基因芯片技术研究针灸对肾阳虚证骨关节炎患者免疫相关基因表达的影响

目的:探讨针灸对肾阳虚证骨关节炎患者免疫相关基因表达的影响。方法:用基因芯片技术检测肾阳虚证骨关节炎患者及正常人的基因表达谱,以及针灸治疗显效者的治疗前后基因表达谱的变化。结果:通过基因表达谱芯片筛选出与肾阳虚骨关节炎免疫相关的基因13条,肾阳虚骨关节炎患者与正常人相比表达下调4条,上调5条。经温针治疗显效的4例患者治疗前后的基因芯片比较结果显示:NM000265、NM001838基因普遍上调,NM_001784基因普遍下调,其他基因表达无规律性变化。结论:肾阳虚证骨关节炎的发生涉及免疫相关基因表达的异常,针灸可能通过诱导或阻遏这些基因的表达发挥效应。     

应用基因表达谱芯片技术筛选老龄肾阳虚证特征功能类基因

目的:利用基因芯片技术探讨肾阳虚证发生的特征功能基因集。方法:在老龄肾阳虚证流行病学调查过程中,筛选出典型肾阳虚证患者2例和正常对照2例,采用美国Affymetrix公司的HG-u133Plus2.0基因表达谱芯片,按一步法抽提总RNA,分离纯化两种样品的mRNA,经逆转录合成掺入生物素标记的cDNA合成探针,与芯片杂交和严格洗片后,用荧光扫描仪扫描芯片荧光信号图像,获得肾阳虚患者差异表达基因。结果:两例患者和正常人比较获得680和503条差异表达基因,通过g:GOSt基因芯片数据分析平台进行基因功能分类,发现免疫反应功能类基因出现显著性。结论:肾阳虚证的发生与免疫反应功能类基因的异常表达密切相关。     

肾阳虚证免疫功能相关基因筛选及其表达分析

目的以基因芯片技术从基因表达角度分析肾阳虚证与免疫功能的关联性。方法筛选出符合中医肾阳虚证诊断标准的患者4例,健康对照4例,提取mRNA,经标记、杂交、清洗、芯片扫描、图像的采集与数据分析等过程,获得基因表达数据,通过SAM芯片数据分析软件筛选肾阳虚证显著表达基因。结果筛选到70条显著表达基因,其中与免疫相关的有18条。结论肾阳虚证患者存在免疫功能异常,免疫功能基因的异常表达是肾阳虚证发生的分子基础之一。     

温针个案的分子药效学分析

目的　采用基因芯片技术研究温针对肾阳虚证骨关节炎患者基因表达的影响 ,探讨温针治疗肾阳虚证骨关节炎的分子机制。方法　以 4 0项肾阳虚辨证因子量表为评定标准 ,筛选出 8例符合西医骨关节炎诊断标准和中医肾阳虚证诊断标准的典型肾阳虚证患者 ,给予温针治疗 15d ,选取疗效最好的 4例提取mRNA作基因芯片分析 ,本文仅选择其中 1例。结果　治疗后患者疼痛积分由 14分降至 1分 ,骨关节炎病情严重指数由 19分降至 1分 ,肾阳虚积分由 2 0分降至 6分 ,虚寒积分由 2 6分降至 9分。获得表达差异的基因 2 4 6条 ,已知功能的 12 6条 ,分别涉及免疫、代谢、细胞骨架及运动等多种相关基因。结论　温针通过影响多种相关基因的表达而达到治疗的效果。     

骨关节炎肾阳虚证个案的温针疗效及基因表达谱研究

目的　观察温针治疗骨关节炎肾阳虚证患者的临床疗效 ,并以基因芯片研究温针疗效的基因表达谱。方法　筛选出符合西医骨关节炎和中医肾阳虚证诊断标准的患者 1例 ,温针治疗 2周 ,治疗前后取血、提取mRNA ,经标记、杂交、清洗、芯片扫描、图像的采集与数据分析等过程 ,获得差异基因表达谱。结果　温针对此例患者的治疗作用达到显效 ,对基因表达的影响涉及免疫、基础代谢、肌肉运动、生长发育和信息传导等多个方面。结论　温针治疗肾阳虚型骨关节炎疗效确切 ;应用基因芯片技术能够同时半定量地研究数千条基因的表达状态 ,可以从微观基因水平研究针刺的整体机制 ,并从分子水平判定其疗效 ,为探讨针灸的作用机制开辟新途径。     

肾阳虚骨关节炎个案与13个免疫基因的初步研究 --辨证论治的个体化医学及分子疗效评定方法探试

目的 :观察温针治疗肾阳虚骨关节炎典型病例的疗效 ,通过基因芯片前沿方法研究该疗效的差异表达基因。从而探索辨证论治的个体化医学治疗效果及分子疗效评定的新方法。方法 :对 10例典型肾阳虚关节炎患者 ,辨证评分 ,然后施以温针灸治疗后精选疗效最好者。对其治疗前、后分别采血 ,提取mRNA ,经标记、杂交、清洗、芯片扫描、图象采集与数据分析等过程获得差异基因表达谱。结果 :在 10例肾阳虚关节炎治疗有显著性的背景上 ,所选 1例患者的肾阳虚证、疼痛分分别减少 2 6分、12分 ,基因芯片检测该患者治疗前、后血液获得有表达差异的基因 5 7条 ,其中已知功能的基因有 3 3条 ,与免疫相关有 13条 ,约占整个已知功能基因的 3 6 4%。结论 :温针治疗肾阳虚证有效病例的基因表达涉及广泛 ,其分子机理包括免疫、能量、疾病、肿瘤等多个方面 ,但以免疫方面最为突出。同时也可由肾阳虚证的分子生物学基础 ,来探讨辨证论治的个体化医学疗效及其评价方法     

Toll样受体信号通路相关基因在肾阳虚证中的表达差异性研究

目的探讨Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)信号通路相关基因在肾阳虚证中表达的差异性。方法采集15例肾阳虚证患者和10例健康人的外周血白细胞,应用TLRs信号通路实时定量PCR芯片技术,比较肾阳虚证组与健康对照组之间TLRs信号通路相关基因表达的差异。结果在84个TLRs信号通路相关基因中,肾阳虚证组与健康对照组比较,共检测到28个差异表达基因(P 0. 05),其中,有4个基因表达上调,24个基因表达下调,下调基因占总差异表达基因的85. 7%。在芯片中包含的10个TLRs基因(TLR1-TLR10)中,除了TLR3之外,其余均出现差异表达;在TLRs信号通路众多接头分子中,MyD88出现差异表达。结论肾阳虚证出现了大量TLRs信号通路相关基因的差异表达,其总体表达趋势以下调为主。接头分子MyD88的差异表达提示MyD88依赖信号转导途径异常可能是肾阳虚证发生的重要机制之一。     

青少年肾阳虚体质差异表达基因研究

目的:利用基因芯片技术筛选、分析青少年肾阳虚体质者外周血白细胞的差异表达基因,从基因水平初步探究青少年肾阳虚体质的机理。方法:利用体外转录方法,将青少年肾阳虚体质组与同年龄段的正常体质组外周血白细胞mRNA合成为标记有不同荧光的cDNA探针,运用杂交互补原理筛选差异表达基因。结果:共筛选出127条符合标准的差异表达基因,63条呈上调表达,64条呈下调表达。提示:与青少年肾阳虚体质相关的基因表达涉及到免疫相关、发育相关、细胞生长、细胞受体、细胞信号和传递蛋白、蛋白翻译合成等。其中,PSMB7基因及CXCR4基因的表达差异均较明显,提示这两条基因可能与青少年肾阳虚体质密切相关。     

青少年肾阳虚体质差异表达基因的筛选研究探析

目的:利用基因芯片技术筛选、分析青少年肾阳虚体质者外周血白细胞的差异表达基因,从基因水平初步探究青少年肾阳虚体质的形成机理.方法:利用体外转录方法,将青少年肾阳虚体质组与同年龄段的正常体质组外周血白细胞mRNA合成为标记有不同荧光的cDNA探针,运用杂交互补原理筛选差异表达基因.结果:共筛选出127条符合标准的差异表达基因,其中63条呈上调表达,64条呈下调表达.结论:与青少年肾阳虚体质相关的基因表达涉及到免疫相关、发育相关、细胞生长、细胞受体、细胞信号和传递蛋白、蛋白翻译合成等.其中,CCNH基因与PSMB7基因的表达差异最大,提示这两条基因可能与青少年肾阳虚体质密切相关.     

运用基因芯片研究骨关节炎虚寒证的基因表达谱述要

目的:研究骨关节炎虚寒证的基因表达谱.方法:临床上选择骨关节炎虚寒证患者8例,同时选择8例正常人,取血、提取mRNA、经标记、杂交、清洗、芯片扫描、图像的采集与数据分析等过程获得差异基因表达谱.结果:获得表达差异大于2.0倍的基因75条.讨论:对75条基因中已知功能的41条基因从病、证、基因多功能等角度进行了初步分析.     

老龄肾阳虚证差异表达基因的筛选与鉴定

目的:筛选并鉴定与老龄肾阳虚证相关的差异表达基因。方法:从前期基因表达谱芯片初步获得的差异表达基因中筛选出25个基因,选取18例肾阳虚证患者和6例正常对照者,采用半定量RT-PCR检测其血液中这25个基因的表达情况,从中鉴定出与老龄肾阳虚证相关的差异表达基因。结果:有8个基因在18例老龄肾阳虚证患者和6例正常人间的表达水平存在明显差异,这8个基因主要涉及细胞周期和凋亡,肿瘤发生以及免疫。结论:老龄肾阳虚证的发生涉及一系列免疫紊乱的复杂过程,推测肾阳虚可能与肿瘤的发生存在某种程度的关联。     

运用基因芯片研究骨关节炎虚寒证的基因表达谱述要

目的：研究骨关节炎虚寒证的基因表达谱。方法：临床上选择骨关节炎虚寒证患者8例。同时选择8例正常人，取血、提取mRNA、经标记、杂交、清洗、芯片扫描、图像的采集与数据分析等过程获得差异基因表达谱。结果：获得表达差异大于2.0倍的基因75条。讨论：对75条基因中已知功能的41条基因从病、证、基因多功能等角度进行了初步分析。     

肾阴虚证及肾阳虚证不孕症患者卵巢颗粒细胞基因表达谱研究

目的运用基因组学方法研究不孕症不同肾虚证型的基因表达差异并探索其潜在的目标基因。方法选取肾阴虚证、肾阳虚证、正常(因男方因素不孕)行体外受精-胚胎移植/卵胞浆内单精子显微注射(IVF-ET/ICSI-ET)的不孕症患者各33例。收集3组患者取卵日直径1.80~2.00 cm卵泡的卵泡液,提取颗粒细胞,应用高通量测序技术测定各组基因表达,分析各组差异表达的基因,对差异表达基因进行功能和通路分析。结果与正常组相比,肾阴虚证组、肾阳虚证组基因表达谱均存在明显差异。肾阴虚证组与正常组的差异表达基因313条,其中219条上调、94条下调;肾阳虚证组与正常组的差异表达基因319条,其中218条上调、101条下调。差异表达基因的基因本体论(GO)和信号转导通路分析表明,肾阴虚证单独调节的基因主要与细胞凋亡、生殖功能相关,肾阳虚证单独调节的基因主要与女性妊娠、胚胎着床相关。结论p53、Bax、Bcl-2、IGFBP7、HSL、RPL29等基因与细胞凋亡、生殖功能、女性妊娠、胚胎着床相关,这些基因有望成为不孕症中医肾虚辨证分型的目标基因。     

肾虚质大鼠免疫相关基因表达谱与肾藏象理论相关性研究

目的:研究肾虚质大鼠脾脏淋巴细胞免疫相关基因表达谱的状况,筛选差异表达的免疫基因谱,探索用现代免疫及基因芯片技术研究肾藏象理论的新方法。方法:采用"猫吓鼠"的方法,造成先天不足、后天失养的复合型肾虚质动物模型,提脾脏淋巴细胞总RNA,经标记、杂交、芯片扫描、图象采集与数据分析等过程获得基因表达谱。结果:模型组与空白组大鼠脾脏淋巴细胞mRNA杂交得到了149条差异表达基因;药物干预后与模型组杂交得到了45条差异表达基因,有20条基因在两次杂交中均有差异。结论:肾虚质大鼠脾脏淋巴细胞存在差异表达的免疫基因谱,补肾中药可以通过调控某些基因的表达而发挥改善肾虚质的作用。     

利血平脾虚证模型大脑皮层基因表达谱变化的初步研究

目的 :应用基因芯片技术研究利血平脾虚证大鼠模型大脑皮层基因表达谱的变化。方法 :雌性Wis tar大鼠 30只 ,按体重均衡随机分为模型组和对照组 ,模型组用利血平注射液背部皮下注射。造模第 1～ 9天 :0 .15mg/kgbw/天 ,第 10～ 12天 :0 .2 5mg/kgbw/天 ,第 13天 :0 .5mg/kgbw/天。对照组同法注射同量注射用水。第 14天处死 ,取大脑皮层 ,提取mRNA ,作逆转录为cDNA ,制成探针以备检测。选用两张BioDoorChip4 0 96基因表达谱芯片 ,将探针与芯片杂交 ,计算机扫描后 ,用GenePixPro 3.0软件进行分析。结果 :筛选出两张芯片上4 0 96条靶基因中 ,脾虚证模型基因差异表达一致的基因 14 5条 ,占检测基因的 3.5 4 % ,其中已知基因表达上调的有 2 7条 ,表达下调的有 2 0条。并进行初步分析。模型大鼠大脑皮层的基因表达改变涉及免疫、细胞骨架运动、能量代谢、蛋白合成和细胞内信号转导等多个方面。结论 :脾虚证实质涉及大脑皮层的基因表达谱改变。     

老龄肾阳虚证的差异表达基因谱分析

目的 采用基因表达谱芯片技术,分析老龄肾阳虚证的发生与基因表达异常间的联系.方法 筛选肾阳虚证患者3名和正常对照者3名,采用美国Affymetrix公司的HG-u133Plus 2.0基因表达谱芯片,通过组间比较,筛选出老龄肾阳虚患者差异表达基因.结果 芯片数据组间比较分析后获得34条差异表达基因,聚类分析得到6条有特征性地差异表达基因,主要涉及细胞周期和凋亡,肿瘤发生以及免疫.结论 老龄肾阳虚证的发生涉及一系列免疫紊乱的复杂的过程,可能与个体的衰老存在密切关联.     

基因芯片技术研究虚热证大鼠阴虚内热的分子机制

目的:通过基因芯片技术研究虚热证大鼠肝全基因表达谱的改变,阐释虚热证大鼠"阴虚内热"的分子机制。方法:使用中药复方附子、肉桂、干姜建立虚热证大鼠模型,应用基因芯片检测各组大鼠肝脏基因表达,筛选差异表达基因,进行基因功能分类注释,荧光定量PCR验证芯片结果。结果:虚热模型组与空白对照组比较有99条基因差异表达,主要涉及防御应答,固醇代谢等功能。结论:虚热证阴虚内热的分子机制可能与刺激应答相关基因及固醇代谢相关基因两类基因的异常表达相关。     

老龄冠心病心肾阳虚证的差异表达基因谱分析

目的:采用双通道基因表达谱芯片技术,分析老龄冠心病心肾阳虚证基因表达水平的异常。方法:采用病证结合的诊断标准,筛选老龄冠心病心肾阳虚证患者6名和同龄健康对照者6名,采血,分离白细胞,提取总RNA,做基因芯片检测。结果:经Microsoft excel和Microsoft office Access软件筛选,老龄冠心病心肾阳虚证与健康对照者比较,获得44条差异表达基因,主要涉及脂代谢、免疫、心血管病变的基因。结论:老龄冠心病心肾阳虚证的发生涉及一系列免疫和脂代谢紊乱的复杂的过程,与动脉硬化存在密切关联。     

青少年肾阳虚体质差异表达基因的筛选研究

目的利用基因芯片技术筛选、分析青少年肾阳虚体质者外周血白细胞的差异表达基因,从基因水平探究青少年肾阳虚体质的内在机理。方法通过针对性调查,对154例16~24岁青少年进行问卷调查,筛选典型的青少年肾阳虚体质者。利用体外转录方法,将青少年肾阳虚体质组与同年龄段正常体质组外周血白细胞mRNA,合成为标记有不同荧光的cDNA探针,运用杂交互补原理筛选差异表达基因。结果共筛选出127条符合筛选标准的差异表达基因,其中63条呈上调表达,64条呈下调表达。结论与青少年肾阳虚体质相关的基因表达涉及到免疫相关、细胞周期蛋白、原癌基因和抑癌基因、代谢、离子通道和运输蛋白、细胞骨架和运动、DNA结合、转录和转录因子、细胞受体、细胞信号和传递蛋白、蛋白翻译合成等。其中CCNH基因与PSMB7基因的表达差异最大,提示这两条基因可能与青少年肾阳虚体质密切相关。     

用基因芯片技术研究青少年肾阳虚体质差异表达基因

利用基因芯片技术筛选、分析青少年肾阳虚体质者外周血白细胞的差异表达基因，从基因水平初步探究青少年肾阳虚体质的机理。利用体外转录方法，将青少年肾阳虚体质组与同年龄段的正常体质组外周血白细胞mRNA合成为标记有不同荧光的cDNA探针，运用杂交互补原理筛选差异表达基因。结果：共筛选出127条符合标准的差异表达基因，其中63条呈上调表达，64条呈下调表达。提示：与青少年肾阳虚体质相关的基因表达涉及到免疫相：关、发育相关、细胞生长、细胞受体、细胞信号和传递蛋白、蛋白翻译合成等。