西罗莫司对小鼠皮肤胶原沉着病模型的治疗作用及可能作用机制的探讨

目的基于建立的表现为皮肤胶原沉着的小鼠慢性移植物抗宿主病模型,探讨西罗莫司对该慢性排斥反应的治疗作用及其作用机制。方法建立B10.D2→BALB/c异基因移植小鼠模型,随机分为两组,异基因移植治疗组(实验组)口服西罗莫司,连续治疗,剂量3 mg/(kg.d);异基因移植对照组(对照组)口服橄榄油。同时移植BALB/c供体小鼠细胞混悬液给受体BALB/c小鼠作为同基因移植组。记录小鼠体质量和状态变化情况;取背部皮肤,进行病理分析;提取RNA,实时荧光定量PCR检测趋化因子(RANTES、MCP-1)及纤维生成相关因子(TGF-β1、胶原Ⅰ)表达水平的变化;取外周血和脾细胞,通过流式细胞仪分析CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞水平的变化。结果观察期结束(11周)时,西罗莫司治疗组小鼠体质量[(20.43±2.27)g]与橄榄油对照组[(14.13±1.47)g]相比明显恢复(P<0.05);病理分析显示,与橄榄油对照组相比,西罗莫司治疗组小鼠皮肤无明显的增厚变硬,纤维增生以及炎症细胞浸润;实时荧光定量PCR检测证实,西罗莫司治疗组小鼠皮肤RANTES、胶原Ⅰ、TGF-β1以及MCP-1 mRNA转录水平较橄榄油对照组显著下调(P<0.05)。此外,流式细胞仪检测结果显示,西罗莫司治疗组小鼠外周血中CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞所占比例[(11.47±1.42)%]与橄榄油对照组[(7.57±0.63)%]相比显著上调(P<0.05);西罗莫司治疗组小鼠脾细胞中CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞所占比例[(24.55±0.21)%]与橄榄油对照组[(11.05±1.2)%]相比显著上调(P<0.01)。结论西罗莫司可能通过上调CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞,抑制效应细胞的活化,下调炎症细胞以及趋化因子的分泌表达,从而改善小鼠皮肤病变(胶原沉着以及炎性浸润),显著提高小鼠的生存质量。     

PTEN对糖尿病肾病肾间质纤维化的作用及其机制

目的 探讨同源性磷酸酶-张力蛋白（PTEN）对糖尿病肾病肾间质纤维化的作用及其可能机制。方法 将体外培养的大鼠近端肾小管上皮（NRK52E）细胞分为正常糖（NG）组、高糖（HG）组及高渗（MA）组,采用Western blotting检测各组PTEN、LC3、P62、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的表达水平。另将NRK52E细胞分为正常糖对照（NG）组、高糖对照（HG）组和高糖过表达PTEN（HG+pPTEN）组,采用激光共聚焦显微镜观察PTEN对自噬的影响,并在荧光显微镜下观察PTEN对胶原表达的影响。结果 Western blotting检测结果显示,与NG组比较,HG组PTEN、LC3表达水平明显降低,而P62、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原表达水平明显升高,差异均有统计学意义（_P<0.01）,而MA组PTEN、LC3、P62、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原表达水平无明显变化。激光共聚焦显微镜观察结果显示,HG组红色斑点和黄色斑点数减少,表明存在明显的自噬抑制,而其余两组未见明显自噬抑制。细胞免疫荧光染色结果显示,HG组PTEN红色荧光减弱、表达降低,胶原荧光染色增强、表达升高,而其余两...     

上调microRNA-150表达对肝癌SMMC7721细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨上调microRNA- 150 (miR- 150)表达对肝癌SMMC7721细胞增殖和凋亡的影响及其可能机制.方法 SMMC7721细胞分成miR-150感染组(加入pGIPZ-miR-150慢病毒表达载体)、阴性对照组(加入只含GFP的慢病毒载体)和空白对照组(不转染).采用荧光定量PCR检测miR-150的表达情况,Western blotting检测靶基因c-Myb蛋白的表达,CCK-8法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果 荧光定量PCR结果显示,转染miR-150pGIPZ后,SMMC7721细胞miR-150表达量(2.48±0.15)较阴性对照组(0.81±0.09)增加了2倍(p＜0.01).CCK-8法检测结果显示,与阴性对照组和空白对照组比较,miR-150组的细胞增殖率显著降低(P＜0.05).Western blotting检测结果表明,miR-150组细胞c-Myb蛋白表达(0.31±0.07)与空白对照组(0.80±0.09)及阴性对照组(0.81±0.08)相比明显减少(P＜0.0l).流式细胞仪检测结果显示,miR-150组细胞凋亡率(19.36％±1.78％)与阴性对照组(5.12％±0.54％)及空白对照组(4.68％±0.35％)相比明显增加(P＜0.01).结论 上调miR-150表达可通过降低靶基因c-Myb的表达,抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,miR-150可能成为肝癌靶向治疗新的靶基因.     

miRNA分子miR-24的研究进展

mRNA又称microRNA、微小RNA,是一类22个碱基左右的非编码单链小分子RNA,最初于1993年由研究人员在研究果蝇发育的时序性调控过程中发现.最先发现的miRNA为lin-4和let-7,最近十多年来,越来越多的miRNA被发现[1-2].     

冠状动脉西罗莫司洗脱支架植入术后晚期及超晚期支架内血栓形成的临床研究

目的 分析药物洗脱支架植入后晚期支架内血栓形成(LST)及超晚期支架内血栓形成(VLST)事件的发生率以及临床相关因素.方法 长期随访西罗莫司洗脱支架治疗的1 504例患者,分析发生LST的8例患者以及VLST的14例患者的基本临床特征、冠状动脉病变特征及支架植入情况、支架内血栓的发生及治疗情况等.结果 西罗莫司洗脱支架置入术后,LST发生率为0.5％(8/1 504),发生于术后(206±85)d,VLST发生率为0.9％(14/1 504),发生于术后(996±611)d.发生支架内血栓患者与未发生晚期支架内血栓患者比较,高血压、糖耐量异常、吸烟、因急性冠脉综合征入院、闭塞病变、分叉病变、弥漫长病变、多支血管病变、植入长支架、多枚支架的发生率差异有统计学意义(P＜0.05).LST与VLST患者比较,胰岛素依赖的糖尿病、吸烟、高血压病的发生率以及发生血栓时的抗血小板治疗的方案差异有统计学意义(P＜0.05).对14例LST和VLST患者中2例行血栓抽吸延迟PCI治疗,余均行直接PCI治疗,所有患者均再次行药物洗脱支架植入术,目前随访均存活.结论 高血压、糖耐量异常、吸烟、因急性冠脉综合征入院、闭塞病变、分叉病变、弥漫长病变、多支血管病变、植入长支架、多枚支架是患者发生支架血栓的相关因素,其中糖尿病、吸烟对于VLST的影响不同于LST;支架内血栓形成患者行血栓抽吸及再次植入支架安全、有效.     

卡托普利对肾血管性高血压大鼠心肌的保护作用

目的探讨卡托普利在肾血管性高血压大鼠减轻心肌肥厚和心肌纤维化的可能机制。方法将雄性SD大鼠30只随机分为假手术组、模型组（双肾一夹法狭窄左侧肾动脉）、卡托普利组,观察用药6周后左室心肌病理形态、胶原染色、NOS、NO等指标的改变。结果与高血压组相比,应用卡托普利治疗后,血压、左心室重量指数、NOS、NO等指标均有明显的改善。结论卡托普利具有逆转左室肥厚及心肌纤维化的作用。     

灯盏花素对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的保护作用

目的 观察灯盏花素对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾脏间质纤维化的保护作用及机制.方法 将72只Wistar大鼠随机均分为假手术组、UUO组和灯盏花素组.后两组大鼠结扎并剪断左侧输尿管制作UUO模型,假手术组仅游离左侧输尿管后缝合.灯盏花素组于手术前1d至处死当天给予灯盏花素注射液[100mg/(kg·d)]腹腔注射(2.5ml/次,2次/d).假手术组及UUO组用同体积生理盐水腹腔注射.采用HE染色观察术后4、7、14d肾脏组织的病理改变,免疫组化及Western blotting检测转化生长因子β1(TGF-β1,)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在肾脏的表达.结果 假手术组的各时间点肾组织未见病理改变.UUO组术后4、7d,肾间质相对面积增加,且有炎性细胞浸润;术后14d可见肾小管明显扩张,肾间质明显纤维化.与同时间点的UUO组相比,灯盏花素组肾间质相对面积明显下降.与假手术组比较,UUO组和灯盏花素组的TGF-β1和α-SMA蛋白表达水平均有明显增加(P<0.01),但灯盏花素组的表达低于UUO组(P<0.05).结论 灯盏花素可以通过下调TGF-β1及α-SMA的表达减轻UUO术后肾脏间质纤维化.     

芍药苷对大鼠放射性肝纤维化的保护作用和机制研究

目的探讨芍药苷对大鼠放射性肝纤维化的保护作用及机制。方法建立雄性SD大鼠放射性肝纤维化实验动物模型,将大鼠随机分为正常对照组、模型组、芍药苷治疗组(20、40、80 mg·kg-1),每组10只。除正常对照组外,其余各组均制备成放射性肝纤维化模型,造模后各组每天给予相应药物灌胃。于照射后第26周末处死大鼠,检测大鼠血清中AST、ALT的活性,ELISA法测血清中TGF-β1、HA、PC-Ⅲ、LN含量;光镜下观察肝脏HE染色、MASSON染色病理改变;碱水法检测大鼠肝脏组织中羟脯氨酸(Hyp)含量,免疫组化法测肝脏组织TGF-β1、Smad3/4/7蛋白表达情况。结果与正常对照组比较,模型组大鼠肝脏损伤和胶原纤维增生明显,其血清中AST、ALT活性明显升高,血清中TGF-β1、HA、PC-Ⅲ、LN含量明显增加,大鼠肝脏组织中Hyp含量增加,另外大鼠肝脏组织中TGF-β1、Smad3/4/7蛋白表达增加。与模型组比较,芍药苷治疗组可明显抑制大鼠血清中AST、ALT活性的升高,降低血清中TGF-β1、HA、PC-Ⅲ、LN的含量,降低肝脏组织中Hyp含量,减轻肝脏损伤程度及胶原纤维增生程度;芍药苷治疗组可减少大鼠肝脏组织中TGF-β1和Smad3/4/7蛋白表达。结论芍药苷具有明显的抗肝纤维化作用,其机制可能与其阻断TGF-β1/Smad信号传导通路有关。     

MicroRNA-124对人脐静脉内皮细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察miR-124对内皮细胞增殖和凋亡的影响,探讨miR-124在动脉粥样硬化中的作用.方法 采用荧光定量PCR检测miR-124在40例冠心病患者及40例正常对照血浆中的表达水平,CCK-8和BrdU法检测miR-124对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖的影响,TUNNEL染色检测miR-124对HUVECs凋亡的影响,Western blotting检测miR-124对HUVECs促凋亡蛋白cleaved caspase 3及抗凋亡蛋白Bcl-2表达的影响.结果 与对照组比较,miR-124在冠心病患者血浆中的表达明显降低.CCK-8和BrdU检测结果提示miR-124可明显促进HUVECs增殖;TUNNEL染色及Western blotting检测结果提示,miR-124可明显降低HUVECs凋亡细胞的比例及cleaved caspase 3表达,同时增加Bcl-2的表达.结论 MiR-124可促进HUVECs的增殖并抑制其凋亡,为深入认识动脉粥样硬化的发病机制提供了理论依据.     

多囊肾细胞增殖和凋亡机制及治疗研究进展

多囊肾病(PKD)是常见的单基因遗传病之一.在PKD中,肾小管上皮细胞的过度增殖和液体分泌、控制肾小管直径的机制紊乱等都可以导致囊泡形成.目前研究发现细胞内钙离子水平和环磷酸腺苷(cAMP)失调可引起细胞增殖和凋亡信号通路的异常,然后通过单一或协同作用引起囊泡衬里上皮细胞异常增殖和囊液过度分泌,促进了囊泡的形成.本文主要介绍了钙离子和cAMP在PKD增殖和凋亡信号通路中的核心作用,以及通过干预钙离子和cAMP的产生作为PKD新的治疗靶点的研究进展.     

凝血酶体外促进肺癌细胞Glc-82周期进程和增殖及其分子机制

目的探讨凝血酶体外促进肺癌细胞Glc-82周期进程和增殖及其作用机制。方法采用CCK8法检测凝血酶（thrombin）对Glc-82细胞增殖活性的影响,确定其量效和时效关系;利用碘化丙锭（propidium iodide,PI）单染和AnnexinⅤ-FITC/PI双染在流式细胞仪上检测细胞周期和凋亡;以荧光实时定量PCR检测10号染色体上与张力蛋白同源缺失的磷酸酶基因（phosphatase and tensin homologue deleted on chromatosome 10,PTEN）mRNA水平的变化,免疫印迹法检测PTEN蛋白表达和AKT磷酸化水平的变化。结果凝血酶（0.5和1.0 U/ml）可以有效促进细胞的增殖（P〈0.01）。凝血酶（0.5 U/ml）促进Glc-82细胞由G1期向S期转化,可以抑制PTEN的表达,提高AKT磷酸化水平,但对细胞凋亡没有影响。结论凝血酶（0.5 U/ml）可以促进肺癌细胞Glc-82周期进程和细胞增殖,可能系通过PTEN/PI3K/AKT信号分子途径发挥作用。     

凝血酶体外促进肺癌细胞Glc-82周期进程和增殖及其分子机制

目的探讨凝血酶体外促进肺癌细胞Glc-82周期进程和增殖及其作用机制。方法采用CCK8法检测凝血酶(thrombin)对Glc-82细胞增殖活性的影响,确定其量效和时效关系;利用碘化丙锭(propidium iodide,PI)单染和AnnexinⅤ-FITC/PI双染在流式细胞仪上检测细胞周期和凋亡;以荧光实时定量PCR检测10号染色体上与张力蛋白同源缺失的磷酸酶基因(phosphatase and tensin homologue deleted on chromatosome 10,PTEN)mRNA水平的变化,免疫印迹法检测PTEN蛋白表达和AKT磷酸化水平的变化。结果凝血酶(0.5和1.0 U/ml)可以有效促进细胞的增殖(P<0.01)。凝血酶(0.5 U/ml)促进Glc-82细胞由G1期向S期转化,可以抑制PTEN的表达,提高AKT磷酸化水平,但对细胞凋亡没有影响。结论凝血酶(0.5 U/ml)可以促进肺癌细胞Glc-82周期进程和细胞增殖,可能系通过PTEN/PI3K/AKT信号分子途径发挥作用。     

Protective effect of hypoxia against radiation induced fibrosis in the rat gut.

The protective effect of hypoxia, induced by degradable microspheres, against the development of fibrosis was investigated after single-dose irradiation of exteriorized rat ileum. Evaluation, based upon microscopy and analysis of hydroxyproline in protected and nonprotected gut segments, demonstrated an evident protective effect at doses of 15 to 25 Gy.     

microRNA-7真核表达载体的构建及其对细胞增殖能力的影响

目的构建miR-7真核表达载体,以研究miR-7过表达后对细胞增殖能力的影响。方法以人全血标本基因组为模板,PCR扩增miR-7序列,然后将该序列克隆入pHRS-1cla-CMV-EGFP载体中,构建pHRS-1cla-miR-7-CMV-EGFP慢病毒表达载体。将构建好的载体瞬时转染入293FT细胞中,利用RT-PCR技术对转染前后293FT细胞中miR-7的表达水平进行检测。将pHRS-1cla-miR-7-CMV-EGFP慢病毒表达载体瞬时转染入乳腺癌细胞系MCF-7中,利用CCK-8法以及BrdU增殖实验检测过表达miR-7后细胞增殖能力的变化。结果构建的pHRS-1cla-miR-7-CMV-EGFP慢病毒表达载体质粒酶切和测序鉴定结果正确,实时定量RT-PCR结果表明,与转染pHRS-1cla-CMV-EGFP对照载体细胞相比,转染pHRS-1cla-miR-7-CMV-EGFP慢病毒表达载体72 h后的293FT细胞成功地过表达miR-7达76.8倍。CCK-8法以及BrdU增殖实验检测过表达miR-7后乳腺癌细胞系MCF-7的增殖能力显著性下降（P〈0.05）。结论成功构建了pHRS-1cla-miR-7-CMV-EGFP慢病毒表达载体,瞬时转染后细胞可以有效地高表达miR-7,同时证明过表达miR-7可以使细胞的增殖能力受到明显抑制。     

氯沙坦及维生素E对高强度军事训练致大鼠肾损伤模型的保护作用

目的探讨氯沙坦、维生素E对于高强度军事训练致大鼠肾损伤模型的保护作用。方法40只雄性SD大鼠随机分对照组、模型组、氯沙坦组、维生素E组,除对照组外,其余组按高强度负荷累积肾损伤模型的训练方法行8周跑台训练,每周5d,每天1次,每次持续20min。观察每周末的尿液及8周训练结束时血、尿各指标改变。结果训练结束后,模型组、氯沙坦组、维生素E组的尿蛋白、尿N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶(NAG)、血清尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)值均高于对照组(P<0.05),其中模型组值高于氯沙坦组、维生素E组,氯沙坦组低于维生素E组(P<0.05)。训练结束模型组、氯沙坦组、维生素E组血浆及肾组织血管紧张素Ⅱ浓度(angio-tensinⅡ,AngⅡ)高于对照组,其中氯沙坦组高于模型组(P<0.05),维生素E组与模型组无差异(P>0.05)。模型组、氯沙坦组肾组织Na -K -ATP酶活性低于对照组和维生素E组,其中氯沙坦组高于模型组(P<0.05),维生素E组与对照组间无明显差异(P>0.05)。结论氯沙坦能有效降低尿蛋白、NAG、BUN等,有一定的抗氧化作用。维生素E能增强训练能力,在降低尿蛋白、NAG、BUN等方面弱于氯沙坦,但抗氧化作用明显。两种药物对于高强度军训引起的肾脏损伤均有保护作用。     

N-乙酰-L-半胱氨酸对多器官功能障碍综合征模型小鼠肺树突细胞损伤的保护作用

目的 探讨抗氧化剂N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)对酵母多糖诱导的多器官功能障碍综合征(MODS)模型肺树突细胞(DCs)损伤的保护作用.方法 健康雄性BALB/c小鼠腹腔注射酵母多糖复制MODS模型,随机分为对照组、酵母多糖组、酵母多糖+NAC组(n=20).建模后48h处死动物,采用生化法检测肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性;光镜下观察肺组织病理学变化;采用密度梯度离心及CDllc+免疫磁珠分离肺DCs,流式细胞术检测DCs表面MHC-Ⅱ/Ⅰ-Ad分子及共刺激分子CD86的表达;Annexin V/7-AAD双染色流式细胞术检测DCs凋亡情况.结果 与对照组比较,酵母多糖组肺组织MPO活性显著升高(P＜0.05),肺组织损伤明显,可见大量中性粒细胞浸润,肺DCs表面MHC-Ⅱ/Ⅰ-Ad、CD86阳性表达及细胞凋亡比例均显著增高(P＜0.05).与酵母多糖组比较,酵母多糖+NAC组肺组织MPO活性明显下降(P＜0.05),肺损伤程度减轻,中性粒细胞浸润减少,肺DCs表面MHC-Ⅱ/Ⅰ-Ad、CD86阳性表达及细胞凋亡比例显著下降(P＜0.05).结论 NAC可以减轻MODS模型小鼠的肺损伤,抑制肺DCs活化诱导的细胞凋亡,对肺DCs损伤具有保护作用.