共轭亚油酸对人胃腺癌细胞侵袭及转移相关基因表达的影响

目的 研究c9,t11－共轭亚油酸（CLA）对人胃腺癌细胞（SGC－7901）侵袭能力的影响,探讨其抑制肿瘤转移的可能机制。方法 用重组基底膜侵袭实验评价癌细胞侵袭能力;用逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）检测SGC－7901细胞中组织基质金属蛋白酶抑制剂（TIMP）－1、TIMP－2和nm23-H1mRNA的表达。结果 在200、100和50μmol/L浓度时,c9,t11-CLA对SGC－7901细胞侵袭重组基底膜的抑制率分别为53.7%、40.9%和29.3%。c9,t11-CLA可诱导SGC－7901细胞中TIMP－1、TIMP－2和nm23-H1mRNA的表达。结论 c9,t11-CLA抑制SGC-7901细胞侵袭重组基底膜。c9,t11-CLA的抗侵袭活性与诱导肿瘤细胞中TIMP－1、TIMP－2和nm23-H1mRNA的表达等有关。     

环氧合酶-2在c9,t11-共轭亚油酸抑制肿瘤细胞转移中的作用

目的 研究c9,t11-共轭亚油酸（c9,t11-CLA）抑制人胃腺癌细胞（SGC-7901）转移作用与亚油酸代谢途径中限速酶环氧合酶-2（COX-2）的关系。方法采用体外细胞培养方法,用COX-2的选择性抑制剂NS．398抑制SGC-7901细胞中COX-2的活性,再加入200、100、50和25μmol／L浓度的c9,t11-CLA,利用重组基底膜侵袭实验、黏附实验、趋向运动实验检测c9,t11-CLA抑制肿瘤细胞转移的作用与COX-2的关系。结果与NS-398组比较,NS-398＋100Ixmol／Lc9,t11-CLA和NS-398＋200μmol／L c9,t11-CLA对SGC-7901细胞的侵袭有明显的抑制作用,穿过膜的细胞数分别为48．7±1．5（F=14．309,P=0．000）和43．7±4．0（F=19．005,P=0．000）;NS-398＋200μmol／L c9,t11-CLA组能显著降低SGC-7901细胞对基质成分层粘连蛋白、纤维粘连蛋白和基质胶的黏附作用,所测吸光度值（A值）分别为0．052±0．011,0．058±0．008（F=3．063,P=0．021）和0．042±0．004（F=6．692,P=0．001;F=11．999,P=0．000）;NS-398＋200ixmol／L c9,t11-CLA对SGC-7901细胞的趋向运动能力无明显的抑制作用（F=1．380,P=0．276）,其中NS-398＋2001xmol／L c9,t11-CLA组细胞数为26．6±3．4。结论 c9,t11-CLA具有抑制SGC-7901细胞体外侵袭能力、黏附能力和趋向运动能力,这种抑制作用可能与COX-2途径有关。     

共轭亚油酸诱导人乳腺癌细胞(MCF-7)凋亡的作用

目的　为了研究共轭亚油酸单体 (c9,t11 CLA)对人乳腺癌细胞 (MCF 7)凋亡的影响。方法　采用细胞生长曲线 ,凋亡细胞的荧光显微镜和电镜观察、流式细胞光度术的检测以及p5 3蛋白表达的方法 ,观察了用不同浓度c9,t11 CLA(2 5、5 0、10 0和 2 0 0 μmol L)诱导MCF 7细胞凋亡作用。结果　c9,t11 CLA可明显抑制MCF 7细胞生长 ,8天的抑制率分别为 -6 0 %、4 5 2 %、99 0 %和 99 4 %。通过荧光显微镜和电镜技术观察到了发生凋亡的MCF 7细胞 ;用流式细胞光度术也检测到c9,t11 CLA可诱导MCF 7细胞产生凋亡 ,并随着c9,t11 CLA浓度的增加 ,细胞凋亡率逐渐增加 ;而p5 3蛋白表达则随着c9,t11 CLA浓度的增加呈现逐渐降低的趋势。结论　c9,t11 CLA可诱导MCF 7细胞产生凋亡 ,这可能是c9,t11 CLA抑制肿瘤细胞生长的机制之一。     

共轭亚油酸对人胃腺癌细胞中环氧合酶的影响

目的采用体外细胞培养方法,研究不同浓度c9,t11-共轭亚油酸(CLA)对人胃腺癌细胞(SGC-7901)的亚油酸代谢途径中限速酶-环氧合酶(COX)表达的影响.方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)方法检测不同浓度c9,t11-CLA处理后的SGC-7901细胞中环氧合酶(COX)-1、(COX)-2mRNA和蛋白的表达.结果在200,100,50和25μmol/L浓度时,c9,t11-CLA均可下调COX-2 mRNA和蛋白的表达,与共轭亚油酸(CLA)浓度呈负相关;上调COX-1 mRNA的表达,并与CLA浓度呈正相关.结论 c9,t11-CLA的抗癌活性与其影响COX的表达有关.     

FADD在VES诱导人胃腺癌细胞凋亡中的作用

目的 了解带有死亡结构构成的Fas相关蛋白（FADD）在维生素E琥珀酸酯（VES）诱导胃腺癌细胞凋亡过程中的作用。方法 以人胃腺癌SGC－7901细胞作为靶细胞，采用WesternBlot法、Lipofect转染、DAPI染色法探讨FADD在VES诱导SGC－790细胞凋亡过程中的作用。结果 经不同剂量VES处理后，SGC－7901细胞中FADD蛋白表达增加，呈剂量－效应关系；该细胞经FADD反义寡核苷酸转染与正我寡核苷酸杂上比，VES处理的细胞中FADD蛋白表达下降；用FADD反义寡核苷酸转染SGC－7901细胞后，降低了VES诱导的细胞凋亡率。结论 FADD在VES诱导SGC－7901细胞凋亡过程中起着重要的作用。     

共轭亚油酸对肿瘤细胞亚油酸代谢途径中限速酶的影响

目的采用体外细胞培养方法,研究不同浓度c9,t11-共轭亚油酸(c9,t11-CLA)对人胃腺癌细胞(SGC-7901)中亚油酸代谢途径的限速酶的影响。方法用200、100、50和25μmol／L浓度的c9,t11-CLA处理SGC-7901细胞24h,四甲基偶氮唑盐实验检测c9,t11-CLA对SGC-7901细胞增殖的抑制作用,采用逆转录聚合酶链反应检测c9,t11-CLA对SGC-7901细胞中亚油酸代谢途径的Δ6-脱氢酶、△5-脱氢酶、环氧合酶(COX)-1、COX-2和5-脂氧合酶(5-LOX)mRNA表达的影响。结果在200、100、50和25μmol／L浓度时,c9,t11-CLA对SGC-7901增殖的抑制率分别为54．3％、20．5％、10．5％、2．93％;均可下调COX-2mRNA的表达,上调Δ6-脱氢酶、COX-1mRNA的表达,但对Δ5-脱氢酶和5-LOXmRNA表达的影响不显著。结论c9,t11-CLA可通过调节Δ6-脱氢酶和COX的表达抑制肿瘤细胞的增殖,说明c9,t11-CLA通过影响亚油酸代谢途径中限速酶的基因表达而改变类二十碳烷酸的形成,推测c9,t11-CLA影响肿瘤细胞中亚油酸代谢途径的限速酶是其发挥抗癌活性的另一作用机制。     

共轭亚油酸对人乳腺癌细胞生长的抑制作用

目的 研究共轭亚油酸（c9,t11-CLA)对人乳腺癌细胞（MCF－7）生长的影响。方法 采用细胞核分裂指数、细胞生长曲线、细胞集落形成试验、^3H-TdR掺入试验和软琼脂培养方法,所设剂量（μmol/L）为25,50,100,200,以96％乙醇为溶剂对照。结果 在细胞核分裂指数、细胞生长曲线和细胞集落形成试验中,可见c9,t11-CLA对MCF－7细胞生长有明显的抑制作用,其作用于MCF－7细胞8d后的抑制率（％）分别为27．18、35．43、91．05和92．86;在^3H-TdR掺入试验中,可见随着c9,t11-CLA剂量的增加,^3H-TdR掺入到MCF－7细胞中明显的减少,与阴性对照组相比差异有显性;由软琼脂培养试验结果可见,随着c9,t11-CLA剂量的增加,MCF－7细胞的集落形成逐渐降低,除了25 μmol/L剂量组外与阴性对照组相比差异有显性。结论 c9,t11-CLA对MCF－7细胞的生长有明显的抑制作用。     

神经酰胺诱导人结肠癌细胞凋亡的作用

目的 探讨外源性神经酰胺诱导结肠癌HT-29细胞凋亡的作用。方法 采用噻唑兰(MTT)显色法、荧光显微镜、电镜观察以及通过免疫组化方法检测Fas、P53的表达情况。结果 神经酰胺对HT-29细胞的生长有明显抑制作用，并可诱导HT-29细胞产生凋亡，并随着神经酰胺浓度的增加，细胞凋亡率逐渐增加；Fas蛋白的表达随着神经酰胺浓度的增加呈现逐渐升高的趋势，p53蛋白的表达随着神经酰胺浓度的增加呈现降低的趋势。结论 神经酰胺能诱导HT-29细胞产生凋亡。     

Bel7402肝癌细胞中共轭亚油酸异构体通过不同机制下调COX-2表达

[目的]采用体外细胞培养方法,研究c9,t11-CLA和t10,c12-CLA对肝癌细胞Bel7402的COX-2表达的影响和机制。[方法]采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Westernblot)方法检测c9,t11-CLA和t10,c12-CLA处理后的Bel7402细胞中COX-2 mRNA和蛋白质的表达以及PPARγ配体罗格列酮和GW9662对COX-2蛋白水平的影响。[结果]在100μmol/L的浓度下,c9,t11-CLA和t10,c12-CLA都可以降低COX-2mRNA和蛋白质的表达,罗格列酮可以下调COX-2蛋白水平,而PPARγ抑制性配体GW9662可以逆转c9,t11-CLA对于COX-2蛋白水平的下调作用,但是对于t10,c12-CLA的下调作用则没有影响。[结论]两种异构体对COX-2表达的下调作用很可能具有不同的机制。     

植酸对人胃癌细胞的生长抑制和凋亡诱导作用的研究

目的了解植酸对人胃癌SGC-7901细胞的生长抑制和诱导凋亡作用。方法MTT法检测植酸在体外对人胃癌SGC-7901细胞的生长抑制作用;AO/EB荧光染色和DNA Ladder实验检测细胞凋亡;免疫组化法检测凋亡调控基因P53蛋白的表达。结果植酸在体外可以明显抑制人胃癌细胞的生长,并诱导细胞发生凋亡。免疫组化实验结果表明,植酸可以抑制SGC-7901细胞中凋亡相关P53蛋白的表达。结论植酸在体外可以抑制人胃癌SGC-7901细胞的生长并诱导细胞发生凋亡,且对于P53蛋白表达的下调作用可能是其诱导细胞凋亡的机制之一。     

共轭亚油酸对正常动物细胞和人体肿瘤细胞间通讯功能的影响

为探讨c9,t11-共轭亚油酸 (CLA)的抑癌作用可能机制 ,在促癌物 (TPA)存在下 ,对正常细胞(CHL)以及人体肿瘤细胞 (SGC 790 1细胞和MCF 7细胞 )的细胞间隙连接通讯功能 (GJIC)的影响 ,采用划痕标记染料示踪技术 (SLDT) ;c9,t11 CLA剂量为 2 5 (mol L ,5 0 (mol L ,10 0 (mol L和 2 0 0 (mol L ,阴性对照为乙醇。结果显示 ,c9,t11 CLA可明显地提高TPA对CHL细胞的GJIC的抑制效应 ,当c9,t11 CLA浓度为 2 0 0 (mol L作用 48h时 ,细胞间隙通讯功能基本上与阴性对照组相近 ;当用c9,t11 CLA作用SGC 790 1细胞和MCF 7细胞2 4h和 48h时 ,可见 (2 4h 10 0 μmol L的MCF 7细胞 ) 2 4h 2 0 0 μmol L和 48h 10 0、2 0 0 μmol L剂量组的肿瘤细胞有一定的细胞间隙通讯功能。提示c9,t11 CLA可提高SGC 790 1细胞和MCF 7细胞的GJIC的功能 ,并且不同程度的拮抗TPA对CHL细胞GJIC的抑制效应     

共轭亚油酸对人胃腺癌细胞侵袭能力的影响及其作用机制

研究c9,t11-共轭亚油酸 (CLA)对人胃腺癌细胞 (SGC 790 1)侵袭能力的影响 ,探讨其抑制肿瘤转移的可能机理。用 0、2 5、5 0、10 0和 2 0 0 μmol LCLA处理细胞 2 4h后 ,分别用重组基底膜侵袭实验评价癌细胞侵袭能力 ;PAGE底物酶谱方法检测Ⅳ型胶原酶活性 ;RT PCR方法检测SGC 790 1细胞TIMP 1和TIMP 2mR NA表达。研究结果表明 :c9,t11 CLA处理后 ,SGC 790 1细胞侵袭重组基底膜的能力下降、SGC 790 1细胞培养上清中的Ⅳ型胶原酶活性降低、SGC 790 1细胞中TIMP 1和TIMP 2mRNA的表达增加。因此 ,c9,t11 CLA抑制SGC 790 1细胞侵袭重组基底膜 ,并且c9,t11 CLA的抗侵袭活性与降低肿瘤细胞培养上清中Ⅳ型胶原酶活性和诱导肿瘤细胞TIMP 1和TIMP 2mRNA的表达等有关     

Effects ofcis-9,trans-11-conjugated linoleic acid on cancer cell cycle

Objectives To determine the effect of cis-9, trans-11-conjugated linoleic acid on the cell cycle of mammary cancer cells (MCF-7) and its possible mechanism of inhibition cancer growth. Methods Using cell culture and immunocytochemical techniques, we examined the cell growth, DNA synthesis, expression of PCNA, cyclin A, B₁, D₁, p16^ink4a and p21^cip/wafl of MCF-7 cells which were treated with various c9, t11-CLA concentrations (25 mM, 50 mM, 100 mM and 200 mM) of c9, t11-CLA for 24 and 48 h, with negative controls (0.1% ethanol). Results The cell growth and DNA synthesis of MCF-7 cells were inhibited by c9, t11-CLA. MCF-7 cells, after treatment with various c9, t11-CLA doses mentioned above for 8 days, the inhibition frequency was 27.18%, 35.43%, 91.05%, and 92.86%, respectively and the inhibitory effect of c9, t11-CLA on DNA synthesis (except for 25 mM, 24 h) incorporated significantly less³H-TdR than did the negative control (P<0.05 andP<0.01). To further investigate the influence on the cell cycle progression, we found that c9, t11-CLA may arrest the cell cycle of MCF-7 cells. Immunocytochemical staining demonstrated that MCF-7 cells preincubated in media supplemented with different c9, t11-CLA concentrations at various times significantly decreased the expressions of PCNA, and Cyclin, A, B₁, D₁ compared with the negative controls (P<0.01), whereas the expressions of p16^ink4a and p21^cip/wafl, cyclin-dependent kinases inhibitors (CDKI), were increased. Conclusions The cell growth and proliferation of MCF-7 cells is inhibited by c9, t11-CLA by blocking the cell cycle, which reduces expressions of cyclin A, B₁, D₁ and enhances expressions of CDKI (p16^ink4a and p21^cip/wafl).     

环氧合酶-2在c9,t11-共轭亚油酸抑制胃腺癌细胞增殖中的作用

目的　采用体外细胞培养方法,研究不同浓度c9,t11 共轭亚油酸对人胃腺癌细胞(SGC- 790 1)的亚油酸代谢途径中限速酶———环氧合酶(COX -2 )及其产物前列腺素E2 (PGE2 )的影响。方法　采用逆转录聚合酶链反应(RT- PCR)和Westernblot方法检测不同浓度c9,t11 CLA处理后的SGC 790 1细胞中COX- 2mRNA和蛋白的表达,放射免疫方法检测细胞分泌的PGE2 浓度。结果　在2 5、5 0、10 0和2 0 0 μmol L浓度时,c9,t11 CLA均可下调COX 2mRNA和蛋白的表达,同时降低细胞中PGE2 的分泌。结论　环氧合酶2是c9,t11 CLA抑制肿瘤细胞增殖的作用靶点。     

市售牛奶中c9,t11-共轭亚油酸测定的气相色谱法研究

目的：用气相色谱内标法检测部分市售牛奶中c9，t11-共轭亚油酸含量（CLA），分析季节因素对牛奶中e9，t11-共轭亚油酸含量的影响。方法：采用气相色谱内标法，内标物为C17：00甲酯，程序升温，将样品提取、甲酯化后，测定并比较夏季和非夏季牛奶样品中c9，t11-共轭亚油酸的含量。结果：实验方法的回收率为83．67％，RSD=3．45％；精密度为RSD=2．09％。夏季和非夏季牛奶样品中c9，t11-共轭亚油酸含量均值范围分别为0～14．9me,／g脂肪和0～7．3mg／g脂肪。夏季牛奶样品中c9，t11-共轭亚油酸含量显著高于非夏季牛奶样品（P〈0．05）。结论：所建立的实验条件准确可靠，季节变化对牛奶样品中c9，t11-共轭亚油酸含量有显著影响。本研究对在国内开展共轭亚油酸强化乳制品的研究具有指导意义。