人参皂苷Rg3对小鼠肺腺癌多耐药的逆转作用

目的观察人参皂苷Rg3对小鼠肺腺癌多耐药的逆转作用并探讨其机制。方法 将32只接种获得性多药耐药Lewis肺癌细胞的小鼠随机分成4组:荷瘤对照组、多柔比星(ADM)组、人参皂苷Rg3组和人参皂苷Rg3联合多柔比星(ADM)组。各组予以相应干预,观察肿瘤生长情况,肿瘤接种24天处死全部小鼠,剥取皮下移植肿瘤,称瘤重,计算抑瘤率,收集移植瘤标本行免疫组织化学检测P-糖蛋白(P-glycaprotein,p-Gp)和多药耐药相关蛋白1的表达,并行RT-PCR半定量检测多药耐药基因(multidrug resistance,MDR1)mRNA、多药耐药相关蛋白1(multidrug resistance-associated protein 1,MRP1)mRNA表达。结果 (1)各用药组肿瘤的生长受到不同程度抑制,瘤重低于对照组,其抑瘤率分别为10.5%、36.3%、56.2%,联合用药组抗瘤作用进一步增强。(2)免疫组织化学:p-Gp及MRPl蛋白质的表达具有一致性,对照组和ADM组表达较高,而人参皂苷Rg3组和联合组表达明显降低,其中对照组和ADM组比较,人参皂苷Rg3组和联合组比较,差异无统计学意义(P>0.05);而人参皂苷Rg3组和联合组与对照组和ADM组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。(3)RT-PCR:与对照组和ADM组比较,人参皂苷Rg3组和联合组MDR1 mRNA荧光强度降低,人参皂苷Rg3组、联合组同对照组及ADM组比较MDR1 mRNA相对量减小,差异均有统计学意义(P<0.01),而对照组同ADM组比较,人参皂苷Rg3组同联合组比较差异未见统计学意义,MRP1 mRNA的表达与MDR1 mRNA类似。结论 人参皂苷Rg3对小鼠肺腺癌多药耐药有逆转作用,其作用机制可能是下调MDR1 mRNA、MRP1 mRNA及其蛋白的表达。     

脉冲磁场逆转乳腺癌细胞多药耐药性的作用研究

目的：研究脉冲磁场（Pulsed Magnetic Fields，PMF）对乳腺癌耐药细胞株MCF-7／ADR的逆转作用。方法：采用MTT实验方法，分别检测不同频率及不同磁场强度条件照射下的MCF-7／ADR细胞的耐药倍数和逆转倍数。用流式细胞术检测经脉冲磁场照射后MCF-7／ADR细胞中Rh123药物蓄积量变化。用流式免疫荧光技术检测膜经脉冲磁场照射后MCF-7／ADR细胞膜表面P-糖蛋白（P-gP）和多药耐药相关蛋白（MRP1）表达情况。采用半定量RT—PCR（逆转录-聚合酶链反应）检测经脉冲磁场照射后MCF-7／ADR细胞中MDR1和MRP1基因表达情况。建立人乳腺癌耐药细胞株MCF-7／ADR裸鼠移植瘤模型，通过测量肿瘤体积及重量观察PMF对肿瘤细胞的体内逆转作用。结果：脉冲磁场能有效逆转乳腺癌耐药细胞株MCF-7／ADR对阿霉素产生的耐药性（P〈0．01），其中110Hz，40mT照射条件逆转效果最好，可达5倍左右；脉冲磁场能提高罗丹明123在细胞内的蓄积量，其中110Hz，40mT照射奈件下可有效提升20％左右药物蓄积量；细胞经脉冲磁场照射后，膜表面耐药蛋白P糖蛋白表达量明显下降，MRP1蛋白表达量变化不明显；编码上述两种耐药蛋白的耐药基因表达量均明显下降；此外，脉冲磁场联合阿霉素可有效逆转裸鼠移植瘤的生长增值（P〈0．01）。结论：PMF具有逆转体外和体内乳腺癌细胞多药耐药性的作用。     

膀胱肿瘤T24／ADM多药耐药细胞株的建立及耐药机制的研究

目的建立人类膀胱肿瘤多药耐药（MDR）细胞株并研究其耐药机制。方法以人类膀胱肿瘤细胞株T24为研究对象，用多柔比星（ADM）浓度梯度递增诱导法，建立人类膀胱肿瘤细胞多药耐药模型（简称T24／ADM）。用MTT法检测肿瘤细胞的MDR特性；RT—PCR检测膀胱肿瘤耐药细胞株MDR基因的表达情况。流式细胞术检测耐药细胞P-糖蛋白（P—gP）的表达。结果T24／ADM对多种化疗药物产生耐药，对ADM的耐药性提高了16-3倍。RT—PCR检测发现T24／ADM中MDR基因和P—gp的表达明显增强。结论T24／ADM细胞具有MDR特性，其耐药性与MDR基因和P—gP的过表达有关。     

导向逆转剂Ab-IL2体外偶联以及协同抑瘤作用的研究

探讨利用乳腺癌单克隆抗体作为导向载体,将逆转剂IL2特异性地导向肿瘤细胞,使其发挥逆转作用的临床应用价值,为将此方法用于肿瘤的临床治疗提供医学依据。方法:分别制备人基因重组白细胞介素2（IL-2）以及人乳腺癌单克隆抗体（记为Ab）,将其经过体外的偶联与纯化,并对偶联产物进行严格的质量检测,最终得到导向多药耐药（MDR）逆转剂Ab-IL2,并通过体外MDR逆转作用检测其活性保留。将对阿霉素（ADM）耐药的人乳腺癌细胞系MCF-7/ADM,种植于BALB/c裸鼠皮下,每只小鼠注射量为106个细胞,将得到的荷瘤小鼠分为三组,并于接种后的第14,19天分别进行如下处理:1）对照组:腹腔注射生理盐水;2）ADM组:腹腔注射阿霉素（1 mg/kg体重）;3）协同用药组:同时注射阿霉素（1 mg/kg体重）和前述实验获得的多药耐药逆转剂Ab-IL2（1 mg/kg体重）。分别于14、16、18、20天测量肿瘤大小,并于第20天处死小鼠,取出瘤块并称重,据此计算肿瘤抑瘤率。结果:Ab-IL2的质量合格,活性保留为90.7%。多药耐药逆转剂Ab-IL2与阿霉素联合应用显示出体内协同抑瘤作用,至第20天处死小鼠时,协同用药组的抑瘤率为60.48%,是ADM组（抑瘤率19.44%）的3.11倍。结论:将单克隆抗体介导技术应用于肿瘤MDR导向逆转,可以促进逆转剂有效地发挥其应有的作用,本研究为实现临床上MDR逆转剂的成功应用提供了有力保证。      

人肝癌移植瘤多药耐药模型的建立及耐药机制的探讨

背景与目的肿瘤多药耐药是肿瘤化疗的主要障碍和研究热点,本研究拟建立人肝癌裸小鼠皮下及肝原位移植多药耐药模型,探讨其生物学特性和耐药机制的异同,为研究体内逆转肿瘤多药耐药提供理想的动物模型。方法人肝癌细胞系HepG2裸鼠肝原位、皮下移植后,用阿霉素腹腔注射诱导耐药。MTT法检测耐药细胞对抗肿瘤药的敏感性,流式细胞仪检测癌细胞膜蛋白P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MRP)、肺耐药蛋白(LRP)的表达和细胞对罗丹明(R123)的外排作用,逆转录PCR检测耐药细胞中三种膜蛋白mRNA的表达。结果肝原位和皮下移植瘤耐药细胞形态及生物学行为符合人肝癌特征;对多种药物产生较明显的耐药性,其中对阿霉素的耐药倍数分别为26.4和24.6;肝皮下移植和原位移植组耐药细胞膜蛋白P-gp、MRP和LRP的阳性率均增高,分别为(77.3±2.1)%和(78.1±1.9)%,(72.1±4.3)%和(72.7±5.1)%,(31.1±1.0)%和(32.2±1.4)%。多药耐药基因的阳性率也明显增高,细胞对R123的外排作用增强;肝原位移植瘤组与皮下移植瘤组比较,多药耐药性差异没有统计学意义(P>0.05)。结论所建立的裸鼠肝原位及皮下移植瘤多药耐药模型符合人肿瘤多药耐药特征,为研究体内逆转多药耐药提供了理想的动物模型。     

蝎毒多肽提取物对白血病细胞株K562/A02荷瘤鼠耐药性的影响

目的 探讨蝎毒多肽（peptide extract from scorpion venom,PESV）逆转白血病干细胞（leukemiastem cells, LSC）在体内多药耐药（multidrug resistance, MDR）的分子机制。方法 以多药耐药的K562/A02细胞株成模白血病BALB/c裸鼠为例,成模鼠随机分为6组：模型对照组、阿霉素（ADM）组、PESV组、ADM+PESV（H）组、ADM+PESV（M）组、ADM+PESV（L）组。模型对照组给予等体积0.9%氯化钠溶液腹腔注射,其余各组予相应剂量ADM和（或）PESV腹腔注射,连续给药14天。第21天观察各组裸鼠移植瘤生长情况,分别检测瘤块中LSC：细胞膜上P-gp的表达,细胞质中ALDH、PI3K的变化及细胞核中MDR1、NF-κB的活性。结果 K562/A02细胞经免疫磁珠分选前后的CD34+CD38-细胞比率和IC50值分别为31.5%、（60.33±10.68）μg/ml和92.8%、（58.33±9.72）μg/ml,分选后细胞干性显著提高,而耐药性无差异性损失;各组造模裸鼠成瘤率100%。瘤体中LSC：流式细胞仪检测细胞膜上P-gp表达结果：检测对照组89.8%、ADM组91.9%、PESV组88.4%、ADM+PESV（H）组53.9%、ADM+PESV（M）组78.0%、ADM+PESV（L）组78.7%;半定量RT-PCR检测MDR1 mRNA的表达：PESV组＞ADM+PESV（L）组＞ADM+PESV（M）组＞ADM+PESV（H）组＞ADM组;免疫组织化学检测ALDH,显示灰度值ADM组＞PESV组＞ADM+PESV（H）组＞ADM+PESV（M）组＞ADM+PESV（L）组;Western blot检测PI3K分子与Elisa检测NF-κB因子结果一致,在ADM组、PESV组表达上调,在ADM+PESV组中表达下调,下调强度与PESV剂量呈正相关。结论 PESV具有下调白血病干细胞膜上P-gp,细胞质内ALDH、PI3K及细胞核中MDR1、NF-κB的表达水平,增强了白血病K562/A02干细胞在体内对ADM的敏感度,逆转其多药耐药特性。     

阿霉素诱导人肝癌细胞多药耐药株的建立及其生物学特性评价

背景与目的:多药耐药(multidrugresistance,MDR)是肿瘤治疗的主要障碍,为探讨体外逆转肿瘤MDR的新方法,本研究建立人肝癌细胞多药耐药模型HepG2/Adm,并研究其生物学特性。方法:以人肝癌细胞株HepG2为研究对象,用阿霉素(adriamycin,ADM)浓度梯度递增诱导法,建立HepG2/Adm。观察细胞的生长规律;用MTT法检测多药耐药性;流式细胞术检测细胞周期分布、细胞表面多药耐药基因(mdr1)的表达产物P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、多药耐药相关蛋白(multidrugresistance-associatedprotein,MRP)、肺耐药蛋白(lung-relatedprotein,LRP)及谷胱甘肽S-转移酶(glutathioneS-transferase,GST)的表达;逆转录PCR半定量检测4种MDR基因mRNA表达量。结果:与HepG2细胞比较,HepG2/Adm细胞倍增时间延长30.01h,S期细胞减少(5.6±0.03)%,G1、G2期细胞增多犤(4.2±0.09)%,(1.5±0.08)%犦。该细胞对多种抗肿瘤药物耐药,HepG2/Adm对阿霉素的耐药指数是亲本细胞的26倍,细胞表面多药耐药蛋白P-gp、MRP及GST的表达显著增加,LRP表达有一定的增加;上述四种耐药蛋白基因的表达均明显增加。结论:HepG2/Adm细胞具有多药耐药特性,其耐药性与P-gp、MRP及GST的过表达有关。     

HIFU逆转人肝癌细胞HepG2/Adm多药耐药的实验研究

背景与目的：超声波能够改变细胞膜通透性,增强化疗药物对肿瘤细胞的杀伤作用。本研究评价高强度聚焦超声及其联合阿霉素(Adriamycin,ADM)对人肝癌多药耐药细胞株HepG2／Adm的效应,并探讨其作用机制。方法：取对数生长期的HepG2、HepG2／Adm细胞进行实验,分为HepG2、HepG2(超声波照射5s)、HepG2／Adm、HepG2／Adm(超声波照射5s)4组。用MTT法检测处理前后耐药细胞对抗癌药物的敏感性;用流式细胞仪检测肿瘤细胞表面mdr1基因表达产物P170的表达及细胞内阿霉素浓度;利用SP免疫组化法观察细胞膜及核膜上P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的表达。结果：频率0.8MHz、焦域声强460W／(cm^2连续照射5s,能够部分逆转HepG2／Adm细胞的耐药性,HepG2／Adm细胞P-gp的表达活性下降83．1％,耐药细胞内ADM浓度增加88％,对ADM、cDDP、MMc、5-FU和MTX相对逆转效率分别为66．4％、63．4％、89．4％、72．4％和75．0％。结论：高强度聚焦超声可提高人肝癌细胞HepG2／Adm内药物浓度,降低细胞膜及核膜表面P-gp表达,从而部分逆转肿瘤细胞多药耐药。     

多药耐药相关蛋白反义RNA对耐阿霉素人小细胞肺癌细胞株GLC4/ADR耐药性的调节

目的 构建表达多药耐药相关蛋白（MRP）反义RNA的真核表达载体,转染耐药细胞株,初步探讨其影响多药耐药（MDR）的作用机理。方法 以MRPcDNA为模板,应用PCR扩增MRPmRNA5′端（含起始子密码）及MRP mNRA3′端（含终止子密码）片段,通过定向克隆方法,构建表达MRP反义RNA的两个重组载体。通过Lipofectamine将其导入小细胞肺癌（SCLC）耐阿霉素（ADR）的细胞株GLC4／ADR中,经G418筛选,得到分别含pcDNA3空载（MO）、MRP mRNA5′端为靶区的反义RNA（Ma),MRPmRNA3′端为靶区的反义RNA（Mb)的3个细胞克隆。检测细胞内ADR的蓄积改变以及荷瘤裸鼠对ADR的敏感性。结果 经RT－PCR检测,外源片段可获稳定表达。Ma细胞及Mb细胞中,MRP表达分别抑制约14．0％和83．0％,且胞内ADR蓄积量均有一定程度的增加;对ADR的耐药倍数与对照细胞MO相比,分别下降9．5％和28．4％。虽然,MRP反义RNA对细胞的生长、细胞周期及ADR诱导的早期凋亡均无明显影响,但可提高荷瘤裸鼠对ADR的敏感性。结论 MRP反义RNA能抑制MRP蛋白的表达,并使转染细胞内ADR浓度增加,从而逆转MRP介导的MDR。对于配合化疗,提高MRP高表达患者的疗效,具有潜在的应用意义。     

蛋白激酶C抑制剂逆转肾癌多药耐药机制的探讨

目的探讨蛋白激酶C（PKC）抑制剂对肾癌细胞多药耐药（MDR）逆转作用的机制。方法应用荧光显色法、RT-PCR和Western blot方法,检测PKCα cDNA转染肾癌786-0细胞前后,细胞中多药耐药基因1（MDR1）、多药耐药相关蛋白1（MRP1）和肺耐药蛋白（LRP）表达的变化。采用MTT方法,分别测定阿霉素（ADM）与PKC激动剂以及与PKC抑制剂协同作用后,786-0细胞和肾癌转染细胞系PKCα／786-0耐药性的变化。结果RT—PCR结果显示,肾癌转染细胞系PKCα／786-0的MDR1表达水平高于肾癌786-0细胞。ADM与PKC抑制剂协同作用的PKCα／786-0细胞系耐药性明显降低。786-0细胞对ADM的IC50为7．8015e^-7（5．7046e^-7～1．0669e^-6）;PKCα／786-0对ADM的IC50为1．6588e^-6（1．1621e^-6～2．3677e^-6）。PKC激动剂佛波醇酯（PMA）联合ADM处理PKCα／786-0的IC50为2．6794e^-6（2．0521e^-6-3．4983e^-6）;PKC抑制剂Calphostin C联合ADM处理PKCα／786-0的IC50为9．2506e^-8（5．9337e^-8～1．4422e^-7）。结论PKC抑制剂可以逆转入肾癌细胞的多药耐药性,其途径可能与改变MDR1的表达有关。     

中国乳腺癌患者生活质量研究进展

生活质量（qualityoflife,QOL）又译作生命质量、生存质量,它是在世界卫生组织提倡的健康新概念“人们在躯体上、精神上及社会生活中处于一种完好的状态,而不仅仅是没有患病和衰弱”的基础上构建的,是医学模式由生物医学模式向生物一心理一社会医学模式转变的体现。西方发达国家已将此概念广泛应用于临床试验、卫生政策制定和卫生资源效益评价等众多领域。生存质量已作为评价肿瘤患者术后状况的首选指标。     

外泌体在肿瘤发展中的研究进展

外泌体是细胞经过"内吞-融合-外排"等一系列调控过程而形成的细胞外纳米级小囊泡。外泌体可以携带蛋白,运送RNA,在细胞间物质和信息转导中起重要作用。外泌体可能通过调控免疫功能,促进肿瘤血管新生和肿瘤转移,以及直接作用于肿瘤细胞等途径,影响肿瘤的进展。外泌体可应用于肿瘤的诊断。本文总结了近年来有关外泌体在肿瘤发展中作用的研究进展。     

Inhibitory effect of suramin in rat models of angiogenesis in vitro and in vivo

The aim of the present study was to test the ability of the chemotherapeutic agent suramin to inhibit angiogenesis in experimental models in vitro and in vivo. In the culture of rat aortic rings on fibronectin, suramin dose-dependently inhibited vascular cell growth, achieving the maximal effect (mean − 88% versus controls, P < 0.05) at 400 μg/ml. Image analysis showed that suramin could inhibit microvessel sprouting in fibrin from rat aortic rings as evaluated by the ratio between the cellular area and the mean gray value of the sample (sprouting index); suramin at 50 μg/ml significantly reduced the sprouting index from the control value of 0.35 ± 0.04 to 0.14 ± 0.02 mm²/gray level (P < 0.05). Likewise, the area occupied by cells was 19.2 ± 1.8 mm² as compared with 41.8 ± 4.2 mm² in controls (P < 0.05). In the rat model of neovascularization induced in the cornea by chemical injury, suramin at 1.6 mg/eye per day reduced the length of blood vessels (0.7 ± 0.1 mm as compared with 1.5 ± 0.1 mm in controls, P < 0.05). In the same model the ratio between the area of blood vessels and the total area of the cornea (area fraction score) was decreased by suramin from 0.19 ± 0.02 in controls to 0.03 ± 0.003 (P < 0.05). Suramin given i.p. at 30 mg/kg per day markedly inhibited the neovascularization induced in the rat mesentery by compound 48/80 or conditioned medium from cells secreting the angiogenic protein fibroblast growth factor-3 (FGF-3). The area fraction score in control rats treated with compound 48/80 was 0.31 ± 0.03, and this was reduced to 0.07 ± 0.01 by suramin (P < 0.05). After i.p. administration of FGF-3 the area fraction score was reduced by suramin from 0.29 ± 0.03 to 0.05 ± 0.01 (P < 0.05). These results provide evidence that suramin exerts inhibitory effects on angiogenesis in both in vitro and in vivo models. Received: 9 January 1998 / Accepted: 29 June 1998     

Dicer在肿瘤中的研究进展

Dicer是miRNA剪切成熟的关键酶,在肿瘤中扮演单倍体不足抑癌基因的角色.Dicer基因突变携带者易发生家族性肺胸膜母细胞瘤;Dicer在各种肿瘤的发生发展过程中发挥重要作用,基因低表达肿瘤更常表现出恶性程度高和预后差的特点;同时也能介导对药物治疗的敏感性;另外Dicer与miRNA之间复杂的调控体系是其参与肿瘤发生发展的根本所在,可为肿瘤的靶向治疗提供研究基础.     

Role of MutSalpha in the recognition of iododeoxyuridine in DNA

We have previously demonstrated that both the MLH1 and MSH2 status impact the DNA levels of the halogenated thymidine (dThd) analogues iododeoxyuridine (IdUrd) and bromodeoxyuridine (BrdUrd), and thereby radiosensitization induced by these analogues, indirectly implicating both mismatch repair (MMR) proteins in the removal of these bases from DNA. More recent data from our group demonstrate that base excision repair (BER) also impacts IdUrd-DNA levels, supporting a role for the BER pathway in IdUrd removal as well. In this study, we have examined more direct interactions between the MSH2 protein and the processing of IdUrd incorporated in DNA. Our data demonstrate that the MutSalpha (MSH2/MSH6) complex binds specifically to DNA containing an IdUrd-G mismatch, using both purified human MutSalpha as well as nuclear extracts from Msh2-proficient and-deficient mouse cell lines. MutSalpha binding to a IdUrd-G is better recognized than a G-T mismatch in the same sequence context. In addition, MSH2 protein can be found colocalized with IdUrd-DNA using confocal microscopy in G(1) synchronized cells after treatment with IdUrd. Consistent with our recent publication, coadministration of IdUrd and a chemical inhibitor of BER, methoxyamine (MX), also increases the extent of MSH2 nuclear colocalization with IdUrd. Furthermore, we show that the extent of MSH2 colocalization with IdUrd in G(1)-synchronized human tumor cells varies with MLH1 status, suggesting a role for the MLH1 protein in stabilizing the interaction between the MSH2 protein and DNA containing IdUrd. These data, both in vitro and in vivo, suggest direct involvement of MSH2 in processing IdUrd in DNA.