铅抑制急性分离的大鼠背根神经节慢失活钾电流

目的　慢失活外向K+电流 (ID)对于长时程持续刺激中延迟动作电位的发放 ,调节其发放频率和复极化有重要意义 ,其改变对神经元的兴奋性产生重要影响 ,因此研究铅 (Pb2 +)对神经元细胞ID 的效应 ,并初步探讨其作用机理。方法　应用全细胞膜片钳技术 ,根据动力学和药理学特性分离鉴定大鼠背根神经节 (DRG)ID,观察Pb2 +对ID 的抑制效应。结果　Pb2 +以浓度依赖性方式抑制ID。 0 .1,1.0 ,10 .0和 10 0 .0 μmol·L- 1Pb2 +对 + 6 0mV处ID的抑制率分别为 (6 .9± 0 .6 ) %、(2 9.3± 3.0 ) %、(85 .9± 5 .1) %和 (99.4± 7.0 ) % (n =15 ) ,IC50 为2 .4 μmol·L- 1。ID 的激活具有电压依赖性 ,Pb2 +对ID 的抑制作用也具有电压依赖性 ,最大抑制作用发生在 + 6 0mV处。 10 .0 μmol·L- 1Pb2 +使得ID 电流的稳态激活曲线向去极化方向移动 ,并延长ID 的激活时间常数 ,提示Pb2 +增加了ID 的激活时程。结论　Pb2 +显著抑制DRG神经元ID 电流 ,导致神经元的兴奋性增加 ,这可能是Pb2 +影响神经细胞功能的作用机理之一。     

培养大鼠颈上神经节细胞胆碱诱发电流的特征

目的　探讨培养大鼠颈上神经节神经元胆碱诱发电流的反应特征。方法　在培养的大鼠颈上交感节神经元上 ,以α7 nAChR选择性激动剂choline为工具药 ,通过喷射给药 ,采用膜片钳全细胞记录方式研究胆碱诱发电流的电生理学特征。结果　在培养的大鼠颈上交感节神经元上 ,喷射给予α7 nAChR选择性激动剂胆碱可诱发出一内向电流 ,其EC50 值为 8 2 5mmol·L-1,电流包含快、慢两种成分 ,并能被α7 nAChR选择性拮抗剂methyllycaconitine(MLA ,1μmol·L-1)以及α bungarotoxin(α Bgt,1μmol·L-1)明显抑制 ;间隔10、2 0s反复给予胆碱 (10mmol·L-1,1s)可导致诱发电流幅度明显下降 ,电流峰值分别下降为初始幅度的 33 4 %±6 3% (n =3)、32 7%± 5 5 % (n =3) ,持续给予胆碱 (10mmol·L-1,30s)亦可导致该诱发电流幅度明显下降 ,停止刺激后 3min诱发电流幅度可恢复为初始幅度的73 9%± 13 3% (n =10 )。结论　以胆碱激活培养的大鼠颈上交感节神经元α7型N受体 (α7 nAChR)可产生内向电流 ,该电流具有失敏特性     

托吡酯对原代培养海马神经元癫痫样放电的抑制效应

目的:探讨托吡酯对原代培养海马神经元癫痫样放电的抑制作用及其特点。方法:分离原代培养 1日龄SD大鼠海马神经元,d9~15采用膜片钳全细胞模式记录托吡酯 ( 20, 100μmol·L-1 )和苯妥英 (10μmol·L-1 )对电流刺激及谷氨酸诱导神经元癫痫样放电的抑制效应。结果:苯妥英(10μmol·L-1 )、托吡酯(20, 100μmol·L-1 )抑制电流刺激诱导神经元动作电位,分别减少 100 %,(38±25) %和 ( 70±19 ) %。苯妥英 ( 10μmol·L-1 )及托吡酯(100μmol·L-1 )分别完全或部分抑制谷氨酸诱导海马神经元的癫痫样放电。结论:托吡酯抑制原代培养海马神经元的癫痫样放电,并与其浓度及作用时间有关。     

大鼠酸感受离子通道亚基2a表达质粒的构建及生物学特性考察

目的构建大鼠酸感受离子通道亚基2a(acid-sensingion channel subunit 2a,ASIC2a)的表达质粒并研究其组成的同聚体离子通道的生物学特性。方法使用分子生物学技术构建大鼠ASIC2a亚基表达质粒;通过体外转录技术,使编码ASIC2a亚基的cRNA在爪蟾卵母细胞内表达并在膜表面形成同聚体离子通道;使用双电极电压钳技术研究ASIC2a的生物学特性。结果在注射ASIC2a亚基cRNA的爪蟾卵母细胞上,降低胞外液pH值可诱导出内向电流。H+诱发的ASIC2a内向电流具有稳态失活成分可被氨氯吡咪可逆性阻断,其pH50为5.12。提高胞外Ca2+浓度可降低H+诱发的电流幅度,其IC50为11.98 mmol.L-1。当细胞外液中无Na+时,H+基本上不能诱发出内向电流;当同时去除细胞外液中Na+和K+时,H+可诱发出外向电流。结论成功构建ASIC2a表达质粒;ASIC2a除了对Na+通透外,对K+也有一定的通透性,胞外Ca2+抑制ASIC2a孔道的开放。     

咖啡因对急性分离的大鼠背根神经节细胞H-电流的影响

目的　探讨咖啡因在镇痛中的作用机制。方法　应用膜片钳技术研究了咖啡因对大鼠的 3种不同直径大小的背根神经节 (DRG)细胞H 电流特性的影响。结果　 5 .0mmol·L- 1咖啡因对DRG大细胞、中细胞和小细胞的H 电流分别降低了 (80±4 ) % ,(4 0± 3) %和 (11.0± 2 .3) %。结论　咖啡因使H 通道的电压敏感性下降 ,H 通道的激活电压升高。咖啡因对大型和中型DRG细胞H 电流的抑制作用 ,可能是发挥抗伤害性感受和用作镇痛佐剂的作用机制之一     

罗哌卡因和布比卡因对大鼠背根神经节钠通道阻滞作用的比较

目的:比较局麻药罗哌卡因和布比卡因对大鼠背根神经节(DRG)河豚毒素(TTX)敏感(TTX-S)和TTX不敏感(TTX-R)的钠通道阻滞作用的差别,探讨罗哌卡因麻醉时产生感觉运动分离的可能机制。方法:急性分散大鼠背根神经节细胞,利用全细胞膜片钳技术记录DRG细胞TTX-S和TTX-R钠电流,通过浴槽内给药,观察罗哌卡因和布比卡因对TTX-S和TTX-R钠电流的作用。结果:TTX-S钠电流主要产生于大的DRG细胞,而TTX-R钠电流主要产生于小的DRG细胞;罗哌卡因对TTX-R钠电流的半数抑制浓度(IC50)为65.7±6.1μmol·L-1,远低于其对TTX-S钠电流的IC50(246.8±11.2μmol·L-1,P<0.01);布比卡因对TTX-R和TTX-S钠电流的IC50值基本相同(27.2±6.2μmol·L-1vs29.5±2.9μmol·L-1,P>0.05)。结论:罗哌卡因优先阻滞TTX-R钠通道,对TTX-R钠通道和TTX-S钠通道的选择性阻滞是其硬膜外麻醉时感觉运动分离的原因之一。     

苯佐卡因对大鼠背根神经节神经元河豚毒素不敏感型钠离子通道的影响

目的研究苯佐卡因(BZC)对大鼠背根神经节(DRG)神经元河豚毒素不敏感型(TTX-r)钠电流的影响,探讨其镇痛作用的机制。方法酶解法分离新生大鼠单个DRG神经元,应用全细胞膜片钳技术记录不同浓度BZC对TTX-r钠电流的影响。结果 BZC浓度依赖性静息阻断TTX-r钠电流,30、100和300μmol.L-1的BZC分别使TTX-r钠电流峰值抑制率达(18.83±8.51)%、(33.08±9.19)%、(58.91±12.02)%,并使TTX-r钠电流稳态失活曲线浓度依赖性向超极化方向移动。结论 BZC浓度依赖性阻断DRG神经元TTX-r钠离子通道并改变通道的失活,可能是其影响痛觉传导通路以及产生镇痛作用的机制之一。     

苄基四氢巴马汀对大鼠心室肌细胞瞬时外向钾电流的影响

利用全细胞膜片钳技术测定大鼠心室肌细胞的Ito,研究苄基四氢巴马汀 (BTHP)对大鼠心室肌瞬时外向钾电流 (Ito)的影响 .结果显示 ,5 .0 μmol·L- 1BTHP可以降低Ito,使Ito幅值从 (13.8± 2 .2 )pA·pF- 1降至 (5 .1± 1.4 )pA·pF- 1(P <0 .0 1) .在 1～ 10 0μmol·L- 1范围内BTHP的作用呈浓度依赖性 ,IC50 为3.6μmol·L- 1,该药不改变Ito电流 电压曲线的形状 ,而使电流幅值减少 .5 .0 μmol·L- 1BTHP使稳态激活曲线右移 ,半激活电压 (V1/2 )从 (- 6.8±0 .2 )mV移至 (- 1.5± 0 .1)mV ,但曲线斜率基本不变 .BTHP对失活曲线影响不大 ,5 .0 μmol·L- 1BTHP使通道失活后恢复时间常数从 (75± 19)ms延长为(119± 2 1)ms(P <0 .0 1) .结果说明 ,BTHP浓度依赖地阻滞大鼠心室肌细胞的Ito.     

Ca~(2+)经钙激活非选择性阳离子通道进入ECV304内皮细胞

目的　研究钙离子进入ECV30 4内皮细胞株的途径和血管紧张素Ⅱ (AⅡ )对钙内流的影响。方法　用膜片钳的细胞贴附式和全细胞方式记录ECV30 4内皮细胞的通道活动。结果　 (1 )在记录单通道电流时电极液含 1 2 0mmol·L- 1 CaCl2 ,细胞浴液不含K+ 、Na+ 时 ,Ca2 + 经非选择性阳离子通道 (CAN)内流的电导为γ0 =(1 2 90± 2 1 1 ) pS(n =4)。1× 1 0 - 7mol·L- 1 AⅡ可显著增强通道电流幅度和延长通道开放时 ,其电导增大为γ1 =(2 2 1 8± 2 2 9)pS(n =4)。全细胞记录得到的结果与单通道的一致。 (2 )用全细胞方式记录到ECV30 4内皮细胞的电压依赖性钙通道电流 ,记录到该峰值电流为 (2 9 32± 3 56)pA(n =4) ,2 0 μmol·L- 1 nifedepine能抑制这个峰值电流 ,被抑制后的电流峰值为 (6 0 0± 3 94)pA(n =4)。 2 μmol·L- 1 BayK8644能显著激活通道活动。结论　Ca2 + 经CAN进入ECV30 4细胞 ,AⅡ可显著增强CAN的钙流     

盐酸埃他卡林对脑神经元钠、钾、钙通道的影响

目的　研究盐酸埃他卡林 (Ipt)对脑神经元钠、钾、钙通道的影响。方法　在原代培养的大鼠海马神经元上 ,应用膜片钳全细胞记录技术观察Ipt对钠、钾、钙离子通道电流的影响。结果　Ipt对钠、钙电流幅度以及电流 -电压曲线无影响 ,可增强外向钾电流幅度 ,使电流 -电压曲线上移。其中 ,Ipt 1、10、10 0 μmol·L-1分别使钾通道电流峰值增大为给药前的 (12 1 9± 8 1) %、(114 7± 7 1) %和 (10 9 1±10 0 ) % (P <0 0 1～ 0 0 5 )。给予盐酸埃他卡林 1μmol·L-1的同时给予ATP敏感性钾通道拮抗剂格列本脲 30 μmol·L-1时 ,对钾通道电流无影响。结论　盐酸埃他卡林对脑神经元ATP敏感性钾通道具有激活作用 ,它不影响神经元钠通道和钙通道     

川芎嗪对大鼠背根神经节细胞P2X嘌呤受体介导反应的作用

目的探讨川芎嗪(tetram ethy1pyrazine,TMP)对嘌呤2X(P2X)受体介导反应的作用。方法在大鼠新鲜分离的背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)神经元标本上应用全细胞膜片钳技术记录川芎嗪对P2X受体激动剂激活电流的影响。结果外加ATP(1~1 000μmol.L-1)可引起DRG神经元产生激活电流(n=102),ATP-激活电流(IATP)显示快失敏和慢失敏两种形式的内向电流。预加川芎嗪(0.1~10mmol.L-1)后,大部分(89.2%,91/102)受检细胞可观察到ATP(100μmol.L-1)-激活电流出现明显的抑制作用。川芎嗪(1 mmol.L-1)使α,-βm eATP(10μmol.L-1)-激活电流减小。预加川芎嗪(1 mmol.L-1)后ATP(1~1 000μmol.L-1)激活电流的剂量-效应曲线明显下移。预加川芎嗪(1 mmol.L-1)前后ATP(100μmol.L-1)的I-V曲线反转电位值不变,均接近0 mV。川芎嗪(1 mmol.L-1)可明显抑制被前列腺素E2(100μmol.L-1)或P物质(0.1μmol.L-1)增大的ATP激活电流。通过微电极胞内透析注入PKA抑制剂H89(10μmol.L-1)至胞内,使川芎嗪(1 mmol.L-1)抑制ATP(100μmol.L-1)激活电流的作用减小。结论川芎嗪可能是通过PKA系统以及P2X受体离子通道复合体细胞外环的变构调制点影响P2X受体激动剂在大鼠DRG神经元的激活电流。     

龙血素B抑制大鼠背根神经节细胞辣椒素诱发的电流反应

目的探讨龙血素B对大鼠背根神经节细胞辣椒素诱发的辣椒素受体电流的影响。方法采用全细胞膜片钳技术在急性分离的大鼠背根神经节细胞上观察龙血素B对辣椒素诱发的辣椒素受体电流的影响。结果①在-60mV的钳制电位下,辣椒素受体拮抗剂辣椒卓平可以完全抑制辣椒素受体电流;②不同浓度的龙血素B溶液对辣椒素诱发的受体电流具有浓度依赖的抑制作用;2.0、4.0、8.0和16.0μmol.L-1的龙血素B溶液对辣椒素诱发的受体电流峰值的抑制率分别为15.36%±2.12%、36.41%±2.43%、76.26%±2.16%和96.69%±3.21%(n=10,P<0.05),半数抑制浓度(IC50)为4.9μmol.L-1,Hill系数为2.29。结论龙血素B可以明显抑制辣椒素诱发的辣椒素受体电流,影响痛觉信息的传入,这可能是以龙血素B为重要成分的中药血竭产生镇痛作用的机制之一。     

Inhibition of acid‐sensing ion channel currents by propofol in rat dorsal root ganglion neurons

相似文献   

铝对大鼠背根神经节分离神经元GABA激活电流的调制作用

目的　研究三氯化铝 (AlCl3)对大鼠背根神经节分离神经元γ 氨基丁酸 (GABA)激活电流的作用。方法　应用全细胞膜片钳技术在新鲜分离的大鼠背根神经节 (DRG)神经元上观察AlCl3 对GABA激活电流的影响。结果　大部分受检细胞 (4 6 /5 8)对GABA(1～ 10 0 0 μmol·L-1)敏感。在这 46个细胞中 ,单独加AlCl3 可引起三类膜反应 :(1)外向电流 (3/4 6 ) ;(2 )内向电流 (5 /4 6 ) ;(3)无反应 (38/4 6 )。与GABA激活的内向电流相比 ,AlCl3 激活电流幅值要小得多。预加较低浓度 (≤ 10 0 μmol·L-1)AlCl3 对GABA激活电流影响如下 :产生增强效应的细胞为 32 /38,并具有浓度依赖性 ;产生抑制作用的细胞为 4/38;无明显作用的细胞为 2 /38。较高浓度 (10 0 0 μmol·L-1)AlCl3 抑制GABA激活电流 (n2 0 0 0 0 3 16收稿 ,2 0 0 0 0 7 12修回1 江西医学院生理教研室 ,南昌　 330 0 0 6作者简介 :梁尚栋 ,男 ,41岁 ,医学硕士 ,副教授 ,主要研究方向 :神经生理学 ;李之望 ,男 ,教授 ,主要研究方向 :神经生理和药理学=8)。AlCl3 对GABA激活电流的增强作用既可增强峰电流也可增强稳态部分。结论　AlCl3 改变GABAA 受体的机能。     

吗啡对原代培养大鼠海马神经元CCK受体mRNA表达的影响

目的探讨原代培养大鼠海马神经元上胆囊收缩素(cholecystokinin,CCK)受体CCK-AR及CCK-BR mRNA表达及吗啡对其表达的影响。方法采用新生大鼠海马神经元无血清原代培养技术,用吗啡(100μmol·L-1培养基)孵育3,6,12,18,24,36,48,72h,以及采用不同浓度吗啡(10,100,150μmol·L-1)孵育6、30h后,RT-PCR及测序方法观察CCK-AR及CCK-BR mRNA表达及吗啡对其表达的影响。结果RT-PCR结果显示,CCK-AR和CCK-BR mRNA在原代大鼠海马神经元上均有表达;CCK-AR mRNA RT-PCR扩增产物为218bp,CCK-BR mRNA RT-PCR扩增产物为444bp,经测序证实结果的可靠性;CCK-BR mRNA的表达量明显高于CCK-AR。吗啡作用后可使2种CCK受体mRNA表达上调。吗啡浓度及作用时间的不同对CCK-AR和CCK-BRmRNA表达的影响不同。结论原代大鼠海马神经元上有CCK-AR和CCK-BR,以CCK-BR为主;吗啡可使2种CCK受体mRNA表达上调。     

Oxytocin inhibits the activity of acid-sensing ion channels through the vasopressin,V1A receptor in primary sensory neurons

BACKGROUND AND PURPOSE

A growing number of studies have demonstrated that oxytocin (OT) plays an analgesic role in modulation of nociception and pain. Most work to date has focused on the central mechanisms of OT analgesia, but little is known about whether peripheral mechanisms are also involved. Acid-sensing ion channels (ASICs) are distributed in peripheral sensory neurons and participate in nociception. Here, we investigated the effects of OT on the activity of ASICs in dorsal root ganglion (DRG) neurons.

EXPERIMENTAL APPROACH

Electrophysiological experiments were performed on neurons from rat DRG. Nociceptive behaviour was induced by acetic acid in rats and mice lacking vasopressin, V_1A receptors.

KEY RESULTS

OT inhibited the functional activity of native ASICs. Firstly, OT dose-dependently decreased the amplitude of ASIC currents in DRG neurons. Secondly, OT inhibition of ASIC currents was mimicked by arginine vasopressin (AVP) and completely blocked by the V_1A receptor antagonist SR49059, but not by the OT receptor antagonist L-368899. Thirdly, OT altered acidosis-evoked membrane excitability of DRG neurons and significantly decreased the amplitude of the depolarization and number of action potentials induced by acid stimuli. Finally, peripherally administered OT or AVP inhibited nociceptive responses to intraplantar injection of acetic acid in rats. Both OT and AVP also induced an analgesic effect on acidosis-evoked pain in wild-type mice, but not in V_1A receptor knockout mice.

CONCLUSIONS AND IMPLICATIONS

These results reveal a novel peripheral mechanism for the analgesic effect of OT involving the modulation of native ASICs in primary sensory neurons mediated by V_1A receptors.     

6-[4-(4′-吡啶)氨基苯]-4,5-二氢-3(2H)哒嗪酮对大鼠胸主动脉环收缩功能的影响

目的研究新型钙增敏强心剂6-[4-(4′-吡啶)氨基苯]-4,5-二氢-3(2H)哒嗪酮(MCI-154)的扩血管作用机制。方法采用生物张力换能器及生理记录仪测定大鼠离体胸主动脉环和蜕膜胸主动脉环的收缩张力。结果MCI-154可浓度依赖性抑制1nmol.L-1~10μmol.L-1去甲肾上腺素(pD2′为4.21±0.23)和80mmol.L-1KCl(IC50为7μmol.L-1)引起的血管环收缩,提示其可通过抑制血管平滑肌细胞膜上受体操纵性和电压依赖性钙通道而减少胞外钙内流。在无Ca2+K-H液中,MCI-154预处理可浓度依赖性降低3μmol.L-1苯肾上腺素(IC50为5μmol.L-1)及20mmol.L-1咖啡因(IC50为16μmol.L-1)引起的血管环收缩张力,提示其可抑制血管平滑肌细胞胞内钙释放。在1μmol.L-1Ca2+溶液中,MCI-154可显著降低蜕膜血管环收缩张力(IC50为10μmol.L-1),提示其可降低血管平滑肌对Ca2+的敏感性。结论MCI-154可通过抑制血管平滑肌胞外钙内流、胞内钙释放和降低其对Ca2+敏感性来降低血管平滑肌收缩张力,体外具有扩血管效应。     

Urocortin舒张自发性高血压大鼠胸主动脉与NO和K~+通道的关系

目的探讨Urocortin(Ucn)对自发性高血压大鼠(SHR)胸主动脉舒缩功能的作用及机制。方法采用体外血管灌流,观察Ucn对SHR胸主动脉的舒张作用,以及左旋硝基精氨酸甲酯(N(ω)n itro-L-argin ine methyl ester,L-NAME)、亚甲蓝(M ethylene B lue,MB)和格列本脲(G lybenc lam ide)对其舒张作用的影响。结果Ucn(1 nmol.L-1~1μmol.L-1)可明显舒张内皮完整和去内皮SHR胸主动脉(P<0.01),此作用具有剂量依赖性;一氧化氮(NO)合成酶抑制剂L-NAME(100μmol.L-1)和鸟苷酸环化酶(GC)抑制剂MB部分抑制Ucn舒张血管的作用,而且增强去甲肾上腺素(NE)产生的收缩反应。ATP敏感钾通道(KATP)阻断剂格列本脲(10μmol.L-1)可减弱Ucn的舒血管作用。结论Ucn对SHR血管具有内皮依赖性和非内皮依赖性舒张作用,此作用部分是Ucn增加血管内皮细胞NO水平实现的,并且与NO-cGMP通路和KATP通道有关。