压电免疫传感器再生能力的试验研究

目的采用SPA法在镀金电极表面进行抗体固定,探索压电免疫传感器再生使用的最佳条件.方法对压电免疫传感器的检测时间、特异性,及再生试验的最佳试剂、时间进行实验研究.结果构建的压电免疫传感器检测时间为15min,无交叉反应;NaOH溶液再生10次后,频率响应下降为原有的75%.结论所构建的压电免疫传感器检测时间短,特异性好,可用于临床标本的检测,NaOH溶液用于石英晶体再生的效果较好,极大地降低了使用成本.     

新型压电石英晶体免疫传感器抗体固定方法的建立

目的探讨并建立一种高效免疫微阵列传感器抗体固定的方法.方法分别采用普通蛋白A(SPA)法与经巯基取代SPA(自组装SPA)法固定石英晶体微阵列上抗体,并用石英晶体微天平(QCM)分别检测其不同浓度抗体、抗原条件下发生抗原抗体反应,并对其抗体包被量、反应频率漂移、非特异性反应等多项指标进行统计学分析.结果与传统SPA法相比,自组装SPA具有抗体固定量大、反应速度快、频率下降明显、非特异性反应低等优点.结论自组装SPA法具有比普通SPA法包被一致性更高的优点,可以作为新一代免疫传感器的抗体固定方法.     

压电免疫传感器两种抗体固定方法的比较研究

目的比较压电免疫传感器两种抗体固定方法的优劣,选择压电免疫传感器抗体敏感膜固定的最佳方法. 方法分别采用巯基化方法和蛋白A(SPA)固定法将抗人胰岛素单克隆抗体固定在压电免疫传感器金膜电极表面,比较不同抗体工作浓度、不同浓度标准溶液反应条件下抗体固定量、一致性以及传感器响应能力如频率变化、反应时间、检测线性范围以及反应非特异性等. 结果两种固定方法制备的压电免疫传感器其检测灵敏度、反应时间相当,但巯基化固定方法抗体固定量大、一致性好、检测线性范围较宽、非特异反应低. 结论抗体巯基化法制备的压电免疫传感器具有检测范围宽、非特异反应低等优点,是免疫传感器抗体敏感膜制备的理想方法.     

新型纳米金界面压电石英晶体DNA传感器的实验研究

目的构建一种新型纳米金界面压电石英晶体DNA传感器,探讨纳米金界面上进行寡核苷酸探针固定的最佳条件。方法构建纳米金颗粒修饰的石英晶振生物反应界面,进行巯基修饰的寡核苷酸探针的固定,对纳米金自组装pH值条件、探针固定浓度等影响因素进行实验研究;将构建的传感器和未经纳米金颗粒修饰的传感器用于铜绿假单胞菌检测,比较两种传感器的响应性能,并进一步对该纳米金界面压电石英晶体DNA传感器的再生进行研究。结果纳米金自组装的最佳pH值为6.0,探针最佳固定浓度为3.0μmol/L。纳米金颗粒修饰的石英晶振的响应性能大于未经修饰的石英晶振,可以重复使用5次。结论纳米金界面压电石英晶体DNA传感器,具有不需标记、操作简单、能实时在线检测、频率响应性能高、无污染和能重复使用等优点,在临床实验诊断方面应用前景广阔。     

压电石英晶体免疫传感器微阵列检测人免疫球蛋白的实验研究

目的以AT切型、基频10MHz的镀金石英晶体作为换能器,将抗人免疫球蛋白抗体固定在石英晶体电极表面,用2×5检测池阵列构建一种新型压电石英晶体免疫传感器。方法分别进行标准品及人血清免疫球蛋白的检测,研究了检测温度、时间、特异性等指标对检测的影响。结果该免疫传感器可在15 min内完成检测且无非特异性反应;在检测范围内传感器的响应特性良好,压电晶体频率偏移值与免疫球蛋白浓度呈良好的线性关系,将此免疫传感器用于人血清标本的测定,结果与免疫比浊法符合(r分别为0.94、0.94、0.94、0.92和0.91)。结论此传感器微阵列具有灵敏度高、特异性好,检测通量高,不需标记,操作简便,能实时在线检测和重复使用等优点,可用于临床实验诊断,具有较高的临床推广应用价值。     

适配子型压电石英晶体传感器检测人免疫球蛋白E的实验研究

目的研制适配子型压电子石英晶体传感器阵列与常用的免疫分析方法进行比较,以评价压电石英晶体传感器阵列检测灵敏度、特异性与临床检测的可行性。方法以AT切型、基频10MHz的镀金石英晶体作为换能器,将抗人免疫球蛋白E适配子固定在石英晶体电极表面,用2×5检测池阵列构建新型适配子型压电石英晶体传感器;分别进行标准品及人血清免疫球蛋白E的检测,研究了检测灵敏度、特异性等检测指标。结果该传感器可快速完成检测且无非特异性反应,在检测范围内传感器的响应特性良好,压电晶体频率偏移值与免疫球蛋白浓度呈良好的线性关系;将此免疫传感器用于人血清标本的测定,结果与化学发光法符合(r值=0.9924)。结论研制的传感器阵列具有灵敏度高、特异性好,检测通量高,无需标记,操作简便,能实时在线检测等优点,可用于临床实验诊断,具有较高的临床推广应用价值。     

压电石英晶体传感器阵列检测尿微量白蛋白的实验研究

目的探讨并建立压电石英晶体免疫传感器检测尿液微量白蛋白的方法。方法采用葡萄球菌A蛋白(SPA)法固定石英晶体微阵列上单克隆抗白蛋白抗体,并用石英晶体微天平(QCM)检测样品反应频率漂移量;优化传感器检测条件并运用回收实验,天内、天间重复试验来验证其准确度与精密度,并将免疫比浊法作为参比方法进行方法学比较。结果该传感器平台的非特异性反应低(FS<20Hz),线性范围广(0.01~40mg/L),灵敏度达到5μg/L,准确度高(CV<10%),精密度试验总体CV<10%,并且具有检测时间短(<10 min)等优点,与传统的免疫比浊法具有可比性。结论采用压电石英晶体免疫传感器法检测尿液微量白蛋白,是一种可行的检测方法,可应用于临床检测并为诊断早期肾损伤提供帮助。     

尿β2微球蛋白压电传感器阵列的构建与临床应用

目的探讨并建立压电石英晶体免疫传感器检测尿液微量β2微球蛋白的方法。方法采用葡萄球菌A蛋白（SPA）法固定石英晶体微阵列上单克隆抗β2微球蛋白抗体,并用石英晶体微天平（QCM）检测样品反应频率漂移量;优化传感器检测条件并运用回收实验,天内、天间重复试验来验证其准确度与精密度,并将免疫比浊法作为参比方法与建立的传感器方法进行方法学比较。结果该传感器平台的非特异性反应低（FS〈20Hz）,线性范围广（0.01～40.00mg/L）,灵敏度达到3μg/L,准确度高（CV〈10%）,精密度试验总体CV〈10%,并且具有检测时间短（〈10min）等优点,与传统的免疫比浊法具有可比性。结论采用压电石英晶体免疫传感器法检测尿液微量β2微球蛋白是一种可行的检测方法,可应用于临床检测并为诊断早期肾损伤提供帮助。     

用于禽流感H9亚型检测的压电免疫蛋白芯片的研制

目的：研制禽流感H7亚型检测的压电免疫蛋白芯片。方法：采用聚乙烯亚胺（PEI）粘附、戊二醛（Glu）交联的方法，将禽流感H9抗原固定于石英晶体的金电极表面。研究了敏感材料的浓度、pH值对其固定的影响。结果：该芯片用于检测浓度范围为0．123～1．23mg／ml的禽流感H9血清时，呈线性相关，相关系数0．9854。结论：检测阳性样品的响应值与阴性样品的噪声值之比大于2，可用于定性定量检测。     

纳米金型压电石英DNA传感器的电化学阻抗谱研究

目的采用电化学阻抗谱法表征所构建的纳米金型压电石英DNA传感器。方法采用构建的三电极系统,分别于空白石英晶振、探针固定后、6-巯基己醇封闭后、靶序列杂交后交流阻抗谱、纳米金磁微粒信号放大后对石英晶振表面进行交流阻抗谱分析,同时观察传感器的频率响应情况。结果进行纳米金磁微粒信号放大后,频率变化值为(127.5±6.8)Hz,与靶序列杂交、阴性对照和空白对照频率变化值差异有统计学意义(P0.01),构建的三电极系统可成功检测石英晶振表面电化学变化,并且在检测过程中的各步骤,电子转移阻抗Ret均发生了明显增加(P0.01),压电频率变化趋势与电化学阻抗变化趋势一致。结论电化学阻抗谱法可无损性地分析晶振表面膜层变化,验证了建立的压电石英DNA传感器检测方法和纳米金信号放大方法的真实性和有效性。     

免疫球蛋白在胃液中对伤寒杆菌的杀灭作用

目的观察免疫球蛋白在胃液中对伤寒杆菌的杀灭作用. 方法将含有免疫球蛋白的抗血清与相应的细菌在3种不同pH胃液内和伤寒杆菌混合,一方面以观察胃液对抗体有无破坏作用,另一方面观察其对伤寒杆菌的杀灭作用. 结果胃液在pH为4～5时不但不破坏抗体,还可协助抗体完全杀灭所试细菌. 结论口服特异性抗体防治伤寒杆菌感染具有美好的前景.     

电化学乙肝免疫传感器中抗体的固定条件探讨

目的:优化乙肝传感器中抗体的固定条件以制得免疫传感器。方法:以金电极为基底,自组装半胱胺,通过戊二醛交联法将抗体蛋白固定在电极上,制成乙肝修饰电极。以Fe(CN)63-/Fe(CN)64-为电活性指示剂,利用循环伏安法考察了该修饰电极在不同阶段的电化学性能。结果:结果显示优化抗体固定条件后的传感器能对乙肝HBsAg阴阳性抗原进行区分检测。结论:用半胱胺/戊二醛方法固定乙肝抗体制得免疫传感器能与相应的抗原发生免疫反应,具有实际应用的前景。     

适配子型压电传感器的实验研究

目的建立适配子型压电传感器阵列检测人免疫球蛋白E,对适配子型压电石英传感器的各项参数进行初步探索。方法用生物素-亲和素法将针对人IgE的适配子探针固定在压电传感器的金膜表面,通过压电传感器对适配子与IgE的反应进行实时监测,观察不同浓度IgE的反应趋势及所引起的频率变化,获得IgE检测标准曲线;通过检测BSA、IgG、IgE非特异信号,并与特异性信号相比较对适配子检测的特异性进行检验。结果亲和素法固定适配子对IgE进行检测,最低检出限0.055mg/L,线性范围0.1～2.5mg/L,非特异性信号响应小,不超过同浓度特异性信号的5%。结论构建的适配子压电传感器可检测ng级物质且非特异性信号小,显示该平台在临床检测中有较好的应用前景。     

蛋白质芯片检测血清铁蛋白条件的优化研究

目的优化蛋白芯片检测血清铁蛋白(serum Ferritin,SF)的技术条件。方法用芯片点样仪将血清铁蛋白的一种抗体点样于高分子三维基片G(PSG)芯片上,用其另一种抗体做为检测抗体,以Cy3标记的羊抗做为二抗进行检测。以双抗夹心原理对SF抗原进行检测。结果以SF单克隆小鼠抗体为固定探针,选择接触式点样进行芯片点样,点样数在40-200点之间可出现较好的点样一致性;SF的固定探针浓度选择为0.5 mg/ml,其检测抗体的浓度为5μg/ml;3%小牛血清白蛋白(BSA)和羊抗兔IgG被优选为封闭剂与第二抗体。SF检测下限与生物检测限分别为3.1 ng/ml和4 ng/ml;建立了对SF具有最佳相关系数的标准方程(SF相关系数0.9999)与标准曲线。结论此研究优化了蛋白芯片检测SF的检测条件,建立了定量检测SF的蛋白芯片平台。     

一种快速检测甲型流感病毒方法的建立

目的 建立一种用于甲型流感病毒抗原检测的基于胶体金免疫层析法的快速、简便试剂盒。方法 以柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记一种抗甲型流感病毒单克隆抗体。硝酸纤维素膜上包被另一种抗甲型流感病毒单克隆抗体,制成免疫层析试纸。待测样品中的甲型流感病毒首先与胶体金标记抗体结合,然后移动至硝酸纤维素膜上与固定的单克隆抗体发生反应,形成肉眼可见的红色带。结果 本试纸与不同浓度甲型流感病毒培养液均能发生特异性反应,与乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、副流感病毒等16种病原体无交叉反应。用甲型流感病毒培养液不同浓度标本与美国同类产品比较,灵敏度相同。稳定性检测显示42 ℃和37 ℃热破坏放置结果均优于美国同类产品。临床比对结果评价kappa值为0.976,一致性非常高。结论 试纸条灵敏度和特异性能够达到临床使用的要求,并具有简便快速、无需特殊仪器设备等优点,对甲型流感的诊断和流行病学调查具有十分重要的应用价值。     

Clinical inquiries: What blood tests help diagnose celiac disease?

Histological confirmation of infiltrative lesions via small bowel biopsy is the gold standard for diagnosing celiac disease. Four serum antibody assays may serve as a first-step diagnostic tool to identify biopsy candidates: immunoglobulin A tissue transglutaminase (IgA tTG), IgA endomysial antibody (IgA EMA), IgA antigliadin antibody (IgA AGA), and IgG antigliadin antibody (IgG AGA). IgA tTG and IgA EMA offer the best diagnostic accuracy. Patients with selective IgA deficiency may have falsely negative IgA assays (strength of recommendation [SOR]: B, based on a systematic review, multiple small cross-sectional studies, and expert opinion).