性别和年龄对60Coγ射线照射离体人外周血辐射敏感基因mRNA表达的影响

目的：探讨性别和年龄因素对电离辐射诱导的离体人外周血中辐射敏感基因mRNA表达变化的影响。方法：采集30例健康人离体外周血,以剂量率为1 Gy/min的⁶⁰Co γ射线进行照射,照射剂量分别为0.5、1、2、3、4、6和8 Gy （以0 Gy为阴性对照组）,照射后培养12 h,应用实时荧光定量PCR （qPCR）方法检测18个辐射敏感基因的mRNA表达水平变化,分析性别和年龄因素对这些基因mRNA表达水平的影响。结果：与阴性对照组相比,各剂量γ射线照射组人外周血18个辐射敏感基因的mRNA表达水平均明显增加,并且呈剂量-效应关系（R²=0.63~0.97,P < 0.05）。在相同照射剂量,MDM2、XPC、FDXR、DDB2、ASTN2和TNFSF4 mRNA相对表达水平在不同个体之间存在较大的差异。女性外周血中BAX、TNFRSF10B、ASTN2、TNFSF4、POLH和GADD45A mRNA相对表达水平均高于男性,在0.5~8 Gy照射剂量范围内具有统计学差异（P < 0.05或P < 0.01）。MDM2、FDXR、DDB2和RPS27L mRNA表达水平在不同年龄组间（20~29岁、30~39岁、40~49岁和50~60岁）存在差异（P < 0.05或P < 0.01）。结论：离体人外周血中辐射敏感基因mRNA表达水平的变化存在个体间差异,且与受照者性别和年龄相关。     

（60）Co γ射线诱导人淋巴细胞GDF15 mRNA表达水平的变化

目的：研究电离辐射诱导正常人外周血永生化淋巴细胞株中生长分化因子15（GDF15）mRNA表达水平的变化,以期为采用基因表达指标估算电离辐射吸收剂量提供科学依据。方法：用60Coγ射线照射指数增长期的人淋巴细胞株,采用不同剂量（0～15Gy）照射,于照射后不同时间点（0～72h）收集细胞提取RNA,用实时荧光定量PCR测定GDF15 mRNA表达水平的变化。结果：除照射后12h外,其它各时间点淋巴细胞株中,照射后细胞GDF15 mRNA的表达水平均随照射剂量的增加而升高,至某一剂量达高峰后开始下降;照射后12h细胞GDF15基因表达水平在各照射剂量点均显著高于对照（0Gy）组,拟合剂量效应曲线为y=1.0469x＋0.5278（R2=0.9457,P〈0.05）。在不同时间点,各照射剂量组基因表达的变化规律不同。8Gy照射后,GDF15表达总体上调,照射后12h达最高。结论：电离辐射诱导的GDF15 mRNA表达水平升高与辐照剂量和时间有一定的关系。     

Ewing’s肉瘤细胞X-射线照射后TNF-α和TGF-β mRNA表达的研究

 目的　研究Ewing’s肉瘤细胞系 (RM 82 )X 射线外照射后肿瘤坏死因子 (TNF α)和转化生长因子 (TGF β)mRNA表达水平的变化 ,探讨X 射线诱导内源性TNF α和TGF β产生的可能性及意义。 方法　应用实时荧光RT PCR ,检测接受不同剂量X 线照射 (2Gy ,5Gy ,10Gy ,2 0Gy ,30Gy ,4 0Gy)和受照后不同时间 (1h ,3h ,6h ,12h ,2 4h ,4 8h ,72h)。TNF α和TGF βmRNA表达水平的变化。 结果　RM 82细胞TNF αmRNA表达水平较外照射前显著升高。一方面受照后TNF αmRNA表达逐渐升高 ,照射剂量达 4 0Gy时TNF αmRNA表达水平达高峰 ,为正常对照组的 10 8倍 ;另一方面 ,照射后 3h后TNF αmRNA表达逐渐升高 ,6h达高峰 ,为正常对照组的 18倍。相反 ,TGF βmRNA表达水平X 射线照射前后无显著变化。结论　Ewing’s肉瘤细胞系 (RM 82 )接受X 线照射后TNF αmRNA表达明显升高 ,且呈现时间、剂量依赖性。放射治疗可诱导Ewing’s肉瘤细胞系 (RM 82...     

60Coγ射线诱导人淋巴细胞线粒体COXⅡ基因表达改变的研究

目的：研究电离辐射诱导人外周血永生化淋巴细胞株中线粒体COXⅡ基因表达水平的变化,以期为探索放射敏感生物标志物和解决放射生物学领域中快速剂量估算的难题提供科学依据。方法：采用不同剂量（0～15 Gy）~（60）Coγ射线照射指数生长期的人淋巴细胞株,于照射后不同时间点（0～72 h）收集细胞提取总RNA和总蛋白,分别用实时荧光定量PCR和Western blot方法测定COXⅡ基因表达水平的变化。结果：~（60）Coγ射线照射后的各个时间点上,COXⅡ基因在mRNA水平的变化无明显规律性。在蛋白水平上,与对照组相比,~（60）Coγ射线照射4和12 h后COXⅡ基因表达水平无显著变化（P〉0.05）,照射后24、48和72 h COXⅡ基因表达水平显著上调并且在不同范围内呈现良好的剂量-效应关系（P〈0.05）。对比相同照射时间点COXⅡ基因的mRNA和蛋白水平的表达水平变化发现,两者无必然一致的趋势,但照射后48和72 h,COXⅡ蛋白的表达水平与照射时间呈良好的线性关系。结论：~（60）Coγ射线照射后48和72 h,COXⅡ蛋白表达水平与照射时间呈良好的线性关系,可作为新的辐射损伤标志物进一步研究验证。     

X射线对血管平滑肌细胞粘着斑激酶的影响

目的 探讨X射线对血管平滑肌细胞抑制作用的信号传导机制。方法 建立体外培养的大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）模型,给予2－20Gy（分别为2、5、10、20Gy）单次X射线照射,采用逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）技术,在mRNA水平观察X射线对VSMC粘着斑激酶（FAK）的影响。结果 2－20Gy单次X射线照射下调FAK mRNA表达。照射后48h,2、5、10、15、20Gy各照射组FAK mRNA表达均明显低于对照组,除20Gy与15Gy剂量组之间差异无显著性意义外,各组FAKmRNA表达差异均有极显著性意义（F＝364．21,P＜0．01）。同一剂量15Gy照射后6、24、48、72h照射组FAK mRNA表达均低于同时间点对照组,差异有显著性意义（分别为t=4．07,P＝0．01;t＝7．48,P＝0．02;t＝9．10,P＝0．00;t＝12．93,P＝0．00）,照射后45min、12h两组FAKmRNA表达差异无显著性意义（分别为t=2.18,P=0.10;t=1.46,P=0.22)。结论 放射可能通过在转录水平下调FAK的基因表达,使VSMC增殖受到抑制,诱导VSMC凋亡。其下调作用呈剂量相关性和时间相关性。     

POLH mRNA作为辐射损伤分子生物标志物的可行性研究

目的:研究受γ射线照射后人外周血中POLH mRNA的表达变化,为确立POLH mRNA作为新的辐射损伤分子生物标志物提供实验依据。方法:采取3名健康成人的外周血,利用⁶⁰Co γ放射源分别对其进行0.5、1、2、4、6、10 Gy照射,在照射后2、4、8、12和24 h收集各个剂量组受试者全血,提取总RNA,利用TaqMan探针实时定量PCR法,检测POLH mRNA的相对表达量。另收集30名不同年龄段(男女各占一半)的健康人外周血作为本底组,检测POLH mRNA在不同个体间的表达差异。结果:照射后2 h,仅10 Gy照射组POLH mRNA表达增加,其余各照射组无显著变化;照射后4、8、12和24 h,在0~2 Gy范围内,POLH mRNA表达量随照射剂量的增加而增加,呈现明显的剂量依赖效应,大于2 Gy照射后增加趋势接近饱和。照射后4~12 h随时间的增加表达量也不断增加,于12 h达到峰值。在对健康人群本底表达水平的分析中发现,POLH mRNA表达水平不受性别、年龄影响,在不同个体间相对均一,波动范围小。结论:POLH mRNA可由为辐射诱导表达,在一定时间和剂量范围内呈现明显的剂量依赖关系,且在不同个体之间本底表达水平相对均一,具备作为辐射损伤分子生物标志物的潜力。     

γ射线对人肺癌A549细胞和人淋巴细胞Cx43基因转录表达的影响

目的:研究γ射线对人肺癌A549细胞和淋巴细胞Cx43基因转录表达的影响.方法:对数生长期的肺癌A549细胞和外周血淋巴细胞,分别给予1、2、3、5和6 Gy的60Co γ射线照射,并于照射前(对照组)和照射后4、8、12、24、36、48和72 h分别提取总RNA,反转录成cDNA.应用实时荧光定量PCR技术,检测各时相点Cx43基因表达改变.结果:低剂量1～6 Gy照射后12 h,人外周血淋巴细胞Cx43 mRNA表达水平明显增高,P<0.05.肺癌A549细胞照射后Cx43 mRNA表达水平(在1、3和6 Gy照射12 h后分别为0.06、0.12和0.09)与对照组(1.00)相比明显降低,P<0.05.结论:γ射线照射后能上调人淋巴细胞Cx43 mRNA表达和下调肺癌A549 Cx43 mRNA表达,其机制可能与细胞类型及对γ射线的反应性有关.     

辐射对巨噬细胞系RAW264.7基质金属蛋白酶-9表达的影响

目的观察不同剂量γ-射线(0、5、10、20 Gy)照射小鼠巨噬细胞系RAW264.7后对基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)表达的影响。方法应用不同剂量γ-射线(0、5、10、20 Gy)照射体外培养的巨噬细胞系RAW264.7,照射6、12、24、48 h后,实时荧光定量聚合酶链反应法(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)检测MMP-9 mRNA表达,选择MMP-9 mRNA表达最强的照射剂量;在照射细胞6、12、24、48 h后采用免疫印迹法(Westernblotting)检测MMP-9蛋白表达,并于照射前1 h加入地塞米松1μmol,检测MMP-9蛋白表达。结果60Coγ-射线(5、10、20 Gy)照射RAW264.7细胞系6、12、24、48 h后MMP-9 mRNA表达均明显增强(P<0.05),24 h达高峰,10 Gy增强最明显。与对照组相比,10 Gy照射细胞6、24、48 h后MMP-9蛋白表达明显增强(P<0.05),以24 h最明显(P<0.01);照射前1 h加入1μmol的地塞米松,10 Gy照射24 h后检测MMP-9蛋白表达,与未加地塞米松组相比,MMP-9蛋白表达水平明显下降(P<0.05)。结论γ-射线照射巨噬细胞系RAW264.7,可显著增强MMP-9 mRNA及其蛋白表达;地塞米松可有效抑制电离辐射诱导的MMP-9蛋白表达,MMP-9可能参与了放射性肺损伤的发展。     

X射线对人肺癌A549细胞Bmi-1表达的影响

目的：研究X射线照射对人肺癌A549细胞株中Bmi-1 mRNA和蛋白表达的影响。方法：用不同剂量（0、2、4、6Gy）的X射线照射体外培养的人肺癌A549细胞株,分别采用实时荧光定量PCR和Western blot技术检测照射0、6、12、24、48和72 h后Bmi-1 mRNA和蛋白的表达水平。结果：与对照组比较,2、4、6 Gy X射线照射A549细胞后48 h内Bmi-1 mRNA表达升高,差异均有统计学意义（P〈0.05）;（2 Gy 48 h组除外）,2 Gy组照射后6 h、4 Gy组12 h、6 Gy组24 h升高最显著（P〈0.05）。照射后48 h内蛋白表达升高（4Gy除外）,48 h后蛋白表达逐渐下降,至72 h时接近未照射组水平。各时间点（除4 Gy 48 h和72 h外）的蛋白表达与对照组相比差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论：在本实验条件下,2～6 Gy剂量X射线照射48 h内可使人肺癌A549细胞Bmi-1表达升高,之后表达逐渐降低。     

高剂量X射线对人鼻咽鳞癌ONE1细胞株HIF-1a表达影响的研究

目的：探讨高剂量X射线照射前后低氧诱导因子-1a（HIF-1a）在人鼻咽鳞癌CNE1细胞株中的表达情况。方法：体外培养人鼻咽鳞癌CNE1细胞株,待细胞进入对数生长期后行6MVX射线照射,照射方法为2Gy／次,隔日1次,共25次,累积剂量50Gy,收集照射前后细胞采用免疫荧光染色、RT—PCR和蛋白质印迹法检测高剂量X线照射前后CNE1细胞株中HIF-1a基因及其蛋白的表达。结果：照射前后HIF-1a基因的表达的半定量值分别为0．23±0．02和0．37±0．04,t=-5．422,P=0．006;其蛋白的表达的半定量值分剐为0．05±0．01和0．08±0．01,t=-3．674,P=0．021;X线照射50Gy后HIF-1a在CNE1细胞中的表达比照前明显增高,P〈0．05;共聚焦显微镜观察到X线照射50Gy后的CNE1细胞中绿色荧光强度高于照射前。结论：X射线照射可以引起HIF-1a在CNE1细胞中表达升高。     

Expression Pattern of Mitochondrial ND2 Gene in Human Leukemia and in HL60 Cells During Growth and Differentiation

We differentially screened 5,000 clones from a cDNA library of acute myelogenous leukemia (AML) cell line HL60 using cDNA probes derived from normal granulocytes or from acute myelomonocytic leukemia cells, the objective being to identify genes preferentially expressed in myeloid lineage leukemic cells. One clone, corresponding to a mitochondrial DNA fragment, including NADH dehydrogenase subunit 2 (ND2) gene, was selected for use as a probe. We examined expression of the ND2 gene in various leukemic cell populations and in normal peripheral blood cells. DNA-RNA hybridization studies revealed that ND2 messenger RNA (mRNA) was more markedly expressed in AML cells than in other leukemic cells and normal peripheral blood granulocytes. The expression of ND2 mRNA decreased in HL60 cells several hours after treatment with phorbol myristate acetate (PMA), or dimethyl sulfoxide (DMSO). However, the ND2 gene expression did not depend on the growth-state of HL60 cells because the steady-state level of its expression was observed during transitions of growth. These results suggest that ND2 mRNA is involved in the maturation of myeloid cells and in cellular differentiation, in a lineage-preferential manner. A comparison of the nucleotide sequence of this clone with the documented human mitochondrial DNA sequence revealed several single-base substitutions, insertions and a 39-bases insertion.     

单细胞凝胶电泳技术用于估算大剂量电离辐射的初步探索

目的：初步探索碱性单细胞凝胶电泳（single cell gel electrophoresis,SCGE）方法用于大剂量电离辐射生物剂量估算的可行性。方法：用不同剂量水平（0～16Gy）的60Coγ线照射正常人离体外周血,分别于照射后即刻和1 h后进行SCGE检测,用CASP软件分析血细胞＂彗星＂尾矩（tailmoment,TM）,建立剂量-效应曲线。结果：外周血细胞＂彗星＂尾矩随着照射剂量的增加而增加。以＂彗星＂尾矩为指标,使用统计软件Origin 7.5进行拟合,受照即刻在0～16 Gy剂量范围内彗星TM值与受照剂量D之间的剂量-效应曲线为曲线模式,曲线方程为Y=0.836 7＋0.530 9D＋0.079 9D2（R2=0.996 2,P〈0.05）,而0～8Gy剂量范围内剂量-效应曲线为线性模式,直线方程为Y=0.400 3＋1.129 1D（R2=0.996 3,P〈0.05）。受照1h后0～16Gy剂量范围内,彗星TM值与受照剂量D之间的关系曲线为Y=0.461 6＋0.6560D＋0.062 1D2（R2=0.9984,P〈0.05）,0～8 Gy剂量范围内的关系曲线为Y=0.107 1＋1.128 3D（R2=0.999 5,P〈0.05）。结论：用碱性SCGE分析淋巴细胞＂彗星＂尾矩有望成为一种估算大剂量电离辐射的生物剂量计。     

ATM基因在低剂量电离辐射诱导EL-4细胞适应性反应中的作用

目的：探讨低剂量电离辐射诱导EL-4细胞适应性反应中ATM基因的作用。方法：EL-4细胞应用渥曼青霉素处理后接受低剂量0.075 Gy预先照射,再分别进行较高攻击剂量照射（1.0,1.5和2.0 Gy）,RT-PCR和免疫荧光法检测ATM mRNA及蛋白表达。同时应用流式细胞术检测细胞凋亡和周期进程变化。结果：渥曼青霉素能够阻断ATM基因在mRNA及蛋白水平的表达。应用渥曼青霉素后直接接受攻击剂量照射和应用渥曼青霉素后先接受低剂量0.075Gy预先照射后再接受攻击剂量照射,均能诱导EL-4细胞发生适应性反应。结论：ATM基因可能不影响低剂量电离辐射诱导EL-4细胞发生适应性反应。     

ERCC1在恶性肿瘤患者外周血和肿瘤组织中表达的相关性研究

目的 探讨核苷酸切除修复交叉互补基因1（ERCC1）在肺癌、结肠癌、胃癌、乳腺癌患者外周血和肿瘤组织中表达的相关性及其临床意义。方法 采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）技术检测230例肺癌、160例结肠癌、125例胃癌、100例乳腺癌患者的肿瘤石蜡标本及其对应的血液样本中ERCC1 mRNA的表达水平。结果 ERCC1 mRNA在4种肿瘤的癌组织和外周血中的表达差异均无统计学意义（P＞0.05）。4种肿瘤的癌组织中ERCC1 mRNA的相对表达量高于相对应外周血中的表达（P＜0.05）,且肿瘤组织与外周血ERCC1 mRNA的表达均呈正相关（肺癌：r=0.430,P＜0.001;结肠癌：r=0.553,P＜0.001;胃癌：r=0.583,P＜0.001;乳腺癌：r=0.501,P＜0.001）。肺癌、结肠癌及乳腺癌肿瘤组织和外周血中ERCC1的表达水平与年龄、性别均无关（P＞0.05）。胃癌肿瘤组织和外周血中ERCC1 mRNA的表达水平与年龄无关,而男性患者肿瘤组织中ERCC1的表达高于女性（P＜0.05）。结论 通过检测肺癌、结肠癌、胃癌及乳腺癌患者外周血中ERCC1的表达水平能够在一定程度上间接反映癌组织中ERCC1的表达状况。     

非小细胞肺癌患者外周血 AEG -1 mRNA 的表达及临床意义

目的：探讨非小细胞肺癌患者外周血AEG-1mRNA的表达情况及其临床意义。方法：收集104例新诊断的非小细胞肺癌患者外周血标本,RT—PCR法检测AEG-1mRNA表达水平,分析其与临床病理特征之间的关系。对其中52例接受含铂方案化疗的晚期患者随访12个月,探讨外周血AEG-1mRNA表达水平与化疗反应率及无进展生存期之间的关系。结果：非小细胞肺癌患者外周血高表达AEG-1mRNA,其表达水平与肿瘤分期（P=0．015）、组织分化程度（P=0．048）和远处转移（P=0．007）密切相关。接受含铂方案一线化疗的52例晚期患者中,AEG-1mRNA高表达者较低表达者对含铂方案化疗反应率低（25．0％VS58．3％,P=0．015）,中位无进展生存期短（5．25VS8．25个月,P=0．019）。结论：非小细胞肺癌外周血AEG-1mRNA高表达提示肿瘤分期晚、组织分化差、转移率高。外周血AEG-1mRNA表达有可能成为晚期非小细胞肺癌患者含铂方案-线化疗的疗效预测和预后因子。