CIAPIN1基因在结肠癌组织的表达及其相关性研究

目的 检测CIAPIN1基因在结肠癌组织的表达水平与结肠癌患者临床特征的相关性,研究CIAPIN1基因与结肠癌发生的相关性.方法 收集28例结肠癌患者手术后的癌组织及癌旁组织标本(术前未行放化疗),采用Western blot法检测28例结肠癌患者结肠癌组织、癌旁组织的CIAPIN1基因蛋白表达水平,探讨CIAPIN1基因与结肠癌发生的相关性;统计患者临床资料,分析CIAPIN1基因表达与结肠癌患者临床特征及肿瘤标志蛋白的关系.结果 Western bloting法检测28例结肠癌患者结肠癌组织CIAPIN1的表达明显低于癌旁组织,分别为17.9％与85.7％,差异有统计学意义(P＜0.01).CIAPIN1基因的表达与患者肿瘤大小、肿瘤分期呈负相关(P=0.020);CIAPIN1与结肠癌患者性别、肿瘤发生部位、CEA、CA50、CA199、CA242、CA724的表达无相关性(P＞0.05).结论 CIAPIN1在结肠癌组织的表达缺失或降低可能与结肠癌的发生密切相关,与肿瘤大小、分期呈负相关.与患者的性别、肿瘤发生部位、肿瘤标记蛋白(CEA、CA50、CA199、CA242、CA724)无相关性.     

CIAPIN1和P-gp蛋白在胃癌组织中的表达及临床意义

目的探讨细胞因子诱导的凋亡抑制因子1(CIAPIN1)和P糖蛋白(P-gp)蛋白在胃癌组织中的表达,分析二者对胃癌诊断的临床意义。方法回顾性分析2017年8月至2019年3月于本院行手术切除治疗的60例胃癌患者的临床资料,分析CIAPIN1、P-gp蛋白在胃癌及癌旁组织中的阳性率,分析临床分期、淋巴结转移情况对胃癌组织CIAPIN1、P-gp蛋白表达的影响。结果CIAPIN1、P-gp蛋白在胃癌组织中的阳性率高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);临床分期Ⅲ~Ⅳ期患者胃癌组织CIAPIN1、P-gp阳性率高于Ⅰ~Ⅱ期,淋巴结转移患者胃癌组织CIAPIN1、P-gp阳性率高于未转移,差异有统计学意义(P<0.05);经线性回归分析检验显示,CIAPIN1、P-gp蛋白与胃癌临床分期、淋巴结转移相关(P<0.05)。结论CIAPIN1、P-gp蛋白在胃癌组织与癌旁组织表达存在差异,其表达与临床分期、淋巴结转移情况相关,CIAPIN1、P-gp蛋白表达对临床分期、淋巴结转移的诊断具有一定意义。     

调控CIAPIN1基因表达对食管癌细胞生长及侵袭性的影响

目的 采用重组慢病毒CIAPIN1表达载体和CIAPIN1沉默载体感染食管癌EC9706细胞,观察调控CIAPIN1基因表达对细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡及体外侵袭转移的影响.方法 构建CIAPIN1表达慢病毒载体和CIAPIN1 siRNA慢病毒载体,包装得到重组慢病毒;分别感染食管癌EC9706细胞,筛选得到稳定C...     

调控CIAPIN1基因表达对食管癌细胞生长及侵袭性的影响

目的 采用重组慢病毒CIAPIN1表达载体和CIAPIN1沉默载体感染食管癌EC9706细胞,观察调控CIAPIN1基因表达对细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡及体外侵袭转移的影响。 方法 构建CIAPIN1表达慢病毒载体和CIAPIN1 siRNA慢病毒载体,包装得到重组慢病毒;分别感染食管癌EC9706细胞,筛选得到稳定CIAPIN1基因高表达和低表达的细胞。实验分为CIAPIN1表达组、CIAPIN1 siRNA组、无关siRNA对照组和空白对照组。采用RT-PCR和蛋白质印迹法分析CIAPIN1基因和蛋白的表达,MTT实验检测细胞增殖,流式细胞术(FCM)分析细胞周期及细胞凋亡的变化, Boyden小室检测细胞侵袭转移。 结果 与空白对照组、无关siRNA对照组和CIAPIN1 siRNA组比较,CIAPIN1高表达组细胞生长受到抑制(P<0.05);S和G₂/M期细胞比例减少,G₀/G₁期细胞比例增加(P<0.05);平均细胞凋亡率增加(P<0.05),穿透Matrigel的平均细胞数减少(P<0.05)。 结论 以慢病毒为载体介导的CIAPIN1基因高表达可有效抑制食管癌EC9706细胞增殖、促进细胞凋亡和降低细胞侵袭迁移能力。     

shRNA沉默基因DNMT1的表达对膀胱癌T24细胞增殖与凋亡的影响

目的 体外研究shRNA(short hairpin RNA)沉默基因DNMTl的表达对膀胱癌T24细胞增殖和凋亡的影响,初步探讨DNMT1在膀胱肿瘤形成过程中的作用机制.方法 实验分为空白对照组(给予脂质体)、HK组(含无效干扰序列的质粒)及pshRNA-DNMT1组;常规培养膀胱癌T24细胞株,用脂质体Lipofeetamine 2000将构建成功的重组质粒pshRNA-DNMT1转染进入T24细胞,然后进行RT-PCR、Western blot检测各组DNMT1 mRNA及蛋白质水平变化;进行MTT,Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测各组T24细胞增殖和凋亡情况.结果 重组质粒pshR-NA-DNMT1成功转染进入膀胱癌T24细胞;经RT-PCR检测pshRNA-DNMT1组DNMT1 mRNA表达减少,24、48、72h的抑制率分别是28.44%、52.48%、70.91%;转染pshRNA-DNMT1后,T24细胞中DNMT1蛋白24、48和72 h的抑制率分别为24.27%、57.79%、69.74%;在MTT检测中,pshRNA-DNMT1组的细胞增殖抑制率在24、48、72 h分别为(4.34±0.76)%,(9.87±1.54)%和(13.78±1.93)%,与空白对照组比较各时间点差异均有极显著性意义(均P<0.01);转染24、48和72 h后,pshRNA-DNMT1组细胞凋亡率分别为(3.87±0.81)%、(8.69±1.23)%和(11.46±1.24)%,与空白对照组比较差异均有极显著性意义(均P<0.01).结论 重组质粒pshRNA-DNMT1能有效降低膀胱癌细胞中DNMT1基因mRNA及蛋白的表达,并在一定程度上抑制T24细胞的增殖和促进凋亡.     

缺氧诱导因子1α和葡萄糖转运因子1蛋白在肾癌和膀胱癌组织表达的临床意义

目的观察缺氧诱导因子1α(HIF-1α)及其靶基因Glut-1蛋白在膀胱移行细胞癌和肾透明细胞癌中的表达及其临床意义。方法TransAMTM酶联法测定25例膀胱移行细胞癌,16例肾透明细胞癌组织及同一患者远离肿瘤5 cm的癌周正常对照组织中HIF-1α蛋白活性定量;用免疫组织化学方法,对58例膀胱移行细胞癌和38例肾透明细胞癌石蜡组织标本中Glut-1蛋白的表达进行检测。结果HIF-1含量在肾透明细胞癌组织中为(3．38±1．71)μg/孔板,明显高于癌旁正常肾组织(2．23±1．07)μg/孔板,差异有统计学意义(P=0．03)。HIF-1α在膀胱TCC与对照中含量低,差别小,膀胱癌组织HIF-1含量较癌旁正常膀胱组织相比,有增高趋势,但差异无统计学意义(P=0．60)。12例正常膀胱黏膜和16例正常肾组织中无Glut-1蛋白的表达,Glut-1蛋白在膀胱癌和肾癌组织表达均显著增强,Glut-1蛋白在膀胱移行细胞癌中广泛表达,阳性率为77．9％(45／58)。G1、G2、G3膀胱癌组织Glut-1阳性表达率分别为66．7％,89．1％和53．3％。Glut-1蛋白与膀胱肿瘤分级有差异(P=0．029);31例表浅性膀胱癌Glut-1阳性表达率为83．9％,浸润性膀胱癌Glut-1阳性表达率70．4％,两组比较差异无统计学意义(P=0．90),提示Glut-1蛋白的表达与肿瘤分期无关。本组58例均有2年以上的随访,其中31例表浅性膀胱癌2年内有19例复发,12例无复发,复发组19例与未复发组12例Glut-1蛋白的表达分布无差异(P=0．90),提示Glut-1蛋白的表达与表浅性膀胱癌复发无关。在肾透明细胞癌组织中存在Glut-1广泛表达86．9％(33／38)。但Glut-1蛋白的表达与肾癌分级,分期无关。结论HIF-1α的表达可能对肾癌发生,发展起着重要作用,但在膀胱癌中作用还需进一步研究;Glut-1基因参与了肾透明癌和膀胱移行细胞癌的形成过程。     

Siva-1在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨Siva-1在胃癌组织中的表达及其与细胞凋亡的关系.方法 选取2016年1月—2018年12月广西壮族自治区人民医院经手术切除的胃癌组织及癌旁组织各54例.采用qRT-PCR和SP法检测Siva-1 mRNA及蛋白的表达水平,分析Siva-1在胃癌组织中的表达及与临床病理特征的关系.结果 胃癌组织中Siva-...     

GSTP1表达下调促进膀胱癌细胞T24凋亡

目的 通过慢病毒表达系统,使用shRNA下调入膀胱癌T24细胞GSTP1基因的表达,研究其对T24细胞增殖的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 通过慢病毒表达系统,建立稳定低表达GSTP1基因的T24细胞株;进行CCK-8实验以及克隆形成实验,检测GSTPI表达下调对T24细胞增殖的影响;对细胞进行Annexin V-FITC/PI染色,使用流式细胞仪,检测GSTP1表达下调对T24细胞凋亡的影响.结果 与未处理组、对照组相比,GSTP1干扰组的T24细胞增殖受到明显抑制,差异有统计学意义(P＜0.01);细胞凋亡检测结果显示,GSTP1表达下调后明显促进T24细胞凋亡,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 GSTP1表达下调抑制膀胱癌细胞T24增殖,并其机制可能与促进T24细胞凋亡相关.     

LASS2在膀胱癌组织中的表达及对细胞增殖和侵袭能力的影响

探讨人源性长寿保障基因2(LASS2)在膀胱癌组织中的表达,以及下调该基因对膀胱癌细胞增殖和侵袭的影响。 方法 选取2014年3月-2017年4月择期行手术治疗的原发性膀胱癌初诊患者93例,取同期正常膀胱组织40例作为对照组。免疫组织化学法检测膀胱癌组织和对照组的LASS2蛋白表达,培养人膀胱癌BIU-87细胞,并分为LASS2干扰组、阴性对照组和空白组。Western-blot法检测细胞中的LASS2蛋白表达,MTT法和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力,Transwell小室检测细胞侵袭能力。 结果 膀胱癌组织中LASS2蛋白阳性率为40.86%,低于对照组的87.50%,差别有统计学意义(χ²=24.572,P<0.01); 膀胱癌组织中LASS2蛋白阳性表达与WHO分级和TNM分期有关(P<0.05); LASS2干扰组细胞中LASS2蛋白相对表达量低于空白组和阴性对照组(P<0.05); LASS2干扰组24,48,72和96 h时细胞吸光度(A)值、细胞克隆形成数、侵袭细胞数均高于空白组和阴性对照组(P<0.05)。 结论 LASS2蛋白在膀胱癌组织中呈低表达,下调LASS2基因表达可促进膀胱癌细胞的增殖和侵袭。     

IGHG 1 基因对膀胱癌细胞增殖凋亡及迁移的影响

目的 探讨沉默IGHG 1 基因对膀胱癌EJ 细胞增殖、凋亡及迁移的影响。方法 将靶向沉 默IGHG 1 基因的慢病毒载体（LV-IGHG1-RNAi）感染EJ 细胞,构建稳定沉默IGHG 1 基因的EJ 细胞 （shIGHG1-EJ 细胞）作为实验组;将阴性对照序列（NC）慢病毒载体感染EJ 细胞,构建稳定转染NC 序 列的NC-EJ 细胞作为阴性对照组;未转染膀胱癌EJ 细胞作为空白对照组。用实时荧光定量聚合酶链反应 （qRT-PCR）检测细胞IGHG1 mRNA 的相对表达量,Western blot 检测细胞IgG、Caspase-3 和Caspase-3 剪 切片段蛋白的表达,CCK-8 法检测细胞的增殖,流式细胞术（FCM）检测细胞的凋亡,细胞划痕实验检测细 胞的迁移。结果 shIGHG1-EJ 细胞转染率为（76.667±0.042）%,NC-EJ 细胞转染率为（75.333±0.055）%。 qRT-PCR、Western blot 检测结果显示,与空白对照组相比,shIGHG1-EJ 细胞IGHG1 mRNA 和IgG γ 蛋 白表达量降低（P <0.05）,shIGHG1-EJ 细胞IGHG 1 基因被沉默。CCK-8 法结果显示,与空白对照组相比, shIGHG1-EJ 细胞增殖降低（P <0.05）;FCM 和Western blot 检测结果显示,与空白对照组相比,shIGHG1-EJ 细胞凋亡率增加（P <0.05）,且在17 kD 处出现Caspase-3 剪切片段;细胞划痕实验结果显示,shIGHG1-EJ 细胞迁移能力仅为EJ 细胞的36%（P <0.05）;同时NC-EJ 细胞在增殖、凋亡及迁移方面与EJ 细胞比较,差 异无统计学意义（P >0.05）。结论 EJ 细胞经慢病毒载体沉默IGHG 1 基因后,细胞增殖和迁移水平降低,细 胞凋亡率增加。     

microRNA-21对膀胱癌T24细胞增殖的影响 及对VEGF和AP1蛋白的调节

 【目的】 研究microRNA-21(miR-21)对膀胱癌T24细胞系中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)和活化因子蛋白-1(activator protein-1, AP1)及mRNA表达的调节作用,探讨miR-21对膀胱癌T24细胞增殖的影响&#65377; 【方法】 用人工合成的miR-21相应的双链互补DNA片段,插入pSilencerTM 3.1-H1 neo载体表达载体,经测序鉴定后作为microRNA的表达质粒;用脂质体将miR-21高表达质粒转染进T24膀胱癌细胞,经G418筛选获得阳性克隆&#65377;用RT-PCR技术和Western blot方法分别检测该细胞系中VEGF和AP1的mRNA和蛋白表达情况&#65377;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测膀胱癌T24细胞增殖的变化情况&#65377;【结果】 Western blot结果显示miR-21能够增加VEGF和AP1蛋白的表达,RT-PCR方法分析显示VEGF和AP1 mRNA水平升高&#65377;MTT显示转染后细胞的生长速率比未转染的细胞明显加快&#65377;【结论】 miR-21促进T24膀胱癌细胞增殖, 提示可能与VEGF和AP1 的低表达有关&#65377;     

凋亡抑制基因Livin在膀胱癌中的表达及临床意义

目的检测凋亡抑制基因Livin在膀胱移行细胞癌组织中的表达,以探讨其在膀胱癌发生、发展中的作用。方法应用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法,检测了60例膀胱移行细胞癌中Livin基因的表达情况。结果60例膀胱癌组织中Livin基因阳性表达率为28．3％,10例非肿瘤膀胱组织无一例Livin表达阳性;Livin的表达与膀胱癌的病理分级、临床分期无关（均P〉0．05）;21例复发性膀胱癌组织中Livin阳性表达率为38．1％（8／21）,高于原发性膀胱癌（23．1％,9／39）。结论Livin在膀胱癌的发生发展中具有一定意义,Livin高表达提示患者可能有早期复发的倾向。     

CXCR4基因158沉默对膀胱癌T24细胞增殖和凋亡及迁移能力的影响

目的 探讨CXCR4基因沉默后对人膀胱癌T24细胞增殖、凋亡、迁移能力的影响。 方法 将T24细胞分为3组,即干扰组、阴性对照组和空白对照组。采用阳离子脂质体转染试剂Lipofectamine 2000将靶向沉默CXCR4基因的小干扰RNA(siRNA)序列转染至膀胱癌T24细胞株中,Western-blot检测转染后T24细胞中CXCR4蛋白的表达水平,MTT比色法检测细胞凋亡,Transwell迁移试验观察T24细胞迁移能力。 结果 转染siRNA后,CXCR4蛋白表达量明显下调(P<0.05),与空白对照组及阴性对照组的T24细胞比较,沉默CXCR4基因后,显著抑制膀胱癌T24细胞的增殖活性(均为P<0.05),促进T24细胞凋亡(均为P<0.05); Transwell实验结果提示,RNAi干扰CXCR4表达后能显著抑制膀胱癌T24细胞的迁移能力(P<0.05)。 结论 RNAi干扰CXCR4表达水平能够抑制T24细胞增殖、促进细胞凋亡及降低细胞的迁移能力,推测CXCR4基因可能是膀胱肿瘤细胞增殖及迁移的重要调控因子之一。     

腺病毒介导的ING4基因对人膀胱癌细胞增殖、凋亡的影响及其分子机制

目的 探讨腺病毒介导的人生长抑制因子4(ING4)基因对人膀胱移行细胞癌T24细胞体外抑癌效应及其分子机制.方法 将含ING4的重组腺病毒(Ad-ING4)转染T24细胞,以空载体组、未转染组细胞作对照.应用半定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹法检测各组ING4基因及蛋白质在T24细胞中的表达;四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组T24细胞生长情况;流式细胞术(FCM)和Hochest 33258染色法检测各组T24细胞凋亡变化;半定量RT-PCR法检测各组细胞中凋亡相关基因B细胞淋巴瘤/白血病基因-2(Bcl-2)、B细胞淋巴瘤/白血病基因伴随蛋白x(Bax)、p53、缺氧诱导因子(HIF)1α和半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)的表达;Western印迹法检测各组细胞中caspase-3蛋白的表达.结果 腺病毒介导的ING4基因在T24细胞中成功表达,能明显诱导T24细胞凋亡,其凋亡率可达17.2%±4.1%,高于空载体组(4.7%±1.2%)和未转染组(4.8%±1.2%,P<0.05);外源性ING4基因可引起T24细胞中p53、Bax基因表达上凋(1.40±0.11比0.27±0.04,1.50±0.12比0.60±0.05)和Bcl-2、HIF-1α基因表达下凋(0.19±0.02比1.20±0.08,0.33±0.03比0.98±0.06,均P<0.05),并促进caspase-3活化.结论 腺病毒介导的ING4基因在体外可通过上凋p53、Bax/Bcl-2基因和下凋HIF-1α基因表达,导致caspase-3的活化而抑制人膀胱移行细胞癌T24细胞的生长,并诱导其凋亡.     

三氧化二砷对膀胱癌T24细胞增殖及APC基因表达的影响

目的:探讨三氧化二砷（arsenic trioxide,As₂O₃）对人膀胱癌T24细胞增殖及腺瘤性结肠息肉病相关基因（adenomatous polyposis coli,APC）表达的影响。方法:采用2、4、8 μmol/L的As₂O₃处理T24细胞,MTT法检测T24细胞增殖抑制率;脱氧核糖核酸原位末端转移酶标记技术检测细胞凋亡;用RT-PCR及Western blot法分别检测As₂O₃对T24细胞中APC mRNA和蛋白表达的影响。结果:As₂O₃在2~8 μmol/L浓度范围内处理T24细胞72 h可有效抑制细胞增殖（P<0.01）;促进细胞凋亡（P<0.01）;增加APC mRNA和蛋白表达（P<0.01）。结论:在一定浓度范围内（2~8 μmol/L）As₂O₃可以有效抑制T24细胞增殖和诱导其凋亡,其机制可能与上调APC基因的表达有关。     

Caspase-3在膀胱癌组织中的表达及意义

目的探讨caspase-3在膀胱癌发病过程中的作用及与细胞凋亡之间关系.方法应用免疫组织化学方法和末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法,检测55例膀胱癌和12例正常膀胱组织中caspase-3和细胞凋亡的表达水平.结果膀胱癌中caspase-3阳性表达率为41.8%,显著低于正常膀胱组织的75.0%(P＜0.05).caspase-3表达与膀胱癌病理分级、临床分期和肿瘤复发之间无关(P＞0.05).膀胱癌中caspase-3阳性表达者的细胞凋亡指数为9.3±3.1显著高于阴性表达者的6.8±2.4(P＜0.001).结论 caspase-3表达下调导致细胞凋亡减少,可能在膀胱癌的发生发展过程中起重要作用.     

沉默SOCS1基因表达对人口腔癌KB细胞增殖的机制研究

目的:探究小干扰RNA(siRNA)沉默细胞因子信号转导抑制因子1(SOCS1)基因对人口腔癌KB细胞增殖、凋亡及侵袭的影响,旨在为口腔癌患者基因靶向治疗提供参考。方法:将培养好的人口腔癌KB细胞随机分为空白对照组、阴性组、转染组,siRNA沉默SOCSl基因、阴性对照质粒分别转染至转染组、阴性组,而空白对照组不作任何处理,SOCS1基因沉默后,四唑盐法检测三组KB细胞增殖率、流式细胞术检测各组KB细胞凋亡率,同时检测三组细胞侵袭能力。结果:siRNA沉默SOCS1基因在人口腔癌KB细胞中呈阳性表达(细胞膜或细胞质呈棕黄色),转染组基因沉默后24、48、72、96 h人口腔癌KB细胞增殖率明显低于阴性组,比较差异有统计学意义(P<0.05);转染组人口腔癌KB细胞凋亡率高于空白对照组和阴性组,空白对照组人口腔癌KB细胞凋亡率高于阴性组,比较差异有统计学意义(P<0.05);转染组穿膜细胞数低于空白对照组和阴性组,阴性组穿膜细胞数低于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:siRNA沉默SOCS1基因可减弱人口腔癌KB细胞的增殖能力,并抑制其侵袭能力,有望为...     

端粒酶逆转录酶基因hTERT突变表达载体在膀胱癌细胞T24中的表达

目的 构建端粒酶逆转录酶基因（hTERT）缺失突变的真核表达载体pEGFP-hTERT，并转孜膀胱癌细胞株T24中，观察其稳定表达，探讨其对端粒酶性调控机制及成为膀胱肿瘤基因治疗新靶点的可能性，方法 将PCR扩增的hTERT缺失突变体片段用EcoRⅠ与SalⅠ酶切，并连接到真核表达载体pEGFP-C1上，构建成hTERT缺失突变的真核表达载体pEGFP-hTERT；利用DNA－磷酸钙共沉淀法将pEGFP-hTERT导入膀胱癌细胞株T24中，应用荧光显微镜、与衰老相关的β－半乳糖苷酶染色等方法观察转染细胞中hTERT-GFP融合蛋白定位表达及对膀胱癌细胞生长的影响。结果 酶切鉴定证实hTERT缺失突变体体已克隆到pEGFP-C1的EcoRⅠ与SalⅠ位点之间，在转染细胞中观察到与其融合的绿色荧光蛋白的稳定表达，定位于细胞核内；转染细胞2wk后与衰老相关β－半乳糖苷酶表达增加，细胞生长受抑制。结论 构建的端粒酶逆转录酶基因hTERT缺失突变真核表达载体pEGFP-hTERT可在膀胱癌细胞T24中稳定表达。突变型hTERT蛋白可入细胞核中竞争性影响端粒酶的功能，进而抑制膀胱癌细胞的生长。     

凋亡抑制基因Survivin在膀胱癌中的研究进展

Survivin(存活素、生存素)是凋亡抑制蛋白家族的成员之一,具独特的分子结构和功能,在肿瘤组织中特异性表达。Survivin能够抑制凋亡和调节分裂,在人类正常分化组织中很少表达却特异性表达于常见的肿瘤。本文就其分子生物学特性、组织分布,抗凋亡机制及在膀胱癌中的研究现状予以综述。