维甲类化全物Ro13—7410对HL—60细胞的作用

目的：探讨合成的第三代维甲类化合物（Ｅ）－４「２－５，６，７，８－ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏ－５，５，８，８－ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌ－２－ｎａｐｈｔｈａｌｅｎｙｌ－１－ｐｒｏｐｅｎｙｌ」ｂｅｎｚｏｉｃ ａｃｉｄ（Ｒｏｌ３－７４１０）对白血病细胞ＨＬ－６０的影响。方法：采用ＮＢＴ还原能力测定检测细胞分化，电和程序性细胞死亡检测试剂盒鉴别凋亡细胞，Ｆｕｒａ－２／ＡＭ荧光法测定胞浆内Ｃａ＾２＋浓度，ＰＣＲ－Ｅ     

苦参碱对K562细胞株端粒酶活性和细胞周期的影响

目的为寻找新的肿瘤细胞诱导分化剂,探讨了苦参碱对Ｋ５６２细胞的诱导分化作用及其机制。方法采用ＰＣＲＥｌｉｓａ方法检测苦参碱作用前后端粒酶活性的改变,以流示细胞仪分析细胞周期的改变。结果苦参碱作用后的Ｋ５６２细胞,其端粒酶活性明显受抑,且细胞周期明显改变,Ｓ期细胞数显著降低。结论苦参碱对Ｋ５６２细胞有诱导分化作用,其机制可能与抑制端粒酶活性、阻止细胞周期的进程有关。     

维甲类化合物Ro13-7410对HL-60细胞端粒酶活性的影响

维甲类化合物Ｒｏ１３７４１０对ＨＬ６０细胞端粒酶活性的影响刘小珊娄陵生张莉萍周建芳唐宗山黎学先蒋纪恺康格非既往研究表明，ＨＬ６０细胞在被全反式维甲酸（ＲＡ），二甲亚砜（ＤＭＳＯ）等诱导分化时，伴有端粒酶活性的明显下降。我们在以往的工作中发现，合...     

巨噬细胞培养上清液对HL-60细胞端粒酶活性的影响研究

目的　探讨影响端粒酶活性因素及可能机理。方法　使用ＰＣＲ－ＥＬＩＳＡ法半定量检测端粒酶活性，并进行细胞周期、形态学观察。以人类早幼粒白血病细胞ＨＬ－６０（Ⅰ）和全反式维甲酸（ＡＴＲＡ５μＭ）处理７２ ｈ 的ＨＬ－６０细胞（Ⅱ）为实验对象。再用一定浓度的小鼠腹腔巨噬细胞培养上清液（ＭＣＳ）体外刺激实验细胞。结果　实验细胞Ⅱ在５％ ＭＣＳ作用下，较对照无明显差异；受２０ ％ ＭＣＳ作用４８ ｈ，端粒酶活性可明显上调（Ｐ＜ ０．０５），在第３ 天酶活性下降；在２０％ 、４０％ ＭＣＳ作用下较对照均明显增高（Ｐ＜ ０．０５），但两者（２０％ 与４０％ ）间无明显差异；ＭＣＳ直接作用实验细胞Ⅰ、Ⅱ的端粒酶提取物，未见端粒酶活性明显变化。实验细胞Ⅱ在持续的ＭＣＳ作用下培养２ 周，恢复恶性增殖能力。端粒酶活性变化受细胞群主体分布影响不大。ＭＣＳ作用于具有高端粒酶活性的实验细胞Ⅰ，未发现明显促进作用。无ＭＣＳ的培养体系中，小牛血清浓度不影响实验细胞Ⅰ、Ⅱ的端粒酶活性。结论　ＡＴＲＡ处理的ＨＬ－６０ 细胞的端粒酶是可调节的，未活化的巨噬细胞培养上清液可对其活性进行有效上调，而对ＨＬ－６０ 细胞高水平表达的端粒酶活性影响不大。     

胃癌细胞凋亡过程中胞内Ca2+和三磷酸肌醇浓度的改变

目的　探讨顺铂诱导胃癌细胞凋亡过程中细胞内游离Ｃａ２＋ 浓度（［Ｃａ２＋］ｉ） 和三磷酸肌醇（ＩＰ３） 浓度的变化特点和意义。方法　选择顺铂诱导胃癌细胞凋亡,采用光镜、电镜、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测凋亡。Ｆｕｒａ２ 荧光负荷技术测［Ｃａ２＋］ｉ,竞争性蛋白结合法测定ＩＰ３ 浓度。结果顺铂浓度为２ μｇ／ｍｌ 作用于ＢＧＣ８２３ 胃癌细胞２４ 小时出现典型的凋亡改变。胃癌细胞凋亡过程中,胞内［Ｃａ２＋］ｉ 明显升高,以凋亡早期更为明显。胃癌细胞凋亡早期（３０ 秒）,ＩＰ３ 浓度明显升高,到凋亡晚期（２ ～２４ 小时） ,ＩＰ３ 浓度明显降低。结论　在胃癌细胞凋亡过程中,［Ｃａ２＋］ｉ 表现为上调趋势。ＩＰ３ 浓度在凋亡早期,表现为上调趋势,在稍晚阶段,表现为下调趋势,这为治疗胃癌提供新靶点     

神经节苷脂GM_3的分离纯化及对HL-60细胞膜中性糖脂图谱的影响

用改进的Ｋｌｅｎｋ法从狗红细胞中提取和纯化了神经节苷脂ＧＭ３，将分离纯化的ＧＭ３加入早幼粒白血病细胞系（ＨＬ－６０）ＤＭＥ／Ｆ１２培养液中，终浓度为５０μＭ，细胞的增殖明显受到抑制，并按单核－巨噬细胞分化成熟，表现为细胞吞噬功能显著增强，非特异性酯酶活性升高。细胞的形态呈现与分化相一致的变化，比较ＧＭ３诱导ＨＬ－６０细胞分化前后细胞中性糖脂图谱的变化，ＣＤＨ显著增多是ＧＭ３诱导ＨＬ－６０细胞向单核－巨噬细胞分化的一个重要特征，ＣＭＨ及ＣＱＨ亦相应显著增多。     

放射诱导HL-60细胞凋亡的流式细胞计量术分析

目的　定性和定量地分析放射诱导ＨＬ６０ 细胞凋亡。　方法　以人类白血病细胞系ＨＬ６０ 为材料，应用光学显微镜和电子显微镜及琼脂糖电泳定性分析６０ Ｃｏ 放射线诱导ＨＬ６０ 细胞凋亡的发生，应用ＤＮＡ流式细胞计量术和末端转移酶（ＴｄＴ） 介导的缺口末端标记法（ＴＵＮＥＬ） 的流式细胞定量检测ＨＬ６０ 细胞凋亡。　结果　（１） 放射后ＨＬ６０ 出现细胞体积缩小，染色质固缩致密化、边缘化，染色体断裂，凋亡小体和细胞膜保持完整等形态学特征。（２） 琼脂糖电泳表现为特征性ＤＮＡ“梯谱”。（３）流式细胞计量术发现放射诱导ＨＬ６０ 细胞凋亡在照射后６ｈ 已较明显，而且细胞凋亡百分比随着照射剂量增加而增加。ＴＵＮＥＬ法检测细胞凋亡百分比值比ＤＮＡ流式细胞分析的方法得到的值要小，但差异无显著意义。　结论　流式细胞计量术结合细胞形态学检查和（ 或） 琼脂糖电泳能较好、简便、迅速地分析放射诱导ＨＬ６０ 细胞凋亡     

丹参酮ⅡA诱导HL-60细胞凋亡

目的：在以往对丹参酮ＩＡ诱导分化和抗癌作用研究的基础上，进一步研究丹参酮ＩＡ诱导ＨＬ－６０细胞凋亡，以探讨其抗癌作用机理。方法：应用体外细胞培养技术，以１～１０μｇ／ｍｌ丹参酮ＩＡ作用于培养的ＨＬ－６０细胞５天后，进行光镜、电镜、琼脂糖凝胶电泳及流式细胞仪的观察和分析。结果：丹参酮ⅡＡ作用后，ＨＬ－６０细胞的生长受到明显抑制，其半数抑制浓度ＩＣ５０约为１０μｇ／ｍｌ光镜、电镜观察到细胞呈现凋亡特征，琼脂糖凝胶电泳显示细胞ＤＮＡ呈梯状降解，流式细胞仪分析表明，１０μｇ／ｍｌ丹参酮ⅡＡ作用后，ＨＬ－６０细胞凋亡率达２８．８％，细胞被阻止于Ｇ０／Ｇ１期，Ｓ期细胞明显减少（Ｐ＜０．０１），其ｂｃｌ－２基因的表达显著降低，而ｐ５３基因的表达增强（Ｐ＜０．０１）。结论：丹参酮ⅡＡ可诱导ＨＬ－６０细胞凋亡，这可能为丹参酮ⅡＡ抗癌抑癌的重要机理之一，诱导分化与诱导凋亡之间的关系有待进一步探讨。     

神经节苷脂GM3的分离纯化及对HL—60细胞膜中性糖脂图谱的影响

用改进的Ｋｌｅｎｋ法从狗红细胞中提取和纯化神经节苷脂ＧＭ３，将分离纯化的ＧＭ３加入早幼粒白血病细胞系（ＨＬ－６０）ＤＭＥ／Ｆ１２培养液中，终浓度为５０μＭ，细胞的增殖明显受到抑制，并按单核－巨噬细胞分化成熟，表现为细胞吞噬功能显著增强，非特异性酯酶活性升高。细胞的形态呈现与分化相一致的变化，比较ＧＭ３诱导ＨＬ－６０细胞分化前后细胞中性糖脂图谱的变化，ＣＤＨ显著增多是ＧＭ３诱导ＨＬ－６０细胞向单核－     

阿霉素诱导细胞凋亡过程中的信号传递

目的探讨阿霉素诱导人涎腺癌细胞凋亡的分子机制。方法通过光镜和电镜观察不同作用时间后细胞的形态学改变，ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳，流式细胞仪分析ＤＮＡ含量和细胞周期，并检测细胞内Ｃａ(２＋)浓度的变化。结果阿霉素作用于ｍＥｃ－１细胞后出现了细胞凋亡的特征，细胞内Ｃａ(２＋)浓度明显增力。。结论Ｃａ(２＋)参与细胞凋亡过程可能是阿霉素诱导ＩＥＣ－１细胞凋亡的机制之一。     

Inhibition of telomerase activity during induction of HL-60 cells by retinoid Ro13-7410

Telomeresformtheendsofeukaryoticchromosomesconsistingoftandemarraysofhighlyconservedhexameric(TTAGGG)repeats.Telomereshavebeenimplicatedinprotectingtheendsofchromosomesagainstexonucleaseandligases,preventingtheactivationofDNA-damagecheckpoints,andcou...     

三氧化二砷对HL-60细胞hTERT基因表达和端粒酶活性的影响

目的：探讨三氧化二砷（As2O3)处理HL－60细胞前后人类端粒酶逆转灵酶（hTERT)基因表达和端粒酶活性的改变。方法：采用姬姆萨染色及碘化丙锭染色置流式细胞仪检测来观察细胞的凋亡，以RT－PCR分析hTERT 基因的mRNA表达水平；应用间接免疫荧光标记法通过流式细胞仪检测hTERT蛋白含量；利用多聚酶链反应－酶联免疫反应（PCR－ELISA）方法检测As2O3处理HL－60前后端粒酶活性的改变。结果：2umol/L As2O3诱导HL－60细胞凋亡的过程中，hTERT mRNA表达水平显著下降，细胞内hTERT蛋白含量也相应降低，其端粒酶活性明显受到抑制，结论：As2O3可通过下调hTERT基因的表达而抑制HL－6细胞的端粒酶活性。     

端粒酶反义脱氧核苷酸与多糖对HL-60细胞的影响

目的　研究人类端粒酶反义脱氧核苷酸及其与梁金菇多糖协同作用对HL 6 0细胞凋亡及端粒酶活性的影响。方法　端粒酶反义脱氧核苷酸单独或与梁金菇多糖协同处理HL 6 0细胞后 ,分别用涂片法、流式细胞仪法和电镜检测两种药物处理后对细胞凋亡的影响 ,以TRAP Elisa法检测对端粒酶活性的影响。结果　端粒酶反义核酸单独或与梁金菇多糖协同处理HL 6 0均可提高细胞的凋亡率并抑制端粒酶活性 ,两者协同处理效果更显著。结论　端粒酶反义核酸可降低细胞的端粒酶活性并诱导细胞调亡 ,梁金菇多糖则可加强这种作用。     

Inhibition of telomerase activity correlates with a decrease in the RNA component of telomerase during differentiation

In most normal somatic cells the telomeres of human chromosomes shorten with each cell division because of low expression or lack of telomerase activity. Telomerase, a ribonucleoprotein that synthesizes telomeric DNA onto chromosomal ends, is reactivated or upregulated in tumor cells and maintains the stability of telomere length. We previously showed that treatment of HL60 leukemia cells with differentiation-inducing agents resulted in inhibition of telomerase activity. In the present study, we found that the decrease in telomerase activity did not temporally correlate with the expression of a differentiation marker, CD11b, on the cell surface. Mixing of protein extracts from telomerase-negative differentiated HL60 cells with those from parental HL60 cells did not result in inhibition of telomerase activity, suggesting that a diffusible cellular telomerase inhibitor was not produced in the differentiated cells. However, a decrease in telomerase activity correlated with a selective decrease of telomerase RNA expression, a decrease in the levels of total cellular RNA, and an increase in cells at G(0) phase.     

Arsenic trioxide downregulates telomerase activity in HL-60 cells

Telomeres are the specialized nucleoproteincomplexes at the physical ends of eukaryoticchromosomes[1]. Telomere length decreases along with increasing cycles of cell divisions. Telomere shortening has therefore been proposed to play a role in cellular senescence. Telomerase is a protein-RNA enzyme complex that adds a six-base DNA sequence (TTAGGG) to the ends of chromosomes and thereby prevents their shortening. This enzyme is specifically activated in most malignant tumors but is usuall…     

Z-ajoene引起HL-60细胞G2/M期阻滞及端粒酶表达活性的降低

目的 探讨Z-ajoene诱导细胞周期阻断于G2／M期的分子机制以及对端粒酶活性的抑制作用。方法 采用MTT法测定Z-ajoene对HL-60细胞的增殖抑制率;以流式细胞仪测定Z-ajoene对HL-60细胞的周期阻断作用,并采用Western blot法测定相关蛋白p34^cdc2、cyclinB1、cyclinA的表达水平;TRAP-银染法测定端粒酶活性的变化,同时采用RT-PCR方法检测端粒酶hTRT和TP1mRNA的表达。结果 10μmol／L Z-ajoene作用后能明显将HL-60细胞阻滞于G2／M期。在药物作用10h后,G2／M期细胞的比例达到顶峰,与对照组比较增加了1．95倍。另外,10μmol／L Z-ajoene作用后出现cyclinB1蛋白的聚集及p34^cdc2蛋白表达的降低,但cyclinA蛋白的水平并无显著性变化。经Z-ajoene作用24h后,HL-60细胞端粒酶活性显著降低。而不同浓度的药物作用12h,其端粒酶活性均无显著性变化。在10μmol／L Z-ajoene作用24h后,能够降低端粒酶hTRT和TP1 mRNA的水平。结论 Z-ajoene能够在作用较短时问内明显将细胞周期阻断于G2／M期,同时伴有cyclinB1聚集及p34^cdc2的抑制;而HL-60细胞的端粒酶活性仅在药物作用较长时间后才有一定降低,并且端粒酶hTRT和TP1mRNA的表达也同时降低。结果表明,Z-ajoene的细胞周期阻断作用可能是造成端粒酶缺失及HL-60细胞生长抑制的重要原因。     

冬凌草甲素对HL-60细胞的生长抑制作用及其对细胞端粒酶活性的调节

目的：探讨冬凌草甲素对HL-60细胞的生长抑制作用及其对细胞端粒酶活性的影响．方法：应用噻喳蓝(MTT)还原法检测细胞生长抑制率；流式细胞仪检测细胞凋亡及bcl-2基因的表达水平；应用端粒重复扩增(TRAP)法检测端粒酶活性。结果：5nmol／L～25nmol／L的冬凌草甲素可诱导细胞凋亡．抑制细胞增生。在细胞生长受抑制过程中．端粒酶活性及bcl-2表达水平显著下降。结论：冬凌草甲素可诱导急性白血病HL-60细胞凋亡、抑制细胞增生；其作用机制与端粒酶活性下降及bcl-2的表迭水平下调有关．其中bcl-2的表达水平可能起重要的调节作用。     

端粒酶活性与白血病细胞系的分化

为了探讨白血病细胞的分化和端粒酶活性改变的关系。方法采用ＰＣＲ－ＬＩＳＡ方法检测白血病细胞株Ｋ－５６２和ＨＬ－６０诱导分化前后的端粒酶活性。结论分化是细胞自身调控的过程,端粒酶活性的高低与细胞所处的分化状态密切相关。