尾悬吊模拟失重大鼠肺组织VEGF mRNA的研究

为研究尾悬吊模拟失重大鼠肺组织血管内皮生长因子（VEGF）mRNA的变化，采用尾悬吊模拟失重，分为悬吊7天和21天及相应同步对照共4组，每组10只健康雄性SD大鼠，并采用原位杂交技术检测肺组织的VEGF mRNA表达情况。发现同正常对照组相比，7天尾悬吊模拟失重大鼠肺组织VEGF mRNA的表达水平明显增高（P＜0．05），且21天悬吊组模拟失重大鼠肺组织VEGF mRNA的表达水平仍较高（P＜0．05），但同7天悬吊组相比增高程度已明显降低。提示在模拟失重条件下肺组织VEGF的表达水平增高。     

尾悬吊模拟失重大鼠肺组织一氧化氮合酶mRNA的研究

为探讨尾悬吊模拟失重大鼠肺组织诱导型一氧化氮合酶mRNA(iNOS mRNA)的变化，采用尾悬吊模拟失重法，将大鼠分为悬吊7天和21天及相应对照组4组，并采用原位杂交技术检测肺组织iNOS mRNA的表达情况，发现同正常对照组相比，7天尾悬吊模拟失重大鼠肺组织iNOSmRNA的表达水平明显增高（P＜0．01），21天悬吊组模拟失重大鼠肺组织iNOSmRNA的表达水平仍显著增高（P＜0．01），提示NO参与了在模拟失重条件下的肺组织损伤的过程。     

失重对大鼠肾上腺髓质激素分泌及miRNA-375表达的影响

目的研究模拟失重环境对大鼠肾上腺髓质激素分泌及miRNA-375表达的影响。方法健康成年雄性Wistar大鼠56只,随机分为0h(正常对照)、6h、12h、1d、3d、5d、7d共7个组(n=8)。采用Morey-Holton尾悬吊法建立模拟失重动物模型。各组大鼠实验结束后眼球取血,取双侧肾上腺。采用放射免疫分析法检测血浆肾上腺髓质激素[多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NE)、肾上腺素(E)]水平,RT-PCR法检测肾上腺组织酪氨酸羟化酶(TH)mRNA和miRNA-375的表达,Western blotting和免疫组化技术检测肾上腺髓质TH蛋白表达。结果尾悬吊模拟失重条件下大鼠血浆肾上腺髓质激素波动明显,6~12h出现一过性下降,随后急剧升高,3d时形成峰值。RT-PCR结果显示,各组大鼠肾上腺组织TH mRNA表达波动明显,6h时呈现一过性下降,随即上升,1d时达峰值,之后呈下降趋势,5d时形成谷值。大鼠肾上腺髓质TH蛋白表达以尾悬吊3d时染色最强。肾上腺髓质中miRNA-375表达表现为尾悬吊早期(6h)呈一过性显著升高,随后快速下降,12h、1d和3d时表达受到明显抑制,表达量显著下降,5d时表达量增加,7d时显著升高(P<0.05)。结论失重环境可影响大鼠肾上腺髓质激素分泌,其机制可能与miRNA-375通过复杂的信号通道调控TH表达有关。     

模拟失重大鼠肺组织一氧化碳表达的变化

目的　研究在模拟失重大鼠肺组织中一氧化碳表达的变化 ,探讨其在失重时肺组织损伤中的作用。　方法　采用尾部悬吊模拟失重 ,分为悬吊 7d和 2 1d及相应对照 4组 ,每组 10只健康雄性 SD大鼠 ,共 4 0只大鼠。并采用原位杂交技术检测肺组织诱导型血红素氧合酶 (HO- 1) m RNA表达情况。　结果　同正常对照组相比 ,7d尾悬吊模拟失重大鼠肺组织 HO- 1m RNA表达水平明显增高 ,且具有统计学意义 (P<0 .0 1) ,2 1d悬吊组模拟失重大鼠肺组织 HO- 1m RNA表达水平仍显著增高 (P<0 .0 1)。　结论　在模拟失重条件下肺组织一氧化碳的表达水平增高。     

尾悬吊模拟失重大鼠肺组织细胞凋亡调控基因的研究

为研究尾悬吊模拟失重大鼠肺组织细胞凋亡调控基因的变化，采用尾悬吊模拟失重，分为悬吊7天和21天及相应对照4组，每组10只健康雄性SD，并采用原位杂交技术检测肺组织bcl-2/bax的表达情况。发现7天尾悬吊模拟失重大鼠肺组织bcl-2 mRNA水平明显低于对照组，两者之间差异有显著性意义（P＜0．05），但21天bcl-2 mRNA水平与对照组相比无显著性差异（P＜0．05）；7天尾悬吊模拟失重大鼠肺组织bax mRNA水平明显高于对照组，两者之间差异有显著性意义（P＜0．05），但21天bax mRNA水平与对照组相比亦无显著性差异（P＞0．05）。提示尾悬吊7天模拟失重大鼠肺组织细胞凋亡调控基因存在变化。     

低氧诱导因子-1α与马桑内酯点燃SD大鼠难治性颞叶癫痫耐药模型耐药性的相关性研究

目的 探讨难治性颞叶癫痫中低氧诱导因子-1α (HIF-1α)在不同脑区表达水平的变化及其与耐药蛋白MDR1/Pgp表达的关系.方法 以SD大鼠作为研究对象,设置点燃组和对照组.点燃组处理方法:以马桑内酯(CL)0.4ml/kg肌注,1次/72h,在给药1～5次期间判定点燃模型是否构建成功,选择符合标准的大鼠继续给药,1次/6d,共30次;最后点燃组共存留7只大鼠.对照组5只大鼠,在同时间点给予0.4ml/kg生理盐水肌注.取大鼠脑组织标本,制备后采用实时荧光定量PCR(RQ-PCR)、免疫组织化学(IIHC)和Western blotting三种方法分别检测HIF-1 α、MDR1/Pgp在脑组织中的表达情况.结果 IHC显示,HIF-1α在点燃组主要表达于大鼠海马、颞叶皮质等部位的神经元和神经胶质细胞,在对照组仅见微弱表达.Pgp的分布及表达情况与HIF-1 α一致.RO-PCR显示,点燃组HIF-1αmRNA在海马中的表达为对照组的1.741倍,在颞叶中的表达是对照组的1.395倍.Pgp mRNA在海马及颞叶的表达分别为对照组的2.297倍和1.474倍.Western blotting显示,点燃组海马HIF-1 α蛋白表达(1.284±0.166)较对照组(0.763±0.117)明显增高(p＜0.05),且点燃组颞叶皮质中HIF-1α蛋白(1.350±0.105)亦较对照组(0.941±0.078)明显增高(P＜0.05).Pgp的表达与HIF-1α表达呈一致变化,即点燃组海马和颞叶中Pgp的表达(0.831±0.086,0.919±0.129)较对照组(0.441±0.053,0.643±0.095)明显增高(P＜0.05).另外,点燃组Pgp蛋白和mRNA在海马中的表达较颞叶高(P＜0.05).结论 HIF-1α在大鼠颞叶癫痫耐药模型的海马和颞叶皮质中的表达较正常大鼠高,且与Pgp表达的空间分布一致.HIF-1 α与PgP表达的相关性提示HIF-1 α可能与难治性颢叶癫痫的耐药性相关.     

模拟失重对大鼠肺组织NF-κB表达的影响

目的研究模拟失重条件下健康大鼠肺组织中核因子-κB（NF-κB）的表达变化及其意义。方法采用尾悬吊模拟失重大鼠模型,分为悬吊7天、21天组及相应对照组,每组10只健康雄性Wistar大鼠。免疫组织化学法检测肺组织中NF-κB的表达水平。结果悬吊7天及21天组大鼠肺组织NF-κB表达水平与相应对照组比较均显著升高（P〈0．01,P〈0．05）。悬吊21天组大鼠肺组织中NF-κB表达水平较悬吊7天组减弱（P〈0．05）。结论尾悬吊模拟失重大鼠肺组织NF-κB表达水平明显上调,考虑与肺组织损伤有关。     

模拟失重对大鼠小肠黏膜紧密连接蛋白表达的影响

目的 研究尾吊模拟失重大鼠小肠黏膜紧密连接(TJ)蛋白的表达.方法 24只Wistar大鼠随机分为3组:对照组(Con),悬吊14 d组(TS-14d)和悬吊21 d组(TS-21 d).测定空肠Ti蛋白Occludin,Zonula Occludens-1(ZO-1)的免疫组化、实时荧光定量表达;透射电镜下观察TJ和...     

模拟失重对大鼠肺动脉反应性的影响及其机制研究

目的研究模拟失重对肺动脉反应性的影响及其机制。方法采用-30°尾悬吊14d大鼠失重模型模拟微重力生理效应,利用离体灌流技术测量对照组和尾悬吊14d组大鼠肺动脉环对苯肾上腺素(PE)、氯化钾(KCl)和乙酰胆碱(Ach)等血管活性物质的反应性及Nω-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)对肺动脉收缩反应的影响,免疫印迹分析两组肺动脉内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表达。结果与对照组相比,尾悬吊组对PE和KCl的收缩反应显著下降,对Ach的舒张反应明显增强;L-NAME处理后使尾悬吊组对PE的收缩反应恢复;尾悬吊组大鼠肺动脉组织eNOS表达显著高于对照组。结论模拟失重后肺动脉收缩反应下降,舒张反应增强,肺动脉内皮细胞eNOS表达增加以致舒张产物NO增加是肺动脉收缩反应性下降的主要原因。     

川芎嗪对模拟失重大鼠肺组织钙调神经磷酸酶-β表达的影响

目的探讨模拟失重大鼠肺组织内钙调神经磷酸酶-β（calcineurin-β）的表达变化及川芎嗪对其的影响。方法采用大鼠尾部-30&#176;悬吊（TS）模拟失重生理效应。30只健康Wistar大鼠随机分为对照组、尾吊7d组和尾吊＋川芎嗪7d组,每组10只。采用免疫组织化学和Western blotting方法观察各组大鼠肺组织内calcineurin-β蛋白表达水平的变化。结果免疫组化及Western blotting检测显示,尾吊7d组肺组织内calcineurin-β表达水平明显高于对照组（P〈0.01,P〈0.05）,经川芎嗪干预7d后大鼠肺组织calcineurin-β表达水平与尾吊7d组比较显著降低（P〈0.05）,与对照组比较已无显著性差异（P〉0.05）。结论尾吊模拟失重可引起大鼠肺组织calcineurin-β蛋白表达水平增加,而川芎嗪可下调肺组织calcineurin-β蛋白的表达。     

地塞米松对尾悬吊大鼠肺组织细胞凋亡的影响

目的　探讨地塞米松对尾悬吊大鼠肺组织细胞凋亡的影响。方法　采用尾悬吊大鼠模拟失重模型 ,将健康雄性SD大鼠分为尾悬吊组 (尾悬吊 7天模拟失重 )、地塞米松干预组 (尾悬吊第 3天开始腹腔注射地塞米松 5mg/kg,共 5天 )和正常对照组 ,每组 10只 ,用TUNEL技术检测肺组织细胞凋亡情况。结果　尾悬吊组凋亡指数显著高于对照组 ,差异有统计学意义 (P <0 0 5 ) ,地塞米松干预后细胞凋亡水平明显低于尾悬吊组 ,差异有统计学意义 (P <0 0 5 )。结论　尾悬吊模拟失重的大鼠肺组织细胞凋亡指数增高 ,而地塞米松可抑制模拟失重大鼠肺组织细胞的凋亡。     

模拟失重对大鼠动脉血压、心率昼夜节律的影响及其机制

目的 探讨模拟失重对大鼠尾动脉血压、心率昼夜节律的影响及相关的机制.方法 采用尾悬吊后肢去负荷模型地面模拟太空微重力环境对心血管系统的影响.18只8周龄雄性SD大鼠随机均分为尾悬吊组(SUS组,尾悬吊28d后进行实验)和对照组(CON组,常规饲养,不行尾悬吊).每3h测量大鼠尾动脉血压及心率;采用血管环实验测定腹主动脉收缩能力的昼夜差异;蛋白免疫印迹实验分别检测视交叉上核(SCN)和腹主动脉组织中时钟基因Per2(Period2)、Bmal1及dbp的昼夜表达水平.结果 大鼠经28d模拟失重后,与对照组比较,尾动脉收缩压、舒张压均出现显著下降且昼夜差异消失;心率显著增加且昼夜差异消失;腹主动脉的收缩反应性下降且昼夜差异消失;SCN和腹主动脉组织时钟基因表达的昼夜差异也趋于消失.结论 28天模拟失重可导致大鼠心血管系统节律紊乱,可能与时钟基因表达异常密切相关.     

尾部悬吊对大鼠淋巴细胞AP-1基因表达的影响

目的 探讨尾吊法模拟失重对大鼠胸腺,脾c-fos,c-jun调控基因表达的影响,为航天活动体机体中免疫功能防护提供依据。方法 20只大鼠随机分为7d对照组,7d悬吊组,14d对照组和14d悬吊组,采用尾吊模型模拟失重,分别于悬吊7d,14d处死,取胸腺和脾脏,一步法提取RNA,点杂交检测c-fos,c-jun的基因表达。结果 胸腺c-fos,c-jun表达在悬吊7d,14d均显著升高,脾c-jun表达在7d显著升高。结论 模拟失重可能对淋巴细胞调控基因产生影响。     

模拟失重大鼠胃窦黏膜白细胞介素2和生长抑素表达的变化

目的　研究模拟失重状态下大鼠胃窦部白细胞介素 2 (IL 2 )及生长抑素 (SS)免疫反应细胞的变化。　方法　采用尾部悬吊模拟失重 ,将大鼠分为悬吊 14d组、2 8d组及相应同步对照组。以免疫组织化学方法 ,观察大鼠胃窦部黏膜IL 2及SS免疫反应细胞的变化。　结果　与正常对照组相比 ,14d尾部悬吊大鼠胃窦部黏膜IL 2免疫反应细胞有下降趋势 ,但统计学分析无明显差异 ,SS免疫反应细胞减少 (P <0 0 1) ;2 8d尾部悬吊大鼠胃窦部黏膜IL 2和SS免疫反应细胞均明显减少(P <0 0 1)。　结论　在模拟失重状态下 2～ 4周 ,大鼠胃窦部的IL 2及SS的表达即可出现下降。     

高频正弦波振动对吊尾大鼠脊髓c-fos蛋白表达变化的改善作用

目的 观察高频正弦波振动对吊尾大鼠脊髓c-fos蛋白表达的影响. 方法 选取Sprague-Dawley雌性大鼠30只,按随机数字表法分为3组:模拟失重t4 d组、模拟失重+高频振动14d组及正常对照组,每组各10只动物.采用大鼠尾部悬吊法建立模拟失重模型,用免疫组织化学技术观察吊尾大鼠脊髓L5-6节段c-fos蛋白的表达. 结果 正常对照组大鼠,大多数c-fos阳性神经元位于脊髓Ⅳ和Ⅵ～Ⅶ板层.模拟失重14d后,脊髓Ⅳ、Ⅵ和Ⅶ板层内的阳性神经元数量及Ⅵ～Ⅶ板层内阳性神经元总数均明显多于正常对照组(P＜0.05)和模拟失重+高频振动组(P＜0.05).而模拟失重+高频振动组大鼠脊髓阳性神经元的总数及板层分布模式与正常对照组大鼠无统计学差异. 结论 高频正弦波振动对模拟失重状态下大鼠脊髓神经元c-foS蛋白表达的改变具有明显的改善作用.模拟失重后肌梭传人通路中脊髓神经元活动的增强可能与肌梭传人冲动减少有关.     

尾吊大鼠颈总动脉和股动脉自噬活性的改变

目的观察尾吊模拟失重对大鼠颈总动脉和股动脉自噬活性的影响。方法雄性SD大鼠,随机分为尾吊组和对照组,通过Western Blot、PCR及免疫组化检测尾吊模拟失重后大鼠颈总动脉及股动脉微管相关蛋白轻链3(LC3)和Bcl-2相关蛋白(Beclin-1)的表达变化。结果尾吊28 d后,大鼠股动脉LC3及Beclin-1的mRNA和蛋白的表达均显著高于对照组,免疫组化发现LC3在内皮层及平滑肌层均有表达升高;而颈总动脉的LC3及Beclin-1的mRNA和蛋白的表达无明显变化。结论尾吊模拟失重可以诱导大鼠股动脉自噬活性增强。     

尾悬吊大鼠骨和骨髓中骨钙素的变化

目的研究模拟失重骨质和骨髓内骨钙素 (OC)以及骨和软骨钙盐代谢的形态学变化。方法选用2 0只SD大鼠 ,随机配对分为 1 4d和 2 8d尾悬吊组及相应的 2个自由活动组 ,每组 5只。组织标本行原位杂交及三色染色。结果尾吊组大鼠骨质和骨髓内OC的表达明显弱于对照组 (P <0 .0 5 ) ;尾吊组1 4dOC的表达明显强于 2 8d(P <0 .0 5 )。模拟失重导致股骨和软骨基质钙化障碍 ,原有钙化基质内钙盐脱钙明显 ,2 8d脱钙明显加重。结论大鼠后肢去负荷导致骨和骨髓OC含量的降低 ,骨和软骨钙盐代谢障碍 ,去负荷时间越长越显著     

模拟失重对大鼠骨肉瘤细胞内Ⅰ型胶原表达的影响

目的 通过观察回转条件下培养的大鼠骨肉瘤细胞内Ⅰ型胶原的基因和蛋白表达的变化，探讨模拟失重对成骨细胞增殖功能的影响。方法 对培养的大鼠骨肉瘤细胞采用回转器模拟失重24、48、72h，同时设1G对照组。在各时间点提取细胞总RNA，进行反转录PCR，检测Ⅰ型胶原α1链(COL—Ⅰα1)mRNA的表达情况，同时采用ELISA法测定细胞内Ⅰ型胶原蛋白的表达量。结果 模拟失重72h细胞内COL—Ⅰα1mRNA和Ⅰ型胶原蛋白的表达量均明显低于对照组。结论 回转器模拟失重72h使大鼠骨肉瘤细胞的增殖功能降低。     

缺氧诱导体外绒毛组织转化生长因子3β表达及调控

 目的探讨低氧对体外培养的绒毛组织转化生长因子3β(TGF-3β)表达的诱导作用,以及缺氧诱导因子1(HIF-1)对TGF-3β表达的调控作用.方法取孕早期绒毛组织分4组培养:正常对照组、缺氧组、HIF-1α反义组和HIF-1α正义组.HIF-1α反义组和HIF-1α正义组先加入HIF-1α寡核甘酸,低氧条件培养48h.48h后,收集培养的绒毛组织,实时定量PCR方法检测TGF-3β和HIF-1α mRNA表达水平;Westem blot方法检测TGF-3β和HIF-1α蛋白表达水平.结果与正常对照组相比,缺氧组的HIF-1α mRNA和蛋白表达增加,TGF-3β mRNA和蛋白表达也升高;与HIF-1α正义组比较,HIF-1α反义组HIF-1α mRNA和蛋白表达降低,TGF-3βmRNA和蛋白表达也下降.结论缺氧可以诱导体外培养的绒毛组织TGF-3β表达,且缺氧对TGF-3β表达的诱导作用可能通过HIF-1调控.     

地塞米松对尾悬吊大鼠肺组织诱导型一氧化氮合酶的影响

目的　研究地塞米松对模拟失重大鼠肺组织诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)表达的影响。方法　采用尾悬吊模拟失重大鼠模型 ,将健康雄性SD大鼠分为尾悬吊 7天组和地塞米松干预组 ,每组各 10只 ,并采用免疫印迹和免疫组化两种方法检测肺组织iNOS的表达。结果　同尾悬吊 7天组相比 ,地塞米松干预组大鼠肺组织iNOS表达明显减低 ,差异有统计学意义 (P <0 0 5 )。结论　地塞米松通过抑制iNOS表达对模拟失重所致大鼠肺组织损伤起保护作用。