ 48h小鼠骨髓细胞cyclinB1转录水平在各个时间点未见明显变化 ,0 5～ 6GyX射线照射后 1 2h ,骨髓细胞cyclinB1基因转录在各剂量点均未见明显改变 ;2GyX射线照射后小鼠骨髓细胞cdc2转录水平从照后 4h即开始不同程度下降 ,1 2h达最低值 (为假照射组的 46 % ) ,照射后 48h开始恢复 ,0 5～ 6GyX射线照射后 1 2h ,骨髓细胞cdc2基因转录水平在各剂量点均明显降低 ,分别达到假照射组的40 %～ 70 %。结论　电离辐射可诱导小鼠骨髓细胞发生G2 期阻滞 ,cdc2激酶活性下降在G2 期阻滞中起重要作用。     

电离辐射对胸腺细胞及脾细胞p16、CyclinD1、CDK4蛋白表达的影响

目的　研究电离辐射对小鼠胸腺细胞及脾细胞中p16、CyclinD1及CDK4蛋白表达的影响。方法　采用单克隆抗体免疫荧光标记及流式细胞术检测蛋白表达的变化。结果　时效实验证实 ,2 0GyX射线全身照射后 8,2 4及 48h ,胸腺细胞p16蛋白表达显著增高 (分别P <0 0 5、P <0 0 1及P <0 0 5) ;照射后 2 4h ,脾细胞p16蛋白表达显著增高 (P <0 0 5)。然而 ,照射后 8～ 2 4h ,胸腺细胞CDK4蛋白表达显著降低 (P <0 0 5～P <0 0 1) ;照射后 8～ 72h ,脾细胞CDK4蛋白表达显著降低(P <0 0 5～P <0 0 1)。量效实验证实 ,1 0 ,2 0及 4 0Gy全身照射后 2 4h ,胸腺细胞及脾细胞p16蛋白表达均显著增高 (P <0 0 5～P <0 0 1)。然而 ,2 0Gy照射后胸腺细胞CDK4蛋白表达显著降低(P <0 0 5) ;0 5～ 6 0Gy照射后脾细胞CDK4蛋白表达显著降低 (P <0 0 5～P <0 0 1)。研究还发现 ,胸腺细胞及脾细胞中CyclinD1蛋白表达于照射后均明显降低。结论　电离辐射可诱导胸腺细胞及脾细胞中p16蛋白表达增高。p16 CyclinD1 CDK4通路可能在X射线诱导胸腺细胞G1期阻滞中起重要作用     

低剂量辐射诱导小鼠胸腺细胞及其亚组的适应性反应

目的研究低剂量辐射预先照射以及随后大剂量照射后小鼠胸腺细胞Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）、ＣＤ３、ＣＤ４和ＣＤ８分子表达的变化。方法ＴＣＲ、ＣＤ３表达采用间接荧光流式细胞术检测,ＣＤ４、ＣＤ８表达采用双参数直接免疫荧光流式细胞术检测。结果实验结果表明：单纯１５ＧｙＸ射线全身照射后ＴＣＲ,ＣＤ３阳性细胞数以及ＣＤ４－Ｄ８－,ＣＤ４＋ＣＤ８＋,ＣＤ４＋ＣＤ８－和ＣＤ４－ＣＤ８＋细胞数明显减少,当１５ＧｙＸ射线全身照射前６小时预先照射００７５Ｇｙ时,可明显减轻其后１５Ｇｙ照射对ＴＣＲ＋,ＣＤ３＋,ＣＤ４＋ＣＤ８＋,ＣＤ４＋ＣＤ８－和ＣＤ４－ＣＤ８＋的损伤作用。表现为各亚组细胞数显著高于单纯１５Ｇｙ照射组。ＣＤ４－ＣＤ８－亚组的细胞数无明显变化。结论００７５ＧｙＸ射线全身照射能够诱导胸腺细胞ＴＣＲ＋,ＣＤ３＋,ＣＤ４＋ＣＤ８＋,ＣＤ４＋ＣＤ８－和ＣＤ４－ＣＤ８＋亚组细胞的适应性反应。