磷脂酶Cε1在1型糖尿病大鼠病理性神经痛中的作用初探

目的 观察糖尿病病理性神经痛(DNP)大鼠脊髓磷脂酶Cε1(PLCE1)表达变化及RhoA抑制剂C3胞外酶对其活性影响,阐明PLCE1在DNP发生中的作用.方法 24只8周龄、健康雄性SD大鼠随机分为4组(n=6):正常对照组(C组),单纯RhoA抑制剂组(E组),1型糖尿病DNP模型组(DNP组)和RhoA抑制剂干预...     

磷脂酶Cε1在1型糖尿病大鼠病理性神经痛中的作用初探

  目的  观察糖尿病病理性神经痛（DNP）大鼠脊髓磷脂酶Cε1（PLCE1）表达变化及RhoA抑制剂C3胞外酶对其活性影响，阐明PLCE1在DNP发生中的作用。  方法  24只8周龄、健康雄性SD大鼠随机分为4组（n = 6）:正常对照组（C组），单纯RhoA抑制剂组（E组），1型糖尿病DNP模型组（DNP组）和RhoA抑制剂干预组（EG组）；静脉注射1%链脲佐菌素（STZ 65 mg/kg）用于建立1型糖尿病DNP大鼠模型。对E组和EG组大鼠进行每天1次为期1周的RhoA抑制剂C3胞外酶（10 pg/10 μL）鞘内注射治疗；C组和DNP组在相应时间点鞘内给予同等容积的溶剂；应用葡萄糖测定仪测定空腹血糖浓度（mmol/L）；采用von Frey细丝法和冷热板测痛仪测定大鼠后爪机械刺激缩足反射阈值（MWT）和热刺激缩足反射潜伏期（TWL）作为痛阈观察指标；Western-blot检测脊髓活化RhoA蛋白（RhoA-GTP）、总RhoA蛋白和PLCE1蛋白表达，用脊髓PLCE1蛋白表达水平和RhoA-GTP/总RhoA比值分别评价PLCE1和RhoA活性。ELISA检测脊髓TNF-α和IL-6含量以评价炎症反应。  结果  单纯应用RhoA抑制剂C3胞外酶对非DNP大鼠各项检测指标无明显影响；1型糖尿病DNP大鼠脊髓组织RhoA和PLCE1活性均显著增加（P < 0.05），TNF-α和IL-6含量明显增多，差异有统计学意义（P < 0.05），TWL及MWT显著降低，差异有统计学意义（P < 0.05）； C3胞外酶治疗在显著抑制1型糖尿病DNP大鼠脊髓组织RhoA 表达（P < 0.05）的同时，伴有脊髓PLCE1活性的显著降低，差异有统计学意义（P < 0.05）、炎症因子TNF-α和IL-6生成的明显减少，差异有统计学意义（P < 0.05），并显著缓解1型糖尿病DNP大鼠的机械痛敏和热痛敏。  结论  PLCE1在1型糖尿病大鼠DNP中发挥重要作用，其活性受RhoA调控。     

胰腺癌中磷脂酶Cε1和B淋巴细胞瘤-2表达的研究

目的获取胰腺癌组织,检测并探究PLCε1和B淋巴细胞瘤-2 (Bcl-2)在其中的表达及与胰腺癌临床资料的关系。方法收集中南大学湘雅医院胰腺癌患者(2013年1月至2016年12月确诊)病理石蜡标本69份。另取11个正常的胰腺组织作为对照。应用免疫组织化学的方法,检测所得标本组织中PLCε1和Bcl-2的染色情况。所得数据按临床资料进行分组并分析其相关意义。结果 PLCε1和Bcl-2在胰腺癌组织中表达高于正常组织(P 0.05)。肿瘤组中PLCε1和Bcl-2的阳性表达强度在肿瘤大小组之间(P 0.05)和淋巴结转移组之间差异存在统计学意义(P 0.05)。PLCε1与Bcl-2的表达强度呈正相关(相关系数r=0.639,P 0.05)。结论 PLCε1可能与胰腺癌的发生、发展有关;PLCε1和Bcl-2可能在某些信号通路中扮演重要角色,对胰腺癌内信号通路的调节发挥一定的作用。     

磷脂酶Cε1在结肠癌组织中的表达及意义

目的 通过检测结肠癌组织及其癌旁组织中磷酸肌醇特异性的磷脂酶Cε1 (PI-PLCε1)的表达情况,探讨PI-PLCε1在结肠癌发病过程中的临床意义。方法 采用实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR,qRT-PCR）及免疫组化的方法检测42例结肠癌组织及其相对应的癌旁组织中PI-PLCε1的表达情况,并分析肿瘤分化程度及肿瘤部位对于结肠癌组织中PI-PLCε1表达情况的影响。结果 qRT-PCR结果显示,结肠癌组织中PI-PLCε1基因的表达低于其癌旁组织（ P<0.05）,不同肿瘤分化程度及肿瘤部位结肠癌组织中PI-PLCε1基因的表达差异没有统计学意义（ P>0.05）。免疫组化结果显示,结肠癌组织中PI-PLCε1蛋白的阳性表达率低于其癌旁组织（ P<0.05）。不同肿瘤分化程度结肠癌组织中PI-PLCε1蛋白的阳性表达率差异没有统计学意义（ P>0.05）,但不同肿瘤部位中PI-PLCε1蛋白的阳性表达率差异有统计学意义（ P<0.05)。结论 PI-PLCε1在结肠癌组织中的表达显著减少,且与肿瘤分化程度无关。     

磷脂酶C—γ1在人胚组织中的表达

目的 研究磷脂酶C－γ1（PLC－γ1）在人胚组织中的表达情况。方法 收集人胚组织（包括软骨、软骨膜、骨骼肌）并行石蜡包埋及切片,采用免疫细胞化学ABC染色法观察人胚组织细胞中PLC－γ1的表达情况。结果 PLC－γ1在这几种细胞中均有较强的表达,主要位于胞质中。结论 PLC－γ1相关的细胞内信号传递途径对于人早期胚胎细胞的发育、增殖具有重要的生物学意义。     

"环境-遗传-基因互作"模式中磷脂酶Cε1对食管癌易感性的影响

随着全基因组关联分析( genome-wide associa-tion study,GWAS)和后GWAS研究的深入,越来越多的疾病相关单核苷酸多态性( single nucleotide polymorphism,SNP)被发现.近年的研究[1-3]提示,部分疾病相关SNP可导致其所在基因以及相关基因转录和蛋白表达水平发生变化,进一步影响肿瘤的发生和发展,甚至影响肿瘤的转归(预后),这些发现极大丰富了"环境-遗传-基因互作"模式对肿瘤发生、发展和转归影响的新理论;这些SNP可分为增加疾病易感性的SNP和致病性SNP两大类.推测致病性SNP不但影响相关基因的转录和蛋白表达,并且也可能影响驱动基因突变.     

胰岛素作用对胰岛β细胞磷脂酶Cγ1表达的影响

目的：观察胰岛素对大鼠胰岛β细胞内磷脂酶Cγ1（PLCγ1）表达的影响.方法：大鼠胰岛分离纯化.通过HE染色观察纯化胰岛的形态特征,采用免疫组织化学方法并结合激光扫描共聚焦显微镜和图像分析技术对胰岛β细胞表达不同时间（0,30,60,120,240min）内的PLCγ1进行半定量分析.结果：PLCγ1在胰腺的内外分泌部均有表达.与0min比较,胰岛素作用30,60min时胰岛β细胞表达的PLCγ1荧光强度有明显降低（P〈0.05）;而在240min时PLCγ1荧光强度与0min比较无明显差别.结论：胰岛素作用60min内可使PLCγ1表达下调;胰岛素-PLCγ1途径参与了胰岛素的信息传递.     

磷脂酶C—γ1和γ2在PDGF促成纤维细胞克隆形成中的不同作用

目的 探讨磷酯酶Cγ1和γ2（PLC－γ1和γ2）在血小板源性生长因子（PDGF）诱导小鼠成纤维细胞克隆形成信号传导中的作用。方法 将全长PLCγ2cDNA亚克隆进真核细胞表达载体，转染小鼠成纤维细胞株PLC－γ1－／－和PLC－γ1^ / ，使PLC－γ2在成纤维细胞中表达，同时以未插入目的基因的空载体转染这两种细胞作为实验对照。用有限稀释法随机挑选几个单细胞克隆，经Western Blotting鉴定其PLC－γ2表达量，转染细胞及其相应对照被用来测量克隆形成能力。结果 PLC－γ2可在PDGF的作用下活化，对克隆形成有显的正调控作用，而PLC－γ1基因对克隆形成无任何影响。并且γ2利于细胞低密度时的存活，因而，PLC－γ2可显促进低密度细胞的克隆形成,γ1可能有相反作用。结论 PLC－γ1和γ2在PDGF诱导小鼠成纤维细胞克隆形成中的有不同作用。     

不同部位胃癌却感染的比较

目的 比较不同部位胃癌Hp的感染. 方法 对胃镜检查和病理学确诊的102例胃癌患者(55例胃窦癌和47例胃底癌)临床资料进行回顾性分析.所有患者事先均未接受抗Hp治疗.在癌区及外周区各取组织2块,同时送病理进行组织病理切片染色Warthin-Starry(W-S)染色,并采用快速尿素酶实验,两项均为阳性者确定诊断. 结果 组织切片显示,肠型胃癌与弥漫型胃癌Hp感染比较差异无统计学意义(61.7% vs 58.2,P>0.05).胃窦癌患者Hp感染率明显高于胃底癌患者(78.2% vs 46.8%,P＜0.05). 结论 不同部位胃癌Hp感染不同,胃窦癌较贲门胃底癌感染率更高.     

蛋白激酶C介导磷脂酶C-γ1参与高温诱导热休克蛋白70表达

目的 研究蛋白激酶C(PKC)是否介导磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)参与高温诱导成纤维细胞热休克蛋白70(HSP70)表达的信号转导通路.方法 以基因敲除方法建立的缺失PLC-γ1基因(plcgl-/-)及野生型PLC-γ1基因(plcgl+/+)小鼠胚胎成纤维细胞为模型,Western免疫印迹-增强化学发光法检测高温诱导时PLC-γ1的磷酸化激活,PKC激酶检测试剂盒测定PKC激活程度,并以酶联免疫吸附(ELISA)法及MTT法测定PKC抑制剂白屈莱红碱(chelerthrine chloride,CH)和激活剂佛波醇-12-豆蔻酰-13乙酸(phorbol12-myristate 13-acetate,PMA)对HSPT0表达及细胞热耐力的影响.结果 plcgl+/+细胞经高温处理,PIE-γ1出现磷酸化激活、PKC活性显著增强(P<0.01);plcgl-/-细胞PKC活性也有所增强,但明显低于plcgl+/+细胞(P<0.01).PKC抑制剂或激活剂能增强或降低两种细胞热耐力,对高温引起的两种细胞HSP70合成都有明显抑制或促进作用.结论 蛋白激酶C可介导磷脂酶C-γ1参与高温诱导成纤维细胞热休克蛋白70表达的信号传递.     

肺鳞状细胞癌组织中磷酯酶CE1的表达

目的:探讨磷酯酶CE1(PLCE1)在肺鳞状细胞癌组织中的表达及意义.方法:采用免疫组化SP法检测48例肺鳞状细胞癌组织和48例正常肺组织中PLCE1的表达,分析其表达与肺鳞状细胞癌组织临床病理特征的关系.结果:肺鳞状细胞癌组织中PLCE1的阳性表达率为81.3％(39/48),高于正常肺组织的12.5％ (6/48)...     

Genetic polymorphism of the phospholipase C epsilon 1 gene and risk of gastric cancer

Background The pathogenesis of gastric cancer （GC） involves environmental and genetic factors.Recently,two genome-wide association studies found that phospholipase C epsilon 1 （PLCE1） polymorphisms might be related to GC risk,and several studies further validated this finding.However,these studies yielded inconsistent results.Methods A comprehensive database search was performed to identify eligible studies.Odds ratios with 95％ confidence intervals were calculated to assess the strength of the association between PLCE1 rs2274223,rs753724,and rs11187842 and risk of GC.Subgroup analyses,publication bias,and sensitivity analyses were also conducted.Results Eleven studies （12 cohorts） were included in the meta-analysis.Based on 13 676 cases and 23 569 controls,a significant association between PLCE1 rs2274223 and GC risk was detected under various genotypic models.In the subgroup analyses,the association was significant for cardia GC,but weak for non-cardia GC.The association under the heterozygote model was detected for PLCE1 rs753724 and rs11187842 based on three studies involving 2768 cases and 3890 controls.Conclusions Our findings demonstrate that the presence of the G allele at rs2274223 of the PLCE1 gene may contribute to susceptibility to GC,especially cardia GC.PLCE1 rs753724 and rs11187842 are associated with GC risk under the heterozygote model.Further well-designed large studies are warranted to validate these findings.     

血清肿瘤标志物检测在贲门癌及胃窦癌诊断中的应用价值

目的 比较血清肿瘤标志物联合检测在贲门癌及胃窦癌诊断中阳性率的差异,探讨其临床应用价值. 方法 选择2010-12 ～2014-03就诊于我院并且资料完整的212例胃癌患者进行研究,根据其癌症部位分为胃窦癌组和贲门癌组,并以200例健康体检病人作为正常对照组进行分析.比较三种血清肿瘤标志物血清癌胚抗原(CEA)、糖类抗原72-4(CA72-4)以及糖类抗原19-9(CA19-9)单独检测以及联合检测对贲门癌及胃窦癌诊断阳性率的影响. 结果 单独检测3种肿瘤标志物对贲门癌和胃窦癌的阳性率经统计学分析差异无统计学意义(P＞0.05);而联合肿瘤标志物进行检测时,CA72-4联合CA19-9检测对其阳性率影响不大(P＞0.05),但CEA的联合检测阳性率明显提高,胃窦癌组三者联合检测的阳性率可高达72.90％,而贲门癌组三者联合检测的阳性率也可达58.10％,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 血清CEA、CA72-4以及CA19-9水平在贲门癌及胃窦癌的诊断上具有一定的临床意义,联合检测可显著提高胃癌尤其是胃窦癌的诊断阳性率,其结果优于单独检测,值得在临床上推广使用.     

食管贲门双源癌患者癌组织中mdm2,CyclinD1和p16蛋白的表达

目的:探讨食管贲门双源癌组织中mdm2、CyclinD1和p16蛋白的表达.方法:采用免疫组化ABC法,对河南食管癌高发区30例双源癌患者食管鳞癌(SCC)和贲门腺癌(GCA)组织中mdm2、CyclinD1和p16蛋白的表达进行检测.结果:30例双源癌患者SCC组织中mdm2、CyclinD1和p16蛋白阳性率分别为57%(17/30)、45%(13/29)和24%(7/29),CCA组织中分别为73%(22/30)、33%(10/30)和17%(5/30),SCC和GCA组织中3种蛋白的阳性率差异均无统计学意义(P均＞0.05).SCC和GCA组织中mdm2、CyclinD1和p16蛋白表达的一致性差异无统计学意义(P均＞0.05).结论:食管和贲门双源癌存在较高的mdm2、CyclinD1和p16蛋白表达一致性改变,提示河南食管癌高发区食管贲门双源癌可能具有相似的发病因素和分子机制.     

食管贲门双源癌组织中P21~(WAF1)蛋白的表达

目的:探讨同一个体食管贲门双源癌组织P21WAF1蛋白变化特征及其意义。方法:采用组织病理学和免疫组化卵白素-生物素-过氧化物酶复合物(ABC)法,分析15例双源癌患者(同时发生食管鳞癌和贲门腺癌)P21WAF1蛋白的表达状况。结果:15例食管贲门双源癌患者食管鳞癌和贲门腺癌组织均出现不同程度的P21WAF1蛋白的阳性表达,食管鳞癌组织中阳性率为47%(7/15),贲门腺癌组织中阳性率为47%(6/15),免疫反应类型主要为弥漫型和镶嵌型。15例食管贲门双源癌患者食管鳞癌和贲门腺癌组织中P21WAF1蛋白一致性改变率为87%(13/15)。结论:食管贲门双源癌组织存在较高的P21WAF1蛋白表达一致性改变,提示河南食管癌高发区食管/贲门癌可能具有相似的分子机制。     

食管癌高发区楼村居民贲门与胃窦上皮病变的比较

采用内窥镜直视下粘膜活检和组织病理学检查方法，对河南食管癌高发区楼村普查期间接受胃镜检查的２２６名３０岁以上居民贲门和胃窦粘膜上皮病变进行比较分析。结果：贲门粘膜上皮肠上皮化生和间变发生率明显高于同一人群的胃窦粘膜上皮病变发生率。提示：这一地区人群贲门和胃远侧部位上皮癌变可能存在不同的发病因素和发病机理。     

河南食管癌高发区食管贲门双源癌粘蛋白1、C-erbB2蛋白的表达

目的：探讨同一个体食管贲门双源癌组织粘蛋白1（MUC1）和C－erbB2蛋白变化的特征及其意义。方法：采用免疫组化卵白素－生物素－过氧化物酶复合物（ABC）法和组织病理学方法,分析河南食管癌高发区25例双源癌患者（同时发生食管鳞癌和贲门腺癌）MUC1和C－erbB2蛋白的表达状况。结果：25例患者食管鳞癌和贲门腺癌组织均出现不同程度的MUC1和C－erbB2蛋白的阳性表达。食管癌：MUC1,C-erbB2免疫阳性率分别为80％（20／25）,20％（5／25）;贲门癌：分别为72％（18／25）,48％（12／25）,且免疫反应类型均主要为弥漫型。MUC1,C－erbB2蛋白在食管和贲门双源癌肿瘤组织中具有很高的一致性改变,一致性改变率分别为92％、64％。结论：食管和贲门双源癌存在较高的MUC1和C-erbB2蛋白一致性改变,提示河南食管癌高发区食管贲门双源癌可能具有相似的发病因素和分子机制。     

PD-L1和 PD-1在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的：探讨程序性死亡配体-1（PD-L1）和程序性死亡受体-1（PD-1）在胃癌组织中的表达及其与患者临床病理特征的关系。方法收集151例行胃癌根治术患者的肿瘤组织标本及其对应的74例转移淋巴结标本,以及20例癌旁组织标本,采用免疫组织化学法检测其中 PD-L1和 PD-1蛋白表达,并分析其与患者各项临床指标关系。结果 PD-L1和PD-1在胃癌细胞及癌间质淋巴细胞表达较癌旁组织明显升高,阳性率分别为60.93%和38.41%;癌旁组织不表达 PD-L1和 PD-1;在转移淋巴结的表达与对应肿瘤组织一致,一致率分别为82.43%和87.84%。胃癌组织 PD-L1和 PD-1表达不相关。PD-L1表达与 pTNM 分期、浸润层面、淋巴结转移情况及脉管癌栓相关（P <0.05）,PD-1与各临床指标不相关。结论 PD-L1和 PD-1在胃癌组织中表达显著升高,并与胃癌患者临床病理特征密切相关;PD-L1可能成为预测胃癌进展和预后的新分子标志物,阻断 PD-L1/ PD-1信号通路有望成为胃癌免疫治疗的新策略。     

胃窦胃体部幽门螺杆菌Lewis抗原的表达

目的：研究胃内不同部位幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,Hp)Lewis抗原表达的状况。方法：应用ELISA法检测58位患者胃窦胃体部Hp菌株Lewis抗原的表达，用RAPD－PCR法测定Hp菌株类型。结果：105例患者中，58例（55.2%）胃窦胃体部位同时Hp阳性，其中55例（94.9%）为同一Hp菌株感染。55对Hp菌株中，21对（38.2%）表达不同的Lewis抗原（Le^x、Le^y、Le^a和Le^b）。结论：部分患者胃窦胃体部位相同Hp菌株表达不同的Lweis抗原。     

Expression of vascular cell adhesion molecule-1 facilitates angiogenesis in gastric carcinoma

Objective： To investigate the relationship between the expression of VCAM-1 and oncogenesis, tumor angiogenesis and metastasis in gastric carcinoma. Methods： Using RT-PCR and immunohistocbemistry technique, the expression of VCAM-1 were detected in specimens from 44 patients with gastric cancer, 8 with ulcer. Microvessel density （MVD） was also counted by endothelial cells immunostained with monoclonal antibodies CD34. In addition, Circulating sVCAM-1 concentrations were measured by an enzyme linked immunosorbent assay. Results ： Of 44 gastric cancer tumor tissues, 36 were detected the ex pressions of VCAM-1 mRNA. The rates of VCAM-1 mRNA in the primary gastric cancer tissues were significantly higher than those in the para-cancerous tissues and benign ulcer tissues （P 〈 0.05）. The VCAM-1 posithoseive isolates had more lymph node metastases than that of VCAM-l-negative ones （P 〈 0.05）： MVD of positive VCAM-1 expression tissues were higher than those of negative VCAM-1 （P 〈 0.05）. Circulating sVCAM-1 levels decreased significantly after operation （P 〈 0.05）. Furthermore, the levels of sVCAM-1 were positively correlated with the expressions of VCAM-1 in the tumor tissues （r = 0.64, P 〈 0.05 ）. Conclusion： Expressions of VCAM-1 mRNA was closely related to oncogenesis, tumor angiogenesis and metastasis in gastric carcinoma. The concentration of sVCAM-1 may be considerexl as an effective mark of tumor burden of gastric cancer.