敲除清道夫受体A iv/一七基因对小鼠氧化型低密度脂蛋白组织分布和清除的影响

目的应用清道夫受体AⅠ/Ⅱ基因敲除小鼠及其野生对照小鼠,观察在正常饮食和高脂饮食情况下,清道夫受体AⅠ/Ⅱ对小鼠氧化型低密度脂蛋白分布和清除的影响。方法用Southernblot和免疫组织化学法鉴定实验小鼠清道夫受体AⅠ/ⅡDNA和蛋白的表达。将2月龄雄性野生对照小鼠和清道夫受体AⅠ/Ⅱ基因敲除小鼠各50只随机分为4组:清道夫受体AⅠ/Ⅱ基因敲除小鼠和野生对照小鼠各38只,给予高脂饮食(常规饲料加15%油脂和1.25%胆固醇)8周,观察实验前后血清总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、载脂蛋白A、载脂蛋白B及血肌酐等水平的变化;清道夫受体AⅠ/Ⅱ基因敲除小鼠和野生对照小鼠各12只,高脂饮食3天后从尾静脉注射125I标记的氧化型低密度脂蛋白,于10min、1、3和6h获取血液、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃、肠、脂肪和肌肉等标本,分别称取质量并用γ射线计数仪检测其放射性强度。结果正常饮食下,清道夫受体AⅠ/Ⅱ基因敲除小鼠和野生对照小鼠血脂水平接近;高脂饮食下两组小鼠血脂水平均明显升高,但清道夫受体AⅠ/Ⅱ基因敲除小鼠血浆低密度脂蛋白水平明显高于野生对照小鼠;清道夫受体AⅠ/Ⅱ基因敲除小鼠在注射125I标记的氧化型低密度脂蛋白10min后的清除率明显低于野生对照小鼠,注射125I标记的氧化型低密度脂蛋白6h后其主要分布于肝脏,在心脏和肾脏也有高分布;高脂饮食条件下,敲除清道夫受体AⅠ/Ⅱ基因对经尾静脉注射的125I标记的氧化型低密度脂蛋白在体内的分布不同于野生对照小鼠。结论敲除清道夫受体AⅠ/Ⅱ后,小鼠脂质代谢的调节能力受到损伤,机体对血液中氧化型低密度脂蛋白的清除能力下降,组织细胞对氧化型低密度脂蛋白的摄取减少,血低密度脂蛋白水平升高。     

天然及氧化型脂蛋白(a)与巨噬细胞表面结合

为探讨脂蛋白 (a)及氧化型脂蛋白 (a)在巨噬细胞上的结合和降解途径 ,将生物素标记的脂蛋白与小鼠腹腔巨噬细胞进行结合和竞争性结合试验。结果发现 ,脂蛋白 (a)能以一定的亲和力、可饱和性地与巨噬细胞表面结合 ;低密度脂蛋白对其结合无明显抑制作用 ,而氧化型低密度脂蛋白、氧化型脂蛋白 (a)均能不同程度地抑制这种结合。脂蛋白 (a)经氧化修饰后 ,与巨噬细胞的结合量显著增加。脂蛋白 (a)、低密度脂蛋白不能有效竞争氧化型脂蛋白 (a)的结合 ,而氧化型脂蛋白 (a)和氧化型低密度脂蛋白为有效的竞争性抑制剂。提示脂蛋白 (a)主要经清道夫受体与巨噬细胞表面结合 ;氧化型脂蛋白 (a)除经清道夫受体介导外 ,可能还通过其它特异性受体与巨噬细胞表面结合。     

蛋白激酶C抑制剂对小鼠腹腔巨噬细胞清道夫受体功能的影响

目的 观察细胞内蛋白磷酸化水平对清道夫受体功能的影响。方法 用蛋白激酶C抑制荆星形孢菌素处理小鼠腹腔巨噬细胞，利用蛋白质印迹试验和放射自显影方法观察药物对细胞表面受体表达的影响，并分别测定对照组和处理组细胞对碘标记的氧化型低密度脂蛋白的结合、降解以及细胞内脂质蓄积的程度。结果 0．4μmol／L蛋白激酶C抑制剂星形孢菌素可以促进细胞结合碘标记的氧化型低密度脂蛋白，增加细胞表面受体的表达，但抑制细胞降解碘标记的氧化型低密度脂蛋白，同时抑制细胞内胆固醇酯的蓄积。结论 以上表明清道夫受体功能与细胞内蛋白质磷酸化水平密切相关。     

巨噬细胞集落刺激因子对小鼠腹腔巨噬细胞清道夫受体途径和细胞内胆固醇酯积聚的影响

为探索巨噬细胞集落刺激因子、清道夫受体、氧化型低密度脂蛋白与动脉粥样硬化的关系，观察了重组人巨噬细胞集落刺激因子对小鼠腹腔巨噬细胞清道夫受体途径的影响以及重组人巨噬细胞集落刺激因子对氧化型低密度脂蛋白所致细胞内胆固醇酯积聚的影响．结果发现重组人巨噬细胞集落刺激因子能增加培养的小鼠腹腔巨噬细胞表面的清道夫受体数目，使之对氧化型低密度脂蛋白的结合和降解呈现剂量和时间依赖性增加，并使细胞内胆固醇酯积聚增多．表明巨噬细胞集落刺激因子可通过增加清道夫受体数目使小鼠腹腔巨噬细胞对氧化型低密度脂蛋白的结合和降解增多，从而增加细胞内胆固醇酯含量，促进动脉壁内泡沫细胞形成．     

B类Ⅰ型清道夫受体的研究进展

清道夫受体（scavenger receptor class B type I,SR—BI）是第一个在分子水平上得到确证的高密度脂蛋白（high density lipoprotein,HDL）受体,最早是由Brown和Goldstein等在20世纪七十年代末在以乙酰化氧化低密度脂蛋白（LDL）为配体克隆的清道夫受体家族中作为CD36膜蛋白超家族以及溶酶体整合膜蛋白相关蛋白被独立发现的。     

巨噬细胞集落刺激因子对小鼠腹腔巨噬细胞清道夫受体途径和细胞内胆固醇酯积聚的影响

为探索巨噬细胞集落刺激因子，清道夫受体、氧化型低密度脂蛋白与动脉粥样硬化的关系，观察了重组人巨噬细胞集落刺激因子对小鼠腹腔巨噬细胞清道夫受体途径的影响以及重组人巨细胞内胆固醇酯积聚的影响。结果发现重组人巨噬细胞集落刺激因子能增加培养小鼠的腹腔巨噬细胞表面的清道夫受体数目，使之对氧化型低密度脂蛋白的结合和降解呈现剂量和时间依赖性增加，并使细胞内胆固醇酯积聚增多。     

硫酸乙酰肝素蛋白聚糖及肝素对巨噬细胞脂质蓄积的抑制作用

用苏丹Ⅳ染色观察巨噬细胞内脂质聚积的变化；通过酶－荧光法检测巨噬细胞内胆固醇含量并检测125Ⅰ标记氧化型低密度脂蛋白降解量来反映巨噬细胞清道夫受体的活性，以探讨硫酸乙酸肝素蛋白聚糖及肝素对巨噬细胞脂质蓄积的影响及机制。结果发现，氧化型低密度脂蛋白（100mg／L）组巨噬细胞的胞浆内可见较多苏丹Ⅳ着色红染颗粒，氧化型低密度脂蛋白（100mg／L）十硫酸乙酰肝素蛋白聚糖（15．5mg／L）组0及氧化型低密度脂蛋白（100mg／L）十肝素（200mg／L）组巨噬细胞内红色颗粒明显少于氧化型低密度脂蛋白组；氧化型低密度脂蛋白十硫酸乙酰肝素蛋白聚糖组及氧化型低密度脂蛋白十肝素组巨噬细胞内总胆固醇和胆固醇酯的含量明显低于氧化型低密度脂蛋白组（P＜0．05，P＜0．01）；硫酸乙酰肝素蛋白聚糖组及肝素组125Ⅰ标记的氧化型低密度脂蛋白降解量均低于对照组。结果提示，硫酸乙酰肝素蛋白聚糖和肝素可能是通过下调清道夫受体活性减少了巨噬细胞对氧化型低密度脂蛋白的摄取而抑制脂质在巨噬细胞内的聚集和泡沫细胞的形成。     

硫化氢对THP-1源性巨噬细胞脂质摄取的影响

目的探索硫化氢对THP-1源性巨噬细胞脂质摄取的影响及可能机制。方法采用荧光显微镜测DiI标记的氧化型低密度脂蛋白(DiI-ox-LDL)摄取、RT-PCR和免疫印迹法测定CD36 mRNA和蛋白表达。结果巨噬细胞与DiI-ox-LDL孵育后大量摄取氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL),外源性硫化氢供体硫氢化钠显著抑制巨噬细胞摄取氧化型低密度脂蛋白,而炔丙基甘氨酸(一个硫化氢产生酶胱硫醚-γ-裂解酶抑制剂)加剧巨噬细胞摄取氧化型低密度脂蛋白。进而,硫氢化钠呈浓度依赖性抑制巨噬细胞CD36 mRNA和蛋白表达,而炔丙基甘氨酸促进巨噬细胞CD36 mRNA和蛋白表达。结论硫化氢抑制巨噬细胞摄取脂质及清道夫受体CD36表达。     

洛伐他汀能下调人脐静脉内皮细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体mRNA的表达

目的　探讨洛伐他汀对人脐静脉内皮细胞表达血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体mRNA和摄取氧化型低密度脂蛋白的影响。方法　用TRIzol试剂常规方法提取人脐静脉内皮细胞总RNA ,逆转录聚合酶链反应检测血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体mRNA含量 ,检测12 5　I标记的氧化型低密度脂蛋白放射活性法来确定内皮细胞摄取率 ,分光光度法测量乳酸脱氢酶含量。结果　人脐静脉内皮细胞与 1、10和 5 0 μmol/L洛伐他汀孵育 4 8h后 ,血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体mRNA的表达分别为对照组的 84 %、6 9%和 4 8% ;与 10 μmol/L洛伐他汀孵育 2 4、4 8和 96h后 ,血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体mRNA的表达分别为对照组的 82 %、6 9%和 5 2 %。洛伐他汀使人脐静脉内皮细胞对氧化型低密度脂蛋白的摄取减少 ,对乳酸脱氢酶含量没有影响。结论　洛伐他汀能降低血凝素样氧化型低密度脂蛋白mRNA的表达和对氧化型低密度脂蛋白的摄取。     

普罗布考干预后小鼠血清对巨噬细胞胆固醇流出的影响

目的 观察普罗布考处理后小鼠血清及不同浓度普罗布考体外干预对巨噬细胞胆固醇流出的影响,探讨普罗布考调节细胞胆固醇流出的可能机制.方法 16只健康雄性C57 BL/6J小鼠随机分为两组,分别给予普通饮食或添加普罗布考饲料饲养4周后,收集血清,酶法测定血清脂质;以乙酰化低密度脂蛋白和3H-胆固醇标记巨噬细胞,并以不同浓度普罗布考干预细胞,然后以上述血清介导,测定细胞胆固醇流出;收集干预后的细胞,提取mRNA及膜蛋白,分别检测ATP结合盒转运子A1和G1、B族Ⅰ型清道夫受体的表达.结果 普罗布考干预4周后小鼠血清较对照组介导更多的胆固醇从巨噬细胞流出,普罗布考呈剂量依赖性地增加巨噬细胞ATP结合盒转运子G1基因和蛋白的表达,并加速血清诱导的胆固醇流出率,而对B族Ⅰ型清道夫受体、ATP结合盒转运子A1基因和蛋白表达无明显影响.结论 普罗布考干预后的小鼠血清显著促进巨噬细胞胆固醇流出,其机制可能是通过增加ATP结合盒转运子G1的表达,而与细胞膜B族Ⅰ型清道夫受体、ATP结合盒转运子A1的表达无关.     

A类清道夫受体N端第1～27位氨基酸胞浆结构域缺失对功能的影响

目的确定A类清道夫受体胞浆域中的信号序列，探讨其对于受体功能的影响。方法构建A类清道夫受体N端第1～27位氨基酸胞浆结构域缺失体的表达质粒，并将其经脂质体介导瞬时转染入CHO细胞中。用Western blot检测A类清道夫受体在细胞中的表达，并用流式细胞仪定量检测转染后的蛋白表达效率。用DiI标记的乙酰化低密度脂蛋白与转染的细胞共孵育，激光共聚焦显微镜下观察乙酰化低密度脂蛋白在细胞内的分布，并进行荧光定量分析。结果A类清道夫受体N端第1～27位氨基酸胞浆结构域缺失体可大量表达于转染细胞膜和细胞浆。在高浓度乙酰化低密度脂蛋白刺激下，A类清道夫受体N端第1～27位氨基酸胞浆结构域缺失体的细胞内定位发生变化，也可存在于转染细胞核内。A类清道夫受体N端第1～27位氨基酸胞浆结构域缺失体摄取DiI标记乙酰化低密度脂蛋白的能力较全长相比下降约60％，细胞粘附能力较全长A类清道夫受体相比则下降约8．9％。结论A类清道夫受体的N端第1～27位氨基酸结构对于A类清道夫受体在细胞内的定位表达、结合和摄取配体以及调节细胞粘附的功能具有重要的作用。     

氧化型低密度脂蛋白经血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1途径诱导血管内皮细胞损伤

探讨氧化型低密度脂蛋白致血管内皮细胞损伤的作用 ,并从血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体 1的途径探讨损伤作用的机制。用1 2 5I标记的氧化型低密度脂蛋白进行放射性配基结合实验及配基竞争性抑制实验检测培养的人脐静脉内皮细胞中存在的特异性氧化型低密度脂蛋白受体 ,2 ,4 二硝基笨肼法测定乳酸脱氢酶活性 ,台盼兰染色、相差显微镜下观察细胞的形态学变化并计数细胞的存活率。结果发现 ,人脐静脉内皮细胞膜上存在与氧化型低密度脂蛋白高亲和力的结合位点 ,Scatchard分析Kd为 38.4± 18.8mg L、Bmax为 181.5± 5 5 .5ng 10 6 cells。氧化型低密度脂蛋白与人脐静脉内皮细胞作用 2 4h ,随着氧化型低密度脂蛋白剂量的增加 ,不仅显著增加人脐静脉内皮细胞释放乳酸脱氢酶的量 ,而且使人脐静脉内皮细胞的存活率下降 ,血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体 1受体阻滞剂聚肌苷酸和爱兰苔胶可以阻断氧化型低密度脂蛋白的上述损伤作用。结果提示 ,血管内皮细胞表达氧化型低密度脂蛋白受体血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体 1,氧化型低密度脂蛋白诱导对血管内皮细胞的损伤作用可能是通过血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体 1的受体途径。     

胶原性巨噬细胞清道夫受体研究进展

胶原作为人体中最丰富的蛋白质是细胞外基质的一种主要成份。在巨噬细胞的膜蛋白中，I型和II型清道夫受体及胶原样巨噬细胞受体都有一个胶原结构域。对I型和II型受体缺陷小鼠的分析和组织化学研究指出，这些蛋白质对巨噬细胞的清除、粘附和宿主的防御功能有重要作用。     

两种细胞因子和表皮生长因子、纤维母细胞生长因子对血管平滑肌细胞清道夫受体活性的影响

为探讨有关的细胞因子和生长因子是否影响平滑肌细胞清道夫受体与氧化型低密度脂蛋白结合活性，以Ｃｕ２＋氧化法制备的氧化型低密度脂蛋白免疫豚鼠，制备抗氧化型低密度脂蛋白抗体，在培养的小牛主　动脉平滑肌细胞中，用细胞酶联免疫吸附检测法测定清道夫受体结合氧化型低密度脂蛋白的活性。结果发现，碱性纤维母细胞生长因子、表皮生长因子、肿瘤坏死因子可提高血管平滑肌细胞表面清道夫受体活性，而粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子对清道夫受体活性无影响。此结果提示，某些细胞因子、生长因子对平滑肌细胞清道夫受体活性具有调节作用。     

巨噬细胞修饰低密度脂蛋白对细胞受体活性的影响及前列腺素E_2的作用

为研究低密度脂蛋白经细胞修饰后对细胞受体的影响及前列腺素E2的作用，利用免疫细胞化学和生物亲和素-酶联免疫吸附法分别检测小鼠腹腔巨噬细胞清道夫受体、小鼠皮肤纤维母细胞低密度脂蛋白受体的结合活性，结果发现修饰组的巨噬细胞胞浆及胞膜有强阳性黄褐色颗粒，而药物组仅中度着色；修饰组低密度脂蛋白与其受体结合量（54±13μg／g细胞蛋白）较对照组（144±μg／g细胞蛋白）显著下降（P＜0．01）；药物组受体结合量（100±11μg／g细胞蛋白）较修饰组明显提高（P＜0．05）。表明细胞修饰低密度脂蛋白能够刺激清道夫受体活性，抑制低密度脂蛋白受体活性；前列腺素E2（20mg／L）可对抗细胞修饰低密度脂蛋白对此二种受体的作用。     

两种细胞因子和表皮生长因子、纤维母细胞生长因子对血管平滑肌细胞清道夫受体活性的影响

为探讨有关的细胞因子和生长因子是否影响平滑肌细胞清道夫受体与氧化型低密度脂蛋白结合活性，以Ｃｕ＾２＋氧化法制备的氧化型低密度脂蛋白免疫豚鼠，制备抗氧化型低密度脂慢白抗体，在培养的小牛主动脉平滑肌细胞中，用细胞酶联免疫吸附检测法测定清道夫受体结合氧化型低密度脂蛋白的活性。结果发现，碱性纤维母细胞生长因子、表皮生长因子、肿瘤坏死因子可提高血管平滑肌细胞表面清道夫受体活性，而粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子     

清道夫受体与糖尿病

清道夫受体 (SR)是主要存在于巨噬细胞膜表面的一种糖蛋白 ,能特异性结合并摄取氧化低密度脂蛋白等多种配体从而介导脂类代谢。本文主要介绍与糖尿病相关的SRA、SRB Ⅰ和CD36的结构、分布和功能 ,以及细胞因子等对其调节作用。在 2型糖尿病中CD36表达的水平增加 ,CD36和SRA Ⅰ在糖尿病动脉粥样硬化的形成中介导胆固醇的摄取 ,SRA Ⅱ作为糖基化终末产物的受体在糖尿病肾病中有促进肾小球硬化的作用。     

过氧化体增殖物激活型受体-γ对巨噬细胞脂蛋白受体和炎症因子表达效应的研究

目的 探讨配体曲格列酮（Trog)活化的过氧化体增殖物激活型受体γ（PPAR-γ）对脂蛋白介导的巨噬细胞脂蛋白受体和炎症因子表达的影响。方法 采用密度梯度超速离心法获得低密度脂蛋白（LDL）和极低密度脂蛋白（VLDL），用Cu^2 LDL氧化修饰为氧化LDL；通过免疫组织化学，Northern杂交和激光扫描共聚焦显微镜检测巨噬细胞清道夫受体A（SRA），VLDL受体（VLDLR），肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）以及PPAR-γ的表达或活化状态，结果 Trog活化的PPAR-γ能抑制巨噬细胞SRA，VLDLR，TNF-α和MMP-9的mRNA以及蛋白表达。结论 PPAR-γ抑制巨噬细胞脂质摄取和炎症因子表达的效应，对防治急性冠状动脉综合征可能起着一定的作用。     

清道夫受体与糖尿病

清道夫受体(SR)是主要存在于巨噬细胞膜表面的一种糖蛋白，能特异性结合并摄取氧化低密度脂蛋白等多种配体从而介导脂类代谢。本文主要介绍与糖尿病相关的SRA、SRB-Ⅰ和CD36的结构、分布和功能，以及细胞因子等对其调节作用。在2型糖尿病中CD36表达的水平增加，CD36和SRA-Ⅰ在糖尿病动脉粥样硬化的形成中介导胆固醇的摄取，SRA-Ⅱ作为糖基化终末产物的受体在糖尿病肾病中有促进肾小球硬化的作用。     

巨噬细胞低密度脂蛋白受体相关蛋白缺乏促进载脂蛋白E/低密度脂蛋白受体双基因敲除小鼠动脉粥样硬化的形成

目的探讨动脉粥样硬化中体内巨噬细胞特定低密度脂蛋白受体相关蛋白(LRP)的作用,及其与摄取脂蛋白的关系。方法采用载脂蛋白E/低密度脂蛋白受体双基因敲除小鼠构建巨噬细胞特异LRP缺失小鼠模型。结果巨噬细胞LRP缺失不影响血浆总胆固醇和甘油三酯水平、脂蛋白分布、血液单核细胞数量。巨噬细胞LRP缺失导致18周龄小鼠主动脉根部粥样硬化病变面积增加1.8倍。且LRP缺失也导致晚期斑块数相对增加。LRP敲除小鼠与同窝对照组小鼠比较?...