人外周血单个核细胞白细胞介素-2受体的荧光定量法研究

本文探索了应用荧光分光光度计定量测定正常人外周血单个核细胞介素-2受体(IL_2R)的方法及其条件.以PHA与ConA诱导单个核细胞IL_2R表达的最适细胞浓度为3×10~6/ml:PHA和ConA最适浓度分别为100μm/ml和10μg/ml,PHA诱导较ConA为优.PHA诱导细胞IL_2R的表达24h达到高峰,尔后逐渐下降.第一抗体(抗—Tao)和第二抗体(荧光抗体)与单个核细胞孵育时间分别以20min和10min为好.检测同一标本不同复管的细胞(1×10~6)IL_2R结合荧光抗体mol(简称M)为5.22±0.45×10~(10),变异系数(CV)为8.6％,表明该法稳定性较好.测定5例正常人细胞(1×10~6)IL_2R结合荧光抗体M为4.8±0.97×10~(10).CV为20.2％,结果表明该法能较客观检测出不同个体IL_2R表达.     

甲状腺功能亢进症患者甲状腺组织糖皮质激素受体的改变及意义

1　材料和方法1.1　研究对象　甲状腺功能亢进症 (甲亢 )组患者 2 0例 ,年龄 (30± 4)岁 ;甲状腺腺瘤组 15例 ,年龄 (35± 6 )岁 ;对照组 15例 ,年龄 (33± 5 )岁。 3组均为女性。1.2　甲状腺组织 GR测定方法　采用放射配体结合法。取甲亢患者手术切除的甲状腺组织 ,甲状腺腺瘤患者手术切除的甲状腺组织以及周围正常组织 (作对照 ) ,加入 10倍体积 Tris- HCl缓冲液 (p H 7.45 ,0 .0 5 mol/ L ) ,匀浆 ,高速离心 10 0 0 0× g 2 0min,分离出细胞核 ;分别加入 0 .5、1、5、10、15、2 0、2 5 nmol/ L 3 H- Dex(1.78TBq/ mm ol,英国放化中…     

脑部糖皮质激素膜受体的实验研究

目的探讨脑部糖皮质激素膜受体的结合特性。方法用改进的蔗糖密度梯度超速离心法从大鼠脑匀浆物中制备出突触质膜,其中不含胞液成分,用放射配体结合法,以[3H]皮质酮作为标记配体。结果测得突触质膜上有皮质酮特异结合部位,其结合的饱和曲线呈“S”形,用Scatchard作图呈一条向上凸的曲线,表明受体结合过程中有正协同作用,蛋白的结合容量(R0)为(450.20±58.60)pmol/g,平衡解离常数(kd)为(160.25+28.20)nmol.L-1。取代结合实验表明,[3H]皮质酮结合部位有相当显著的配体结合特异性。按结合力大小排列为:醛固酮>皮质酮≈皮质醇>孕酮>睾酮≈雌二醇>地塞米松。结论提示脑突触质膜上存在糖皮质激素膜受体。     

睾丸的绒毛膜促性腺激素受体的放射性配体结合分析

作者建立了大鼠睾丸细胞膜的绒毛膜促性腺激素受体的放射性配体结合分析。睾丸经匀浆、蔗糖密度梯度离心及高速离心制成膜制剂。~(125)I-HCG与膜制剂于30℃反应1小时半,测得膜受体容量为0.36×10~(-12)mol/μg蛋白,K_D值为0.45×10~(-10)mol/L,Hill系数为0.976,k_1为0.41×10~(-3)pmol/min,k_2为2.12×10~(-3)pmol/min。解离图不成直线,分快相和慢相。     

免疫抑制剂对白细胞糖皮质激素受体的调节作用

1　材料和方法1.1　材料　取女性献血员静脉血 2 0 0 ml,肝素抗凝 ,弃血浆 ,加 2倍体积的 PBS、1.5倍体积的 Dextran T5 0 0混匀静置 15min,上清液 2 0 0 0 r/min离心 5 min,取沉渣加 Tris- NH4Cl溶液 37℃温育 10 m in,使残余的红细胞破裂 ,2 0 0 0 r/m in离心 5min,取沉淀物 ,用 PBS洗 2次 ,即可得到白细胞悬液。1.2　方法　 Dex、CTX、Cs A均设有 0 .0 1、0 .0 5、0 .1、0 .5、1.0、5 .0 mg/m l共 6种浓度 ,选择三药单用及三药合用 ,分别加入上述白细胞悬液中作用一定时间后进行白细胞 GR特异结合测定 ,采用放射配体结合法 ,3 H…     

人卵巢褪黑素受体的鉴定及卵巢癌组织褪黑素受体的改变

目的 :证实人卵巢组织存在褪黑素受体 (MR) ,并了解卵巢癌组织 MR的改变情况。 方法 :采用放射配体结合法检测卵巢及卵巢癌组织 MR,以肿瘤周围正常组织作为对照。 结果 :人卵巢存在 1 2 5I-褪黑素 (Mel)特异结合位点 ;卵巢肿瘤组织和周围正常组织 MR特异结合最大结合量 (Bmax)分别为 (0 .6 0± 0 .12 ) fmol/ m g和 (1.2 0± 0 .30 ) fm ol/ mg,肿瘤组织明显低于对照组织 (P<0 .0 1) ;Kd 分别为 (6 8± 11) pmol/ L和 (32± 10 ) pmol/ L ,两组无明显差异 (P>0 .0 5 )。结论 :人胚胎卵巢组织存在 MR,卵巢癌组织 MR结合容量降低。     

库欣综合征患者外周血白细胞糖皮质激素受体改变及意义

1　材料和方法1.1　研究对象　库欣病 (肾上腺皮质增生 ) 2 0例 ,男 8例 ,女 12例 ,年龄 (30 .1± 8.6 )岁 ;库欣综合征 (肾上腺腺瘤 ) 2 4例 ,男 10例 ,女 14例 ,年龄 (36 .4± 7.1)岁 ;对照组 2 0例 ,男女各 10例 ,年龄 (32 .8± 3.6 )岁。1.2　外周血多形核白细胞 (PML)分离　应用淋巴细胞分离液 (上海试剂二厂产品 )分离出单个核白细胞 (MNL) ,然后用Dextran T5 0 0充分混匀 ,静置 15～ 2 0 m in,使红细胞凝集沉淀 ,用 Hanks液洗两遍 ,即可得到纯净 PML。1.3　 3 H - Dex特异结合测定　应用放射配体结合法。 3 H- Dex(1.78TBq/ …     

前列腺组织雄激素受体的测定方法

建立雄激素受体测定的放射配基结合分析法测得人前列腺组织中胞浆胞核雄激素受体均可被约5×10^-9mol/L的双氢睾酮饱和，其最大结合容量(Bmax)及平衡解离常数(Kd)分别为；胞浆129．4×10^-15mol/mg，0．88×10^-9mol／L胞核176．2×10^-15mol／mg，3．2×10^-9mol／L。人前列腺癌胞浆、胞核雄澈素受体均高于正常前列腺(n=3)及前列腺肥大(n=32)。用融裱法放射自显影证实雄激素受体主要分布在前列腺组织的腺区，尤其是在腺上皮细胞核内。     

冬凌草甲素对β-肾上腺素受体及腺苷酸环化酶活性的影响

本研究采用放射性配体结合分析法和腺苷酸环化酶(AC)活性测定,观察了冬凌草甲素(Oridonin)对大鼠外周血淋巴细胞β受体的结合作用和北京鸭虹细胞膜中AC活性的影响。结果表明,Oridonin和普萘洛尔(Propranolol)一样能与标记配基竞争与β受体结合,其IC_(50)分别为6.7×10~(-5)mol/L,6.0×10~(-8)mol/L。KI值分别为1.9×10~(-5)mol/L,1.7×10~(-8)mol/L。阻断肾上腺素对膜制剂中AC活性的激动作用,从而证明Oridonin是一种较弱的β受体拮抗剂。     

去肾上腺大鼠肝胞液糖皮质激素受体测定

报告了以【~3H】地塞米松为配体的糖皮质激素肝胞波受体的放射配体结合测定法。所测得的地塞米松特异结合部位具有以下特点:①低容量,结合容量为264±50fmole/mg蛋白;②高亲和力,平衡解离常数为2.5±0.9×10~(-8)M;③与皮质激素结合的特异性;④除肝脏以外,还存在于胸腺、脑、肾等靶器官;⑤腹腔内注射氢化可的松所诱导的酪氨酸转氨酶的活性和特异结合部位在体内被占据的程度之间呈平行关系,因此具备了作为受体的条件。测定结果的重复性较好。简要地讨论了影响测定结果的因素。     

正常人外周血单个核细胞白细胞介素-2受体荧光定量方法研究(简报)

本文探索了应用荧光分光光度计定量测定正常人外周血单个核细胞白细胞介素-2受体(IL_2R)的方法及其条件。以PHA与ConA诱导单个核细胞IL_2R表达的最适细胞浓度为3×10~6/ml。PHA和ConA最适浓度分别为100μg/ml和10μg/ml,PHA诱导较ConA为优。PHA诱导细胞IL_2R表达24小时达到高峰,尔后逐渐下降。第一抗体(抗—Tac)与第二抗体(荧光抗体)的最适浓度分别为1:50和1:32,两种抗体与单个核细胞孵育时间分别以20和10分钟为好。检测了同一标本不同复管的细胞(1×10~6)IL_2R结合荧光抗体M为(5.22±0.45)×10~(-10),变异     

99m锝标记紫杉醇脂质体在移植荷瘤鼠体内分布的研究

对 2 0只雌性裸鼠建立人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型 ,经其尾静脉注射锝标紫杉醇脂质体 (99m TC- TL) 0 .2m l,于 15 min、 30 m in、 90 m in各处死动物 5只 ,将心、肝、脾、肺、肾、小肠、子宫附件、骨及肿瘤组织分别称重。其余 5只动物尾静脉注射游离锝 (99m TC— F) 0 .2 m l,于 90 min处死 ,取肝、脾、肺及肿瘤组织称重 ,用 γ-定标仪测其放射强度 (单位 :CPM/ 10 0 mg)。肝、脾、肺脏器内 99m TC动态放射值最高 (5 5 2 .1± 92 .8～ 2 6 0 .1± 2 1.0 cpm/ 10 0m g) ,其放射强度随时间延长呈下降趋势 ,肿瘤组织放射值较低 (3.6± 0 .6 cpm/ 10 0 m g) ,动态测量呈水平位。99m TC- TL组与 99m TC- F组在 99m TC示踪显示 90 min时 ,TC- TL 组肝、脾、肺内放射强度高于 99m TC- F组 (P<0 .0 5 ) ,而肿瘤组织中两组无显著性差异 (P>0 .0 5 )。结论 :静注紫杉醇脂质体在荷瘤鼠体内主要定向分布于网状内皮系统丰富的肝、脾、肺器官内 ,肿瘤组织有一定滞留性 ,但亲和力较差     

男性肥胖患者胰岛素受体的改变及意义

目的:研究男性肥胖患者胰岛素受体及胰岛素和血糖的改变及意义。方法:选取肥胖患者128例,根据体质量指数(BMI)分为轻、中、重3组,其中轻度肥胖组52例,年龄(41±5)岁,BMI 25-27 kg/m2;中度肥胖组42例,年龄(43±6)岁,BMI 27-29kg/m2;重度肥胖组34例,年龄(45±4)岁,BMI>29 kg/m2;而对照组24例,年龄(42±6)岁,BMI<25 kg/m2。采用131I标记胰岛素的放射配体结合法检测腹部脂肪组织中胰岛素受体的结合容量(位点/细胞),同时检测空腹血糖和血清中胰岛素的水     

人肝细胞生成素受体的确定及特性

目的　研究人重组肝细胞生成素 (rhHPO)特异性刺激肝细胞增殖的信号转导是否通过特异性受体结合介导。方法　通过受体结合和特异性竞争抑制实验及Scatchard分析原代培养大鼠肝细胞、人胎肝细胞和肝癌细胞的特性。结果　原代培养大鼠肝细胞、人胎肝细胞和肝癌细胞存在HPO受体 ,受体数量分别为 10 0 0 0个 /细胞、2 0 0 0 0个 /细胞和 5 5 0 0 0个 /细胞 ,平衡解离常数(Kd)分别为 2、1.4及 0 .7pmol,HPO与受体结合的复合物分子量约为 90× 10 3 ,推算出HPO与该受体结合具有饱合性和特异性 ,此结合不能被EGF、TGF α和胰岛素所竞争抑制。通过交联反应在SDS PAGE电泳上显示此受体分子量约 75× 10 3 。结论　HPO促肝细胞增殖作用是通过肝细胞表面这种特异性膜受体介导的。     

感染性疾病患者外周血性激素及其受体改变及意义

1　材料和方法1.1　研究对象　肺部感染患者 2 2例 ,均为女性 ,年龄 (4 0± 5 )岁 ,胸片及痰培养证实 ;尿路感染患者 32例 ,均为女性 ,年龄(38± 10 )岁 ,尿常规检查及中段尿培养证实 ;对照组为健康人 30例 ,均为女性 ,年龄 (4 0± 8)岁。1.2　方法　血浆雌二醇 (E2 )、睾酮 (T)含量采用放射免疫法测定。外周血白细胞雌激素受体 (ER)及雄激素受体 (AR)检测采用放射配体结合法 ,3 H - Dex E2及 3 H- Dex T均为 1.5 nm ol/ L ,作一点分析。2　结果和讨论　　肺部感染、尿路感染组及对照组血浆 E2 含量分别为 (784± 6 9)、(76 5± 81)、…     

RC-160对NCI-H446细胞生长抑素受体内化及调变

目的 :探讨人小细胞肺癌细胞株NCI H4 4 6的生长抑素受体体外调变的规律 .方法 :采用体外放射配基结合分析法 ,以12 5I标记的生长抑素类似物 (RC 16 0 )为配基 ,在与NCI H4 4 6细胞进行体外饱和及竞争结合实验的基础上 ,进行RC 16 0诱导下NCI H4 4 6细胞株的生长抑素受体内化及上调实验 .结果 :温育 15min时 ,内化组与对照组的内化率分别为 (2 2 .3± 2 .5 ) %和 (8.2± 3.3) % (P <0 .0 1) ,膜结合率分别为 (4 3.8± 4 .0 ) %和 (12 .4± 1.6 ) % (P <0 .0 1) .低浓度的非标记RC 16 0暴露前 13h上调率增加缓慢 ,仅为 (2 0 .0±1.3) % ,其后上调率迅速增加 ,并于暴露后 19h达到顶峰(76 .5± 2 .6 ) % .结论 :RC 16 0可使NCI H4 4 6细胞表面生长抑素受体内化并上调 ,且具有一定的时相性     

磷脂酰肌醇3-激酶对血管紧张素与胰岛素Ⅱ诱导的血管平滑肌肥大的介导作用

目的　研究磷脂酰肌醇 3-激酶 (PI3K)信号通路对血管紧张素 (Ang )与胰岛素诱导的血管平滑肌细胞蛋白质合成的影响 ,及该信号系统对 4 E结合蛋白 1(4 E- BP1)和核糖体蛋白 S6激酶磷酸化的介导作用。　方法　体外培养 8周龄的 SD大鼠平滑肌细胞 ,(1) 3H亮氨酸掺入法测定蛋白合成 ;(2 ) Western印迹法检测蛋白激酶 B(PKB)、4 E- BP1和核糖体蛋白 S6激酶的磷酸化。　结果　 (1)与对照组相比 ,Ang (10 0 nmol/ L )与胰岛素 (10 0 nm ol/ L )对血管平滑肌细胞的 3H亮氨酸掺入有显著刺激作用 [Ang (× 10 3cpm) :8.0 0± 0 .5 4 vs 5 .15± 0 .2 6 ,P<0 .0 5 ;胰岛素 :6 .13± 0 .31vs5 .0 5± 0 .35 ,P<0 .0 5 ]。 PI3K抑制剂 L Y2 94 0 0 2使 Ang 的 3H亮氨酸掺入刺激作用受到抑制 ,抑制率 :0 .1μmol/ LL Y2 94 0 0 2 :38% (P<0 .0 5 ) ;1μmol/ L L Y2 94 0 0 2 :6 2 % (P <0 .0 5 )。同样浓度的 L Y2 94 0 0 2对胰岛素的 3H亮氨酸掺入刺激作用的抑制率分别为 4 3% (P<0 .0 5 ) ,5 7% (P<0 .0 5 ) ,97% (P<0 .0 5 )。(2 )静止的血管平滑肌细胞中加入 Ang 或胰岛素 ,显著增加 PKB的磷酸化。Ang 刺激的 PKB磷酸化于 5 m in达高峰 ,胰岛素刺激的 PKB磷酸化于 30 m in达高峰。PKB抑制剂 L Y2 94 0 0 2以剂量     

人肌肉组织褪黑素受体鉴定及意义

1　材料和方法1.1　材料　取 4例活检人骨骼肌组织 ,患者年龄 2 8～ 5 6 (4 0± 12 )岁。 Mel、2 - I- Mel、6 -氯 - Mel、6 -羟 - Mel等由香港大学彭树勋教授惠赠 ,1 2 5I- Mel:33.3TBq/ mm ol,美国 Donpont公司产品。1.2　肌肉组织 MR测定　采用放射配体结合法。骨骼肌组织加 6倍体积 Tris- HCl缓冲液匀浆 ,高速离心后取上清。37℃孵育6 0 min,用多头细胞收集仪 ,通过玻璃纤维滤膜清洗游离核素 ,然后用γ计数仪测定滤膜的放射活性。2　结果和讨论　　饱和分析显示 :横纹肌组织 MR Bmax(0 .6 1± 0 .11) fm ol/ mg,Kd 为 (4 6± 13…     

男性糖尿病患者血白细胞雄激素受体水平

目的:探讨老年男性糖尿病白细胞雄激素受体(AR)水平变化。方法:2型糖尿病患者15例,均为男性,年龄65～73岁,病程5～12年。健康对照男性12名,年龄65～76岁。白细胞AR测定采用放射配体结合法。血清睾酮(T)测定采用放射免疫分析。结果:老年男性2型糖尿病血白细胞AR结合量为(819±106)位点/细胞,与对照组的(843±114)位点/细胞差异不显著。而     

实验性室间隔缺损心肌血管紧张素Ⅱ受体表达的变化

目的　探讨实验性室间隔缺损 ( VSD)动物左右心室心肌血管紧张素 受体的改变。方法　建立猪实验性室间隔缺损动物模型 ,术后 1月取左右心室组织 ,通过放射性配体受体结合分析法测定每 10 6个细胞上血管紧张素 受体 ( AT1 R、AT2 R)的最大结合量 ( Bmax)和平衡解离常数 ( KD)。结果　假手术组与正常组动物受体的 Bmax和KD改变无统计学意义 ,手术组动物左室 AT1 R、右室 AT1 R和 AT2 R的 Bmax值 (分别为 188.42± 13 3 .97、2 72 .14±2 3 2 .74、40 .42± 3 4.76fmol/ 10 6 ,对照组 AT1 R和 AT2 R的 Bmax值左室为 2 9.2 0± 19.5 0和 2 .90± 0 .64 ,右室为76.72± 5 1.2 1和 9.63± 1.2 7fm ol/ L )增高明显 ( P<0 .0 5 )。结论　心内左向右所引起的心室容量负荷过重 ,导致AT1 R的表达增高 ,是 VSD心室肥厚及重构的重要机制 ;AT2 R在右心室表达增高 ,可能是中等程度容量负荷的VSD容易出现左室肥厚而非右室肥厚的原因