缺口连接酶链反应检测沙眼衣原体DNA的实验研究

目的:建立缺口连接酶链反应方法检测沙眼衣原体.方法:根据编码CT主要外膜蛋白的基因(ompl)的稳定区设计2对互补的寡核苷酸探针.采用G-LCR和常规PCR扩增CT标准株DNA,并对二者检测CT的敏感性进行比较.结果:对5种CT标准株进行G-LCR扩增,均出现54bp长度的DNA片段.敏感性实验可检测出2个CT原体,而PCR可检测出20EBs.G-LCR较PCR敏感10倍;在特异性方面,不扩增肺炎衣愿体及其他细菌DNA,具有很高的特异性.结论:G-LCR用于检测沙眼衣原体特异、敏感、快速、准确,可为CT感染的临床诊断提供依据.     

连接酶链反应检测结膜沙眼衣原体

目的 了解活动性沙眼患的年龄分布，评价WHO简易沙眼分级法和连接酶链反应(LCR)诊断沙眼衣原体的意义。方法 根据WHO简易沙眼分级法，对89例受检进行沙眼分级，并应用刮擦拭子采集上睑结膜标本。进行连接酶链反应以诊断沙眼衣原体。结果 10岁以下的沙眼占56．18％，20岁以下占26．94％；84例沙眼及可疑沙眼中，16例LCR阳性(19．05％)，各抽样点的LCR阳性率为7.14％～34．38％。结论 应加强对青少年活动性沙眼的防治；WHO的简易分级活法适合在基层农村推广；连接酶链反应可用于早期沙眼的诊断及批量样本的检测。需注意采样方法及转送温度条件的控制。     

连接酶链反应检测男性就诊者尿标本中的沙眼衣原体

目的评价连接酶链反应(LCR)检测性病专科门诊男性就诊者尿标本中沙眼衣原体(CT)的敏感性和特异性。方法取852例患者尿道拭子作CT培养;同时取患者较长时间(2 h以上)不排尿后的首次尿(FVU)标本,用质粒LCR检测CT。对培养法和质粒LCR结果相异的标本,用另一针对CT主要外膜蛋白基因的LCR进行确证,参照“扩大的金标准”来确定检测结果。结果质粒LCR敏感性和特异性分别为98.6%和99.4%,而培养法分别为77.4%和99.5%,前者敏感性高于后者(P<0.001)。在伴或不伴尿道症状的就诊者间LCR敏感性和特异性无显著性差异。结论LCR是一种既敏感又特异的CT诊断方法。FVU可作为筛检男性CT感染的一种非损伤方法。     

连接酶链反应检测男性就诊者尿标本中的沙眼衣原体

OBJECTIVE: To determine the sensitivity and specificity of ligase chain reaction (LCR) for detection of Chlamydia trachomatis (C. trachomatis) in the urine of symptomatic and asymptomatic men. METHODS: C. trachomatis was detected by LCR in both first-void urine (FVU) and urethral swab cultures from 852 randomly selected male outpatients seeking medical attention for sexually transmitted diseases. In cases with discrepancy between the results yielded by the two methods, a second LCR directed against a gene fragment encoding the major outer membrane protein was performed. The results were evaluated on the basis of an expanded gold standard. RESULTS: The sensitivity and specificity was 98.6% and 99.4% with LCR, respectively, and was 77.4% and 99.5% with urethral swab culture. The sensitivity of LCR was much higher than that of urethral swab culture P<0.001 .The presence or absence of urethral symptoms did not show any influence on the results. CONCLUSION: LCR is sensitive and specific for detecting C. trachomatis infections, and FVU can be used for non-invading diagnosis and screening of the infection in men.     

连接酶链反应检测沙眼衣原体的准确性Meta分析

目的评价连接酶链反应技术与培养法诊断沙眼衣原体的准确性。方法计算机检索PubMed、EMBASE、Cochrane图书馆、中国生物医学文献数据库、中周期刊全文数据库和万方数据库等,收集连接酶链反应诊断沙眼衣原体的试验研究．依据QUADAS质量评价标准评价纳入研究的质量,采用MetaAnalyst软件进行Meta分析。结果共纳入22个研究,共16073例受试者。Meta分析结果显示：与诊断沙眼衣原体感染的“金标准”细胞培养相比,连接酶链反应诊断沙眼衣原体感染的合并敏感度、特异度、阳性似然比、阴性似然比、诊断比值比和综合受试者T作特征曲线下面积分别为0．934（95％可信区间0．891～0．961）、0．983（95％可信区间0．972～0．990）、52．88（95％可信区间32．297～86．583）、0．069（95％可信区间0．043～0．110）,1234．549（95％可信区间545．900～2791．925）和0．986。结论连接酶链反应可作为确诊沙眼衣原体感染的一项新技术,在检测沙眼衣原体感染中有着重要意义。     

体外扩增法检测尿道炎患者尿液中沙眼衣原体DNA的研究

目的 :采用聚合酶链反应技术 (PCR)从尿道炎患者尿液中检测沙眼衣原体感染 ,并与细胞培养法及ELISA法相比较 ,以期建立灵敏特异、无创伤性沙眼衣原体DNA诊断技术。方法 :收集患者就诊时初段尿 ,提取尿液沉渣DNA ,PCR法检测沙眼衣原体核酸 ;尿道拭子标本作细胞分离培养 (CC) ;取患者血清作ELISA检测抗体。结果 :采用PCR从尿道炎患者尿液样本中检测到沙眼衣原体DNA ,1 34份尿液样本 ,32份阳性 ,阳性率为 2 3.9%;尿道拭子标本 ,细胞培养阳性率为 2 2 .4 %( 30 /1 34) ;ELISA法检测血清阳性率为 1 7.9%( 2 4 /1 34)。以细胞培养法结果为金标准 ,PCR的敏感度和特异度分别为 1 0 0 %和 98.0 %;ELISA法则为 73.3 %和 98.0 %。三种方法相比较 ,PCR法和CC法无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,两者与ELISA法均存在显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论 :以尿液为样本 ,采用PCR法检测尿道炎患者沙眼衣原体DNA是一种灵敏特异、无创伤性检测手段 ,值得推广使用     

核酸扩增-液相杂交法检测沙眼衣原体DNA

目的：探讨用核酸扩增（PCR）－液相杂交法检测沙眼衣原体DNA的效果。方法：用PCR－液相杂交法对616份临床标本进行了沙眼衣原体检测，并与培养法比较，对与培养法结果不相符合的标本及部分阴性标本进行连接酶链反应（LCR）复检。结果：PCR－液相杂交相法检测沙眼衣原体特异性良好。灵敏度达到0.1fg，临床标本沙眼衣原体DNA阳性检出率为27.6％，显著高于培养法的6.3%（P＜0.001）。以培养法为标准，此法的灵敏度为100％。以LCR法为标准，此法的灵敏度为97.2％,特异度为80.7%，2者具有较好的相符性。结论：PCR－液相杂交法检测沙眼衣原体DNA操作简便，特异性强，灵敏度高，适合临床应用。     

聚合酶链反应检测沙眼衣原体

聚合酶链反应检测沙眼衣原体苏明权，祝道成，穆士杰，丁振若（第四军医大学西京医院检验科西安７１００３３）关键词沙眼衣原体；聚合酶链反应；实验诊断中图号Ｒ５１８沙眼衣原体是人类重要的致病菌，能引起多种感染性疾病。长期以来，对沙眼衣原体感染的实验室诊断一直...     

聚合酶链反应快速检测沙眼衣原体

应用聚合酶链反应对２６９例临床标本进行了检测，８１例沙眼衣原体来阳性。表明ＰＣＲ技术是快速检测沙眼衣原体感染的有力手段。     

缺口-连接酶链反应-酶联免疫吸附(Gap-LCR-ELISA)检测沙眼衣原体的方法学研究

目的:探讨敏感性和特异性好的沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,CT)感染的诊断方法.方法:肺炎患儿鼻咽拭子标本分别经细胞培养及质粒探针连接酶链反应分析;计算TC和G-LCR法敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值,比较两种方法在检测CT感染中的差异.结果:按扩大金标准,真阳性共49例,阴性共344例.TC法假阴性12例,配对χ2检验显示:G-LCR-ELISA与TC比较差异显著,G-LCR优于TC.结论:LCR方法是一种快速而准确的检测CT方法,LCR法敏感性高于TC,LCR法特异性高.     

沙眼衣原体基因分型及其应用

本文分别以沙眼衣原体（Ｃｈｌａｍｙｄｉａｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ，Ｃｔ）隐蔽性质粒引物（Ｐｐ）及主要外膜蛋白基因（ｏｍｐ；）引物（Ｐｍ）．用ＰＣＲ扩增Ｃｔ特异性ＤＮＡ，并用单链构象多态性（Ｓｉｎｇｌｅ－ｓｔｒａｎｄｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｐｏｉｙｍｏｒｐｈ－ｉｓｍ，ＳＳＣＰ）作基因分型。４２６份标本中，９２例质粒ＰＣＲ阳性，用质粒ＰＣＲ阳性标本作ｏｍｐ：ＰＣＲ，６６例为阳性。其中５２例标本经ＳＳＣＰ分析显示７种不同的电泳图谱，１８例与标准株ＴＥ５５电泳图谱相同。其中两份标本分别取羊水及新生儿睑结膜，其ＳＳＣＰ图谱相同，表明两株Ｃｔ核酸序列完全相同。在分子水平上证实了Ｃｔ的垂直传播。临床标本可先采用敏感的质粒ＰＣＲ作初筛。阳性者再作ｏｍｐ１ＰＣＲ进行基因分型。应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ对Ｃｔ作基因分型，在分子流行病学研究中有重要意义。     

聚合酶链反应和DNA探针杂交法检测沙眼衣原体的比较

目的：探讨聚合酶链反应（PCR）和DNA探针杂交法检测泌尿生殖道沙眼衣原体（Ct)的临床诊断价值。方法：应用这两种方法对未使用过抗衣原体药物的80例宫颈炎患者同时进行Ct检测。结果：PCR法检出Ct基因的阳性率（23．8％）高于探针杂交法（15．0％），两者比较有显著性差异。结论：PCR法检测Ct较DNA探针杂交法敏感，如将两法结合应用结果将更可信。     

用荧光定量PCR及金标法检测不孕妇女生殖道沙眼衣原体感染的比较

目的检测73例不孕妇女宫颈分泌物中沙眼衣原体感染情况.方法应用荧光定量PCR及金标法并将两种方法作比较.结果表明用荧光定量PCR法检测不孕的沙眼衣原体阳性为41例(56.1%),阴性32例(43.9%),金标法检测阳性为19例(26.0%),阴性54例(74.0%),荧光定量PCR检测的阳性率明显高于金标法检测(P＜0.01).结论荧光定量PCR法在检测沙眼体较金标法更敏感、快速,是早期诊断生殖道沙眼衣原体感染的一种极有价值的方法.     

不同RNA提取及反转录方法对环状RNA聚合酶链反应的影响

［摘要］ 目的 比较不同总RNA提取方法及不同反转录引物对喉鳞状细胞癌细胞株Hep2细胞环状RAN扩增的影响,进一步为环状RNA鉴定与扩增提供可靠的实验方法。 方法 使用Trizol抽提法和miRNeasy Mini试剂盒提取Hep2细胞中的总RNA;Nanodrop 2000对总RNA进行定量及纯度测定;使用随机引物和通用引物分别对总RNA进步反转录;实时定量聚合酶链反应检测Hep2细胞中环状RNA-circHIPK3及circFLNA的表达。 结果 Trizol抽提法提取的RNA浓度和RNA总量高于miRNeasy Mini试剂盒提取的RNA总浓度结果（P＜0.01）,但应用miRNeasy Mini试剂盒提取的RNA纯度要高于Trizol抽提法（P＜0.05）,应用随机引物反转录,能扩增出circHIPK3和circFLNA,而利用通用引物进行反转录,circHIPK3及circFLNA不能被扩增;另外,利用miRNeasy Mini试剂盒法提取总RNA后所扩增出circHIPK3及circFLNA的相对表达量明显高于Trizol抽提法（P＜0.01）。 结论 miRNeasy Mini试剂盒提取总RNA纯度更高,更有利于环状RNA的扩增,利用随机引物进行反转录而非通用引物,可顺利扩增出环状RNA。     

Assessment of polymerase chain reaction and serology for detection of chlamydia pneumoniae in patients with acute respiratory tract infection

Objective To study Chlamydia pneumoniae （C. pneumoniae） infection in 110 patients with respiratory tract infection admitted to our hospital from January to December 1995 in Nanjing.Methods Sputum and throat swab specimens were taken and C.pneumoniae DNA was detected by using polymerase chain reaction （PCR） with the HM-1-HR-1 primer pair. At the same time, serum samples were taken and immunoglobulin G and M （IgG and IgM） fractions of antibodies to C.pneumoniae were studied by microimmunofluorescence test.Results Prevalence of specific IgG was 70％ in patients with respiratory tract infection. Seventeen patients （15.5 ％） were serologically diagnosed as having recent C.pneumoniae infections and 12 patients （10.9％） had positive PCR in sputum and/or swab specimens. The total positive rate was 22.7％ （25/110） detected by PCR combined with serological tests. Acute infection of C.pneumoniae was common in patients with asthma （57.1％）, pneumonia （35.0％）, COPD （25.9％） and bronchitis （25.0％）. Clinical features between C.pneumoniae infection and non-C.pneumonia infection showed no significant differences.Conclusions Chlamydia pneumoniae is an important pathogen that causes infection of the human respiratory tract and attention should be drawn to this special illness.     

荧光定量PCR检测不孕妇女生殖道沙眼衣原体和解脲支原体

目的调查深圳地区不孕妇女的生殖道沙眼衣原体（CT）和解脲支原体（UU）感染；比较荧光定量PCR法与UU培养或金标法检测CT的敏感性。方法219例不孕妇女患者取宫颈分泌物，用荧光定量PER法检测219例分泌物标本UU的DNA，同时对196例标本进行CT的DNA检测。另选68例正常体检女性作为对照组；同时采用支原体培养药敏试剂盒进行UU培养以及金标法检测CT，并对结果进行统计、分析。结果荧光定量PCR检出UU阳性率39．7％（87／219），CT阳性率44．9％（88／196），分别高于对照组（P〈0.05）。同时，培养法检出UU阳性率为29．7％，金标法检测CT阳性率为27％，与PER相比，P〈0.05。结论输卵管不孕妇女生殖道UU和CT检出率较高，荧光定量PCR具有敏感性高和特异性强的特点，对不孕患者CT和UU的诊疗具有实际意义。     

环介导等温扩增技术用于结核病诊断的价值评估

目的 评估环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)在诊断结核病中的应用价值.方法 以疑似活动性结核患者为研究对象.前瞻性收集患者临床标本,分装后进行荧光涂片显微镜镜检、BACTEC MGIT 960液体培养、MTB GeneXpert(Xpert)和L...     

荧光定量聚合酶链反应检测泌尿生殖道沙眼衣原体感染120例

目的　评价泌尿生殖道沙眼衣原体 (CT)感染治疗前后拷贝数变化的意义。方法　应用荧光定量聚合酶链反应 (FQ -PCR)检测尿中CT及CT -DNA拷贝计数 (拷贝数·ml-1)。结果　 12 6例CT阳性患者CT -DNA拷贝计数 4.5× 10 5～ 6 .7× 10 9,平均 5 .2× 10 7。治疗后 86例CT检测转阴 ,临床症状消失 ;40例CT -DNA拷贝数 1.5× 10 5～ 3.5× 10 7,平均1.8× 10 5,症状明显减轻 (P <0 .0 1)。结论　FQ -PCR是检测CT感染的可行方法 ,对临床用药、疗效判断有一定临床意义。