补肾活血中药复方对实验性糖尿病大鼠视路神经元病理损害的影响及机理探讨

目的:观察实验性糖尿病大鼠视路神经元组织形态学的病理改变,并探讨补肾活血中药复方防治实验性糖尿病大鼠视路损害的作用机理。方法:用免疫组化及Nissl染色结合图像分析半定量测定视网膜、外侧膝状体及视皮质的神经营养因子-3(neurotrophic-3,NT-3)、突触素I(synapsin I,Syn I)的表达强度和Nissl小体的含量。结果:与正常对照组相比,阴性对照组大鼠视路三级神经元的NT-3、Syn I的表达强度和Nissl小体的含量均明显降低(P<0.05或0.01);与阴性对照组相比,中药治疗组大鼠视网膜、外侧膝状体及视皮质的NT-3、Syn I表达强度和Nissl小体的含量均明显增高,尤以中药高剂量组明显(P<0.05或0.01)。结论:补肾活血中药能减轻实验性糖尿病大鼠视路三级神经元病理损害,其作用机制之一可能是通过增加糖尿病大鼠视路NT-3的表达,一定程度恢复糖尿病大鼠视觉通路神经细胞突触的密度和分布(轴突再生),并改善其神经递质释放调节功能。     

补肾活血中药对糖尿病大鼠视路NT-3和Nissl小体的影响

目的探讨补肾活血中药对实验性糖尿病大鼠视路三级神经元的影响。方法以链脲佐菌素造成大鼠实验性糖尿病模型。用免疫组化及Nissl染色结合图像分析半定量测定视网膜、外侧膝状体及视皮质的神经营养因子-3(neurotrophic-3,NT-3)的表达强度和Nissl小体的含量。结果与正常对照组相比,阴性对照组大鼠视路三级神经元的NT-3的表达强度和Nissl小体的含量均明显降低(P<0.05或0.01);与阴性对照组相比,中药治疗组大鼠视网膜、外侧膝状体及视皮质的NT-3的表达强度和Nissl小体的含量均明显增高,尤以中药高剂量组明显(P<0.05或0.01)。结论补肾活血中药能减轻实验性糖尿病大鼠视路三级神经元病理损害,其作用机制之一可能是通过增加糖尿病大鼠视路NT-3的表达。     

补肾活血中药对糖尿病大鼠视路突触素1和髓鞘硷性蛋白的影响

目的：探讨补肾活血中药对糖尿病大鼠视路突触素1和髓鞘硷性蛋白（myelin basic protein,MBP)的影响。方法：以链佐菌素造成大鼠糖尿病模型后，给予补肾活血中药加降糖灵混悬液连续6月，采用免疫组化结合图像分析半定量检测视网膜，外侧膝状体，视皮质17例区三级神经元轴突突触素Ⅰ和神经纤维髓鞘硷性蛋白的含量。结果：与正常组相比，模型组大鼠三级神经元轴突突触素Ⅰ和神经纤维MBP的含量明显降低（P＜0．001），补肾活血中药组大鼠三级神经元轴突突触素Ⅰ和神经纤维MBP的含量明显增加（P＜0．001）。结果：补肾活血中药能够增加糖尿病大鼠视路三级神经元突触的密度，并可提高神经纤维MBP合成，恢复髓鞘，有利于神经纤维传导功能的恢复。     

补肾活血中药对糖尿病大鼠视路胶质纤维酸性蛋白和髓鞘碱性蛋白表达的影响

目的观察补肾活血中药复方对糖尿病大鼠视路星形胶质细胞和少突胶质细胞的影响。方法以STZ制作大鼠实验性糖尿病模型。用免疫组化染色结合图像分析半定量测定视网膜、外侧膝状体、视皮质中胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)和髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)的表达。结果与正常对照组相比,阴性对照组糖尿病大鼠视网膜、外侧膝状体及视皮质中GFAP和MBP阳性染色均不同程度的降低(P<0.05或P<0.01);与阴性对照组相比,中药各剂量组视路3个部位的GFAP、MBP阳性染色均增高,尤以中药高剂量组明显(P<0.05或P<0.01);在同等使用降糖灵的基础上,中药高剂量组视路GFAP、MBP的阳性染色较阳性对照Ⅰ组明显增高(P<0.05或P<0.01)。结论STZ性糖尿病大鼠在高血糖持续6个月后,视路3个部位的星形胶质细胞和少突胶质细胞出现免疫组织化学病理改变;补肾活血中药复方能够诱导糖尿病大鼠视路星形胶质细胞发生反应性胶质化,促进神经纤维髓鞘结构的恢复,这可能是补肾活血中药复方减轻糖尿病视功能损害的重要机制之一。     

补肾活血中药对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞的影响

目的 探讨补肾活血中药对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞的影响。方法 以链脲佐菌素造成大鼠糖尿病模型。利用微机图像分析技术夺视网膜神经细胞胞体中Ｎｉｓｓｌ小体进行定量测定和分析。结果 中药治疗组的糖尿病大鼠视网膜神经节细胞胞体中Ｎｉｓｓｌ小体减少程度明显低于阴性对照组和阳性对照Ⅰ组。结论 补肾活血中药有减轻实验性糖尿病视网膜神经节细胞病理损害的作用。     

补肾活血中药对实验性糖尿病大鼠肾脏皮层血流值影响的观察

目的:应用激光散斑成像技术观察补肾活血中药对实验性糖尿病大鼠肾脏皮层血流值的影响。方法:将高糖高脂饲料联合链脲佐菌素诱导的实验性糖尿病大鼠20只,按血糖分为模型组和治疗组,每组10只,分别予生理盐水(10 m L/kg)、补肾活血中药煎剂(6.7 m L/kg),另取10只正常大鼠为正常组(生理盐水10 m L/kg)。连续灌胃8周后,观察各组大鼠肾脏皮层血流值。结果:模型组大鼠肾脏皮层血流值(338.55±28.55)明显高于正常组(239.27±33.27)(P0.01);补肾活血中药组大鼠肾脏皮层血流值(247.63±11.49)明显低于模型组(338.55±28.55)(P0.01);补肾活血中药组大鼠肾脏皮层血流值(247.63±11.49)较正常组(239.27±33.27)比较没有差异(P0.05)。结论:实验性糖尿病大鼠肾脏损害的早期表现可能为肾脏皮层血流值增加,补肾活血中药能降低实验性糖尿病大鼠肾脏皮层血流值,其防治糖尿病肾病的机制可能与降低肾脏皮层血流值从而改善肾脏微循环有关。     

糖尿病大鼠视网膜神经节细胞凋亡及补肾活血中药抑制其凋亡的机制

目的 探讨糖尿病大鼠视网膜神经节细胞(RGC)凋亡及补肾活血中药抑制凋亡的机制。方法 以链脲佐菌素造成大鼠糖尿病模型，给予补肾活血中药加降糖灵混悬液，连续6月，采用甲苯胺蓝—伊红染色及免疫组化染色结含图像分析半定量检测RGC数目、尼小体、bcl—2、bax、NT—3的含量，计算bcl—2／bax蛋白的比值，并使用逐步引入剔除模型进行多元线性回归分析。结果 与正常组相比，模型组RGC数目明显减少(P＜0．001)，尼氏小体、bcl—2、NT—3、bcl—2／bax蛋白含量显著降低(P＜0．001)，bax含量显著增高(P＜0．001)；与模型组相比，补肾活血中药组RGC细胞数目明显增多(P＜0．001)，尼小体、bcl—2、NT—3、bcl—2／bax蛋白含量显著增高(P＜0．001)，bax含量显著降低(P＜0．001)。回归分析结果显示RGC数目和尼小体含量分别与bcl—2／bax蛋白比值呈正相关，前者r＝0．754，P＜0．001，后者r＝0．578，P＜0．001。结论 糖尿病大鼠RGC凋亡及补肾活血中药抑制其凋亡的可能机制之一是通过调节bcl—2／bax的比值，神经营养因子NT—3量的改变也有一定的作用。     

补肾活血方对血管性痴呆大鼠海马BDNF mRNA及受体TrkB mRNA表达的影响

目的探讨补肾活血方对血管性痴呆(VD)大鼠脑海马神经元保护机制。方法 70只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、补肾活血高剂量组、补肾活血低剂量组、尼莫地平对照组,每组14只,采用两血管阻断法制备大鼠VD模型,补肾活血高剂量组、低剂量组分别以10.14、5.07 g生药/kg灌服补肾活血方,尼莫地平对照组以11.06 mg/kg灌服尼莫地平,给药30天后,检测各组大鼠水迷宫法行为学、脑海马神经元超微结构及海马组织BDNF mRNA和Trk B mRNA蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠空间学习记忆能力与探索能力下降,表现为逃避潜伏期明显延长,穿越原平台次数及在原平台停留时间均明显减少(P0.01),海马神经元BDNF mRNA和Tr KB mRNA及蛋白表达下降(P0.05,P0.01),脑海马神经元超微结构明显受损;与模型组比较,补肾活血高、低剂量组大鼠空间学习记忆能力与探索能力明显改善,表现为逃避潜伏期明显缩短,穿越原平台次数及在原平台停留时间均明显增加(P0.05,P0.01),海马神经元BDNF mRNA及受体Trk B mRNA及蛋白表达升高(P0.05,P0.01),改善脑海马神经元超微结构。结论补肾活血方可提高脑海马神经元BDNF及受体Trk B表达,保护脑海马神经元,改善VD大鼠学习与记忆能力。     

补肾活血中药复方对AGEs条件下体外纯化培养视网膜Müller细胞活力的影响

目的:探讨补肾活血中药对体外糖基化终末产物(AGEs)条件下视网膜Müller细胞活力的影响。方法:体外纯化培养7天SD大鼠视网膜Müller细胞至P2代;中药血清药理学方法制备补肾活血中药含药血清;体外纯化培养的P2代视网膜Müller细胞置于AGEs状态下,以补肾活血中药含药血清干预,检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出量。结果:(1)低AGEs组较正常对照组LDH值有升高趋势,其差异无统计学意义(P0.05);高AGEs组较正常对照组LDH值明显升高,其差异有统计学意义(P0.05)。(2)正常中药干预组与正常对照组LDH值比较,其差异无统计学意义(P0.05)。(3)AGEs中药干预组较AGEs组LDH值明显降低,其差异有统计学意义(P0.05)。结论:AGEs条件可导致体外纯化培养的大鼠视网膜Müller细胞细胞膜稳定性下降,通透性增加,细胞活力降低,补肾活血中药含药血清可提高AGES条件下视网膜Müller细胞活力,这可能是补肾活血中药防治糖尿病性视网膜病变(DR)的药物干预途径之一。     

补肾活血方合关节镜治疗膝骨性关节炎29例临床观察

目的:观察补肾活血方联合关节镜治疗膝骨性关节炎的临床疗效。方法:将58例膝骨关节炎患者随机分为治疗组与对照组各29例,对照组给予西乐葆胶囊联合关节镜治疗,治疗组在对照组治疗的基础上加用补肾活血方治疗。比较两组患者的临床疗效。结果:总有效率治疗组为96.6%,高于对照组的58.6%,差异有统计学意义(P0.05)。WOMAC(骨性关节炎指数评分表)总评分治疗组治疗后优于对照组(P0.05)。结论:补肾活血中药联合关节镜治疗膝骨性关节炎临床疗效显著,值得在临床上推广。     

补肾活血中药治疗血管性痴呆的实验研究

在MID动物模型上,以西药脑复康为对照,采用水迷宫和放免法观察了醒脑胶囊主要成份补肾活血药物对痴呆大鼠学习记忆能力及脑组织(海马、皮质)中神经肽AVP、SS含量的影响。结果:中药组和脑复康组大鼠游迷宫所需时间和错误次数均明显少于模型组(P<0.05或P<0.01),其中中药组大鼠游全程时间显著少于脑复康组(P<0.05或P<0.01),错误次数与脑复康组无显著性差异(P>0.05)。同时中药组与脑复康组大鼠血浆、脑组织(海马、皮质)中AVP、SS含量均显著高于模型组(P<0.01),且中药组AVP、SS含量又明显高于脑复康组(P<0.05或P<0.01)。提示补肾活血中药能明显改善VD大鼠学习记忆能力,疗效与脑复康相近。同时补肾活血中药能显著提高VD大鼠血浆、脑组织(海马、皮质)中神经肽AVP、SS含量,且优于脑复康。推测血浆及脑组织中神经肽AVP、SS含量的提高可能是中医补肾活血法治疗VD的神经生化基础之一。     

补肾活血中药对实验性血瘀证大鼠内皮细胞功能的影响

目的：观察补肾活血中药对实验性血瘀证大鼠血管内皮细胞功能的影响。方法：采用补肾活血中药药液灌服实验性血瘀证大鼠模型，将动物随机分为对照组、模型组、大剂量和小剂量共4组，每组10只。造模成功后，给药组灌服药物40天，然后下腔静脉取血，测定各观察指标和主动脉血管壁组织学变化。结果：补肾活血中药组血脂、血流变、内皮功能、凝血纤溶各项指标及组织形态学均有明显变化，接近正常组，与模型组有显著差异。结论：补肾活血中药有降低血液黏度、调节血脂和改善血管内皮细胞功能的作用。     

补肾活血法对糖尿病模型大鼠肾组织RAGE mRNA表达的影响

目的:研究补肾活血中药(糖络通)对糖尿病大鼠肾组织中糖基化终产物受体(RAGE)mRNA表达的影响,探讨补肾活血法对早期肾脏损害的防治作用及其作用机制。方法:随机将33只正常雄性Wistar大鼠分为正常对照组(N)、糖尿病对照组(D)、糖络通治疗组(DT)各11只。糖尿病大鼠采用腹腔注射链脲佐菌素造模,D组与DT组均用长效胰岛素隔日皮下注射,DT组同时用糖络通连续给药8周后观察观察大鼠体质量、空腹血糖、糖化血红蛋白、24 h尿微量白蛋白,肾皮质RAGE mRNA的表达水平。结果:与N组相比,D组、DT组在大鼠体质量、空腹血糖、糖化血红蛋白方面无显著性差异(P>0.05),说明D组、DT组血糖控制理想。与N组相比,D组大鼠24 h尿微量白蛋白定量有显著性差异(P<0.01),DT组无显著性差异(P>0.05),说明糖络通具有消除蛋白尿的作用。与N组相比,D组大鼠肾皮质ARGE mRNA(OD值)有显著性差异(P<0.01),DT组无显著性差异(P>0.05),说明糖络通具有降低大鼠肾皮质RAGE mRNA表达水平的作用。结论:糖络通具有消除蛋白尿的作用,在降低糖尿病大鼠肾皮质内RAGE mRNA的表达水平方面有较好疗效。     

补肾、健脾、活血中药及活髓片、活髓膏对溶血性贫血大鼠造血及GM-CSF、EPO、IL-2的影响

目的观察补肾、健脾、活血中药对溶血性贫血大鼠造血及红细胞生成素(GM-CSF)、粒-巨噬细胞集落刺激因子(EPO)、白介素-2(IL-2)的影响。方法采用乙酰苯肼造成大鼠溶血性贫血,对造模成功者分别给予补肾药、健脾药、活血药、活髓片、活髓片与活髓膏合用,共13天。用放射免疫法检测血中GM- CSF、EPO及IL-2。结果健脾组大鼠存活率及血红蛋白均最高；对GM-CSF的影响,补肾组、健脾组及合治组高于正常组、对照组、活血组(P＜0．05)；造模大鼠各组IL-2均高于正常组,实验各组之间差异无显著性(P＞0．05)；健脾组EPO最高,高于补肾组、活血组及活髓组(P＜0．05),各用药组与对照组比较差异有显著性(P＜0．05,P＜0．01)。结论补肾、健脾、活血中药促进造血的机制与环节有所不同。     

补肾活血中药对慢性心力衰竭大鼠Klotho蛋白及心肌细胞形态的影响

目的:观察补肾活血中药对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心功能、心肾组织Klotho蛋白、心肌细胞形态的影响。方法:选取12周龄雄性SD大鼠60只,随机分为4组:假手术组、模型组、赖诺普利对照组(0.25 mg·kg~(-1)·d~(-1))、补肾活血中药组(5.4 g·kg~(-1)·d~(-1))。通过结扎大鼠冠状动脉左前降支配合减食、力竭式游泳造成慢性心衰模型,造模成功后连续灌胃4周,超声检测并计算大鼠左室收缩末期内径(LVSD)左室舒张末期内径(LVDD)左室射血分数(EF)左室短轴缩短率(FS),蛋白质印迹法(Western Blot)测定大鼠心、肾组织中Klotho蛋白表达水平,实时定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR)检测大鼠心、肾组织中Klotho mRNA表达水平,电镜下观察心肌细胞形态学变化。结果:根据EF值判定造模成功,经治疗后,与模型组比较赖诺普利对照组、补肾活血中药组大鼠LVSD、LVDD、EF、FS明显改善,差异有统计学意义(P0.05);与模型组比较,赖诺普利对照组、补肾活血中药组大鼠心、肾组织中Klotho mRNA及Klotho蛋白表达均升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论:补肾活血中药可上调Klotho蛋白的表达,改善慢性心衰大鼠心肌细胞形态,改善大鼠心功能,延缓心室重构,有效治疗慢性心衰。     

补肾益智方对Alzheimer病模型大鼠突触的影响

目的 :观察补肾益智方对Alzheimer病 (AD)模型大鼠突触的影响 ,探讨该方改善学习记忆的作用机制。方法 :采用D 半乳糖致亚急性衰老合并Meynert核损毁的AD大鼠模型 ,实验分为青年组、老年组、模型组、石杉碱甲组、补肾益智方低剂量组、补肾益智方高剂量组 ,用电镜结合体视学分析方法观察各组大鼠前额皮皮及海马CA1区突触的形态结构。结果 :模型组突触的数密度(Nv)、面密度 (Sv)均显著低于青年组和老年组 (P <0 0 1) ;补肾益智方高、低两个剂量组均能显著增加AD模型大鼠突触的Nv和Sv(P <0 0 1) ,且高剂量组增加Nv的作用较低剂量组明显 (P <0 0 5 )。结论 :补肾益智方有促进新的突触形成 ,增加突触数量的作用 ,且对于AD模型大鼠前额皮质及海马CA1区突触数密度的增加有明显的量效关系。     

补肾活血汤改善膝骨关节炎大鼠行为学的实验研究

目的观察补肾活血汤对膝骨关节炎大鼠模型行为学的影响。方法将18只SD雄性大鼠随机分为补肾活血汤组、模型组和空白组。补肾活血汤组和模型组大鼠双膝关节腔注射4%木瓜蛋白酶0.2 mL,隔日注射1次,连续注射2周。造模成功后,补肾活血汤组予补肾活血汤中药灌胃给药,模型组和空白组大鼠予以蒸馏水灌胃处理,连续给药4周。比较造模前后各组大鼠的精神状态、体质量、膝关节活动度等。收集各组大鼠双膝关节影像学图像,观察各组大鼠双膝关节面间隙狭窄、关节面磨损及变形、骨赘生成等情况。给药结束后,测定各组大鼠自主活动次数、旷场实验10 min活动总距离和平均速度,以及水迷宫实验找到平台时间和活动距离等。结果造模后,补肾活血汤组、模型组大鼠较空白组大鼠精神萎靡、反应迟钝,双膝关节可见肿胀、活动不利,补肾活血汤组、模型组与空白组体质量比较明显减轻(P<0.05);补肾活血汤组和模型组大鼠双膝关节面间隙狭窄、关节面磨损、变形及骨赘生成较空白组大鼠双膝明显。给药4周后,模型组大鼠较补肾活血汤组、空白组大鼠自主活动次数减少、旷场实验10 min活动总距离和平均速度降低及水迷宫实验找到平台时间和活动距离延长(P<0.05)。结论补肾活血汤具有改善膝骨关节炎SD大鼠行为学指标与治疗膝骨关节炎的功效。     

补肾方药对地塞米松所致实验性骨质疏松大鼠卵巢功能的影响

目的 :探讨补肾中药对地塞米松 (DXM )所致实验性骨质疏松 (OP)大鼠卵巢功能的影响。方法 :采用放射免疫分析方法对正常对照组、病理对照组、中药治疗组大鼠生长激素 (GH)、黄体生成素(LH)、卵胞生成素 (FSH)、雌二醇 (E2 )、孕酮 (P)、睾酮 (T)和泌乳素 (PRL)的水平进行比较。并对三组大鼠卵巢、子宫分别称湿重和进行组织形态学观察。结果 :病理对照组与正常对照组大鼠比较GH、LH、FSH、E2和P的水平明显降低 (P <0 0 5) ,子宫和卵巢重量减轻 (P <0 0 5)。中药治疗组与病理对照组相比GH、LH、FSH、E2 和P的水平显著增高 (P <0 0 5) ,子宫和卵巢重量增加 (P <0 0 5)。各组间T和PRL无显著性变化 (P >0 0 5)。组织形态学观察可见补肾中药能明显改善病理状态下大鼠卵巢和子宫的形态结构。结论 :补肾中药能提高大鼠体内GH、LH、FSH、E2 和P的水平 ,使子宫、卵巢重量增加 ,组织形态改善。说明补肾中药对DXM所致实验性骨质疏松大鼠有治疗作用。     

补脾肾活血法防治糖尿病肾病机理探讨

目的观察补脾肾活血方对糖尿病大鼠肾脏病变的影响,以探讨其防治糖尿病肾病的机制.方法用链脲佐菌素(STZ)制备糖尿病大鼠模型,12周后,测定肾功能指标、糖化血红蛋白(GHb)、血清和肾皮质糖基化终产物(AGEs)水平,并对大鼠肾脏进行光镜和电镜观察.结果补脾肾活血中药治疗后肾功能指标、血糖、糖化血红蛋白、血清和肾皮质AGEs都显著低于糖尿病组(P＜0.01 或 P＜0.05),且肾脏病理改变得以改善.结论补脾肾活血中药能够通过降低血糖、减少尿蛋白和抑制蛋白非酶糖化防治糖尿病肾病的发生.     

滋养肝肾、活血化瘀中药对实验性糖尿病大鼠视神经组织形态的影响

目的：观察滋养肝肾、活血化瘀复方制剂对实验性糖尿病大鼠视神经组织形态的影响。方法：用四氧嘧啶造成Ｗｉｓｔａｒ大鼠糖尿病模型，于造模后７天开始给中药复方制剂灌胃６个月，以达美康作对照。光镜下观察比较大鼠视神经组织结构。结果：中药治疗组的糖尿病大鼠视神经纤维退变和神经髓鞘脱失的程度均显著低于阴性对照组和阳性对照组（Ｐ＜０．０１，０．００１）。结论：滋养肝肾、活血化瘀中药有减轻实验性糖尿病大鼠视神经病理损害的作用。