壳聚糖体内外抗幽门螺杆菌的实验研究

目的 研究壳聚糖体内外抗幽门螺杆菌（Hp）作用。方法 （1）采用打孔法检测了不同浓度、pH值、脱乙酰度壳聚糖及羧甲基壳聚糖在体外对蜘的抑菌作用。（2）建立BALB／c小鼠脚感染的动物模型后，随机分为8组：①对照组；②PPI组；③AM组；④AM＋PH组；⑤壳聚糖组；⑥壳聚糖＋PPI组；⑦壳聚糖＋AM组；⑧壳聚糖＋AM＋PPI组。分别给予上述药物每日2次灌胃，共2周。停药后4周，处死小鼠，无菌条件下取胃黏膜进行砷定量培养和石蜡包埋切片，进行Giemsa染色。结果 （1）壳聚糖和羧甲基壳聚糖在体外对3株邱标准菌株具有普遍的抑菌作用；在pH6-4范围内，随pH值降低，抗菌作用增强，差异有统计学意义（P〈0．01），最佳pH值为4；70％、88．5％脱乙酰度壳聚糖及羧甲基壳聚糖的抗伽作用差异有统计学意义（P〈0．05），抑菌强度依次为DD70壳聚糖、DD88．5，壳聚糖和羧甲基壳聚糖；在1％-5％浓度范围内羧甲基壳聚糖抗伽作用差异无统计学意义；在0．5％-2％浓度范围内70％、88．5％脱乙酰度壳聚糖抗伽作用差异也无统计学意义（P〉0．05）。（2）对饰感染的小鼠，以上8组的坤清除率分别为O％、O％、41．7％、58．3％、58．3％、66．7％、83．3％、91．7％，其中③-⑧组的坤清除率显著高于①和②组（P〈0．05），⑧组的坤清除率还显著高于③组（P〈0．05）。坤定植密度研究发现，各组之间坤定植密度差异有统计学意义（P〈0．001），饰定植密度在③一⑧组显著低于①和②组（P〈0．05）；⑥-⑧组显著低于③组（P〈0．05）；⑧组显著低于④组（P〈0．05）。结论 壳聚糖和其衍生物对坤有普遍的抑菌作用；壳聚糖及其衍生物的抗饰作用受多种因素影响，其中pH值对壳聚糖抗菌作用的影响最为明显，在pH值6—4范围内，壳聚糖的抗坤活性随着pH值的下降而显著增强；壳聚糖在体内有抗坤作用，并与AM有协同作用。     

以壳聚糖为佐剂的幽门螺杆菌蛋白抗原对幽门螺杆菌感染的免疫保护作用

目的探讨以壳聚糖为佐剂的幽门螺杆菌（脚）抗原对脚感染的免疫保护作用。方法BALB／c小鼠随机分为9组：（1）空白对照组：PBS溶液；（2）壳聚糖酸溶液组；（3）壳聚糖颗粒组；（4）印抗原组；（5）np抗原＋壳聚糖酸溶液组；（6）Hp抗原＋壳聚糖颗粒组；（7）Hp抗原＋CT组；（8）脚抗原＋壳聚糖酸溶液＋CT组；（9）Hp抗原＋壳聚糖颗粒＋CT组。各组于第0、7、14、21天灌胃各免疫1次，免疫后4周给予109CFUIml的SSlnp菌液0．5ml／只进行攻击，隔日1次，共2次。4周后，采用定量砌培养和病理改良Giemsa染色法检测胃黏膜内伽感染情况。结果（1）以壳聚糖为佐剂的印抗原的免疫保护率达60％，与以凹为佐剂的伽抗原的免疫保护率（58．33％）相似，显著高于单纯印抗原组及其他不含印抗原组（P〈0．05），同时以凹＋壳聚糖为佐剂的坳疫苗的保护率为84．62％、85．71％，高于CT或壳聚糖单独作佐剂组。（2）病理组织学检测含佐剂组的铷定植计分显著低于无佐剂组和无抗原组（P〈0．05），壳聚糖和CT联合应用组的跏定植计分最低，显著低于单以CT为佐剂组（P〈0．05）。（3）砌定量培养脚定植密度在佐剂中含壳聚糖组均显著低于对照组和单纯脚抗原组（P〈0．05），而单以CT为佐剂组脚定植密度与对照组和单纯坳抗原组差异无统计学意义（P〉0．05）。结论以壳聚糖为佐剂的坳抗原对Hp感染具有免疫保护作用，并且与CT有协同作用。     

壳聚糖对幽门螺杆菌形态及超微结构的影响

目的　从细菌形态和超微结构探讨壳聚糖抗幽门螺杆菌 (Hp)的作用机理。方法　将Hp与壳聚糖作用 2 4h后 ,在透射和扫描电镜下观察Hp的细菌形态和超微结构变化。结果　 (1)透射电镜结果 :Hp形态多样 ,以球形体为主 ,并可见V形、U形和不规则形 ;Hp菌胞壁变薄不完整 ,有的菌体细胞壁部分或全部脱落消失 ,细菌轮廓模糊 ,结构不清 ,且发生不同程度的凹陷变形 ,甚至穿孔和破碎 ;胞浆内容物稀疏 ,空隙明显扩大 ;细菌内部结构消失或分布异常 ,胞质不均匀或密度下降 ,出现高电子密度颗粒。 (2 )扫描电镜结果 :Hp形态多样 ,以球形体为主 ,并可见U形和不规则形 ;细菌表面广泛改变 ,黏附有可折射物质 ,外观呈毛刺状。结论　壳聚糖可能通过破坏Hp外膜的结构、功能和通透性 ,使细菌内容物渗出 ,细菌破裂 ,并从破损的细胞外膜进入Hp内 ,与胞质作用 ,扰乱其代谢。这二方面机制发挥抗Hp作用     

壳聚糖对幽门螺杆菌外膜屏障功能的影响

研究壳聚糖 (即脱乙酰壳聚糖 ,Chi tosan)对Hp外膜屏障功能的影响 ,以探讨壳聚糖抗Hp的作用机制 ,以 6种抑菌作用较好的壳聚糖溶液 ,3种 70 %脱乙酰、3种 88.5 %脱乙酰为试验材料。将Hp标准菌株SydneyStrain 1(SS1)、NCTC116 39、NCTC116 37加入上述壳聚糖溶液中 ,细菌浓度为 10 8CFU ml,将每种壳聚糖分别与Hp菌液加入 2 4孔加样板中 ,每孔 2ml,每种溶液做 5孔 ,在 37℃和微需氧条件下 ,12 0r min振荡 ,4 8h后取出孔内液 ,30 0 0r min离心 10min后 ,取上清液分别测葡萄糖含量、天门冬氨酸氨基转移酶 (AST)和γ 谷氨酰转肽酶(GGT)…     

不同浓度和pH值的壳聚糖对幽门螺杆菌抑菌作用的影响

壳聚糖是甲壳质脱乙酰衍生物 ,是一个来源丰富、无毒、可吸收降解的天然氨基葡聚糖 ,大量的研究已证实壳聚糖具有广谱的抗菌性能 ,此外它还有增强免疫、调节生理功能等功效。本文研究了在不同ｐＨ值条件下 ,不同浓度的壳聚糖对幽门螺杆菌 (Ｈｐ)的抑菌作用 ,为壳聚糖的临床应用提供实验资料。采用打孔法分别检测了浓度为1%、1.5 %、2 %、2 .5 %、3%、3.5 %、4%、5 %和ｐＨ值为 8.5、6 .5、5 .5的壳聚糖对Ｈｐ标准菌株 (Ｓｙｄｎｅｔｓｔｒａｉｎ 1,ＳＳ1)和 2株患者体内分离出的Ｈｐ菌株的抑菌作用 ,结果表明 :壳聚糖对 3种不同的Ｈｐ菌株均…     

Th免疫反应在以壳聚糖为佐剂的幽门螺杆菌疫苗免疫保护中的作用

目的：探讨以壳聚糖为佐剂的脚疫苗的免疫保护作用及其机理。方法：BALB／c小鼠随机分为7组：空白对照组、壳聚糖酸溶液组、壳聚糖颗粒组、却抗原组、脚抗原＋壳聚糖酸溶液组、却抗原＋壳聚糖颗粒组和脚抗原＋CT组，各组于第0、7、14和21天灌胃各免疫1次，末次免疫后4周给予SS1Hp菌攻击，隔日1次，共2次。在攻击前后分批处死小鼠，取胃黏膜检测坳和Th1、Th2细胞因子含量，同时检测血清中抗Hp IgG2a和IgG1含量。结果：①以壳聚糖为佐剂的坳疫苗的免疫保护率达60％，与以CT为佐剂的印疫苗的免疫保护率（58．33％）相似，显著高于单纯脚抗原组及其他不含Hp抗原组（P〈0．001～0．05）。②却攻击后胃黏膜内IFN-γ、IL-2和IL-12含量在含佐剂组显著高于无抗原和无佐剂组（P〈0．001～0．05）；③坳攻击后胃黏膜内IL-4含量在以壳聚糖颗粒为佐剂组显著高于以CT为佐剂组（P〈0．05），以壳聚糖溶液为佐剂组显著高于对照组、无佐剂组及佐剂中含CT组（P〈0．001～0．05）。结论：以壳聚糖为佐剂的坳疫苗对脚感染具有免疫保护作用，同时可促进Th1和Th2的混合免疫反应。     

以壳聚糖为佐剂的幽门螺杆菌疫苗诱导的细胞免疫反应

目的:探讨以壳聚糖为佐剂的幽门螺杆菌(Hp)疫苗诱导的细胞免疫反应及其在免疫保护中的作用。方法:BALB/c小鼠随机分为空白对照组(PBS溶液)、壳聚糖酸溶液组、壳聚糖颗粒组、Hp抗原组、Hp抗原 壳聚糖酸溶液组、Hp抗原 壳聚糖颗粒组、Hp抗原 霍乱霉素(CT)组、Hp抗原 壳聚糖酸溶液 CT组及Hp抗原 壳聚糖颗粒 CT组,各组于第0、7、14、21天灌胃各免疫1次,末次免疫后4周给予1×1012CFU/L的SS1Hp菌液0·5mL/只进行攻击,隔日1次,共2次。在攻击前后分批处死小鼠,采用Hp培养和病理改良Giemsa染色法检测胃黏膜内Hp感染。用定量ELISA法检测胃黏膜内IL-2、IL-4和IL-10含量;HE染色进行胃黏膜病理学检测。结果:①以壳聚糖为佐剂的Hp疫苗的免疫保护率达60%,与以CT为佐剂的Hp疫苗的免疫保护率(58·33%)相似,显著高于单纯Hp抗原组及其他不含Hp抗原组(P<0·05)。②胃黏膜内IL-2的水平攻击后含佐剂组显著高于对照组(P<0·05)。IL-10水平攻击前以壳聚糖为佐剂组高于无佐剂组,攻击后以CT 壳聚糖颗粒为佐剂组高于其他组(P<0·05)。IL-4水平攻击前以壳聚糖为佐剂组高于无佐剂组(P<0·05),攻击后以壳聚糖颗粒为佐剂组高于以CT为佐剂组(P<0·05),以壳聚糖溶液为佐剂组高于对照组、无佐剂组及佐剂中含CT组(P<0·05)。③胃黏膜炎症程度在单纯壳聚糖组和以壳聚糖颗粒为佐剂组显著低于以CT为佐剂组(P<0·05)。结论:①以壳聚糖为佐剂的Hp疫苗对Hp感染具有免疫保护作用。②以壳聚糖为佐剂的Hp疫苗可促进Th1和Th2的混合免疫反应,并逆转Hp感染所致Th2反应的抑制,使Th1和Th2反应达到平衡,从而发挥其免疫保护作用。③以壳聚糖为佐剂的Hp疫苗所致的免疫后胃炎显著低于以CT为佐剂的Hp疫苗。     

幽门螺杆菌抗菌肽对消化道致病菌的杀伤作用

幽门螺杆菌 (Ｈｐ)可产生杀菌肽样抗菌多肽 (ｃｅｃｒｏｐｉｎ ｌｉｋｅａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌｐｅｐ ｔｉｄｅ ,Ｈｐ ＣＡＢＰ)。这种来源于Ｈｐ核糖体蛋白Ｌ1(ｒｉｂｏｓｏｍａｌｐｒｏｔｅｉｎＬ1,ｒｐＬ1)的Ｎ 端肽 ,在结构与功能的许多方面与杀菌肽 (Ｃｅｃｒｏｐｉｎｓ)相似。我们通过研究Ｈｐ源杀菌肽样抗菌肽Ｈｐ( 2 2 0 )对消化道常见致病菌的杀伤作用 ,探讨Ｈｐ产生抗菌肽的临床及流行病学意义。Ｈｐ( 2 2 0 )按ＨｐＲｐＬ1Ｎ 端第 2至第2 0位多肽序列人工合成。采用琼脂扩散法检测Ｈｐ( 2 2 0 )对消化道常见致病菌的抗菌…     

机体免疫反应和CagA对幽门螺杆菌长期感染转归的影响

10年前在我院行胃镜、病理和Ｈｐ检测确诊为Ｈｐ阳性者 6 3例 ,10年后到我院复查再次行上述检查 ,其中 16例转阴 ,47例仍为阳性。采用细菌培养和Ｇｉｅｍｓａ染色检测胃粘膜内Ｈｐ ,用间接ＥＬＩＳＡ法检测了 47例Ｈｐ持续感染 10年患者血清抗ＨｐＣａｇＡ ＩｇＧ和抗ＨｐＩｇＥ ,并检测了这些患者 10年前后胃镜和病理组织学变化。47例Ｈｐ持续阳性患者 10年前后消化性溃疡 (ＰＵ)的发生率由 14例(2 9 78% )发展至 2 5例 (5 3 19% ) (Ｐ <0 .0 5 ) ;胃粘膜糜烂由 8例 (17 0 2 % )发展至 18例 (38 2 9% ) (Ｐ <0 .0 5 ) ;肠上皮化生 (ＩＭ)由…     

CagA和机体免疫反应在幽门螺杆菌致病中的作用及相互关系

目的　探讨幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)菌型差异和机体免疫反应在Hp致病中的作用及其相互关系。方法　采用间接ELISA法检测了 175例患者血清抗HpCagA IgG和抗HpIgE。结果　①Hp感染者抗HpCagA IgG的阳性率 (80 % )明显高于抗HpIgE(5 8 2 9% ,P <0 0 1)。②血清抗HpCagA IgG在慢性活动性胃炎 (ACG)和十二指肠球部溃疡 (DU)患者显著高于胃溃疡 (GU)、胃癌(GCa)、慢性非活动性胃炎 (NACG)和对照组 (P <0 0 1) ,而后 4组之间差异无显著性。③血清抗HpIgE在ACG显著高于DU、GU、GCa、NACG和对照组 (P <0 0 1) ,并且在中重度胃炎显著高于轻度胃炎(P <0 0 0 1)。④血清抗HpCagA IgG和抗HpIgE无明显相关性 (r=0 2 45 9,P >0 0 5 )。结论　CagA和血清抗HpIgE参与了Hp的致病过程 ,但是两者之间无明显相关性 ,并且它们在疾病中的含量也有一定差异 ,这说明二者在Hp的致病过程中是相互独立的因素 ,Hp感染引起疾病是多因素的综合作用。     

以壳聚糖为佐剂的Hp疫苗诱导的体液免疫应答及其免疫保护效应

目的：探讨以壳聚糖为佐剂的Hp疫苗的免疫保护作用及其机制。方法:BALB/c小鼠随机分为9组：①空白对照组：PBS溶液；②壳聚糖酸溶液组；③壳聚糖颗粒组；④Hp抗原组；⑤Hp抗原+壳聚糖酸溶液组；⑥Hp抗原+壳聚糖颗粒组；⑦Hp抗原+CT组；⑧Hp抗原+壳聚糖酸溶液+CT组；⑨Hp抗原+壳聚糖颗粒+CT组，各组于第0、7、14、21 d 灌胃各免疫1次，免疫后4周给予1×1012CFU/L的SS1 Hp菌液每只 0.5 mL进行攻击，隔日1次，共2次。4周后，采用定量Hp培养和病理改良Giemsa染色法检测胃黏膜内Hp感染。用ELISA法检测血清抗Hp IgG、IgG1、IgG2a及唾液和胃黏膜内抗Hp IgA，用SP免疫组织化学法检测胃黏膜内分泌型IgA（sIgA）。结果:①以壳聚糖为佐剂的Hp疫苗的免疫保护率达60%，与以CT为佐剂的Hp疫苗的免疫保护率（58.33%）相似，显著高于单纯Hp抗原组及其它不含Hp抗原组（P<0.01或P<0.05），同时以CT＋壳聚糖为佐剂的Hp疫苗的保护率为84.62%、85.71%，其Hp的定植评分显著低于无佐剂组及以CT为佐剂组（P<0.01，P<0.05）。②含佐剂的Hp疫苗所诱导产生的Hp IgG水平显著高于对照组及无佐剂组（P<0.01，P<0.05），而以CT＋壳聚糖为佐剂组所产生的抗Hp IgG水平显著高于仅以 CT或壳聚糖为佐剂组（P<0.05）。③胃黏膜内sIgA及特异性抗Hp IgA水平在壳聚糖为佐剂组与以CT为佐剂组无差别（P>0.05），显著高于无佐剂组，而壳聚糖与CT联合应用组显著高于单以CT为佐剂组（P<0.01，P<0.05）。结论:以壳聚糖为佐剂的Hp疫苗对Hp感染具有免疫保护作用，并可成功诱导黏膜局部的特异性体液免疫应答，从而发挥免疫防御作用。     

幽门螺杆菌相关的消化性溃疡患儿细胞免疫功能研究

目的检测42例幽门螺杆菌（HP）感染相关的消化性溃疡外周血白细胞介素-2（IL-2）、可溶性白细胞介素2受体（sIL-2R）、白细胞介素6和8（IL-6和IL-8）和T淋巴细胞亚群,以探讨其免疫学发病机制。方法IL-2、sIL-2R、IL-6、IL-8和T淋巴细胞亚群检测,分别采用ELISA、双抗体夹心ELISA和APAAP法进行。结果CD3＋、CD4＋细胞百分率、CD4＋/CD8＋比值和IL-2水平均显著低于对照组（P均〈0.01）,而CD8＋细胞百分率、sIL-2R、IL-6、IL-8水平均显著高于对照组（P均〈0.01）。结论HP感染相关的消化性溃疡患儿细胞免疫功能低下且紊乱,该患儿机体的免疫功能障碍在该病的发生中起一定作用。     

他汀类药物对缺血性脑血管病患者外周血中体液免疫指标的调节作用

目的 检测缺血性脑血管病患者服用他汀类药物前后外周血中与体液免疫相关的指标(CD19+ CD27+细胞、IL-21、总IgG)的变化,初步探究他汀类药物在缺血性脑血管病患者中对B细胞的免疫调节作用.方法 采用流式细胞仪检测11名缺血性脑血管病患者接受他汀类药物治疗前后外周血中记忆B细胞(CD19+CD27+细胞)的百分比,分别用酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫比浊法检测17名缺血性脑血管病患者服用他汀类药物前后血清中IL-21和IgG水平,对检测结果进行服药前后自身对照,使用配对t-检验进行统计分析.结果 流式检测显示缺血性脑血管病患者服用他汀类药物后外周血中记忆B细胞(CD19+ CD27+细胞)数量下降[(3.39±1.77)％比(2.36±1.29)％,P=0.019],血清中IL-21水平下降[(112.79 ±45.19)比(88.83±18.40) pg/mL,P=0.024],血清中总IgG水平升高[(10.74±2.41)比(11.97 ±2.61) g/L,P=0.03].结论 他汀类药物对体液免疫有调节作用.     

免疫球蛋白治疗儿童难治性癫痫的近、远期疗效与体液免疫功能的研究

目的 :探讨人血免疫球蛋白治疗儿童难治性癫痫的近、远期疗效和体液免疫功能的变化。方法 :对 36例儿童难治性癫痫辅加人血免疫球蛋白治疗 ,随访 6个月～ 1年 ,分别采用ELISA法和速率散射浊度法对 36例病儿和 2 2例健康儿童进行Ig、C3、C4CH5 0的检测 ,并给予治疗前后配对比较。结果 :36例病儿经辅加免疫球蛋白治疗后 17例终止发作 ,5例显效 ,6例有效 ,8例无效 ,近期总有效率为 77 8%。随访≥ 1年者 2 8例 (77 8% ) ,其中 13例 (4 6 4 % )复发 ,远期有效率为 5 3 6 % ,临床显效时间在用药后 1周内 ,EEG也出现同步显著改善。体液免疫的结果是治疗前癫痫组Ig中的IgG、IgM和C3、C4、CH5 0明显低于对照组 (P <0 0 1) ;治疗后癫痫患儿IgG、IgM和C3、C4、CH5 0明显高于治疗前 (P <0 0 1) ,特别是C3、C4、CH5 0升高最为明显。半年后复检Ig和C3、C4、CH5 0又降低 ,配对比较差异有显著性 (P <0 0 1)。结论 :癫痫患儿体液免疫功能明显低下 ,给予人血免疫球蛋白后 77 8%病例近期临床发作得到控制 ,EEG转为正常或好转 ,也可使血IgG、IgM和C3、C4、CH5 0含量短期内升高 ,这可能是人血免疫球蛋白能有效治疗癫痫的机制之一。     

The chemokine receptor CCR7 is expressed on epithelium of non-inflamed gastric mucosa, Helicobacter pylori gastritis, gastric carcinoma and its precursor lesions and up-regulated by H. pylori

CCR7 chemokine-receptor expression on tumour cells of gastric carcinoma has been associated with lymph-node metastasis and is thought to play an important role in metastasis. However, so far it is unknown whether CCR7 is newly up-regulated on gastric carcinoma or already expressed in non-neoplastic gastric epithelium. Therefore, epithelial CCR7 expression was investigated in the process of gastric carcinogenesis: non-inflamed mucosa --Helicobacter pylori gastritis -- intestinal metaplasia/dysplasia -- gastric carcinoma. CCR7 was expressed by gastric epithelium in non-inflamed gastric mucosa (n = 5), H. pylori gastritis (n = 17), intestinal metaplasia (n = 10), dysplasia (n = 3) and on tumour cells in 20 of 24 patients with gastric carcinoma (13/14 intestinal-type; 7/10 diffuse-type) as tested by immunohistochemistry. As CCR7 expression by gastric epithelium was significantly stronger in H. pylori gastritis than in non-infected mucosa, the influence of H. pylori on CCR7 receptor expression of gastric epithelial cells was investigated by fluorescence activated cell sorter analysis. H. pylori strains up-regulated the CCR7 chemokine-receptor in CCR7-positive cell lines. No difference in CCR7 up-regulation between cag(+) and cag(-)H. pylori strains was found. Epithelial CCR7 up-regulation by H. pylori may alter the metastatic fate of gastric carcinoma. Additionally, CCR7 expression not only on gastric carcinoma, but also on non-neoplastic gastric epithelium, suggests a novel biological function.