缺血后处理对供体犬肺组织细胞凋亡基因表达的影响

【目的】观察供体犬肺再灌注后早期供体肺组织脂质过氧化反应的变化,了解缺血后处理对供体犬肺植入后细胞凋亡基因表达的变化情况。【方法】随机选取12对比咯犬,组成供受体,进行异体左侧单肺移植术。随机分成两组,对照组:6对犬,进行供受体左侧异体单肺移植,不予缺血后处理的干预,按常规方式进行。缺血后处理组:6对犬,进行供受体左侧异体单肺移植,常规方式获取的供体犬肺植入后,再灌注早期实施3个周期的10 s再灌～10 s再阻断,总时程1 min的缺血后处理。于供体犬肺再灌注后1、2 h时间点采集供肺标本检测超氧化物歧化酶(SOD)的活性、丙二醛(MDA)的含量;采用RT-PCR技术检测供体肺脏再灌注后1、2 h时间点细胞凋亡基因Bcl-2、Bax的表达;光镜下观察供体犬肺植入后1、2 h时间点肺组织的病理变化,应用SPSS 13.0统计软件处理,以P<0.05为统计学上有显著差别。【结果】供体肺脏植入时间平均(35.9±1.7)min。缺血后处理组在1、2 h时间点的供体肺组织SOD活性水平较对照组升高、MDA含量较对照组减低,有统计学差异(P<0.05);对照组与实验组相比较,肺组织再灌注后1、2 h时间点,Bc12蛋白表达上调(P<0.05),而Bax蛋白表达下调(P<0.05);缺血后处理组肺组织光镜下观察在各时间点的炎症反应均较对照组的变化轻微。【结论】缺血后处理可以抑制再灌注时氧化自由基的堆积,从而减少供体肺的缺血再灌注损伤;缺血后处理能够通过抑制促凋亡Bax蛋白的表达,及促进抗凋亡Bc12蛋白表达,从而影响内源性细胞凋亡途径。     

大鼠肺缺血再灌注损伤中肺泡细胞凋亡的动态观察

目的研究大鼠肺缺血再灌注损伤(IR)中肺泡细胞凋亡的动态过程及其与肺损伤的相关性。方法采用大鼠单肺原位热缺血再灌注模型。于缺血再灌注0min、30min、1h、2h,6h及12h采取肺组织及左房血标本,测定血氧分压、肺组织湿／干重比,并作光镜和透射电镜观察组织、细胞形态及亚显微结构,确定凋亡发生。TUNEL法测定肺组织中凋亡指数。台盼蓝活体染色评价细胞死亡程度,并结合同组凋亡水平间接推测细胞坏死水平。结果肺IR后,肺组织透射电镜观察可见肺泡Ⅱ型上皮细胞增多,并且不同程度出现形态学改变,细胞体积缩小变圆,细胞核呈多形性,核被膜外折或内陷,核固缩并边集在核膜下呈月牙状或腰带状,胞浆浓缩,胞浆内嗜锇性板层体减少、排空增多,细胞膜上微绒毛减少或消失,提示细胞凋亡发生,肺泡Ⅰ型上皮细胞则少有上述改变。单独缺血30min,肺泡细胞凋亡指数无增高。肺再灌注后0．5h起,肺泡细胞凋亡指数显著增高,再灌注2h时达到高峰。与细胞凋亡指数相比,坏死指数与肺功能损害的相关性更显著。结论肺IR后发生凋亡的主要是肺泡Ⅱ型上皮细胞。肺泡细胞凋亡指数于再灌注2h达到高峰。肺泡细胞坏死指数与肺功能损害的相关性较凋亡指数更显著。     

肠缺血再灌注时肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡与肺损伤

目的 观察肠缺血再灌注中肺损伤与肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的关系及其可能的发生机制。方法 Wistar大鼠,肠系膜上动脉夹闭后松夹造成肠缺血再灌注。不同时间点活杀动物,测肺通透指数、肺泡灌洗液（BALF）和血浆中NO、IL-2含量,分离肺泡Ⅱ型上皮细胞,观察凋亡率。结果与结论 肠缺血再灌注可能引起肺损伤;肠缺血再灌注后肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡率上升,再灌注30 min 达高峰;缺血再灌注后血、BALF中NO、IL-2增加;肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡率与肺通透指数显著相关,BALF中IL-2水平与肺通透指数、肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡率显著相关。     

缺血后处理对大鼠无心跳供体肺移植的保护作用

目的: 在大鼠无心跳供体(non-heart-beating donor,NHBD)肺移植动物模型上观察缺血后处理对NHBD供肺的保护作用。方法: 将40只大鼠随机分成缺血后处理组(IPO组)和对照组(C组),每组10对,用“两套管一支架法”完成无心跳供体左肺原位移植。C组肺移植后直接开放肺动脉恢复灌注,而IPO组肺移植后给予5次1 min再灌 /1 min再阻断的后处理措施,然后全面恢复再灌注。结果: IPO组与C组比较,NHBD肺移植术后肺水含量低、肺损伤程度轻,而肺顺应性、肺结构和功能保存更好。此外,IPO组移植术后供肺细胞凋亡程度和丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量较C组低,而SOD含量较C组高。结论: 缺血后处理可以减轻NHBD肺移植术后供肺缺血再灌注损伤,保存供肺结构和功能,还可抑制NHBD肺移植术后脂质过氧化反应和细胞凋亡。     

肺移植后早期肺泡上皮凋亡及其临床意义

目的 探讨肺移植再灌注后肺泡上皮凋亡发生的数量与再灌注损伤关系及与凋亡相关基因Fas抗原和Bcl-2的表达情况.方法 应用免疫组化、TUNEL染色及电镜,对18例肺移植供肺标本冷缺血保存后3和6 h以及再灌注后0.5和1.5 h进行连续观察.结果 再灌注后0.5和1.5 h,供肺肺泡上皮的凋亡指数明显增加(P<0.01).并与再灌注时间呈正相关,Fas抗原表达明显增强,Bcl-2表达明显减弱.结论 肺移植后早期就可观察到肺泡上皮凋亡数量增加,可能与缺血/再灌注损伤有关,细胞凋亡的检测对于防治移植肺缺血/再灌注损伤中的抗凋亡治疗可能具有意义.     

兔肺动脉栓塞/再灌注损伤中肺泡细胞凋亡及其Fas/FasL表达的变化

目的:观察兔肺动脉栓塞/再灌注损伤中肺泡细胞凋亡及其Fas及FasL蛋白表达的变化,探讨肺损伤的可能机制.方法:健康新西兰白兔30只,雌雄不拘,运用5F Berman球囊堵塞左下肺动脉,然后球囊放气,复制肺动脉栓塞缺血再灌注模型,随机分为5组(n=6):假手术组,肺动脉栓塞1 h组、肺动脉栓塞2 h组,肺动脉栓塞2 h再灌注1 h组、肺动脉栓塞2 h再灌注2 h组;另设6只正常未手术白兔为对照组.实验结束取肺组织,测定肺组织湿/干重比,采用流式细胞分析法检测肺组织细胞凋亡率,免疫组织化学法检测肺上皮细胞Fas及FasL蛋白表达的变化.结果:与对照组、假手术组相比,肺动脉栓塞1、2 h组兔肺组织细胞凋亡率明显增加,再灌注后凋亡细胞进一步增多,并随着再灌注时间延长而逐渐增多(P＜0.05或0.01);Fas及FasL蛋白表达在肺动脉栓塞及再灌注后明显上调(P均＜0.01).肺泡上皮细胞凋亡指数与肺组织湿干比、Fas及FasL蛋白表达呈显著正相关(r分别为0.769,0.820,0.820;P＜0.01).结论:肺动脉栓塞缺血/再灌注可能通过激活Fas/FasL系统,诱导肺组织细胞凋亡,从而导致肺损伤的发生.     

血中性粒细胞PECAM-1/CD31表达与肺缺血再灌注损伤的关系研究

目的 研究血液中中性粒细胞PECAM-1/CD31(血小板内皮细胞黏附分子-1)与肺缺血再灌注损伤的关系.方法 建立大鼠单肺原位热缺血再灌注模型.清洁级SD大鼠按再灌注不同时段分为对照组和实验组(5组),应用流式细胞仪测定在肺缺血60 min后再灌注损伤中的不同时间阶段(Oh,2h,4h,6h,8h),血液中中性粒细胞PECAM-1/CD31的变化情况.并作光镜和透射电镜观察组织、细胞形态及亚显微结构,观察凋亡发生.结果 肺缺血再灌注后,血液中中性粒细胞PECAM-1/CD31开始升高,2h达到高峰(P<0.01),然后逐渐下降,至6h和8h基本恢复到缺血再灌注前水平.肺缺血再灌注后,肺组织透射电镜观察可见肺泡Ⅱ型上皮细胞增多,出现不同程度的形态学改变,并可见凋亡小体,提示细胞凋亡发生.此种亚显微结构的改变在再灌注2h最为明显,与PECAM-1/CD31的变化相似.结论 PECAM-1/CD31参与了肺缺血再灌注损伤的病理过程.     

无心跳供体大鼠同种异体左肺原位移植模型的热缺血时限

 目的 建立无心跳供体（NHBD）大鼠同种异体左肺原位移植模型,比较不同热缺血时间（WIT）对大鼠移植肺功能和结构的影响。方法 将32只SD大鼠按供受体随机配对成16对,分成4组,分别为有心跳供体组（对照组,HBD）、NHBD热缺血1 h组、（实验组,NHBD1h）、热缺血2 h组（实验组,NHBD2h）和热缺血3 h组（实验组,NHBD3h）,每组4对。供肺摘取后置于4℃低钾右旋糖苷（LPD）液中4 h。采用三“袖套”套管法行左肺原位移植术。测定和观察移植前、移植后10 min、1 h和2 h的右颈动脉血气,移植后2 h的左肺静脉血气、移植肺湿/干重比和组织形态学改变。结果 NHBD1h组移植肺再灌注10 min、1 h和2 h所采集的右颈动脉血PaO2数值（177.8 ± 15.5、162.0 ± 19.3和195.5 ± 26.4）和对照组HBD组（187.3 ± 34.4、191.8 ± 36.6和198.8 ± 36.6）的差别没有统计学意义;再灌注10 min和2 h,NHBD2h组右颈动脉血PaO2数值（154.8 ± 25.2和116.5 ± 32.1）以及NHBD3h组（121.0 ± 28.2和88.3 ± 23.6）和对照组的差别有统计学意义（P<0.05）。移植肺再灌注2 h后,NHBD1h组左肺静脉血PaO2数值与对照组的差别没有统计学意义（132.3 ± 33.8 vs. 143.8 ± 17.1）,NHBD2h和NHBD3h组与对照组的差别均有统计学意义（78.8 ± 16.1 vs. 143.8 ± 17.1,70.8 ± 15.5 vs. 143.8 ± 17.1,P<0.05）。NHBD3h组的湿/干重比数值和肺损伤程度病理评分与对照组的差别有统计学意义（P<0.05）。结论 本实验成功建立了NHBD大鼠同种异体左肺原位移植模型,在本实验动物模型中,大鼠可以耐受的WIT为1 h。     

丙泊酚 瑞芬太尼对大鼠缺血再灌注损伤肺泡细胞凋亡的影响

目的：探讨麻醉药丙泊酚（propofol）和瑞芬太尼（remifentanil）对大鼠缺血再灌注损伤（is-chemia reperfusion injury,IR）后肺泡细胞凋亡的影响。方法：建立大鼠原位热缺血再灌注模型,于结扎前、缺血30min、再灌注1h、2h、4h给予药物干预,采取肺组织及右房血标本,测定血氧分压,肺组织湿/干重比,并作光镜和透射电镜观察组织细胞形态及超微结构,确定凋亡发生,流式细胞仪测定肺组织中凋亡情况。结果：缺血再灌注组与假手术组比较,血氧分压降低,肺组织湿/干重比增高,肺泡细胞凋亡指数增高,丙泊酚组、瑞芬太尼组与缺血再灌注组比较,血氧分压增高,肺组织湿/干重比降低,肺泡细胞凋亡指数下降。结论：丙泊酚和瑞芬太尼对IR后肺泡细胞凋亡有抑制作用。     

犬肺移植热缺血再灌注后TNF-α和IL-8的早期水平观察

目的　观察分析无心跳供体犬肺移植缺血再灌注后TNF -α和IL - 8的早期水平变化。方法　家犬2 0只 ,先给予静脉注射氯化钾 ,心脏停跳 30min后开始进行冷保护液肺灌洗 ,灌洗时间 5min ,取出供体肺 ,4℃低温保存 1h,然后进行受体右肺移植操作 ,术后连续观察 6hTNF -α和IL - 8水平变化。结果　比较术前及术后6h内TNF -α有先升后降的趋势 ,IL - 8有明显持续性升高的趋势。结论　热缺血 30min犬供体肺移植细胞因子参与肺移植术后早期缺血再灌注损伤 ,其血清水平变化规律对检测早期移植肺损伤有一定的价值。     

缺血后处理对犬肺移植术后早期炎症反应的影响

【目的】 观察供体犬肺再灌注后早期炎症因子及脂质过氧化反应的变化情况,了解缺血后处理对供体犬肺植入后功能的影响。【方法】 12对比格犬,随机分成两组,对照组:6对犬,进行供受体左侧异体单肺移植,不予缺血后处理的干预,按常规方式进行;缺血后处理组:6对犬,进行供受体左侧异体单肺移植,常规方式获取的供体犬肺植入后,再灌注早期实施3个周期的10 s再灌和10 s再阻断,总时程1 min的缺血后处理?于供体犬肺再灌注后1 h和2 h时间点采集供肺标本,采用考马斯亮兰法检测超氧化物歧化酶(SOD)的活性?丙二醛(MDA)的含量;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测供体犬肺植入后1、2 h时间点受体左房混合静脉血IL-8水平的变化;关于光镜下观察供体犬肺植入后1、2 h时间点肺组织的病理变化?采用重复测量资料的方差分析进行检验。【结果】 手术无1例失败,均存活。供体肺脏植入时间平均(35.9 ± 1.7) min。缺血后处理组在1 h、2 h时间点的供体肺组织SOD活性水平较对照组升高(P < 0.001);而供体肺组织MDA含量较对照组减低(P < 0.001)。缺血后处理组的左房混合静脉血的血浆IL-8水平在1、2 h时间点均较对照组的明显减少(P < 0.05)。缺血后处理组肺组织光镜下观察在各时间点的炎症反应均较对照组的变化轻微。【结论】 缺血后处理可能通过减少供体肺组织再灌注后细胞因子IL-8的分泌,从而减轻缺血再灌注后的炎症反应性损伤,达到改善供体犬肺的植入后的功能。     

缺血再灌注后bcl-2/Fas在胆管上皮细胞的表达及意义

目的 观察大鼠肝脏经不同时间热缺血再灌注后胆管上皮细胞的凋亡和调控基因bcl-2／Fas蛋白表达的变化并探讨其意义。方法 以大鼠肝脏原位缺血再灌注为模型，经15min、30min、60min缺血再灌注6h后取材，用TUNEL法原位检测胆管上皮细胞的凋亡，免疫组织化学方法检测调控基因bcl-2、Fas蛋白在胆管上皮细胞上的表达。结果正常组与缺血15min组发生凋亡的胆管上皮细胞极少，随缺血时间的延长，凋亡的胆管上皮细胞增多。发生凋亡的胆管上皮细胞主要局限于较大的肝内胆管（〉20μm）。正常胆管上皮细胞即表达较高的bcl-2蛋白，主要表达在肝内细小胆管上皮细胞。大的胆管包括汇管区胆管和纵隔胆管bcl-2蛋白的表达水平相对较低。随着肝脏热缺血时间的延长，大胆管bcl-2蛋白表达阳性率逐渐增高，60min组bcl-2蛋白表达较对照组差异具有显著性。Fas蛋白阳性表达率对照组较低，随着热缺血时间的延长，再灌注后Fas蛋白阳性表达率明显增高，缺血30min和60min两组与对照组比较差异均有显著性。结论 缺血再灌注能够诱导肝内大胆管上皮细胞发生凋亡，细小胆管上的胆管上皮细胞较少发生凋亡，主要与bcl-2蛋白在不同细胞上的表达差异有关，同时，调控基因Fas蛋白的表达可促进胆管上皮细胞凋亡的发生。     

缺血再灌注后胆管上皮细胞凋亡和bcl-2/bax的表达及意义

目的探讨肝脏经不同时间热缺血再灌注后胆管上皮细胞的凋亡和bcl-2／bax的表达及意义。方法以大鼠肝脏原位缺血再灌注为模型，经15、30和60min缺血再灌注6h后取材，用TUNEL法原位检测胆管上皮细胞的凋亡，免疫组织化学方法检测bcl-2／bax在胆管上皮细胞中的表达。结果随着缺血时间延长，经再灌注后发生凋亡的胆管上皮细胞逐渐增多，bcl-2／bax蛋白表达指数呈进行性降低，bax则随凋亡细胞的增多表达增强。结论热缺血再灌注损伤引起胆管上皮细胞的凋亡，并随缺血时间的延长而加重，bcl-2／bax凋亡基因介导了缺血再灌注后损伤引起的胆管上皮细胞的凋亡，bcl-2对细胞凋亡具有抑制作用。     

银杏叶提取物对大鼠肺缺血-再灌注损伤的保护作用

目的探讨银杏叶提取物对肺缺血一再灌注（I／R）损伤保护作用的机制。方法36只SD大鼠随机等分为假手术对照（S组）组、缺血一再灌注（I／R）组、银杏叶提取物＋缺血／再灌注（EGB＋I／R）组。观察大鼠单侧肺缺血1小时再灌注1h后肺组织NF-KB的表达变化,肺细胞凋亡、超微结构损伤情况。结果①I／R组NF-KB的10D值显著增加,高于S组,而EGb＋I／R组NF_KB的10D值较I／R组减少。②缺血一再灌注后I／R组凋亡的AI数显著增加,高于S组,而EG昏I／R组凋亡的AI数较I／R组减少。③电镜下I／R组肺泡毛细血管内皮细胞、Ⅰ型肺泡上皮细胞水肿变性,Ⅱ型肺泡上皮细胞膜微绒毛减少;EGb＋I／R组Ⅱ型肺泡上皮细胞表面微绒毛增多。结论银杏叶提取物对肺再灌注所致肺细胞凋亡有保护作用,对缺血再灌注后超微结构损伤有一定改善作用,其机制可能与降低NF-KB的活化有关。     

肠缺血再灌注时肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡与肺损伤

目的 观察肠缺血再灌注中肺损伤与肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的关系及其可能的发生机制。方法 Ｗｉｓｔａｒ大鼠,肠系膜上动脉夹闭后松夹造成肠缺血再灌注,不同时间点活杀动物,测肺通透指数,肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）和血浆中ＮＯ、ＩＬ－２含量,分离肺泡Ⅱ型上皮细胞,观察凋亡率。结果与结论 肠缺血再灌注可能引起肺损伤：肠缺血再灌注后肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡来上升,再灌注３０ｍｉｎ达高峰;缺血再灌注后血,ＢＡＬＦ中ＮＯ、Ｉ     

大鼠肺缺血再灌注损伤引起肺细胞的凋亡

目的:观察肺缺血再灌注损伤对肺细胞凋亡的影响.方法:雄性SD大鼠40只,体质量300～350 g,随机分为8组(缺血再灌注6组,单纯缺血组,对照组),每组5只.通过阻断肺门建立大鼠原位肺缺血再灌注模型,应用末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)检测缺血再灌注损伤所引起的肺细胞凋亡的变化及其与再灌注时间的相关性;DNA电泳进行肺组织细胞DNA片段分析;电镜观察凋亡细胞的超微结构.结果:在肺缺血再灌注后早期(30 min)发生明显的肺细胞凋亡,凋亡细胞数峰值位于再灌注后2 h,再灌注后12 h凋亡细胞数与对照组无显著差别;缺血而无再灌注的肺细胞凋亡无明显变化.结论:细胞凋亡在肺缺血再灌注损伤机制中可能起着重要作用.     

猪供心不同时间热缺血移植后细胞凋亡的变化

目的研究供心常温不同时间热缺血后细胞凋亡的变化。方法利用猪原位心脏移植实施方法,18只猪随机分为3组,对照组(C,n=6)灌注低温保护液后切取供心,4℃保存4h;热缺血1组(E1,n=6)常温阻断主动脉缺血5min后灌注低温保护液后切取供心;热缺血2组(E2,n=6)常温阻断主动脉缺血10min后,灌注低温保护液后切取供心。三组低温保存供心4h后分别行原位心脏移植。供心移植2h后取左心室心肌检测心肌细胞凋亡的变化。结果供心移植2h后,E1、E2组心肌细胞凋亡明显高于C组(P<0.01),E2组心肌细胞凋亡明显高于El组(P<0.01)。结论供心热缺血时间的延长增加移植后的心肌细胞凋亡的发生。     

凋亡在肺缺血再灌注损伤中作用机制的研究进展

随着肺移植、体外循环以及肺外科中单侧肺循环阻断技术的广泛应用,肺缺血再灌注损伤（LIRI）对于术后肺功能的影响日益受到关注。术中因肺缺血而引起的肺组织坏死一直被认为是影响肺功能的最重要原因,然而近年的研究表明细胞凋亡尤其是肺泡Ⅱ型上皮细胞（ATⅡ）的凋亡也起重要作用,凋亡在肺缺血再灌注损伤中的机制成为研究热点。文中对该领域的最新进展进行综述。     

脑死亡供体吸入一氧化碳对肺移植后细胞凋亡的影响

目的观察脑死亡(brain death,BD)肺移植供体吸入一氧化碳(carbon monoxide,CO)对移植肺细胞凋亡的影响。方法将24只大鼠随机分为3组,对照组(sham组)供体鼠颅内置入Fogarty导管,但不膨胀前端球囊;脑死亡组(BD组)和脑死亡CO治疗组(BDCO组)供体鼠颅内置入Fogarty导管,并膨胀前端球囊建立BD模型。sham组和BD组吸入氧气浓度为40%的氧氮混合气150 min,BDCO组在开始BD诱导后30 min,确认BD后,吸入氧气浓度为40%的氧氮混合气和250 ppm的CO2 h。然后进行肺移植,移植后2 h取移植肺组织切片进行TUNEL染色观察移植肺中细胞凋亡情况,使用RT-PCR和免疫组化技术观察Caspase-3 mRNA和蛋白表达情况。使用免疫组化评分(immunohistoche micas scores,IHS)对细胞凋亡和Caspase-3蛋白表达进行评估。结果BD组细胞凋亡程度,Caspase-3蛋白和mRNA表达显著高于sham组(P0.05),BDCO组与BD组相比,上述指标显著降低(P0.05)。结论供体BD过程增加了移植肺细胞凋亡比率,BD供体吸入CO对移植肺再灌注后细胞凋亡有拮抗效应。     

改良EC液低温灌注犬肺离体肺组织形态学变化的研究

目的观察犬肺移植中供体离体保存后肺组织随时间延长而产生的结构变化。方法4℃改进型EC液灌注6只健康成年杂种犬肺,灌注结束后离体保存30、60、120、180、240 min。取材制作组织标本,观察不同时间点肺组织结构变化,以灌注前作为对照组。结果0 min时肺组织结构清晰完整,肺泡上皮细胞线粒体轻微肿胀;30 min时肺泡壁、血管周围组织轻微水肿;60 min时肺泡壁结构轻度破损,肺泡上皮细胞肿胀,线粒体肿胀较明显;120 min时部分肺泡壁断裂,肺泡腔融合;180 min时肺泡壁断裂,肺泡腔融合形成少量肺大泡;240 min时肺泡壁断裂,肺泡腔融合形成多个肺大泡,肺泡上皮细胞泡浆空泡变,Ⅱ型肺泡细胞板层小体模糊不清, 空泡变明显,微绒毛已消失。结论改进型EC液离体保存4 h内对离体保存肺组织细胞无明显损伤,4 h后肺损伤较为严重。